Summary
フォトリソグラフィ法によりエッチングし、PDMSから製造されるマイクロ流体フローチャンバーは、EC機能不全や炎症に関連付けられた機能的転帰を調べるために適用されます。代表的な実験では、EC単層を活性化サイトカインの単球の細胞接着を調節する差動せん断応力の能力が実証されています。
Abstract
アテロームは、内皮機能不全をもたらす全身性炎症の高まり状態に寄与する代謝異常によって増強されています。しかし、リスクの個々のレベルを示す内皮細胞の初期段階で機能的な変更は、直接ガイド治療戦略を支援するために臨床的に評価されていません。また、地元の血行動態による炎症の調節は、アテローム性動脈硬化症の非ランダム分布に寄与しますが、機構は、 生体内で線引きするのは困難です。我々は、正確な流量条件下でのヒト内皮細胞（EC）および単球の炎症性イベントの定量的アッセイ代謝摂動のラボオンチップベースのアプローチを説明します。ソフトリソグラフィーの標準的な方法培養EC単層に直接バインドされている血管擬態流体室（VMMC）を 、microfabricateするために使用されます。1これらのデバイスは、試薬の少量をしながら使用することの利点を持っている明確に定義されたせん断場にさらされたECの膜で炎症イベントを直接イメージングするためのプラットフォームを提供しています。我々は正常ヒト大動脈EC（HAEC）におけるサイトカイン、2脂質A-3、4、RAGEによって誘導される5炎症を調査するためにこれらのデバイスを適用している。ここでは、アッセイの単球細胞（THP-1）圧延および差動のせん断特性の下でエアコンと炎症性サイトカインTNF-αによって活性化されるHAEC単層上で逮捕にVMMCの使用を文書化します。このような研究は代謝危険因子でatherosusceptibilityに機械的な洞察を提供しています。
Protocol
1。細胞培養と基板の準備
- 旋盤を使って、100 x 20 mmの組織培養ディッシュ（BDファルコン）から3インチの円形の基板をカットします。 70％エタノールに浸漬して基板を滅菌する。室温で1時間4ミリリットルI型コラーゲン（100μg/ ml）を持つペトリ皿とコートで行われ、その後4ミリリットル1×PBSですすいでください。
- 基板に直接1ミリリットルを適用することにより、6.5x10 5細胞/ mlとシードでヒト大動脈内皮細胞（HAEC、通路4-6）を中断します。 37℃、5％CO 2インキュベーター内で行われ、細胞が1時間の基質に付着することができます。
- 細胞への1xの抗生物質抗真菌剤溶液を補充した内皮増殖培地-2（EGM-2）の9ミリリットルを追加します。細胞が90％コンフルエントに達するまで2日ごとにメディアを変更します。
- 10％FBSおよび1x抗生物質抗真菌剤溶液を添加したRPMI 1640培地でTHP-1細胞を維持します。彼らは1の密度に達する通路細胞0 6細胞/ ml。
2。セルのせん断プロトコル
細胞は、カスタムコーンとプレートの細胞せん断装置（CSD）に条件付けされています。デバイスの詳細と設計仕様を表1および図4に記載されています。
- CSDを準備します。エタノールでチャンバハウジングを殺菌し、滅菌PBSですすいでください。コーンは、細胞単層に垂直であることを保証するために37°Cおよびレベルへの熱住宅を。ハウジングの底部から細胞を基板を組み立て、目的の高さにコーンを設定します。
- リーボビッツ-15（L-15）CO 2の存在下で適切なpHを維持するために、せん断媒体として内皮BulletKitを添加した培地を使用しています。炎症を刺激する剪断媒体に腫瘍壊死因子-α（TNF-α、は0.5 ng / ml）を加え、入口ポートに接続されたシリンジを介してデバイスに6ミリリットルを注入し、空気を導入しないように世話をするチャンバー内の気泡。
- 4時間の高振幅安定したせん断応力（HSS、15ダイン/ cm 2）または振動せん断応力（OSS、0±5ダイン/ cm 2、1 Hz）でのせん断細胞。希望するSSは正確に前述のようにマイクロステッピングモータで制御された細胞は、上記円錐を回転させることにより達成され6面の壁SS（τW）で近似されます。
μは媒体の粘度であり、ωはコーンの角速度であり、αはコーン角（0.5°）である。基板とコーンのアライメントは、精度の平準化と20に設定し、ギャップの高さを介して0.05°±τwの円周方向と半径方向の変動を最小限に抑えるために深さゲージを使用して、10μmの範囲内に調整されます。デバイスは、層流の特性を確保するために検証されています。 cを削除するデバイスからellsと単球接着の分析のために準備します。
3。 PDMSマイクロ流体チャンバーの作製
- アプリケーションに応じて、目的のマイクロチャンネル番号とチャンネルの高さのマスター型を取得します。このプロトコルで使用されている特定の設計の特性を表1に詳述されています。 これらを作成するための方法はすでによく文献に記載されています。1簡単に言えば、チャンネルのネットワークは、CADソフトウェアを使用して設計された（Autodesk Inventorの）と5000 dpiで印刷されます透明性。ネガ型フォトレジスト（SU8）は、100μmの厚さのシリコンウエハ上にスピンされています。透明度は重ねて、紫外線にさらされています。非重合フォトレジストが正のレプリカマスターを生成するために削除されます。
- 計量ボートの重量によるシリコーン硬化剤10：01とPDMS液混合シリコーンベースを作成し、5ミリリットル血清をピペットで攪拌する。壁をこすりしないように注意してくださいのソリューションにプラスチックのフレークを加えないようにするためにボートの重量を量る。
- 100x15mmのペトリ皿の中でマスターウェハを配置し、皿にPDMS液を注ぐ。
- 皿をカバーし、気泡を除去するために15分間、真空容器内に配置します。 15分後にペトリ皿を取り出し、軽く表面上に空気を吹き込むことによって余分な気泡を除去します。
- 70℃で1時間オーブンでペトリ皿を置き℃に皿を取り外し、鋭い刃を使用して流体チャンバを切り取る。
4。顕微鏡上のデバイスの組立
- 倒立顕微鏡に光源をオンにして、37にヒーター℃に設定してください。 10mlのシリンジにチューブを接続し、気泡が存在しないことを、蒸留水でいっぱいに。シリンジポンプにシリンジを置き、1ダイン/ cm 2の壁SSを誘導するために流量を設定します。チャネルの中心線に沿って生成された壁面せん断応力（τw）の標準を使用して近似されます。平行平板フローチャンバーの式：
μは体積流量Qは媒体の粘度であり、hはチャネルの高さ、Wはチャネル幅です。 注：チャネルは有限の幅があるので、実際のτwは wはチャネルに応じて異なりますアスペクト比、および測定は、側壁に最も近い25％で回避されます。1,7 - 水の中にPDMSチャンバーを配置し、個々のチャネルから空気を除去するために100μlのマイクロピペットを使用しています。バルブがオフに設定されていることを確認してチャンバーに真空アダプターを取り付けます。
- 目標以上HAEC単分子膜でペトリ皿を置きます。ペトリ皿の上にPDMSチャンバーを配置しない気泡がデバイスと単層の間に形成されないことを保証しながら慎重にHAEC単分子層の上に置きます。真空がオンになっているとチャンバーがしっかりと接続されているように、バルブを回します。 金属左の唯一の5ミリメートルがあるよう鈍ら19ゲージの針をカットします。バッファを使用してプラスチック製のタンクを記入し、PDMSチャンバーの入り口に入れられます。使用するチャネルの適切な数に対して、この手順を繰り返します。シリンジポンプからPDMSチャネル出口にチューブを取り付けます。
5。せん断応力下では単球接着アッセイ
- HBSS +のCa 2 + / Mg 2 +の + 0.1％HSAに2×10 6細胞/ mlのTHP-1細胞をサスペンドします。室温で15分間、間質由来因子-1（SDF-1、濃度50μg/ ml）でインキュベートすることによりアクティブ化THP-1細胞。
- フローを確立するため、シリンジポンプの電源を入れ、気泡を導入することなく、貯水池の細胞懸濁液50μlを加える。一度流れが完全に開発され、データ収集を開始します。
- 解決策が少なくなった場合は、貯水池にバッファを追加し、適切な流量で5分間実行されます。フロー·ストリーム内の任意の未結合細胞を洗浄するためのチャンネルにバッファを流れる続けています。
6。データ収集と分析
- チャンネル内の3箇所でのチャネルの縦軸に沿って完全に開発の流れは、次の2分間3フレーム/秒でデジタル画像のシーケンスを取得し、入学後、または最寄りの出口側ポートまたは25％の直前に記録しないように注意しながら壁。
- 単分子層と同じ焦点面での位相明るい外観を識別することによってフィールドごとに停止した細胞の数を数えます。
- しっかりとした細胞の逮捕は、10秒の動き<½セルの直径によって定義されています。 3ランダムフィールド/チャネルを介して平均データと、ImageJソフトウェアを使用して定量化する。
7。代表的な結果
血管内皮が均一に全身性炎症に寄与するアゴニストにさらされていますが、アテローム性動脈硬化症は、内皮機能の空間的な異質性をが関与し、動脈内の流れの乱れのサイトで優先的に開発の焦点疾患である8。 。9、10、TNF-αの細胞接着分子（CAMのアップレギュレーションを含むECで十分に特徴付けられた応答を誘導する;例えば、VCAM-1、ICAM-1、E-セレクチン）およびケモカイン循環から募集球、早期のアテローム性動脈硬化病変の特徴で、11動態内皮細胞の炎症性表現型の重要な調節因子である12高の大きさのせん断応力（HSS。例えば15ダイン/ cm 2）または拍動性のせん断応力（PSS、動脈のアテローム性動脈硬化症への抵抗のサイトに関連付けられている例えば15±5ダイン/ cm 2）は、TNF-α誘導応答をダウンレギュレートする。逆に、低振幅のせん断応力（LSS、例えば、2ダイン/ cm 2）または振動せん断（OSS;例えば0±5ダイン/ cm 2）in vivoでの影響を受けやすい部位の特徴、cytokiを悪化させるNE-誘発性炎症13、14私たちのマイクロ流体PDMSデバイスは、内皮機能と病態の調節における流体力学的因子と代謝ストレスの重ね合わせに関連した仮説を検証する機構の研究を実施するためのプラットフォームを提供します。アプローチの有用性と汎用性は、大きく分けて以下の代表的な結果により示されています。
図1。せん断応力は、差動TNF-α炎症性内皮単層にTHP-1細胞接着を調節する。これらのデータは、上記の、ビデオに記載されて説明した詳細なプロトコルを使用して取得した。 HAEC単層は、同時に炎症性サイトカインTNF-α（0.5 ng / mlと、VCAM-1のアップレギュレーションのために〜EC 50）およびHSS（15ダイン/ cm 2）やOSS（0±5ダインのいずれかの低用量に暴露されたdescriとして4時間のカスタムCSDで/ cm 2で 、1 Hz）を詳細なプロトコルのベッド。 THP-1細胞の逮捕は、PDMS流チャンバ内のせん断流の下で定量した。ヒト単球の表現型を模倣し、この細胞株は、その再現性と使いやすさのために選ばれました。 HSS減衰炎症反応は低下したTHP-1細胞停止の結果、OSSに比べて。データは、スチューデントのt検定により分析し、平均値±3つの独立した実験のSEMとして表されます。DeVerseらから許可を得て適応5。
以下のデータは私たちの公開作品から例を使用して、我々のアプローチの多様性を示しています。該当する場合、上記のプロトコルからの逸脱が示されている。
図2。せん断応力勾配におけるサイトカイン誘導VCAM-1発現と単球の動員の変調。 A）HAEC単層floの下で4時間TNF-α（0.3 ng / ml）で刺激したHele-Shawのフロー理論に基づいて設計さVMMCのワット15チャンネルの中心線に沿ってSSの大きさの線形減少は、二次元よどみ流れの合理化と終了を形成すると一致するようにチャンバの側壁を設計することによって達成されたチャンネルのISO-電位線を一致させることができます。入り口から軸方向距離（x）の時にこのチャネルの中心線に沿って生成された壁面せん断応力（τw）は次式で与えられます。
μは体積流量Qは媒体の粘度、ここで、hはチャネルの高さであり、w 1は、チャネルの入り口の幅、Lは総チャネルの長さです。Q 16 からSSの大きさの勾配を生成するために選ばれましたよどみ点における0〜入口ダイン/ cm 2 outleに""ちょうど近トン。B）-C）VCAM-1発現は、量子ドットに結合して刺激静的コントロールの割合の中央値の蛍光強度（MFI）として提示抗体を用いて免疫蛍光顕微鏡でその場で測定した。 SSは刺激HAEC（灰色の三角形）が低く、VCAM-1の基底レベルを調節していませんでした。しかし、VCAM-1発現は、〜2ダイン/ cm 2でピークとせん断の大きさ> 5ダイン/ cm 2（黒四角）で、以下のTNF-αのベースラインに戻ったり、LSSの大きさで、TNF-αの相対増加した。D）単球（10 6 / ml）を）のように前提条件と組織化単分子膜上のパラレル·フロー· チャンネルで5分間2ダイン/ cm 2で灌流した。内皮への単球の動員を定量的に与えられたせん断応力の大きさで、VCAM-1発現と相関していた。特に、monolayeの細かい空間分解能とVCAM-1発現と単球の動員を調べる機能rは、独立した実験でせん断わずか数離散値を適用することによって理解されないSSの大きさの狭い範囲で大きな変化を明らかにした。データは、TNF-αから* P <0.05静的な条件下では、反復測定ANOVAとニューマン·クールズ事後テストによって評価の違いによって分析した。データは平均±3から6の独立した実験からのSEM。 族らから許可を得て適応2。
図3。トリグリセリドに富んだリポ蛋白（TGRL）はドナー血清トリグリセリドレベルとVCAM-1発現に比例してサイトカイン誘導炎症を調節する。HAECの単層をTGRL（10 mg / dlと同時に4時間TNF-α（0.3 ng / ml）で刺激したアポ）静置培養における高脂肪の食事の後に被験者から単離された）。VCAM-1発現はフローサイトメトリーによって中断されたECで個別に測定した。と単球の接着には、詳細なプロトコルで説明されているようVMMCを用いて定量。データは、TNF-αからの％変化として表示されます。単球の逮捕は、ドナー血清トリグリセリドのレベルを直接に増加した。B）炎症誘発性ドナーのサブセットの単球停止がVCAM-1のブロッキング抗体の存在下で抑制された内皮細胞VCAM-1発現に直接比例して変化した。意義が対スチューデントt検定によって決定され、3-5の独立した実験からの平均±SEMを意味します。Wangらの許可を得て適応4。
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Discussion
我々は、CAMの発現と単球接着のリアルタイムイメージングを通じて、血管内皮の炎症性の表現型のオンチップ評価のためのマイクロ流体PDMSデバイスの使用について説明します。我々のアプローチの大きな利点は、このような動脈硬化血管内にせん断応力をミラーリング定義されている流体力学的条件の下で食事の脂質やサイトカインなどの炎症性メディエーターに曝露した細胞の内皮機能不全に関連付けられた成果を定量化する能力にあります。 VMMCは、限られた供給になると、安価でカスタマイズ可能な、高スループットの影響を受けやすいという追加の利点があるかもしれません試薬や材料の少量の使用を容易にする。
マイクロ流体デバイスの使用は、せん断に培養されたECの応答を調べるために数十年にわたって使用されているマクロスケールのアプローチに代わるものを表しています。これらは、CAであるそれぞれの平行平板フローチャンバー、円筒形のチューブ、コーン及びプレート粘度計を含む着実に、層流ポアズイユ流条件（16日）堂々のpable。これらのデバイスへの変更の壁せん断応力の時間的または空間的な変化を生み出す、あるいは動脈の波形を再現することができます。6しかし、一般的にこれらのデバイスは、メディアを大量に必要とする、以下の適応性、製造が高価であり、比較的低いスループットに苦しんでいます。
制限もVMMCsの使用に存在しています。これらのデバイスは、無限の幅を想定して平行平板流理論に基づいて設計されています。これは、幅が高さよりはるかに大きいマクロスケールデバイスのための合理的な仮定である。しかし、マイクロ流体チャネルの有限の幅は実際のτwは wはチャネルのアスペクト比に応じて異なりますので研究は、側壁の影響を排除するためにチャネルの縦軸の中心に沿って実施することが必要となる。1、7は同様に、測定値が近いtを取られていません入り口の影響を避けるために、チャネルの入り口と出口をO。私たちは、けがや私たちの観測された応答に寄与するとして、単分子層にデバイスを封止することにより生じたECへの損傷によって誘導される重要なパラクリン伝達効果や炎症を除外した。 PDMSは、分泌ケモカインおよび白血球およびVMMCの間で非特異的相互作用の吸収につながる可能性が疎水性分子に対して高い親和性を持っています。しかし、我々は、これが我々の研究期間中の問題であることが判明していない。2
培養細胞を用いたフローデバイスを使用すると、せん断応力に関して機構の研究と、原因と効果の実証を容易に還元的なアプローチを構成しています。しかし、in vitroアプローチのいずれかの制限は、それが十分にネイティブ動脈内の環境の複雑さを再現することを前提である。 生体内では 、内皮細胞は慢性的に複雑な流れのパターンに適応され、他の細胞、マトリックス、およびその動作を制御する液性メディエーターとの相互作用の対象となります。
それは短期的なモデルでは、このような通りである上に示された結果のすべてが時不変でないかもしれないことは注目に値する。しかし、彼らは我々が一般に急性炎症の課題の下でのメカニズムを調べるために行う実験の代表である。我々の研究に関連する戦略は、4時間は、VCAM-1発現のおおよそのピークを表すために低用量のTNF-αの刺激、炎症性ベースラインからの変化を監視することです。我々は、VCAM-1の表面発現の変化がこれらの条件の下で強化された単球の動員と相関しているいくつかの研究に記載されています。2-4、17
また、SS波形の選択は、差動内皮細胞の応答を呼び起こすことができます。私たちの代表的なプロトコルでは、sの下に条件付けHAECにおける単球の接着イベントを定量化するためにVMMCの使用を文書化相対的な抵抗（HSS）とカスタマイズされたセルのせん断装置の動脈のアテローム発生への感受性（OSS）のサイトの代表になるように選ばストレスを聴かなければならない。培養されたECのこれまでの知見、HSS減衰OSSに対する相対サイトカインの活性化への応答と一致しています。12、13の結果は、in vivoでの流れの乱れのサイトでのECの抗炎症活性化に大きな寛容と一致している。これらの条件は一般に、それぞれ平穏と乱流を表すために使用されていますが、それらは完全に動脈内の流れの複雑さを再現しません。しかし、文学の富は十分に顕著な流れの特徴を再現する簡単な近似としてそれらの使用をサポートしています14
特に、我々のコーン及びプレートベースのCSDは、以前報告したように長い期間、より複雑な波形とコンディショニング細胞を生成することができます。したがって、6に記載PRにCSDとVMMCのペアリングotocolは、最大限の柔軟性を付与する。このアプローチの検討はされ、周方向にHAEC体験流れの中で、CSDのせん断空調の方向に対してVMMCの方向にあります。そのチャンネルはこれまで、できるだけエアコン細胞の上流の流れ場と入口と平行になるように、実際には、VMMC指向です。チャネルは、これは合理的な近似を表していることを十分に小さい。しかし、我々はまた、VMMCのせん断空調の方向に平行または垂直に流れる球は、 図2に示す結果に影響を及ぼさなかったという以前の研究で実証した。2
in vitroでの技術に関連付けられた追加の考慮事項は、単離されたECや単球における文化と異質ではECの継代シリアルに関連付けられた表現型のドリフトによって誘発される変動が含まれています。 HAECは、通常、通路6と、各ロットによって使用されるべきTNF-αへの一貫した炎症性の応答を特徴とする。そのようなTHP-1などの細胞株の使用は、ドナーの活動に変化し、容易に単離することによって活性化され、単球、の使用に伴うばらつきを減らすことができます。再現性の正確な機能の読み出しは、セルの準備と転送時間を最小限に抑える必要があることを確認するために。コントロールの慎重な選択が意味のある結果を解釈する必要があります。実験に応じて、これらは未処理または静的培養細胞、TNF-α処理、不活性THP-1細胞、ブロッキング抗体、siRNAまたは薬理学的阻害剤の使用などが含まれる場合があります。
アプローチの多様性の証として、我々は、サイトカイン、2脂質A-3、4、HAECにおけるRAGE誘起5炎症を調査するためにこれらのデバイスを適用している。我々の研究は、人間のsから血清由来の脂質粒子の炎症性の電位を測定する含まれている内皮細胞3、4、単球上ubjects 17の代替戦略では、単球接着のメカニズムを調べるためなどのVCAM-1として固定化した分子で誘導体化基質と表示される場合があります。このアプローチを使用して、我々は以前に、ヒト17と、マウスの高脂血症時のVCAM-1の単球接着の-4非常に遅い抗原（VLA）と協働して接着分子CD11cは、機能的役割を明らかに18球を容易にしてアクティブにすることができますので、それらの単離、我々はまた、より高感度で再現性の検出を可能にするために私たちのラボオンチップデバイスで使用する全血アッセイを開発しました。 図17は、
最終的には、アテローム性動脈硬化症の基礎となる初期の炎症事象への洞察を提供することに加えて、我々はwを舗装、この技術開発は、炎症媒介性心血管疾患の個々のリスクを評価するための忠実なex vivoでのアプローチにつながることを想像する単球とECの活性化について報告するパーソナライズされた診断薬の開発のためのAY。
| コーンとプレートの細胞せん断装置 | ||
| 円錐半径 | 0.06985 | メートル |
| 円錐角 | 0.00877（0.5°） | ラジアン（度） |
| ギャップの高さ | 20±10 | μmの |
| 最大角速度（ここで説明する実験用） | 18.85 | ラジアン/秒 |
| 動粘性率 | 0.00077 | m 2 / sの |
| マックスR番号（ここで概説した実験用） | 0.000758 | 無次元 |
| VMMC仕様 | ||
| チャネル長さ | 8.0 | ミリメートル |
| チャネルの高さ | 60 | μmの |
| チャンネル幅 | 2 | ミリメートル |
| レイノルズ数 | 1.67 | 無次元 |
表1。CSDとVMMC仕様。
図4。コーンとプレートの細胞せん断装置（CSD）の断面図。CSDは、静止細胞培養基板上に回転ステンレス鋼円筒形円錐形で構成されています。円錐角とギャップの高さは、培地の存在下で製造せん断場の性質を定義する重要なパラメータである。粘性力と遠心力の関係を示す変更されたレイノルズ数は次式で与えられます。
<BR />
rは円錐の半径であり、ωは角速度であり、αは円錐角であり、νは流体の運動速度である。 Rは<< 1遠心力が低い場合には、流れは層流と純粋な方位であり、誘発せん断応力は、単層にわたって一定である。私たちのCSDで19日培養細胞を用いた基板を収容するチャンバ内に底部からロードされます。コーン。培地は、チャンバに追加され、せん断流体として使用されます。コーンは、事前にロードされた高精度のベアリングとマイクロステッピングモータにより駆動される回転が搭載されている。精密なレベリングシステムは、セル基板に整列垂直を維持します。ギャップの高さは、（セル基板への円錐の頂点からの距離によって定義される）の高精度深さゲージを使用して設定されています。グリースがキャッチし、メディアのシールは、チャンバ筐体が細胞がきれいに油やごみを無料で保管されていることを確認する場所にある。
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Disclosures
利害の衝突が宣言されません。
Acknowledgments
この作品は、スコット·I.サイモン、アンソニー·G. PasseriniにNIH / NHLBIの助成金R01 HL082689によってサポートされていました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 x 20mm Petri Dishes | BD Falcon | 353003 | |
| Ethanol 95% | EMD Chemicals | EX0290-1 | |
| DPBS | Cellgro | 21-031-CV | |
| Type I Rat Tail Derived Collagen | Gibco | A10483-01 | |
| Human Aortic Endothelial Cells | Genlantis | PH30405A | |
| Antibiotic-Antimycotic Solution | Invitrogen | 15240-062 | |
| Endothelial BulletKit | Lonza | CC-4176 | |
| Endothelial Basal Media-2 | Lonza | CC-3156 | |
| 10 ml Syringes | BD Falcon | 309604 | |
| Polyurethane tubing | Tygon | ABW0001 | |
| Leibovitz-15 Media | Gibco | 11415-069 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Base | Dow Corning | 184 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Curing Agent | Dow Corning | 184 | |
| SU8 Photoresist Master Wafer | UC Davis Pan Lab | N/A | |
| Eclipse TE200 Inverted Microscope | Nikon | Eclipse TE200 | |
| Syringe Pump | Harvard Apparatus | PHD2000 | |
| 19 gauge hypodermic needle | Kendall | 8881 | |
| THP-1 Monocytic Cell Line | ATCC | TIB-202 | |
| HBSS (Hanks Buffered Saline Solution) with Ca2+/Mg2+ | Gibco | 14025-092 | |
| Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) | R&D Systems | 210-TA-010 | |
| Stromal Derived Factor - 1 (SDF-1) | R&D Systems | 350-NS-010 | |
| RPMI 1640 | Cellgro | 10-040-CV | |
| Human Serum Albumin (HSA) | ZLB Behring | NDC 0053-7680-32 | |
Table 2. Specific reagents and equipment. |
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References
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