Summary
O transplante de medula óssea oferece uma maneira de alterar o genótipo de células derivadas de medula óssea. Se o gene de interesse é expresso em ambas as células de medula óssea e células derivadas de medula óssea não derivados, transplante de medula óssea pode mudar as células de medula óssea derivadas de um genótipo diferente sem alterar a non-bone marrow genótipo celular derivada.
Abstract
Para compreender o papel de um gene no desenvolvimento de colite, foram comparadas as respostas dos ratinhos de tipo selvagem e gene-de-interesse camundongos knockout para deficientes colite. Se o gene de interesse é expresso em ambas as células de medula óssea e células derivadas de medula óssea não derivadas do hospedeiro, no entanto, é possível distinguir a função de um gene de interesse em células de medula óssea e não derivadas de medula óssea células derivadas pela técnica de transplante de medula óssea. Para alterar o genótipo de medula óssea derivada de células de ratos, a medula óssea original de ratinhos receptores foram destruídas por irradiação e, em seguida, substituído por medula óssea de dador novo genótipo diferente. Quando ratinhos do tipo selvagem da medula óssea do dador foi transplantado para ratos knockout, podemos gerar ratinhos knockout de tipo selvagem, com a expressão de genes em células da medula óssea derivadas. Alternativamente, quando ratinhos knockout de medula óssea do dador foi transplantado para ratos do tipo selvagem destinatário, ratinhos de tipo selvagem, sem gene de interesse que expressama partir de células de medula óssea derivadas foram produzidos. No entanto, o transplante de medula óssea pode não ser 100% completa. Portanto, utilizou-se aglomerado de diferenciação (CD) moléculas (CD45.1 e CD45.2) como marcadores de células do doador e do receptor para controlar a proporção de medula óssea do dador de células derivadas de ratinhos receptores e do sucesso do transplante de medula óssea. Ratinhos de tipo selvagem com CD45.1 ratos knockout com genótipo e CD45.2 genótipo foram utilizados. Após a irradiação dos ratos receptores, as células de medula óssea de dadores de diferentes genótipos foram infundidos nos ratinhos receptores. Quando a medula óssea novo regenerado para assumir a sua imunidade, os animais foram desafiados por agente químico (dextran sulfato de sódio, 5% de DSS) para induzir a colite. Aqui também mostraram que o método para induzir a colite em ratos e avaliar o papel do gene de interesse expresso a partir de células da medula óssea derivadas. Se o gene de interesse, a partir de células de osso derivadas desempenha um papel importante no desenvolvimento da doença (tal como E. colitis), o fenótipo dos ratinhos receptores de transplante de medula óssea pode ser significativamente alterada. No final das experiências de colite, a medula óssea derivadas de células no sangue e na medula óssea foram marcadas com anticorpos contra CD45.1 e CD45.2 e a sua razão quantitativa de existência pode ser utilizada para avaliar o sucesso do transplante de medula óssea por citometria de fluxo. O transplante de medula óssea de sucesso deve mostrar uma grande maioria dos genótipo doador (no termo do marcador CD molécula) ao longo de genótipo receptor, tanto na medula óssea e no sangue de ratos receptores.
Protocol
1. Antes-de-começar Considerações Técnicas
- Recomendamos o uso de ambos os C57/BL6 camundongos selvagens e camundongos knockout para o experimento porque os ratos com moléculas de CD correspondentes pode ser comprado de fornecedores do mouse principais.
- Uma vez que é difícil controlar os ratinhos do tipo selvagem e ratinhos knockout derivadas de células dadoras após transplante de medula óssea, é necessária a utilização de ratinhos CD45.1 para representar ratinhos de tipo selvagem. (CD45.1 C57/SJL WT ratos Jackson estoque Laboratories # 002014).
- A maioria das colônias do rato são CD45.2. Camundongos knockout nossas pertencem a CD45.2 genótipo (alternativamente uma fonte CD45.2 ratinhos WT: Jackson Laboratories stock # 000664). A determinação do CD45.1 ou CD45.2 genótipo pode ser realizada por citometria de fluxo de medula óssea e sangue periférico, como mencionado na seção 7 deste protocolo.
