Summary
Dit protocol beschrijft regelmatig onderhoud en zorg aan optimale omstandigheden voor zebravis veeteelt te behouden. De video illustreert het protocol dat voor systeem onderhoud, regelmatige huisvesting, voeding, fokkerij, en het verhogen van de zebravis larven.
Abstract
Dit protocol beschrijft de reguliere zorg en het onderhoud van een zebravis laboratorium. Zebravis zijn nu aan populariteit wint in de genetica, farmacologische en gedragsonderzoek. Als vertebrate worden zebravis share aanzienlijke genetische sequentie-overeenkomst met mensen en gebruikt als een diermodel voor verschillende menselijke aandoeningen. De voordelen van zebravis in vergelijking met andere veel voorkomende gewervelde modellen zijn voorzien van een hoge vruchtbaarheid, lage onderhoudskosten, transparante embryo's, en snelle ontwikkeling. Als gevolg van de uitloper van belang in de zebravis onderzoek, de noodzaak om vast te stellen en onderhouden van een productieve zebravis behuizing faciliteit neemt toe. Hoewel literatuur beschikbaar voor het behoud van een zebravis laboratorium wordt een beknopte video protocol ontbreekt. Deze video illustreert het protocol dat voor reguliere huisvesting, voeding, fokken en opvoeden van zebravis larven. Dit proces zal onderzoekers helpen bij het natuurlijke gedrag en optimale voorwaarden voor zebrafis begrijpenh veeteelt en dus het oplossen van experimentele problemen die voortkomen uit de vis houderijomstandigheden. Dit protocol zal van grote hulp aan onderzoekers van plan om een zebravis laboratorium op te richten, en ook voor studenten die van plan zijn om zebravis gebruikt als diermodel afstuderen.
Protocol
1. Onderhoud van het Systeem
- Zebravissen worden in een circulerend systeem dat continu filters en belucht het systeem te handhaven water de waterkwaliteit nodig is voor een gezonde huid. De circulerende systeem helpt ook om te filteren overtollig voedsel en vis uitwerpselen. Verschillende bedrijven bieden zebravis systemen, maar we gebruiken systemen van aquatische habitats, de VS in ons laboratorium. De kamertemperatuur of de temperatuur van het reservoir wordt in het algemeen gehandhaafd tussen 26-28,5 ° C en de lichtomstandigheden 14:10 uur (licht: donker). De zebravis als systeem van aquatische habitats (bijv. Benchtop systeem) kost ~ 9000 USD. Dit tafelmodel systeem met twee planken kan houden zes 10-liter, twaalf 3-liter, of twintig 1,5-liter tanks op elke plank. Meerdere regels vis (bijvoorbeeld transgene, mutant, wild type) kan worden ondergebracht op hetzelfde systeem.
- Een reeks verschillende soorten filters worden gebruikt in het systeem. In ons systeem, water uit alle tanks paSSeS door een 120-micron filter pad, 50-micron filter canister, biologisch filter, actieve kool absorptiefilter en UV desinfectie filter alvorens verspreid terug naar de tank. De-chlorinated/aged water wordt gebruikt bij de zebravis systeem. Water kan worden gedeactiveerd gechloreerde verouderen gedurende ten minste 48 uur. Onder ideale omstandigheden moet het water worden bewaard in een reservoir met een pomp circuleert het water warm te houden, en versnellen van de de-chlorering.
- De pH van het systeem water moet dagelijks worden gecontroleerd en onderhouden tussen 6,8 en 7,5. Indien nodig moet natriumbicarbonaat worden gebruikt om de pH te verhogen.
- Aquaria moeten regelmatig worden schoongemaakt. Om een aquarium schoon te maken, sluit de waterstroom om deze tank, afvoer overtollig water door het kantelen van de tank naar achteren en verwijder voorzichtig de tank uit het systeem. Vuil en algengroei zullen duidelijk worden aan de onderzijde en zijkanten van de tank.
- Plaats de baffle in een schone tank, en vul het met de-gechloreerd water (aka System water). Breng zorgvuldig de vis in deze tank met een vis net. Sluit het deksel en breng het naamplaatje van de tank. Plaats de schone tank in het systeem en het inschakelen van de watervoorziening.
