Medicine

מודל חולדת תמותה נמוך להערכת Vasospasm מוחות המושהה לאחר דימום subarachnoid ניסויי

Published: January 17, 2013 doi: 10.3791/4157

Rahul V. Dudhani¹, Michele Kyle¹, Christina Dedeo², Margaret Riordan¹, Eric M. Deshaies^1,2

¹Department of Neurosurgery, SUNY Upstate Medical University, ²Department of Neuroscience and Physiology, SUNY Upstate Medical University

Summary

דימום תת עכבישי Aneurysmal (sah) הוא דימום שמתרחש בחלל תת העכבישים כאשר נקרע מפרצה. בעוד התחלואה והתמותה מהאירוע הזה כבר על ירידה עקב גישות טיפול משופרים, הסיכון של vasospasm לאחר דימום subarachnoid ממשיך להיות כפי שהיה לפני מספר שנים. החשיבות של הקמת מודל חיה מקיפה ולשעתק לזהות אירועי ייזום של vasospasm מוחות כבר למוקד של מחקר מאז השימוש הראשון של חולדות במודל vasospasm ניסיוני בשנת 1979 על ידי בארי

Abstract

מטרה: לאפיין ולהקים מודל לשחזור שמדגים vasospasm המוחין מתעכב לאחר הדימום תת עכבישי aneurysmal (sah) בחולדות, על מנת לזהות את האירועים היוזמים, שינויי pathophysiological ויעדים פוטנציאליים לטיפול.

שיטות: עשרים ושמונה חולדות זכרים ספראג-Dawley (250-300 גר '), חולק באופן שרירותי לאחת משתי קבוצות - sah או שליטה מלוחה. דימום תת עכבישי העכברוש בsah הקבוצה (n = 15) היה מושרה בהזרקה כפולה של דם עצמי, 48 שעות זו מזו, לCisterna magna. בדומה לכך, מי מלח רגיל (n = 13) הוזרק לCisterna magna של קבוצת הביקורת המלוחה. חולדות הוקרבו ביום 5 אחרי הזרקת הדם השנייה והמוחין השתמרו לניתוח היסטולוגית. מידת vasospasm נמדדה באמצעות חתכים בעורק basilar, על ידי מדידת השטח הפנימי luminal צלב החתך באמצעות תוכנת NIH Image-J. המשמעות הייתהנבדק באמצעות ניתוח סטטיסטי Tukey / קרמר 's.

תוצאות: לאחר הניתוח של סעיפים היסטולוגית, אזור העורק basilar luminal צלב חתך היו קטן יותר במלח בהשוואה לקבוצה המלוחה, עולה בקנה אחד עם vasospasm מוחות בקבוצה לשעבר. בקבוצת sah, האזור הפנימי עורק הבסיס (0.056 מיקרומטר ± 3) היה קטן משמעותי מvasospasm חמישה ימים לאחר הזרקת הדם השנייה (שבעה ימים לאחר הזרקת הדם הראשונית), בהשוואה לקבוצת הביקורת המלוחה עם האזור הפנימי (0.069 ± 3, p = 0.004). לא הייתה תמותה מvasospasm המוחין.

מסקנה: מודל sah העכברוש הכפול גורם vasospasm קל, לשרוד, basilar עורק שיכול לשמש כדי לחקור את מנגנוני pathophysiological של vasospasm המוחי במודל חיה קטנה. שיעור תמותה נמוכה ומקובל הוא קריטריון משמעותי להסתפק במודל חית sah אידיאלי כך שהמנגנונים של vasospasm יכולים להיות elucid^{7 ated, 8.} שינויים נוספים של המודל ניתן להתאים להחרפת vasospasm ובחינות נוירולוגיות.