- Camundongos após irradiação ter comprometido a imunidade. Mantenha ratos em instalação livre de patógenos.
- Operação de irradiador requer especial de segurança clearance e treinamento. Para economizar tempo nos processos de formação e aprovação, o melhor é colaborar com um laboratório com técnico qualificado que é capaz de operar o irradiador.
- Muitas instituições têm laboratórios de citometria de fluxo com técnicos experientes. Para minimizar problemas com a operação de citometria de fluxo, é melhor discutir o seu fluxo de citometria de plano experimental com o técnico experiente antes de começar.
- Os ratos foram atribuídos desta maneira (10 ratos por grupo):
| Grupo | Doador de medula óssea para o destinatário | Tratamento | |
| A | BM troca | CD45.1 WT para CD45.2 KO | DSS colite |
| B | Controle normal de água | ||
| C | BM troca | CD45.2 KO para CD45.1 WT | DSS colite |
| D | Controle normal de água | ||
| E | Impostura | CD45.1 WT para CD45.1 WT | DSS colite |
| F | Controle normal de água | ||
| G | Impostura | CD45.2 KO para CD45.2 KO | DSS colite |
| H | Controle normal de água |
* Uma breve ilustração do protocolo experimental é apresentado na Figura 1.
2. Irradiação Mice destinatário
- Ratos são criados e mantidos em instalações livres de agentes patogénicos. Coloque em ratos torta irradiação autoclavado com filtro. Coloque um rato em cada slot de torta de irradiação. Coloque a torta para o irradiador e certifique-se o prato e torta estão girando.
- Ligue a bomba de arpara ventilação. Feche a porta do irradiador e bloqueá-lo.
- Irradiar os murganhos com 1000 rad (o qual é equivalente a 10 Gy) em torno de 10 minutos (dependendo da fonte de radiação e de semi-vida). A partir deste ponto de tempo, os ratinhos irradiados são imuno-comprometidos e têm fraca imunidade contra a infecção. Após a irradiação, leve a torta para fora e colocar em um recipiente estéril para o transporte de biossegurança gabinete em instalações para animais. Evitar expor os ratos ao ambiente externo para minimizar a possibilidade de infecção.
- Em biossegurança gabinete, transferir os ratos em gaiolas de rato autoclavados com cama autoclavado (4 ratos por gaiola Adicionar água estéril novo com suspensão sulfatrim -. 3,12 ml por 100 ml de água).
- Enrole a garrafa de água com uma folha de alumínio como os antibióticos são sensíveis a luz. Agite para misturar o frasco da solução sulfatrim bem antes de carregá-lo para a jaula.
3. Extracção doador de medula óssea
- Sacrificar os ratos com dióxido de carbono ou isoflurdade e, em seguida, mergulhe em 1:200 solução desinfetante. Pulverizar os ratos com etanol a 70%, para molhar a pele e dissecar ossos abertos.
- Mergulhe os instrumentos de dissecção em etanol de 70% para a esterilização.
- Realizar a dissecação em um armário de biossegurança. Use os instrumentos de dissecção estéreis para expor o úmero, fêmur, tíbia e fíbula ossos, livre de fixar os músculos e ligamentos.
- Cortar abrir ambas as extremidades dos ossos para mostrar a medula óssea vermelha. Manter os ossos com uma pinça. Lave a medula óssea vermelha com PBS frio, com seringa de 3 ml e agulhas 25G para uma placa de Petri. Lave a partir de ambas as extremidades dos ossos, para se obter as células da medula óssea mais.
- Use 6 seringas ml e 18G1 / 2 agulhas para quebrar plugues de medula óssea vermelha por aspiração repetida e ejeção. Transferência de medula óssea com tubos de 50 ml Falcon.
- Girar a medula óssea para baixo em 1800 rpm durante 5 min a 4 ° C. Elimine o sobrenadante, ressuspender pellet em vortex por 5-10 segundos.
- Diluir 10X de tampão de lise de RBC com água estéril. Anúnciod 1X tampão de lise (5 ml por rato doador), vortex novamente durante 5 segundos e manter exactamente 3 minutos à temperatura ambiente.