- Om de vis net, spray ontsmet met 70% ethanol, spoel met water en laat het drogen alvorens ze opnieuw te. Verwijder het schot van de vuile tank en spuit beide delen met 70% ethanol. Spoel grondig met leidingwater en laat de tank en baffle volledig drogen alvorens ze opnieuw te.
- De circulerende systeem filters moeten regelmatig worden gecontroleerd en aangepast naar de juiste werking te garanderen. Deze filters moeten regelmatig worden vervangen om een goede en schone watervoorziening te verzekeren van alle aquaria.
- De 120-micron filter pad is meestal verplaatst of vervangen dagelijks, verplaatsen in de richting van de waterstroom naar volledig gebruiken voordat u met een nieuwe.
- De Bus filter moet wekelijks worden gewijzigd. Om de potfilter wijzigen, verwijder het filter unit door te draaien miericlockwise met een sleutel of handen. Leg een plastic zeil of handdoek hieronder om te voorkomen of te absorberen water morsen. Vervang de potfilter door een nieuwe en monteer de filtereenheid terug in het systeem, zorgvuldig vast met handen en een sleutel indien nodig.
- De koolfilter moet tweewekelijkse worden gewijzigd (om de twee weken). Om de koolstof filter te vervangen, verwijder voorzichtig de koolstof filter met een sleutel. Gooi de gebruikte actieve kool en vervang deze door nieuwe actieve kool. Monteer de koolstof houder en plaats het terug in de filtereenheid. Plaats de filtereenheid terug in het systeem. Schakel het systeem en controleer of er water stroomt naar de filter. Indien nodig, spoelen wat water door de pijpen om vuil in de leidingen voordat het filter in het systeem.
- De biologische filter moet worden gereinigd om de zes maanden. Biologisch filter staat meestal tussen de bus en koolstoffilter in het circulerende systeem. Om de biologische filter, rem wijzigenove de filtereenheid uit het systeem. Laat de druk van het filter door op de knop druk. Schroef het filter met een sleutel. Over het algemeen twee mensen nodig voor deze stap. Verwijder het deksel van het filter. Leeg de inhoud van het filter in een container de gezeefde siporax scheiden van het water. Opmerking: siporax is een fijne poriënstructuur biofilter media die de mogelijkheid om zowel nitrificatie en denitrificatie uit te voeren.
- Als de siporax erg vuil is vervangen door nieuwe. Vul het filter unit met het systeem water (de-gechloreerd water), sluit het deksel, de terugkeer van de filtereenheid op het systeem en schakelaar op de watervoorziening. Opmerking: In een aquarium gewend, de siporax zal de thuisbasis van een aantal nitrificerende bacteriën zijn. Deze micro-organismen zijn essentieel voor het handhaven van de stikstofkringloop in het aquarium en verwijderen van de primaire behuizing voor het biologische filter (het vuile siporax) kan leiden tot een ernstige ammonia piek, gevolgd door een nitriet spike terwijl de new biologische filter (met nieuwe siporax) is het herstel van. Beide tussenliggende staten van de stikstofkringloop kan giftig zijn voor in het water levende organismen, en kan doden zebravis als niet gereageerd op passende wijze. Daarom is het belangrijk om een secundaire biologische filter elders in de zebravis behuizing (bijv., in de verzameltank in waterhabitats systeem) snel repopulatie van deze belangrijke micro-organismen mogelijk te maken op nieuwe siporax.
- UV filters worden gebruikt om het systeem biologische verontreinigingen (zoals bacteriën) te controleren en moet worden vervangen om negen tot tien maanden. Opgemerkt dat UV filter desinfectie dosering is ~ 110 mJ / cm 2 aan het begin van de levensduur en de dosis afneemt in de loop van de tijd, zodat het noodzakelijk is de wereld vervangen, zelfs als het lijkt nog steeds functioneel.