Protocol

1. ניתוח חולדה לנושא sah הוזרק 0.15 מיליליטר דם השתלה עורק

החולדה היא מורדמת באמצעות 0.1 מ"ג / ק"ג של קוקטייל מכרסם קטמין / Xylazine והרשה לו לשבת למשך 5 דקות.
הרדמה נאותה היא אושר על ידי ירידה ברפלקס איבר האחורי.
שימוש במכונת גילוח אלקטרוני צוואר אל אף שטח של שיער מסביב לאזור תת העורפי מגולח.
החיה ממוקמת פרקדן על שולחן הניתוחים והזנב חוטא בפולידין על מנת להבטיח חתך סטרילי.
חתך קו אמצע ישר 1 סנטימטר נלקח בהיבט הגחון של הזנב
נתיחתו הוארכה עד לעורק הזנב מזוהה ומבודד.
באמצעות קטטר סטרילי 26-מד, עורק הזנב cannulated ו0.15 מ"ל של דם עורקים הוא נסוג לתוך מזרק.
גזה סטרילית כרוכה סביב את החתך כדי להבטיח hemostasis לפני יישום vetbond לאטום את החתך.
Tהוא העכברוש מופעל נוטה על השולחן והאזור המגולח על אזור משנה העורפי הוא חוטא בפולידין.
שימוש בגישת חתך קו אמצע אנכי זכה לCisterna magna.
לאחר שזוהה מחט מד 25 מוכנס לתוך Cisterna magna ו0.15 מ"ל של CSF הוא נסוג לתוך מזרק כדי להימנע מלחצים תוך גולגולת מוגבר עם הזרקה של נפח דם עצמי.
עכשיו, 0.15 המ"ל של דם המופק מעורק הזנב מוזרק באיטיות לתוך Cisterna magna.
המחט נשארה במקום למשך 30 שניות כדי להבטיח הקרישה בחלל תת עכבישים ולאחר מכן נסוג בזהירות.
Hemostasis מובטחת והחתך נסגר באמצעות מכשיר הידוק.
החיה כיום נוטה להציב על משטח התחממות עם ראש 20 מעלות כלפי מטה עמדה ל20 דקות כדי לאפשר לדם להתקרש בבורות סביב עורק הבסיס.
צעדי 1.1-1.15 חוזרים על עצמם במהלך 48 שעתי הניתוח השנייה לגזרים.
2. ניתוח חולדה לנושא sah הוזרק מלוח מ"ל 0.15
1. החולדה היא מורדמת באמצעות 0.1 מ"ג / ק"ג של קוקטייל מכרסם קטמין / Xylazine והרשה לו לשבת למשך 5 דקות.
2. הרדמה נאותה היא אושר על ידי ירידה ברפלקס איבר האחורי.
3. שימוש במכונת גילוח אלקטרוני צוואר אל אף שטח של שיער מסביב לאזור תת העורפי מגולח.
4. החיה ממוקמת פרקדן על שולחן הניתוחים והזנב חוטא בפולידין על מנת להבטיח חתך סטרילי.
5. חתך קו אמצע ישר 1 סנטימטר נלקח בהיבט הגחון של הזנב
6. נתיחתו הוארכה עד לעורק הזנב מזוהה ומבודד.
7. באמצעות קטטר סטרילי 26-מד, עורק הזנב cannulated ו0.15 מ"ל של דם עורקים הוא נסוג לתוך מזרק.
8. גזה סטרילית כרוכה סביב את החתך כדי להבטיח hemostasis לפני יישום vetbond לאטום את החתך.
9. Raלא מופעל נוטה על השולחן והאזור המגולח על אזור משנה העורפי הוא צייר עם פולידין.
10. שימוש בגישת חתך קו אמצע אנכי זכה לCisterna magna.
11. לאחר שזוהה מחט מד 25 מוכנס לתוך Cisterna magna ו0.15 מ"ל של CSF הוא נסוג לתוך מזרק והמדגם מאוחסן.
12. עכשיו, 0.15 המ"ל של תמיסת מלח רגילה (37 מעלות צלזיוס) מוזרק באיטיות לתוך Cisterna magna.
13. המחט נשארה במקום למשך 30 שניות ונסוגה בזהירות.
14. Hemostasis מובטחת והחתך נסגר באמצעות מכשיר הידוק.
15. החיה כיום נוטה להציב על משטח התחממות עם ראש 20 מעלות למטה עמדה עבור 20 דקות.
16. צעדי 2.1-2.15 חוזרים על עצמם במהלך 48 שעתי הניתוח השנייה לגזרים.
3. קורבן עכברוש
1. ביום 5 לאחר הניתוח השני, החולדות מוקרבות על ידי זלוף לב.
2. החולדה מקבלת מינון קטלני (0.2 מ"ל / ק"ג) של פלוס הקטלנית (VORTECH פרמצבטיקה בע"מ., דירבורן, מישיגן)
3. בחתך קו אמצע אנכי, חלל הבטן והוא התקרב הצפק נפתח.
4. פתיחת בית חזה קדמית מבוצעת והלב חשוף.
5. באמצעות קטטר 26-מד מחובר לפתרון חיץ פוספט (PBS pH 7.4 ועל 37 מעלות) החיה מנוקזת של דם ואז הוא perfused עם paraformaldehyde 4%.
6. לאחר הבטחת זלוף הנאות, זלוף הוא עצר והעכברוש הוא הביא לשולחן עריפת הראש.
7. לאחר עריפת הראש, rongeur עצם משמש כדי להסיר את הגולגולת להסרת מוח.
8. המוח וגזע המוח מופקים בקפידה מכספת הגולגולת ולהציב לתוך 4% פתרון paraformaldehyde ואוחסנו ב 4 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.
4. יצירת סעיפים להערכת Vasospasm
1. מוח החולדה שעכשיו כבר שקוע בסוכרוז 30% במשך 4 ימים הוא הביא לי הcryostat הדואר לחתך.
2. cryoprotected רגע, 12 סעיפי מיקרומטר נוצרים באמצעות cryostat, עם העורק הקדמי cerebellar הנח (AICA) כנקודת התחלה על מנת להבטיח עקביות בין הנושא.
3. 20 קטעים נוצרים עבור כל בעל חיים, שהסתיימו בעורק cerebellar המעולה (SCA).
4. הסעיפים מונחים על גבי זכוכית והעריכו לvasospasm באמצעות מתודולוגיה היסטולוגית