- Após 3 min, encher os tubos com 20 ml de PBS frio para parar a lise e mistura-se. Despeje o conteúdo através de um filtro de células 40 mM diretamente em um novo tubo de 50 ml Falcon.
- Enxaguar os tubos originais com 5 ml de PBS e transferir para o coador de células também. Ateste para 50 ml com PBS e agitar.
4. Contagem de células de doadores de medula óssea
- Adicionar 100 ul de azul de tripano a um tubo Eppendorf a 100 ul de suspensão de medula óssea, para um tubo de Eppendorf e misturar. Pipetar a mistura de células coradas com um hemocitómetro.
- A quantidade de células é calculado através da contagem de células totais vivo de medula óssea em tubos Falcon = número de células não coradas em 16 quadrados x 2 (devido a diluição azul de Trypan) x 10,000 x 50 ml
- Girar as células da medula óssea, em tubos de 50 ml Falcon a 2.000 rpm durante 5 min a 4 ° C.
- Remover o sobrenadante. Baseadosobre as contagens de células totais, ressuspender o pellet com PBS a 1 x 10 células por ml 8
5. Infusão de ratinhos receptores
- Aqueça os ratos receptores sobre uma almofada de calor e sob uma lâmpada de aquecimento. Coloque os ratos beneficiários no limitador. Injectar 1 x 10 7 células por rato em 100-200 ul por via intravenosa.
- Injecção de medula óssea do dador deve ser feita entre 4-24 horas após a irradiação.
- Mantenha-se quatro camundongos injetados por gaiola. Manter os camundongos injetados destinatário em gaiolas autoclavados com água-tratamento por antibióticos nas primeiras 4 semanas em biotério patógeno livre e deixar os ratos recuperar a imunidade. Gaiolas de mudança, de água tratado com antibióticos e alimentos a cada 4 dias para manter a higiene.
6. Indução de colite e Avaliação de Colite
- 4 semanas após a irradiação e transplante de medula óssea, mude para a água regular sem antibióticos e manter os ratos para mais 2 semanas para recuperar o seu normalgut microflora.
- 6 semanas após a injeção de medula óssea, medir o peso corporal inicial. Alguns ratos recebem 5% de sulfato de dextrano em beber água ad libitum para induzir a colite. Alguns ratos são dadas água potável regular apenas como grupos de controle normais.
- 5 dias depois, retirar o sangue periférico, a transferência para tubos revestidos de heparina (Vacutainer) e manter-se em gelo. A piscina do sangue de 4 ratos para um tubo. Combinar 300 ul de sangue com 300 ul de tampão de coloração de células = pi 600. Dividir o sangue para tubos Eppendorf 5, cada um com 100 ul.
- Sacrificar os ratos com dióxido de carbono ou isoflurano. Avaliar os escores de danos macroscópicos (consultar a outra publicação vídeo JOVE para detalhes 1). Medir variação de peso. Medida comprimento do intestino e espessura com paquímetro digital. Observe textura das fezes (duro, macio ou com sangue). Determine de sangue oculto nas fezes com Hemooccult. Dissecar tecidos do cólon e fixar em formol para a H & E coloração.
- Dissecar um fêmur bone por rato, extrair medula óssea e lave a medula óssea com frio PBS através de agulha 25G e uma seringa ml. Piscina de medula óssea 4 fichas de um tubo e manter em gelo.
- Despeje a medula óssea, para uma placa de Petri, a ficha de cisalhamento de medula óssea com uma agulha de 18G e 5 vezes ml seringa até vários nenhuma ficha medula óssea está presente.
- Girar com 1.500 rpm durante 5 min a 4 ° C. Remover o sobrenadante e ressuspender com 600 ul de tampão de coloração de células. Dividir a medula óssea ressuspenso em 5 tubos de Eppendorf, cada um com 100 ul.
7. Inspeção de Qualidade de Transplante de Medula Óssea por citometria de fluxo
- Rotular cada tubos de amostras de sangue ou de medula óssea # 1-5:
- Preparar a mistura de anticorpo para cada respectivo tubo no escuro.