2. Feeding
- Zebravis kan worden met droogvoer (food grootte van 100 micron voor larven tø 300/400 micron voor volwassen vissen) of levend voer (pekelkreeftjes). Pekelkreeftjes (Artemia sp.) Eieren zijn verkrijgbaar bij de plaatselijke dierenwinkels en kunnen worden uitgebroed in het laboratorium door het volgen van de eenvoudige stappen hieronder beschreven.
- Los rode zee zout in de leeftijd van water door het plaatsen van een beker met zout op een magneetroerder voor een betere oplosbaarheid. Als alternatief kan zout worden opgelost in water door beluchten met de beluchting buis. Instant Ocean zout kan ook gebruikt worden als arceringen oplossing als rood zeezout niet beschikbaar. Pekelkreeftjes kan verdragen een breed scala van het zoutgehalte, maar we uitkomen onze Artemia (10-15 g) 30-35 g / L rode zee zout water. Opmerking: In het geval dat artemia eieren zijn niet direct beschikbaar in de lokale dierenwinkels vervolgens ingekapseld pekelkreeftjes kan ook gebruikt worden na "decapping" ze in batches voordat u ze toevoegt aan de garnalen broederij. Dit kan ook voorkomen dat frequente reizen naar de dierenwinkel.
- Vul de pekel kweekapparaat met salt water en voeg de garnalen eieren in een concentratie van 1,2 eetlepels / liter. Krachtig beluchten de uitkomstruimte met een luchtpomp en laat de artemia eieren om uit te komen voor ~ 48 uur.
Opmerking: Er moet worden opgemerkt dat niet-verrijkte Artemia voedingswaarde per uur na uitkomen verliezen. Daarom kan het passend zijn om hatch dan 24 uur of verrijken over 48 uur om de maximale voedingswaarde van de zoutwatergarnalen verkrijgen. - Het afvalwater van het uitkomen systeem wordt toegevoegd aan quarantaine afval te worden gedesinfecteerd met bleekmiddel en later afgevoerd.
- Om de pekel garnalen te verzamelen, verwijder de lucht pijp en laat de cultuur om voor 4-5 min genoegen, maar niet langer dan 10 minuten. De gearceerde pekelkreeftjes verzamelen op de bodem van de Hatcher.
- Verzamel pekelkreeftjes met de kraan onderin de uitkomstruimte. Gooi de eerste stroom die bestaat uit niet-uitgekomen artemia eieren.
- Scheid de pekel garnalen uit het zoute water, met behulp van een artemia collectie netto (~ 350 micron nylon mesh). Spoel de pekelkreeftjes van het net in een container met behulp van het systeem water.
- De verzamelde pekelkreeftjes zijn gewoonlijk aanwezig in hoge concentratie op de bodem van de houder waardoor het een nogal oranje kleur.
- Voer de pekelkreeftjes om de zebravis met behulp van een pipet of een druppelaar / Squeezy fles. De hoeveelheid afgegeven voedsel is afhankelijk van de grootte van de populatie van de afzonderlijke tanks. De algemeen aanvaarde verhouding voor zebravis is 4% van het lichaamsgewicht ontvangen voedsel per dag. Zebravis mag nooit worden overvoerd, omdat dit kan het nitraatgehalte te verhogen in het water, mogelijk van invloed hun broed-, of levensvatbaarheid, zoals sommige vissen kunnen sterven als gevolg van te veel eten.
- Bij het injecteren van voedsel in dewater, hongerige vissen zwemmen om de pekel garnalen te vangen.
- Droge voeding kan worden uitgevoerd met behulp van een Aquatic Eco-System / aquatische habitats eenvoudige veer-based vissen snackautomaat. Als alternatief kan droge voeding ook worden uitgevoerd met behulp van een eenvoudige lepel of door het snijden van een plastic druppelaar diagonaal met een schaar om het een verschijning van een kleine lepel.
3. Teelt
- Zebravissen initiëren breeding aan het begin van licht. Bevruchte eieren kan verkregen worden ofwel door middel van in-tank fokkerij of paarsgewijze fokkerij. Terwijl in-tank fokkerij is meer arbeids-efficiënter en wordt uitgevoerd voor regelmatige embryoteams in ons laboratorium, wordt paarsgewijze fokkerij voorkeur wanneer genen of mutaties moeten worden afgeschermd van de afzonderlijke vissen.
- Voor in-tank fokkerij, de montage van de in-tank fokker en laat langzaam in het aquarium na het begin van het licht. Als alternatief kan in-tank fokken set-up 's nachts worden achtergelaten in het aquarium.
- Ldakrand van de in-tank fokker voor ongeveer 15 minuten, zodat de vis om te paren voordat u de fokker van de tank en het verzamelen van de eieren.
- Paarsgewijze fokken is meestal opgezet laat in de middag na het voeden.
- Monteer de kweekbak en vul het met oude systeem water.
- Overdracht een vrouwelijke en een mannelijke naar tegenovergestelde zijden van de kweekbak. Vrouwtjes kunnen worden onderscheiden van mannen, vanwege de grotere onderbuik. Mannetjes kunnen ook worden onderscheiden van vrouwen omdat ze slanker en donkerder van kleur dan de vrouwtjes. Bovendien mannetjes meer gele verkleuring in de anaalvin dan bij vrouwen (zie figuur 1). In geval van twijfel op zoek naar de legboor in vrouwelijke zebravis (zie figuur 4).
- Verwijder de verdeler de volgende ochtend kort na het begin van licht. Toestaan koppelen ongestoord plaatsvinden gedurende 20 minuten of totdat een voldoende aantal embryo gelegd op de bodem van de tank.
- Na fokkerij,de terugkeer van de vissen om hun tanks. Verzamel de eieren met behulp van een zeef.
- Grondig wassen van de embryo's met het systeem water.
- Breng de embryo's om een petrischaal door het spoelen van de zeef met embryo medium, alias EM3 (NaCl, 13,7 mM; KCl, 0,54 mM; MgSO4, 1,0 mM, CaCl2, 1,3 mM; Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM, NaHCO3, 4,2 mM).
- Embryo's kunnen worden onder een microscoop. Bevruchte eicellen worden dan gescheiden van de onbevruchte eieren met behulp van een naald en een pipet (zie figuur 3).
4. Verhoging van Larven
- Bevruchte eieren worden in een incubator (~ 28,5 ° C) gedurende 72 uur totdat de larven zijn uitgekomen.
- Nu de larven zijn uit het chorion en zwemmen vrij ze zijn klaar om over te dragen aan een van de belangrijkste vis tank. Larven moeten worden gevoed vanaf 5 dagen na de bevruchting (DPF) en worden bewaard in embryo medium (samenstelling beschreven inDeel 3, 10) of het systeem water. Larven kunnen worden bewaard in ronde schotels met ~ 50% of meer water daarin veranderd in een dagelijkse basis. Het water verandering moet ook het verwijderen van dode of zieke larven en andere rommel.
- Zacht overdracht de larven in een tank die een klein formaat baffle (ongeveer 300-400 micrometer). Dode en zieke larven moeten worden verwijderd en een paar milliliter water moet langzaam worden toegevoegd op een dagelijkse basis.
- Na 14 dagen kunnen larven tanks uitgesteld worden in het systeem, en worden geleverd met een kleine stroom van de wielersport water (1-2 druppels per seconde). Als de larven groeien, kan de waterstroom worden verhoogd. Verschillende maten van schotten kan gebruikt worden afhankelijk van de grootte van de larven (bijv. baffle maat 300-400, 500, 700-750 en 1000 micron) en een normale plastic schot moet worden gebruikt voor de volwassen vissen.
- Het duurt meestal 3 maanden voor de embryo's zich ontwikkelen tot seksueel volwassen.