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

בתוך הפרוטוקול שתואר לעיל, ישנם מספר צעדים שאנו מאמינים שדורשים אפיון טוב יותר של המודל ממה שכבר תואר בעבר בספרות. כאן נתמקד בצעדים שהם חיוניים על מנת להשיג מודל לשעתק נמוך תמותת מוחות vasospasm חיות קטן ולהימנע ממלכודות אפשריות הקשורים למודל זה, אם לא נעשה בצורה נכונה.

1. להקיז דם אוטולוגית מעורקי הזנב:

מיקום זהיר של angiocatheter בעורק הזנב הוא הצעד הראשון החיוני במודל. איור-1 מציג את המיקום של קטטר 26 מד בעורק הזנב של החולדה. זה מייצג מיקום טוב עם טראומה מינימאלית ואיבוד דם. מיקום נכון של angiocatheter ניתן לאשר על ידי החזרת דם טובה.

2. הזרקה של דם להשתלת Cisterna Magna:

נתיחה עמוקה של tהוא אזור suboccipital מבוצע עד קרום atlanto-העורפי מיוצג כקרום לבן מבריק (איור-2). Cisterna magna הוא לגשת דרך לנקב דרך הממברנה עם מחט 25-מד. לאחר נסיגה של המחט, ריכוז הדם יש לציין, על מנת להבטיח נפח מספיק של דם אוטולוגית נשאר בתוך מרחב subarachnoid של Cisterna magna. איגום המוגזם של דם על ההיבט החיצוני של קרום atlanto-העורפי אינו רצוי משום שהמודל שלנו משתמש בהיקפים נמוכים יחסית (0.15 מ"ל) של דם אוטולוגית לעומת דגמים קיימים ואיגום עלול לגרום לכרכים לא יעילים של דם בחלל תת העכבישים. כמויות גבוהות יותר של דם בתדירות גבוהה גרמו לכשל נשימה כנראה ממוצרי דם לחץ תוך גולגולת מוגבר וזמן קצר לאחר הזרקה. האוסף של דם סביב עורקים בחלל תת העכבישים הוא אחת מכמה שיטות אפשריות ליזום vasospasm הניסיוני ⁸

3. דגימה

איור-3 מוצג דוגמא גזע מוח שנלקחה מעכבר בלי (איור-3A) ועם דימום (איור-3B) תת עכבישים. שים לב לאוסף של דם בחלל subarachnoid סביב עורק basilar באיור-3B. זה מייצג נפח מספיק דם כדי לגרום vasospasm של עורק הבסיס. החיצים באיור-3A ואיור-3B להגדיר את המידה של עורק basilar (BA). סעיפים (12 מיקרומטר) נלקחים מאורכו של התואר הראשון המשתרע מAICA לSCA.

4. סעיפים היסטולוגית

עשרים סעיפים נותחו עבור כל דגימת עורק בסיס בשליטת sah והמלוחהקבוצות (איור-4). האזור הפנימי luminal צלב החתך של עורק הבסיס היה קטן יותר והיו קמטים משמעותיים של lamina אלסטי פנימי הרמיזות של vasospasm, בsah הקבוצה (איור-4A). עורק הבסיס מקבוצת הביקורת היה גדול יותר המלוחה באזור ולא היה לי lamina אלסטי הפנימי גלי (איור-4B). כימות של מידת הפחתה באזור שבין שתי קבוצות ניתן למצוא באיור 5. מחקרים אלה מאשרים כי מודל זה אינו sah לייצר vasospasm מוחות שניתן להעריך באמצעות שיטות היסטולוגית. שטח חתך הצלב luminal שמש לקביעת vasospasm בגלל עיבוד רקמות לעתים תוצאות בחתכים אמורפיים של כלי השיט, ולכן קשה לקבוע קוטר מתאים למדידה ושימוש לניתוח נתונים. כל המדידות בוצעו באמצעות תוכנת NIH Image-J. בקבוצת sah, עורק הבסיס הואA (הפנימי = .056 מיקרומטר ± 3) היו קטן משמעותי מאשר בקבוצת הביקורת המלוחה (הפנימי = .069 מיקרומטר ± 3, p = 0.004) בשל vasospasm. משמעות נבדקה באמצעות Tukey / קרמר של ניתוח סטטיסטי. טבלה 1 מדגימה את הערכים הללו עם סטיות תקן מחושבים וסטיות התקן עבור שתי הקבוצות.

איור 1. הכנסת קטטר מד 26 מוכנס לתוך עורק הזנב.

איור 2. מראה של הקרום atlanto-עורפי (חץ) בחולדה.

איור 3. משטח גחון של חזיית העכברושinstem עורק בסיס (חיצים) עם (), ומבלי (ב '), אדון.

איור 4. סעיפים היסטולוגית מראים עורק בסיס במלח () ושליטה מלוחה (B) קבוצות. שים לב ששטח חתך צלב luminal של עורק basilar הוא קטן יותר וlamina אלסטי הפנימי הוא גלי (חץ) בקבוצת האדון, שניהם עולה בקנה אחד עם vasospasm.

איור 5. השוואה בין אזורי basilar עורק luminal צולבי חתך בין קבוצות ביקורת sah והמלוחות.

	ספירה	אומר (אזור חתך הצלב luminal)	STD. Dev.	STD. לטעות.
Sah	15	0.056 מ"מ	0.01	0.003
מלוח	13	0.069 מ"מ	0.012	0.003

טבלה 1. חישוב ממוצעים וסטיות תקן של קבוצות שליטת salien sah ו.

מחברים	2 ^nd sah	מקור	נפח מוזרק (1 ^st / 2 ^{ב ')}	להקריב (ההודעה 2 ^nd sah)	שיטות ניתוח	תמותה
Ryba et al. (1999)	48	עורקים	0.1/0.1 מ"ל	יום 5	EM	25%
סוזוקי et al. (1999)	48	Arteriaאני	0.3/0.3 מ"ל	יום 5	אנגיוגרפיה	לא ידוע
סאטו et al. (2002)	48	עורקים	0.35/0.35 מ"ל	יום 5	היסטולוגיה	20%
Aladag et al. (2003)	48	ורידים	0.3/0.3 מ"ל	יום 4	היסטולוגיה	18%
Vatter et al. (2006)	24	עורקים	0.2/0.2 מ"ל	יום 3	אנגיוגרפיה, בדיקת MRI	47%
Lee et al. (2008)	24	עורקים	0.3/0.2ml (n = 15) 0.2/0.1 מ"ל (n = 54)	ימים 1/3/4/7/9 *	היסטולוגיה	40% (n = 15) 1.5% (n = 54)
* חולדות הוקרבו דיפרנציאלי יום 1 (n = 7), היום 3 (n = 7), יום 5 (n = 7), היום 7 (n = 7), היום 9 (n = 7) et al. (2008)

טבלה 2. סיכום של המודלים שפורסמו הכפולים subarachnoid דימום החולדה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

קופים, שהרכב גנטי דומה יותר ותכונות אנטומיות לאדם, לחקות באופן הדוק יותר את אירועי vasospasm מוחות המאוחרים יותר ובקלות יכולה לעבור הדמיה בלתי פולשנית (MRI ואנגיוגרפיה) כדי לעקוב אחר שינויים בעורקים, מאשר מכרסמים ^8. עם זאת, מודלים הפרימטים הם עלות אוסרני וקשור בטיפול יותר מורכב וסוגיות אתיות, ממודלים של בעלי חיים קטנים. מודלי sah חיות קטנות שפותחו בעבר התמקדו בשלוש שיטות של גרימת sah: 1) ניקוב Endovascular עורקים של עורק תוך הגולגולת ומאפשר לדם לברוח לתוך החלל תת עכבישים ולאסוף סביב העורק הנפגע, 2) חשיפה כירורגית של עורקים ו הזרקה מקומית עצמית קריש; 3) הזרקה ישירה של דם (עצמי או מתורם) לתוך החלל תת עכבישי ^8. כל דגם יש יתרונות וחסרונות משלה. לדוגמה, מודל הניקוב endovascular צמוד ביותר מחקה את אירועי an aneurysקרע אבל מ 'קשור בשיעור תמותה גבוה מאוד וvasospasm המוקדם, בעוד הגישה כירורגית היא מלאכותית ואינה מחקה את אירועי המצגת האנושית הטיפוסית של sah aneurysmal. מודל ההזרקה הישירה שאנו מתארים כאן אין לי תמותה נמוכה יותר מזה של דגם הניקוב endovascular ויותר מקרוב מחק מצב sah אדם מאשר מודל ניתוחי פתוח. למרות שמודלים דומים כבר תארו בעבר, היה לנו עקומה למידה גדולה עם פיתוח מודל sah בגלל הסיבוכים הפוטנציאליים מאת הדקויות של המודל, לא היו מתוארים היטב בכל מקום בעבר. זה היה הכוונה שלנו טוב יותר להגדיר את המלכודות פוטנציאליות אלה, כך שחוקרים בעתיד בקלות רבה יותר יכולים להשתמש במודל sah לשעתק זה.

למרות שאנו מציעים מודל פשוט ויעיל עלות כדי לחקור את ההשפעות של vasospasm מתעכב, זה לא בלי המגבלות. בשל היכולת לחולדות במהירות כדי לנקות דם מהחלל תת עכבישים,וההבדלים אנטומיים בעורקי המוח עצמם, חולדות נחשבים מודל גרוע למחקר של דימום תת עכבישים מתעכב ^{6, 8.} יש כמה שלבים קריטיים שישפיעו על התוצאה של המודל. המנה של קוקטייל קטמין / Xylazine לא תעלה על 0.1 מ"ל / ק"ג על מנת להבטיח הרדמה נאותה. כל כמות של ריכוז הדם לאחר ההזרקה לCisterna magna תצוין ותעדה כפי שכבר ציינו כי ריכוז הדם מוביל למידה פחותה של vasospasm ^{9, 13, 15.} מחקרים אחרים הראו כי זריקות 2 של 24 שעות מלבד דם יכולות לגרום למידה משמעותית יותר של vasospasm ^6, אנחנו מאמינים שזה לא היה לחקות את כמובן הזמן של vasospasm בבני אדם שבו רק לעתים נדירות vasospasm מתרחש לפני שלושה ימים אחרי האדון. על מנת לחקות כמובן הפעם מקרוב יותר עשינו את הזריקה השנייה של 48 שעתי דם לאחר הזריקה הראשונה.

שינויים אפשריים של המודל שאנחנו describדואר כולל הזרקת כמויות גדולות של דם אל תוך החלל תת עכבישים, שינוי המקור של דם, משנה את מהלכה הזמן לזריקה השנייה, ולהקריב יותר רחוק מחמישה ימים לאחר הזרקת הדם השנייה. וריאציות כאלה בדגמים קודמים ניתן למצוא לעיל בטבלה 2. במהלך פיתוח המודל, השתמש בשני דגמי ההזרקה היחידות וזוגיים, שינה את הזמן בין זריקות עם מודל sah הכפול, נבדקו כמויות שונות של דם, בדקו את ההשפעות של דם hemolysed, ניסיתי ורידים לעומת עורקים ועצמיים לעומת דם תורם זריקות. כל אחד משינויים אלה להוביל לסיבוכים שהביאו למודל שמיש לבדיקת vasospasm המושהה. המודל שתואר לעיל יצר מודל נמוך תמותת basilar עורק sah חיות קטנה של vasospasm מתעכב המוחין (CV) ^{6, 7, 11, 13, 15} באופן עקבי.

שיעורי תמותה נמוכים ייאפשרו הבנה מעמיקה יותר של enמנגנון הצמיג של vasospasm מוחות ^13. Bederson et al. ¹ השתמש במודל הניקוב endovascular, דיווח שיעור תמותה של 50% בתוך 24 שעות של התבוננות. Veelken et al. ¹⁶ עם המודל שלהם endovascular נימת הרשפ"ת הניקוב תאר שיעור תמותה של 100% בקבוצת זלוף הנורמלית תוך 3 שעות של ההליך. מודל ניקוב endovascular מבוצע על ידי Lee et al. ⁷ הראה מידה משמעותית של vasospasm (קוטר התואר ראשון 230 מיקרומטר ± 70) בהשוואה למודל הדימום הכפול בתוך אותו המחקר (קוטר התואר ראשון 320 מיקרומטר ± 36), ושיעור התמותה מודל ניקוב נמסר להיות 44%. פי חמש עלייה ברמות גלוטמט, כמו גם עלייה בריכוזי חומצת שומן חלב ובחופשיים היא חלק מהתופעות מטבוליות המזיקות ראו כמה דקות לאחר אינדוקציה של sah שתורמים לתמותה המוגברת במודל הניקוב ^10.מחדש די ראיות כדי לתמוך במודל שהניקוב צריך חידוד נוסף כדי לשלוט בשיעורי התמותה הגבוהים.

שיעורי התמותה באמצעות המודל הכפול sah להשתנות בהתאם נרחב בנפח הזרקת דם ובקצב ההזרקה. מצאנו כי כמויות גדולות של דם ושיעורי הזרקה מהירים יותר, כל אלה מובילים לדום נשימה ומוות לעתים קרובות במהלך או מייד לאחר זריקת הדם. במהלך פיתוח מודל, שיעור התמותה נע בין 1.5% עד 47% בנפח דם להיות גורם החשוב ביותר המשפיע על תמותה. עם שכלולו של המודל הנוכחי אנו מתארים כאן, אנו מדווחים ללא הרוגים. ישנם מספר כלים העומדים לרשות לזהות בהצלחה ולהעריך את מידת קורות החיים; היסטולוגיה, מיקרוסקופיה אלקטרונית, אנגיוגרפיה, ^ו11 MRI ^{5, 6, 12, 15.} במודל שלנו, לא נעשה כל ניסיון להשתמש בכל שיטות אחרות מלבד היסטולוגיה.

בחתירה להבנה טובה יותרבסיס הפתופיזיולוגיה של קורות חיים מאוחרים במודלים של עכברים, ניתן לבצע מספר עצום של יישומים עתידיים כשלוחה של המודל שלנו. המטרה המהותית היא הפיתוח של תרופות שיכולים למנוע ולטפל בהצלחת קורות חיים בבני אדם. כדי לעשות זאת יש להבין את יחסי גומלין המורכבים ותהליכי multifactorial אשר יוזמים ומקיים את קורות חיים בבני אדם ^17. עם הקמתו של מודל חולדה מתאים לשרוד אדון, חוקרים יכולים להתמקד במנגנונים לטווח הקצרים וארוכים של vasospasm מוחות ולהימנע מנתונים אופייניים לניזק איסכמי משני בחולדת נוירונים ^{2, 4, 8} סותרים. אנו מאמינים כי מודל sah המתואר כאן יהיה כלי חקירה מועיל להבנת התהליכים אשר יוזמים ולקיים קורות חיים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין לנו מה למסור בנוגע למחקר זה.

Acknowledgments

ברצוננו להכיר את המאמצים של ד"ר מרי לו Vallano, מחלקה למדעי המוח ופיזיולוגיה, לתשומותיה היקרות בלכתוב את כתב יד לזה.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Male SD rats (250-300 g)	Taconic	SD-M
26 G Catheters	Webster	8416683
25 G Needles	Buffalo	305122
1 cc Syringes	Central stores	54245
Ketamine/Xylazine cocktail	Animal Care (SUNY)*	-
Betadine	Central stores	51458
Sucrose	Sigma	S9378-1kg
Paraformaldehyde	Sigma	P6148-500G
Phosphate buffer solution	Fisher	BP-399-4
Surgical Table	Harvard	PY2 72-2590
OCT Compound (cryoprotection)	VWR	25608-930
Superfrost Slides	Fisher	12-550-15
* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine.