Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

دراسة وراثية من التجديد أكسون مع الكبار الظهرية مثقف الخلايا العصبية العقدة الجذر

doi: 10.3791/4141 Published: August 17, 2012

Summary

و

Abstract

ومن المعلوم أن الخلايا العصبية الناضجة في الجهاز العصبي المركزي (CNS) لا يمكن تجديد المحاور العصبية الخاصة بهم بعد الإصابات بسبب تضاؤل ​​القدرة الذاتية لدعم نمو محور عصبي وبيئة معادية في الجهاز العصبي المركزي 1،2 ناضجة. في المقابل، الخلايا العصبية الناضجة في النظام العصبي الطرفي (المحيطي) تجديد بسهولة بعد إصابة 3. ومن المعروف جيدا الكبار عقدة الجذر الظهري (DRG) لتجديد الخلايا العصبية بقوة بعد إصابات الأعصاب الطرفية. كل عصبون DRG ينمو 1 محور عصبي من سوما الخلية، التي الفروع إلى فرعين محواري: فرع الطرفية التعصيب أهداف الطرفية وفرع الوسطى تمتد إلى النخاع الشوكي. إصابة نتائج المحاور الطرفية DRG في تجديد محور عصبي كبير، في حين أن المحاور العصبية المركزية في النخاع الشوكي تجديد سيئة بعد وقوع الضرر. ومع ذلك، إذا كان الضرر الطرفية محواري يحدث قبل إصابة الحبل الشوكي (عملية تسمى الآفة تكييف)، والتجديد من المحاور المركزية greatlتحسن Y 4. وعلاوة على ذلك، فإن محاور عصبية من الخلايا العصبية المركزية DRG مشاركة في بيئة معادية لها نفس التنازلي المحاوير القشري في النخاع الشوكي. معا، هو الافتراض أنه يمكن تسخير الآليات الجزيئية التي تتحكم في تجديد الخلايا العصبية من محور عصبي DRG الكبار لتعزيز الجهاز العصبي المركزي تجديد محور عصبي. ونتيجة لذلك، يتم الآن الكبار الخلايا العصبية DRG المستخدمة على نطاق واسع بأنه نظام نموذجي لدراسة التجدد نمو محور عصبي 5-7.

نحن هنا وصف طريقة لثقافة الكبار الخلايا العصبية DRG التي يمكن استخدامها للدراسة الجينية لتجديد محور عصبي في المختبر. في هذا بالغ نموذج يتم التلاعب وراثيا الخلايا العصبية DRG عبر electroporation بوساطة ترنسفكأيشن الجينات 6،8. بواسطة transfecting الخلايا العصبية مع البلازميد أو الاشتراكية / shRNA، هذا النهج يمكن تحقيق مكاسب على حد سواء، وفقدان وظيفة من بين التجارب للتحقيق في دور الجينات أي فائدة من محور عصبي في نمو الخلايا العصبية من DRG الكبار. عندما يتم transfected الخلايا العصبية مع الاشتراكية / shRNA، البروتين المحلية المستهدفة هيالمنضب عادة بعد 3-4 أيام في الثقافة، وخلال الوقت الذي نمو محور عصبي قوي حدث بالفعل، مما يجعل من دراسات فقدان وظيفة من بين أقل فعالية. لحل هذه المشكلة، الطريقة الموصوفة هنا يتضمن خطوة اعادة التعليق وإعادة الطلاء، بعد ترنسفكأيشن، والذي يسمح لمحاور عصبية من الخلايا العصبية في حالة عدم وجود بروتين استهدفت تنمو من جديد. أخيرا، ونحن نقدم مثالا على استخدام هذا النموذج في المختبر لدراسة دور الجينات المرتبطة تجديد محور عصبي، ج يونيو، في التوسط في نمو الخلايا العصبية من محور عصبي DRG الكبار 9.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. إعداد Coverslips، متوسط ​​الثقافة، وإنزيمات الهضم