# 1 Não anticorpo
# 2 30 ul de controlo de isotipo FITC + 30 uL de controlo de isotipo PE + 15 ul de bloqueio CD16/32
# 3 30 ul FITC CD45.1 Ab + 15 ul de bloqueio CD16/32
# 4 30 PE ulCD45.2 Ab + 15 ul de bloqueio CD16/32
# 5 30 ul de Ab FITC CD45.1 + 30 uL PE CD45.2 Ab + 15 ul de bloqueio CD16/32
| Adicione nada a amostra de sangue ou de medula óssea # 1 |
| Adicionar 5 uL de mistura de anticorpo # 2 para cada amostra de sangue ou de medula óssea # 2 |
| Adiciona-se 3 uL de mistura de anticorpo # 3 para cada amostra de sangue ou de medula óssea # 3 |
| Adiciona-se 3 uL de mistura de anticorpo # 4 para cada amostra de sangue ou de medula óssea # 4 |
| Adicionar 5 uL de mistura de anticorpo # 5 para cada amostra de sangue ou de medula óssea # 5 |
- Manter no escuro em gelo durante 30 min.
- Adicionar 2 ml de 1X tampão de lise de glóbulos vermelhos para cada tubo. Manter no escuro em gelo durante 15 min.
- Girar as células a 1500 rpm, 5 min a 4 ° C. (GH rotor 3.8, 1.500 rpm = 350 xg) Remover o sobrenadante. Ressuspender o sedimento com 500 ul de tampão de coloração de células no brevemente, em seguida escuro vortex. Verifique a CD45.1 (representando WT) e CD45.2 (representando KO) no sangue imunologicamente e amostras de medula óssea por citometria de fluxo. Selecione FITC para representar WT CD45.1 e PE para representar KO CD45.2.
- Analisar os resultados de citometria de fluxo por software FlowJo. Calcular a proporção de FITC: PE ou PE proporção: relação FITC para determinar se o genótipo doador é genótipo dominante no sangue e na medula óssea.
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Representative Results
Se o gene de interesse, desempenha um papel importante em células imunitárias durante o desenvolvimento de colite, os murganhos que receberam medula óssea de genótipo diferente através de transplante de medula óssea (WT KO ou KO para a WT) deve ter uma resposta alterada a colite DSS. Um dos parâmetros mais importantes para determinar a gravidade da colite é a coloração de H & E de tecidos do cólon. Alterações no tecido do cólon estrutura e sinais de inflamação pode ser avaliado quantitativamente pela H & sistema de pontuação E histologia. Critérios para a H & scoring E histologia para DSS modelo de colite pode ser encontrada aqui 2. Alternativamente, química induzida colite pode também ser induzida por trinitrobenzeno sulfónico (TNBS). Métodos de TNBS de colite e os critérios de pontuação H & E histologia pode ser encontrado em uma publicação anterior 3. Histologia diferença de pontuação entre os grupos pode ser analisado por aluno teste t.
Os ratos podem ter significativamentemelhorou ou piorou colite quando comparado com camundongos com osso farsa transplante de medula (WT para WT ou KO para KO). Se o gene de interesse, desempenha um papel significativo na colite através de células derivadas de medula óssea, os ratos com medula óssea trocadas devem responder significativamente diferente dos ratos com sham transplante de medula óssea.
Para DSS modelo de colite, alterações histológicas pode ser avaliada pela pontuação da histologia (ver Figura 4). Alteração significativa da pontuação da histologia pode indicar o desenvolvimento de colite mediada pelo gene de interesse em células de medula óssea derivadas. Por exemplo, é cathelicidin um gene de um péptido anti-microbiana e anti-inflamatória (gene de interesse no nosso caso) 4. Sem o transplante de medula óssea, os ratinhos KO catelicidina geralmente desenvolvido pior colite de ratinhos de tipo selvagem fez em resposta a DSS. Transfusão de tipo selvagem de medula óssea (TP) para cathelicidin knockout (KO) leva a colite melhorou a enquanto transfusina medula óssea a partir de knockout cathelicidin (KO) para ratinhos do tipo selvagem (WT) leva a colite piorou quando expostos a DSS (Figura 2).