Representative Results
Zebravis huisvesting en het onderhoud is eenvoudiger en goedkoper dan traditionele knaagdier modellen. Enkele duizenden zebravissen kunnen worden ondergebracht in een klein laboratorium. Als gevolg van dit protocol, zal onderzoekers in staat om een zebravis faciliteit die gezonde omstandigheden leveren aan de zebravis te beheren. Daarnaast zullen de volgende afbeeldingen helpen bij het identificeren bevruchte eitjes, volwassen zebravis, en hun voedsel. Een illustratie van een mannelijke zebravissen (Figuur 1A) en vrouwelijke zebravis (Figuur 1B & 1C) wordt getoond om onderzoekers te helpen onderscheid te maken tussen een mannelijke en een vrouwelijke zebravis voor het fokken doel Figuur 2 toont een microscopisch beeld van;. Pekelkreeftjes op 12X (Figuur 2A), een Artemia bij 90X (figuur 2B), en een onbevrucht ei aan Artemia 90X (figuur 2C). Dit zal helpen bij het begrijpen van het verschil tussen de onbevruchte en bevruchte pekelkreeftjes voor proper vervoederingsdoeleinden. Bevrucht en onbevruchte eieren weergegeven in figuur 3. Figuur 3A toont een microscopisch beeld van bevruchte en onbevruchte embryo. Onbevruchte embryo's zijn over het algemeen ondoorzichtig en / of met gescheurde cel (len) in het chorion (zwarte pijl) terwijl bevruchte embryo's verschijnt intact en groeien naar het volgende celdeling staat (voor gedetailleerde lezing van de verschillende stadia van zebravis embryo's zie 1). Sterkere vergroting aanzicht van een bevrucht en een onbevruchte eicel wordt getoond in figuur 3B en 3C respectievelijk. Figuur 4 toont een vrouwelijke zebravis de legboor om onderzoekers maken tussen een mannelijke en een vrouwelijke zebravis.
Diverse kritieke problemen die zich kunnen voordoen in een zebravis laboratorium zijn verstopping van de watervoorziening aan individuele / alle tanks in het huisvestingssysteem, slechte waterkwaliteit, en lekkage in leidingen of reservoir van de circulerende systeem. Bovendienproblemen bij het verkrijgen van embryo's van de fokkerij zou een andere zorg. Problemen oplossen van deze problemen wordt hieronder besproken.
Figuur 1. Een illustratie van een mannelijke zebravis (A) en vrouwelijke zebravis (B, C).
Figuur 2. Een microscopisch beeld van pekelkreeftjes 12x (A), een Artemia bij 90X (B), en een onbevrucht ei aan Artemia 90X (C).
Figuur 3. Microscopische weergave (16X) van bevruchte en onbevruchte eieren, waar slechts twee eieren zijn onbevrucht, de onbevruchte eieren worden aangegeven met zwarte pijlen (A). Hogere vergrotingview (90X) van een bevruchte (B) en een onbevruchte eicel (C).
Figuur 4. Een vrouwelijke zebravis's legboor (aangegeven met zwarte pijl) illustratie.
| Parameter | Optimaal bereik |
| Alkaliteit | 50-150 mg / L CaCO 3 |
| pH | 6,8 tot 7.5 (6,0-8,5 getolereerd) |
| Temperatuur | 26-28,5 ° C |
| Hardheid | 50-100 mg / L CaCO 3 |
| Un-geïoniseerde ammoniak | <0,02 mg / L |
| Nitraat (NO 3 -) | <50 mg / L |
| Nitriet (NO 2 -) | <0,1 mg / L |
| Opgeloste zuurstof | > 6,0 mg / L |
| Zoutgehalte | 0,5-1 g / L |
| Geleidingsvermogen | 300 -1.500 ĩS |
Tabel 2. Parameters voor de waterkwaliteit. Waterkwaliteit parameters. Optimaal bereik voor omgevingsparameters in de zebravis aquarium 11.
Discussion
Zebravis zijn afkomstig uit de rivier de Ganges in Noord-India en worden steeds populairder in het onderzoek, zowel in hun volwassen en larvale stadia 2, beoordeeld door Spence et al.. 3. Zebravis hebben een aantal voordelen ten opzichte van andere dierlijke modellen zoals een hoge vruchtbaarheid, gemak van onderhoud, optische klaring van embryo's, snelle embryonale ontwikkeling, en lage onderhoudskosten. Ze vatbaar zijn voor genetische manipulatie 6 en geschikt voor high-throughput drug screening 4,5. De bevruchting externe hetgeen voordelig is voor hun gebruik door ontwikkelingsbiologen. Door deze gunstige eigenschappen, zijn zebravis aan populariteit wint in de genetica 7, farmacologische 8 en gedragsonderzoek 9,10. Er zijn een aantal problemen voor het handhaven van een zebravis faciliteit en zebravis embryo veeteelt te verkrijgen. Hierin beschrijven we onze ervaringen en aanbevelingen bij het aanpakken van deze uitdagingen en oVERZICHT een protocol voor onderhoud van het systeem, het voeden, fokken en opvoeden van de larven.
Onderhoud van het systeem
Voor het behoud van de zebravis in een gezonde conditie, is het belangrijk om hen te voorzien van een schoon milieu in een goed functionerend aquarium systeem. Een belangrijk onderdeel hiervan is het wijzigen van de systeeminstellingen filters regelmatig zodat alle tanks juiste waterstroom en schoon water krijgen. Het is essentieel om het falen van de fiets-watervoorziening te vermijden elke tank als gevolg van geblokkeerde systeembuizen. De buizen kunnen worden gereinigd met een hogere dan normale waterdruk en debiet als verstopping optreedt. Idealiter zou ongeveer 10% van het water van het systeem worden vervangen dagelijks om een goede waterkwaliteit te behouden. Als alternatief kan het water worden vervangen terwijl het veranderen van de opvangbeker of Carbon filter. Dit zorgt ervoor dat vuil afgezet in de verbindingspijpen deze filters verwijderd. De kwaliteit van het water moet worden gecontroleerd op een regelmatige basis. Parameters zoals alkaliteit, pH, temperature, hardheid, ammoniak, opgeloste zuurstof, zoutgehalte, en geleidbaarheid moet worden beschouwd als belangrijke factoren in het vertegenwoordigen van de kwaliteit van het systeem water (zie tabel 2 voor details). Op zijn minst nitraat, moet de pH en de temperatuur worden gecontroleerd op een regelmatige basis om een goede waterkwaliteit te waarborgen voor huisvesting zebravis. Ideaal nitraat (NO 3 -) niveaus <50 mg / L 11, als hoog deze kunnen verminderd worden door het vervangen van het water in het circulatiesysteem met het verse water systeem. Af en toe, ik filters niet goed passen en lekken dus het is aan te raden om op lekken te controleren na een filter. Indien de waterstroom van de belangrijkste reservoir ofwel geblokkeerd nadat de waterpomp of wijzigen van een filter, kan de waterstroom worden hersteld door een los of verwijderen van de filter voor een paar seconden om een vacuüm wordt gegenereerd in de leidingen vrij. De tijd nodig om filters kan veranderen afhankelijk van verschillende factoren zoals de totale biologische belasting on het systeem schoon andere filters en vuil afgezet in de pijpen. Daarom moet filters onmiddellijk vervangen worden als ze verschijnen vuil of als alle tanks zijn niet het ontvangen van de juiste watertoevoer. Ook wordt aanbevolen dat de vis net worden gereinigd met 70% ethanol, en gespoeld met water om het te ontsmetten en laten drogen alvorens opnieuw te worden gebruikt. Drogen zorgt voor verdamping van ethanol die anders is giftig voor vissen.
De meeste systemen maken gebruik van de zebravis gechloreerd kraanwater, maar sommige systemen gedeïoniseerd water. Het is belangrijk om de geleidbaarheid van het water te houden systeem van 300 tot 1500 uS ~ Dit vermindert het energie de vis moet blijven lichaamszouten. Daarom kan zebravis niet worden bewaard in gedeïoniseerd water tenzij zouten worden toegevoegd aan de optimale geleiding te handhaven. Er bestaat een risico van mogelijke hoge koperconcentraties in het systeem water als leidingwater wordt gebruikt omdat de koolfilter niet verwijderd koper. Daarom users moet controleren voor koper concentraties en te voorkomen koperen leidingen waar mogelijk.
Feeding
Zebravis mag nooit worden overvoerd, omdat dit kan het nitraatgehalte te verhogen in het water, mogelijk van invloed hun broed-11, of de levensvatbaarheid, zoals sommige vissen kunnen sterven als gevolg van te veel eten. Wij raden het verstrekken van geen voedsel meer gedurende een voeding dan een tank van vis kan afmaken binnen 10 minuten. Het is zeer belangrijk om zout uit het pekelkreeftjes voordat deze aan de zebravis als boven zoutconcentratie dood veroorzaakt. Als meer zebravis eieren nodig kan vissen worden gevoed driemaal daags. Het reinigen van de kweker vis bakken elke dag verbetert ook de niveaus van de productie van eieren.
Bij het voederen van de aquatische habitats systemen die we meestal zet de waterpomp en luchtpomp, zodat de vissen het voedsel gedurende 10 minuten te eten. Dit vermindert de hoeveelheid voedsel die wordt gewassen in de filters. Echter, moeten gebruikers voorzichtig zijn om remEmber aan te zetten deze pompen daarna weer.
Teelt
Zebravissen zijn meestal op een optimale voedingsbodem toestand tussen ~ 3 en 18 maanden oud. Paarsgewijze fokken mag niet worden uitgevoerd gedurende twee opeenvolgende dagen 11, maar in-tank fokkerij kan dagelijks worden uitgevoerd als een tank kan bevatten vele vissen die de kans op hetzelfde paar van vis worden gekweekt voor twee dagen in een rij vermindert. Breeding dient evenwel regelmatig zelfs als de eieren niet vereist. Dit proces zorgt voor de fokseizoen van de vis wordt gehandhaafd. Het verdient aanbeveling dat er meer vrouwen dan mannen in een fokkerij set-up. Man zebravis veranderen hun vrouwelijke partners op een dagelijkse basis 12, die verder onderschrijft deze aanbeveling. Daarnaast worden, in ons laboratorium hebben we in eerste instantie problemen ondervonden met het fokken, echter met meer vrouwen dan mannen in een fokkerij set-up bijgedragen aan het oplossen van het probleem. Bovendien voeden met een hoog proteïnegehalte content dieet en Artemia twee tot drie keer per dag, vis mengen van verschillende tanks (van verschillende ouders), de temperatuur van de kweek set-up tussen 27 en 28 ° C, en knijpen de buik van vrouwen met geblokkeerde eierstok van buizen zachte massage verder verbeterd eiproductie. Wij raden het bijhouden van de vis lijnen / oorsprong te vermijden inteelt tussen broers en zussen. Dit verbetert embryoproductie. Het bijhouden van het aantal embryo's gelegd door vis uit elke tank is ook een aanrader. Dit helpt met het houden van een track van de beste broedende vissen tanks en het nemen van maatregelen om de fokkerij te verbeteren in de vis niet het leggen van eieren.
Verhoging van larven
Het voeden van de larven moeten beginnen vanaf 5 dpf (dagen na de bevruchting). Jonge larven gevoed kan worden met droogvoer van ~ 100 micron in grootte (bijvoorbeeld ZM100) of levend voer zoals paramecium en raderdiertjes (die stimuleert de groei). Het eten grootte kan langzaam worden verhoogdtot 200 micron (bijvoorbeeld ZM200) of 300/400 micron (bijvoorbeeld ZM300). Een populatie van volwassen vis moet rond 6-7 vis per liter water. Deze praktijk wordt aanbevolen voor een betere handhaving van de BZV (Biologisch Zuurstof Verbruik) van de tanks.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Acknowledgments
De auteurs willen graag Tammy Esmaili bedanken voor haar hulp bij het beheer van laboratorium verbruiksartikelen. AA is de ontvanger van een PhD beurs van de Centre of Excellence voor de ziekte van Alzheimer Onderzoek en Zorg, School of Medical Sciences, Edith Cowan University. MC ontvangt PhD financiering steun van de Rotary Club, Perth. AM, zijn GV, KT, en RNM gefinancierd door Research van de McCusker Alzheimer stichting.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
| Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
| Microscope | Olympus | SZX12 | |
| Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
| Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
| In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
| Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
| Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
| Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
| Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
| Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
| Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
| Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. | |||
References
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
- Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
- Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
- Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
- Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
- Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
- Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).