  1. وتستخدم في الجولة ال 12 مم # 1 coverslips زجاج للثقافة العصبية. يتم تنظيف coverslips مع 10٪ HCL ثم بين عشية وضحاها من قبل غسل بالموجات فوق الصوتية مع الماء المقطر ومنزوع الأيونات لمدة 3 مرات (20 دقيقة / الساعة). يتم تخزين coverslips تنظيفها في الايثانول 70٪ للاستخدام في المستقبل. قبل كل التجارب، coverslips هي الهواء يجفف ويوضع في لوحة الثقافة.
  2. إلى معطف يضاف coverslips المجففة، 100 ميكروليتر من محلول الطلاء التي تحتوي على 100 ميكروغرام / مل بولي-D-ليسين و 10 ميكروغرام / مل Laminin العمل على حل كل ساترة، ويتم نقل لوحة الثقافة في الحاضنة 37 درجة مئوية. 1-2 بعد ساعة، تتم إزالة حل الطلاء ويتم غسل coverslips 3 مرات مع PBS 1X العقيمة.
  3. لإعداد ثقافة المتوسط، ومتوسط ​​الحد الأدنى الأساسي (MEM) وتستكمل مع مصل الدم 5٪ بقري جنيني (FBS)، 1X البنسلين، الستربتوميسين حل (500 وحدة من penicilلين و 500 ميكروغرام من الستربتوميسين)، 1X الملحق GlutaMAX-I، والكواشف التي تحتوي على مضاد التفتل 20 ميكرون 5-الفلوري-2-deoxyuridine و 20 يوريدين ميكرومتر (FDU / R). للوسط المصل خالية، يتم استبدال FBS مع ملحق B27.
  4. وكولاجيناز يتم إعداد حل عن طريق إذابة كولاجيناز ومسحوق مع MEM لجعل تركيز العمل من 1 ملغ / مل. لالتربسين، يتم استخدام TrypLE 1X اكسبرس.

2. تشريح والحصاد من الكبار الفأر الخلايا العصبية DRG

  1. بعد euthanizing ال 6 - لفأر بالغ 10 أسابيع من العمر، وإزالة جلد ظهري وقطع العمود الفقري بأكمله. غسل العمود الفقري مع إزالة 1 مرات X 2-3 برنامج تلفزيوني.
  2. دبوس العمود الفقري لإزالة لوحة تشريح مع ما يصل الجانب بطني، ويزيل بعناية العضلات لكشف الأعصاب الحسية تحت المجهر تشريح. الأعصاب المتصلة DRGs على مستوى الخشب هي سمكا وسهلة لتحديد مكان. ولذلك، بالنسبة لمعظم التجارب فقط قطنيويتم حصاد DRGs.
  3. من خلال قطع كل فقرة على طول محور مع مقص صغير وإزالة بعناية الأقراص الفقرية. باستخدام ملقط لتقسيم كل فقرة لفضح الحبل الشوكي.
  4. لتشريح خارج DRGs الخشب، ترفع كل عصب الخشب مع ملقط وتعقب نحو الحبل الشوكي لتحديد موقع DRGs المرتبطة قطني (من L1 الى L6).
  5. قطع كل DRG من الأعصاب الطرفية المرفقة، جذور ظهري وبطني مع مقص الربيع، وتخزينها في أنبوب microfuge مع متوسط ​​MEM وضعت على الجليد. ويمكن تشريح أكثر DRGs على مستويات مختلفة في العمود الفقري (DRGs الصدري على سبيل المثال) بطريقة مشابهة عندما يكون ذلك ضروريا.