Para verificar a expressão de genes de interesse, a expressão do mRNA do gene de interesse (por ex. Cathelicidin) de doadores de medula óssea de tipo selvagem deve ser detectável no cólon (ou outros), os tecidos dos ratinhos receptores deficientes catelicidina knockout após óssea O transplante de medula. É também interessante saber se a expressão de genes de interesse em ratinhos de tipo selvagem de destinatários é reduzida após a doação de medula óssea de ratinhos knockout.
O enxerto bem sucedido de medula óssea do dador é representado pela proporção dominante do isotipo doador CD sobre destinatário isotipo CD em ambas as células de sangue periférico e medula óssea de ratinhos receptores. Medula óssea mostra melhor a rotulagem de CD45.1 e CD45.2 em citometria de fluxo que o sangue tem uma grande quantidade de células não coradas (Figura 2 e 3).
Figura 1. O protocolo experimental de transplante de medula óssea.
Figura 2. Dados de citometria de fluxo de medula óssea de ratinhos receptores de medula óssea após o transplante. O eixo Y mostra marcado com FITC CD45.1 sinal e o eixo X mostra-PE-rotulado CD45.2 sinal. Transplante de osso bem sucedida é definida pela variação do CD45.1 ou CD45.2 genótipo em ambos medula óssea e no sangue dos ratinhos receptores. para ver figura maior .
Figura 3. Dados de citometria de fluxo de sangue de ratos receptor após o transplante de medula óssea. O eixo Y mostra FITC marcado CD45.1 sinal e eixo X mostra PE marcado CD45.2 sinal. Transplante de osso bem sucedida é definida pela variação do CD45.1 ou CD45.2 genótipo em ambos medula óssea e no sangue dos ratinhos receptores. para ver figura maior .
Figura 4. Avaliação de colite em ratos após o transplante de medula óssea. (A) Amostra H & E de imagens de dois pontos com normal histologia e DSS colite. (B) marca Histologia. Indução bem sucedida de colite DSS podem ser confirmados por aumento significativo de pontuação histológica no dia 5 do tratamento DSS. Após a troca de pontos de medula óssea para o genótipo diferente, a pontuação da histologia deverá alterar significativamente. Isto sugere que o curso de colite alteradas pelo gene de interesse que expressa nas células derivadas de medula óssea. Os dados são representados pela média ± erro padrão das médias.
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Discussion
Este transplante de medula óssea abordagem é adequada para a pesquisa de imunologia colite, infecção, cancro, obesidade e outras doenças. Este transplante de medula óssea experimento é necessária quando o gene de interesse é expresso tanto na medula óssea e células derivadas de medula óssea não derivados e o gene de interesse, se suspeita de mediar doença por células a partir de qualquer população. Por exemplo, o péptido antimicrobiano cathelicidin é mostrado para modular a colite aguda. Mas este é expresso em ambas as células epiteliais e as células imunes (tais como macrófagos). Em seguida, foi utilizado o transplante ósseo para definir qual modula a população de células a colite aguda em ratinhos. A gravidade da colite foi alterado significativamente após a mudança de genótipos de medula óssea por meio de catelicidina transplante de medula óssea. Em seguida, pode-se concluir que cathelicidin expresso em células de medula óssea derivadas desempenha um papel importante na modulação da colite aguda em resposta à DSS.
Óssea macélulas derivadas RROW tipicamente incluem os glóbulos vermelhos, glóbulos brancos e plaquetas. O transplante de medula óssea altera o genótipo destas células, mas não outros. Lateralmente falando, esta experiência só pode diferenciar o papel do gene de interesse em células derivadas de medula óssea versus não-medula óssea as células derivadas. Mas esta experiência não pode ainda definir que a população de células derivadas de medula óssea é o mediador da colite como todos os glóbulos vermelhos, glóbulos brancos e as plaquetas são derivadas da medula óssea. O destino das células derivadas da medula óssea migraram para dois pontos durante a colite é uma área ativa e controversa de pesquisa. Após o transplante de medula óssea e na indução de colite murina, é provável que alguma de células de medula óssea derivadas existir como células linfóides e miofibroblastos em dois pontos 5. Outro relatório sugeriu que a medula óssea células derivadas servir como células progenitoras endoteliais para neovascularização em processo de recuperação 6. Há também evidencos e células ósseas mostrando medula derivados estão associados com a diferenciação celular epitelial em pacientes com colite 7. Não podemos excluir a possibilidade de que algumas das células derivadas da medula óssea podem diferenciar a outras células do que as típicas células do sistema imunológico e desempenham papéis de modulação no desenvolvimento de colite. No entanto, a medula óssea derivada população de monócitos / macrófagos é importante para a protecção contra danos químicos mucosa intestinal induzida por 8,9. Este relatório é consistente com a nossa descoberta de que cathelicidin expressa a partir de células de medula óssea derivadas modula colite DSS enquanto cathelicidin é secretado a partir de monócitos / macrófagos 4.
Por outro lado, há muitas maneiras para controlar o sucesso de transplante de medula óssea. A análise de citometria de fluxo de CD45.1 e CD45.2 genótipos pode fornecer um método quantitativo para determinar a proporção de doadores de medula óssea as células-tronco derivadas de células nos ratinhos receptores. Derivada de células de medula ósseas podem diferenciar-se em vários tipos de células 10. Quando a análise de citometria de fluxo, não é viável, é possível a utilização de ratos machos (XY cromossoma) de doadores e ratos fêmeas (cromossoma XX) destinatário 11. Os camundongos doadores vai levar cromossomos Y únicas no corpo de ratos receptores XX apenas femininas. Cromossoma Y podem ser identificados por hibridação in situ fluorescente 11. Além disso, a imuno-histoquímica de CD45.1, CD45.2 e / ou o gene de interesse nos tecidos pode ser necessário para visualizar as células da medula óssea de doadores derivadas.
Mas CD45 análise de citometria de fluxo e cromossoma Y, em processos de hibridação in situ se realiza depois os ratos foram sacrificados. Para monitorizar a localização das células dadoras nos ratinhos receptores a ser utilizados para o estudo de doenças crónicas como o cancro, sem sacrificar os ratinhos, é possível a utilização de proteínas fluorescentes verdes ratinhos transgénicos como ratinhos dadores 12. Portanto, o osso doador marAs células derivadas de linhas pode ser monitorado no corpo dos ratos receptores em condições não-invasivos de imagem de alta resolução óptica sob anestesia transiente e este pode ser feito repetidamente.
Nem todos os ratos têm de medula óssea bem-sucedido transplante de 13. Observou-se ~ 10-20% dos ratos morrem nas primeiras duas semanas após irradiação, devido a anemia e infecção. Portanto, os ratinhos mais do que o necessário deve ser preparado no início da experiência. Por exemplo, deve-se preparar 10 ratinhos por grupo no início da experiência, se espera 8 ratinhos por grupo disponível no final do experimento colite. Além disso, certifique-se de remover os ratos mortos o mais rápido possível. A velocidade de reconstituição imunitária está correlacionada com o número de células progenitoras hematopoiéticas na medula óssea infundida os ratinhos receptores 14. Portanto, é essencial ter um número suficiente de células de medula óssea vivo (1 x 10 7 células por rato) infundidos em ratinhos receptores para tr sucesso de medula ósseaansplantation.
Ratos receptores após a irradiação ter comprometido a imunidade. Dissecção doador ratos e os procedimentos de preparação da medula óssea deve ser feita no mesmo padrão como experimentos de cultura de células. A utilização de instrumentos esterilizados e os contentores, as técnicas de manipulação asséptica deve ser aplicada. Ao longo de todas as experiências, PBS contém 1% de penicilina-estreptomicina e 10 U de heparina / ml deve ser utilizado durante o tratamento de medulas ósseas. Todos os reagentes são de grau de cultura de células. Discussão técnica adicionais podem ser encontradas na referência 13.
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Disclosures
Não há conflitos de interesse declarados.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado pelo piloto e concessão Estudo de Viabilidade da UCLA-CURE Center, a Fundação de Crohn e Colite da América Prêmio de Desenvolvimento de Carreira (# 2691) e do Instituto Nacional de Saúde NIDDK K01 (DK084256) financiamento para Hon Wai Koon.
Óssea operação irradiação medula foi assistido por Bernard Levin e Cozinha Scott, da UCLA Center for AIDS Research Rato / instalação humanos fundamentais Quimera. Operação de citometria de fluxo foi assistida pela UCLA instalação Núcleo do vetor.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell staining buffer | Biolegend | #420201 | |
| 10X RBC lysis buffer | Biolegend | #420301 | |
| FITC mouse isotype control | Biolegend | #400207 | |
| PE mouse isotype control | Biolegend | #400211 | |
| PE anti-mouse CD45.2 | Biolegend | #109807 | |
| FITC anti-mouse CD45.1 | Biolegend | #110705 | |
| Anti-mouse CD16/32 blocking | Biolegend | #101301 | |
| 40 μm cell strainer | Fisherbrand | #22363547 | |
| PBS 1X | MP biomedicals | #1860454 | |
| Heparin | Fisherbrand | #BP2425 | |
| Sulfatrim (SMZ) | Qualitest | NC9242720 (fisher) | |
| Lysol IC | Andwin Scientific | NC9745686 (fisher) | |
| Vaccutainer | BD | #8000813 | |
| Mouse restrainer | Braintree Scientific | #TV-150 | |
| Irradiator | J.L. Shepherd and Associates | Mark I 68A | |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCanto II | |
| Flow cytometer test-tube | Falcon | #352052 | |
| Digital caliper | Fisherbrand | 14-648-17 | |
| Hemoccult ICT | Beckman Coulter | G0328QW |
References
- Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678 (2012).
- Ungaro, R. A novel Toll-like receptor 4 antagonist antibody ameliorates inflammation but impairs mucosal healing in murine colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 1167-1179 (2009).
- Castagliuolo, I. Protective effects of neurokinin-1 receptor during colitis in mice: role of the epidermal growth factor receptor. Br. J. Pharmacol. 136, 271-279 (2002).
- Koon, H. W. Cathelicidin signaling via the Toll-like receptor protects against colitis in mice. Gastroenterology. 141, 1852-1863 (2011).
- Lee, C. Y. marrow cells in murine colitis: multi-signal analysis confirms pericryptal myofibroblast engraftment without epithelial involvement. PLoS One. 6, e11 (2011).
- Deng, X. New cell therapy using bone marrow-derived stem cells/endothelial progenitor cells to accelerate neovascularization in healing of experimental ulcerative colitis. Curr. Pharm. Des. 17, 1643-1651 (2011).
- Valcz, G. Lymphoid aggregates may contribute to the migration and epithelial commitment of bone marrow-derived cells in colonic mucosa. J. Clin. Pathol. 64, 771-775 (2011).
- Takaba, J., Mishima, Y., Hatake, K., Kasahara, T. Role of bone marrow-derived monocytes/macrophages in the repair of mucosal damage caused by irradiation and/or anticancer drugs in colitis model. Mediators Inflamm. 2010, 634145 (2010).
- Bakhautdin, B. Protective role of macrophage-derived ceruloplasmin in inflammatory bowel disease. Gut. , (2012).
- Seta, N., Kuwana, M. Derivation of multipotent progenitors from human circulating CD14+ monocytes. Exp. Hematol. 38, 557-563 (2010).
- Crain, B. J., Tran, S. D., Mezey, E. Transplanted human bone marrow cells generate new brain cells. J. Neurol. Sci. 233, 121-123 (2005).
- Finnberg, N. K. High-resolution imaging and antitumor effects of GFP(+) bone marrow-derived cells homing to syngeneic mouse colon tumors. Am. J. Pathol. 179, 2169-2176 (2011).
- Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. J. Am. Assoc. Lab Anim. Sci. 48, 11-22 (2009).
- Chen, B. J., Cui, X., Sempowski, G. D., Domen, J., Chao, N. J. Hematopoietic stem cell dose correlates with the speed of immune reconstitution after stem cell transplantation. Blood. 103, 4344-4352 (2004).