3. هضم والتفكك من الكبار الفأر الخلايا العصبية DRG

  1. بعد جمع كل DRGs تشريح، يستعاض عن متوسط ​​MEM مع كولاجيناز 1 مل الى حل واحتضان أنبوب microfuge على 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة.
  2. استبدال كولاجيناز حل مع 500 ميكرولتر اكسبرس TrypLE 1X ذلكlution واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 15-20 دقيقة.
  3. إزالة الحل السريع TrypLE ويغسل DRGs مع 1 مل الثقافة المتوسطة المعدة (التي تحتوي على 5٪ FBS) لمدة 3 مرات.
  4. تخرج ماصة معلومات سرية إضافة 600 مستنبت ميكرولتر وماصة بلطف صعودا ونزولا إلى يسحن الأنسجة لمدة 20-30 مرات باستخدام 1 مل أزرق،.
  5. بعد سحن، والسماح للأنسجة غير فصلها ليستقر على الجزء السفلي من microfuge ونقل تعليق خلية إلى أنبوب معقم 10 مل. إضافة آخر 600 مستنبت ميكرولتر وكرر الخطوة سحن حتى معظم الأنسجة وفصلها. تعليق خلية تم الحصول عليها على كل من الخلايا العصبية والخلايا غير العصبية. في معظم الحالات، يتم استخدام خلايا من 6 DRGs (~ 5 X10 4) عن رد فعل electroporation واحد.

4. التلاعب الجيني للخلايا العصبية عبر Electroporation

  1. إعداد حل ترنسفكأيشن عن طريق خلط الحل nucleofection Amaxa عن الخلايا العصبية الماوس مع البلازميدات الحمض النووي (~ 10 ميكروغرام) أو oligos سيرنا (حوالي 0.2 نانومول) لجعل حجم نهائي قدره 100 ميكروليتر لكل ترنسفكأيشن.
  2. منبذة الخلايا فصل في 680 دورة في الدقيقة لمدة 7 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وتجاهل طاف قدر الإمكان. إضافة حل ترنسفكأيشن المعدة وماصة بلطف صعودا ونزولا 3-4 مرات مع 200 ميكرولتر نصائح ماصة للعودة لوقف الخلايا.
  3. نقل تعليق خلية مختلطة مع حل ترنسفكأيشن إلى كوفيت electroporation وelectroporate الخلايا باستخدام نظام Nucleofector Amaxa برنامج G-013.
  4. بعد electroporation، إضافة على الفور 500 ميكرولتر من قبل حرارة (37 درجة مئوية) متوسط ​​الثقافة التي تحتوي على FBS لكفيت ونقل عن الحل (~ 600 ميكرولتر) في لوحة الثقافة المغلفة في كثافة الخلية المطلوب. عن التجربة التي تتطلب اعادة التعليق وإعادة الطلاء، يتم استزراع الخلايا العصبية مباشرة على طبق من البلاستيك في ثقافة عالية الكثافة (10000-20000 خلايا / جيد). عن التجربة التي يدرس مباشرة نمو محور عصبي، الخلايا العصبية هي ونط مطليس coverslips الزجاج المطلي في أقل كثافة (3000-5000 خلايا / جيد). وضع لوحة الثقافة في الحاضنة (37 درجة مئوية، ونسبة 5٪ CO 2).
  5. أربع ساعة بعد تصفيح عندما الخلايا العصبية والتي تعلق على ركائز، استبدال بلطف الثقافة المتوسطة (الذي يحتوي على حل nucleofection Amaxa) مع 500 ميكرولتر المتوسطة ثقافة جديدة ومرحلة ما قبل حرارة، والعودة إلى لوحة الحاضنة للثقافة إضافي (37 درجة مئوية ، ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ 2). يمكن استخدامها على حد سواء ثقافة المتوسط ​​تحتوي على FBS أو وسيلة خالية من المصل في هذه الخطوة.

5. زراعة الخلايا العصبية الكبار DRG لتحليل النمو أكسون

  1. لالخلايا العصبية transfected مع البلازميدات الحمض النووي، يمكن ملاحظة التعبير عن الجينات الفائدة من (على سبيل المثال EGFP) في وقت مبكر باعتباره ساعة بعد بضعة electroporation. لالخلايا العصبية transfected مع siRNAs، ونحن ننتظر عادة 3-4 أيام للسماح للنضوب كافية من البروتينات الذاتية. يمكن أن الخلايا العصبية مثقف إما ثابتة مباشرة لتحليل نمو محور عصبي في فاريولنا مرة نقاط (1-4 أيام بعد electroporation) أو إعادة مع وقف التنفيذ وإعادة مطلي لتحليل محور عصبي إعادة النمو (انظر أدناه)
  2. للدراسات الخسارة من وظيفة رني بوساطة، يمكن أن الخلايا العصبية مثقف اعادة مع وقف التنفيذ وإعادة مطلي السماح للمحاور عصبية من الخلايا العصبية لتنمو، والتي هي نضبت بالفعل البروتينات المستهدفة. للقيام بذلك، استبدال ثقافة المتوسط ​​القديم من الخلايا العصبية ذات الكثافة العالية مع مثقف 1 حبة متوسطة الحجم قبل حرارة مل الطازجة وماصة بلطف صعودا ونزولا ل6-10 مرات لاعادة وقف الخلايا العصبية المرفق من لوحة الثقافة. لأن الخلايا غير العصبية (مثل خلايا شوان) نعلق أكثر صرامة بكثير للثقافة طبق من الخلايا العصبية، الخلايا إعادة المعلقة هي في معظمها الخلايا العصبية.
  3. نقل الخلايا العصبية اعادة مع وقف التنفيذ في أنبوب microfuge ويسحن بلطف 10-15 مرة لإعادة فصل كتل الخلية في تعليق خلية واحدة.
  4. إعادة لوحة الخلايا العصبية إعادة فصلها على coverslips أعدت حديثا في منخفض الكثافة (3000-5000 خلايا / جيد)، والثقافة بين عشية وضحاها (16-24 ساعة).

6. تثبيت والمناعة تلطيخ، والتصوير الإسفار

  1. نضح على المديين المتوسط ​​واضافة لامتصاص العرق 4٪ (منهاج العمل) (200 ميكروليتر / جيد) لعلاج هذه الخلايا ل15-20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم تغسل الخلايا ثابت مع برنامج تلفزيوني 1X لمدة 3 مرات.
  2. نضح في برنامج تلفزيوني وإضافة حل حجب (1٪ مصل بقري، تريتون 0.1٪ X-100، و 2.0٪ مصل الماعز العادي في برنامج تلفزيوني 1X) إلى الخلايا العصبية ثابتة لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  3. على محاور عصبية التسمية، والخلايا العصبية والمناعية الملون مع المضادة للneurofilaments أو المضادة للأجسام المضادة βIII تويولين. للقيام بذلك، ضع قطرة من حل 30μl الأضداد الابتدائي (1:1200 تخفيف ل-βIII الضد تويولين) على parafilm لكل ساترة. قلب لcoverslips ووضعها على الحل الضد الأولية لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  4. عودة coverslips إلى لوحة الثقافة الأصلية، وغسلها مع PBS 1X لمدة 3 مرات.
  5. كرر نفس الإجراء بالنسبة للثانويةtibody.
  6. غسل coverslips مع الماء المقطر لمدة 3 مرات، وبعد ذلك شن coverslips على شرائح الزجاج مع تصاعد حل (على سبيل المثال إطالة Antifade الذهب).
  7. ولا يمكن تصوير الخلايا العصبية الملون مع أي نظام مضان المجهر مزودة كاميرا رقمية. ويتم قياس أطوال محور عصبي وتحليلها مع برامج التحليل والتصوير.

7. ممثل النتائج

في غياب أي عوامل النمو خارج الخلية المضافة، والخلايا العصبية DRG الكبار عادة ما تبدأ في النمو المحاوير 48 ساعة بعد تصفيح الأولى. على محاور عصبية وغالبا ما تظهر morphologies متفرعة (الشكل 1). في المقابل، فإن الخلايا العصبية إعادة مطلي البدء في توسيع نطاق محاور عصبية سوى ساعة وبعد بضعة الطلاء، واستطال محاور عصبية مع المتفرعة خفضت كثيرا (الشكل 2). هذه النتائج تشير إلى أن إعادة مطلي الخلايا العصبية تتقاسم خصائص مشابهة لتلك الخلايا العصبية تكييف lesioned. باستخدام هذا النهج، ولقد قمنا مؤخرا الخسارةمن وظيفة دراسات لبحث دور للتجديد محور عصبي عامل النسخ المرتبطة ج يونيو في نمو محور عصبي من البالغين الخلايا العصبية DRG في المختبر. أظهرت النتائج أن electroporation من مجموعة من 4 siRNAs مختلفة تستهدف مناطق مختلفة من C-يونيو (ON-TARGETplus) انخفضت بشكل ملحوظ في مستويات البروتين من طراز C-يونيو في الخلايا العصبية DRG البالغ 3 أيام بعد ترنسفكأيشن (الشكل 3) 9. وانخفض بشكل ملحوظ عندما الخلايا العصبية اعيد مطلي ومثقف بين عشية وضحاها، ونمو الخلايا العصبية من محور عصبي ضربة قاضية ج يونيو (التحكم: 348.37 ± 16.21mm؛ SI-C-يونيو: 262،32 ± 15،69 ميكرون، الشكل 3) 9. هذه النتائج تشير إلى أن DRG الكبار مثقف الخلايا العصبية توفير نظام نموذجا مفيدا لدراسة نمو الخلايا العصبية من محور عصبي بالغ.

الشكل 1
الشكل 1. الخلايا العصبية DRG الكبار الماوس تربيتها في كثافة منخفضة لمدة 3 أيام. تم صبغ الخلايا العصبية مع مضاد - & Bايتا؛ الثالث الضد تويولين. لاحظ أن معظم محاور عصبية تظهر morphologies متفرعة. مقياس شريط: 125 ميكرون.

الشكل 2
الشكل 2. إعادة طلاء فأر بالغ DRG الخلايا العصبية بعد 3 أيام في الثقافة. (أ) الخلايا العصبية DRG الكبار تربيتها في كثافة عالية لمدة 3 أيام. (ب) تم زرعها إعادة مطلي الخلايا العصبية DRG الكبار في كثافة منخفضة ليلة وضحاها. لاحظ أن معظم محور عصبي تظهر morphologies ممدود مع المتفرعة محور عصبي قليلا. مقياس شريط: 250 ميكرون في A و 125 ميكرون في B.

الشكل (3)
الشكل 3. دور ج يونيو في نمو الخلايا العصبية من محور عصبي DRG الكبار في المختبر. (أ) تحليل لطخة غربية من طراز C-يونيو في فأر بالغ DRG الخلايا العصبية بعد electroporation من طراز C-يونيو siRNAs. والنتيجة تظهر مستوى انخفضت بشكل ملحوظ من طراز C-يونيو (ب) نمت الخلايا العصبية تحكم transfected مع EGFP محاور عصبية بعد فترة طويلة من إعادة طلاء والثقافة بين عشية وضحاها. (ج) الرئيسان العابرfection من طراز C-يونيو siRNAs وEGFP نمو محور عصبي من ضعف بالغ الخلايا العصبية DRG بعد إعادة طلاء والثقافة بين عشية وضحاها. الحمراء: Tuj-1 تلطيخ؛ الأخضر: EGFP. مقياس شريط: 125 ميكرون. وقد نشرت هذه النتائج في Saijilafu وآخرون. 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

الكبار الخلايا العصبية DRG تجديد المحاور العصبية الخاصة بقوة بعد اصابة الأعصاب الطرفية في والمجراة في المختبر، وبالتالي توفير نظام مفيد لدراسة تجديد محور عصبي في الحيوانات البالغة. في ثقافة المختبر من الخلايا العصبية DRG الكبار أصبحت الطريقة المستخدمة على نطاق واسع للتحقيق في الآليات الجزيئية التي وينظم محور عصبي التجدد. عرضت في المختبر إجراء زراعة الخلايا العصبية الماوس الكبار DRG يمكن هنا دراسة جينية السريع والفعال لنمو محور عصبي التجدد. الإجراء إعادة تعليق، وإعادة طلاء، مفيدة بشكل خاص لفقدان وظيفة من بين دراسات لأنه يسمح للمحاور عصبية من الخلايا العصبية التي قد سبق أن بروتين استهدفت المنضب تنمو من جديد. وعلاوة على ذلك، وإعادة طلي مثقف الخلايا العصبية DRG يقلد 1 في تكييف الجسم الحي تأثير الآفة، وبالتالي توفير نهج أكثر الفسيولوجية ذات الصلة لدراسة تجديد محور عصبي في المختبر.

كفاءة ترنسفكأيشن من البالغين DRG نeurons مع اقتراب electroporation صفها حوالي 20-50٪ لالبلازميدات الحمض النووي اعتمادا على أحجام بنيات، وهو ما يكفي لالتحليل الصرفي للنمو محور عصبي. مقارنة مع electroporation، ونقل الجينات الفيروسية التي تتوسط لديها كفاءة أعلى من ذلك بكثير، الذي هو مناسبة لتحليل الكيمياء الحيوية باستخدام الخلايا العصبية DRG. ومع ذلك، وبناء وإنتاج فيروس لكل الجينات الفائدة من هو أكثر بكثير المستهلكة كثيفة العمالة والوقت. لoligos سيرنا، لا يمكن للكفاءة ترنسفكأيشن تصل إلى ما يقرب من 90٪ على أساس الكفاءة هدمت من البروتينات المستهدفة (انظر الشكل 3A)، الأمر الذي يجعل تحليل الكيمياء الحيوية من البالغين الخلايا العصبية DRG ممكن. ومع ذلك، فإن تأثير siRNAs يقلل بعد فترة أطول نظرا لتدهور oligos سيرنا.

عندما تكون الخلايا العصبية شارك في transfected مع 2 البلازميدات مختلطة في نسبة 1:1، والبلازميد مع حجم أصغر وعادة ما يكون أعلى كفاءة ترنسفكأيشن من البلازميد مع أكبر حجما. كما عesult، وتعديل نسبة البلازميدات 2 تغيير كفاءة شارك في ترنسفكأيشن وفقا لذلك. لترنسفكأيشن سيرنا، فإننا كثيرا ما شارك في transfect الخلايا العصبية مع الخلايا العصبية EGFP إلى التسمية. لأن oligos سيرنا هي أصغر بكثير من EGFP، وكفاءتها ترنسفكأيشن هو أعلى من ذلك بكثير. ولذلك، في تجاربنا نحن نعتقد بشكل عام أن كل الخلايا العصبية EGFP الإيجابية هي أيضا إيجابية لsiRNAs.

وقد حددت العديد من الدراسات التنميط الجيني للخلايا العصبية الكبار DRG بعد axotomy هامشية على عدد كبير من الجينات المرتبطة تجديد (الخرق) 10-12، والتي يعتقد أنها تكمن وراء قدرة تجديد الخلايا العصبية DRG الكبار. ومع ذلك، لم تكن وظائف هذه الخرق في التوسط في نمو الخلايا العصبية من محور عصبي DRG الكبار تتميز أيضا. بحثت هنا ونحن دور الفريق الاستشاري المعروف، ج يونيو، في التوسط في نمو الخلايا العصبية من محور عصبي DRG الكبار عن طريق نهج الخسارة من وظيفة رني بوساطة. هذه الطريقة توفر أداة قيمة في المختبر إلى investigaالشركة المصرية للاتصالات أدوار الخرق الأخرى في تنظيم التجديد محور عصبي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من قبل المنح لFZ من المعاهد الوطنية للصحة (R01NS064288) وكريغ H. مؤسسة نيلسون.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
MEM Invitrogen 11090-081
Poly-D-Lysine hydrobromide Sigma -Aldrich P6407
Laminin Invitrogen 23017-015
5-fluoro-2-deoxyuridine Sigma -Aldrich F0503
Uridine Sigma -Aldrich U3003
Collagenase A Roche 10103578001
TrypLE Express Invitrogen 12604-013
Fetal bovine serum Invitrogen 10270-098
Penicillin-streptomycin (100X) Invitrogen 15140-122
GlutaMAX-I (100X) Invitrogen 35050-038
Glass coverslips (#1) Electron Microscopy sciences 72196-12
24 well cell culture plate Becton Dickinson 35-3047
1X PBS Mediatech 21-040-CV
Sterile, distilled and deionized water Mediatech 25-055-CV
Nucleofector and electroporation Kits for Mouse Neurons Lonza VPG-1001
ON-TARGETplus siRNA against c-Jun Dharmacon L-043776
Anti--βIII tubulin antibody (Tuj-1) Covance MMS-435P
ProLong Gold Antifade mounting solution Invitrogen P36930

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat. Rev. Neurosci. 7, 617-627 (2006).
  2. Liu, K., Tedeschi, A., Park, K. K., He, Z. Neuronal Intrinsic Mechanisms of Axon Regeneration. Annu. Rev. Neurosci. (2010).
  3. Zhou, F. Q., Snider, W. D. Intracellular control of developmental and regenerative axon growth. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 361, 1575-1592 (2006).
  4. Neumann, S., Woolf, C. J. Regeneration of dorsal column fibers into and beyond the lesion site following adult spinal cord injury. Neuron. 23, 83-91 (1999).
  5. Liu, R. Y., Snider, W. D. Different signaling pathways mediate regenerative versus developmental sensory axon growth. J. Neurosci. 21, RC164 (2001).
  6. Zhou, F. Q. Neurotrophins support regenerative axon assembly over CSPGs by an ECM-integrin-independent mechanism. J. Cell Sci. 119, 2787-2796 (2006).
  7. Zou, H., Ho, C., Wong, K., Tessier-Lavigne, M. Axotomy-induced Smad1 activation promotes axonal growth in adult sensory neurons. J. Neurosci. 29, 7116-7123 (2009).
  8. Zhou, F. Q., Zhou, J., Dedhar, S., Wu, Y. H., Snider, W. D. NGF-induced axon growth is mediated by localized inactivation of GSK-3beta and functions of the microtubule plus end binding protein APC. Neuron. 42, 897-912 (2004).
  9. Saijilafu,, Hur, E. M., Zhou, F. Q. Genetic dissection of axon regeneration via in vivo electroporation of adult mouse sensory neurons. Nat. Commun. 2, 543-54 (2011).
  10. Costigan, M. Replicate high-density rat genome oligonucleotide microarrays reveal hundreds of regulated genes in the dorsal root ganglion after peripheral nerve injury. BMC Neurosci. 3, 16 (2002).
  11. Xiao, H. S. Identification of gene expression profile of dorsal root ganglion in the rat peripheral axotomy model of neuropathic pain. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 8360-8365 (2002).
  12. Michaelevski, I. Signaling to transcription networks in the neuronal retrograde injury response. Sci. Signal. 3, ra53 (2010).
دراسة وراثية من التجديد أكسون مع الكبار الظهرية مثقف الخلايا العصبية العقدة الجذر
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Saijilafu, Zhou, F. Q. Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons. J. Vis. Exp. (66), e4141, doi:10.3791/4141 (2012).More

Saijilafu, Zhou, F. Q. Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons. J. Vis. Exp. (66), e4141, doi:10.3791/4141 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter