Summary
نقدم هنا نموذجا الفئران زرع الكلى لتقييم غير جراحية الرفض الحاد طعم خيفي باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني مع 18F-fluorodeoxyglucose.
Abstract
عدد المرضى الذين يعانون من نهاية مرحلة المرض الكلوي، وعدد المستلمين طعم خيفي الكلى يزيد باستمرار. حلقة الرفض الحاد الخلوية طعم خيفي (AR) هي عامل النذير سلبية على بقاء طعم خيفي على المدى الطويل، والتشخيص في الوقت المناسب أمر بالغ الأهمية من أجل وظيفة طعم خيفي 1. في الوقت الحاضر، لا يمكن إلا AR يتم تشخيص بالتأكيد من صميم إبرة الخزعة، التي، كأسلوب الغازية، يكشف خطر كبير من الإصابة الكسب غير المشروع أو حتى الخسارة. وعلاوة على ذلك، الخزعات ليست مجدية في المرضى الذين يتناولون العقاقير المضادة للتخثر وموقع عينات محدودة من هذه التقنية قد تؤدي إلى نتائج سلبية كاذبة إذا كان AR هو تنسيق أو غير مكتمل. ونتيجة لذلك، أعطى هذا الارتفاع إلى البحث المستمر عن طرق الكشف AR الجديد، الذي غالبا ما يتعين القيام به في الحيوانات بما في ذلك استخدام نماذج زرع مختلف.
منذ أوائل 60s فأر زرع الكلى هو المنهج التجريبي راسخة لexaminأوجه وتحليل AR 2. نحن هنا في الوقت الحاضر بالإضافة إلى ذلك الحيوانات الصغيرة بوزيترون الانبعاثات الرسم السطحي (PET) باستخدام 18 F-fluorodeoxyglucose (FDG) لتقييم AR في الفئران مستأصل إحدى الكليتين الكلوي نموذج زرع خيفي واقتراح الكسب غير المشروع التصوير FDG-PET كخيار جديد لغير الغازية، محددة والتشخيص المبكر للAR أيضا عن الوضع البشري 3. وعلاوة على ذلك، يمكن تطبيق هذه الطريقة لمتابعة تحسين رصد رفض الزرع 4.
Protocol
1. متبرع الاسترداد
- إعداد المجهر المجسم، سجل الوزن في الجرذان القديمة 8-10 أسبوع (المانحة ويجب أن تطابق وزن الجسم المتلقي).
- تخدير الفئران المانحة (لويس براون النرويج F1، F1 LBN) باستخدام الأوكسجين / استنشاق isoflurane و(isoflurane و4٪ / 2 لتر / دقيقة الأكسجين). الحفاظ على التخدير عن طريق خفض isoflurane وإلى 2-2.5٪.
- وضع فأر تخدير على لوحة الجراحة. إصلاح الأطراف في الجرذ مع شريط لاصق على وسادة وتطبيق مرهم للعين (Bepanthen، باير) لعيون الفئران.
- الحلاقة وتطهير البطن من الفئران وإجراء شق خط الوسط بطني من العانة إلى الحدود الذيلية من الكبد. فضح الكلية اليسرى والأوعية بتحركه بعناية الأمعاء إلى الجانب الأيمن. ضع ورقة رقيقة من الشاش على الكلية اليسرى وبلل مع حرارة محلول ملحي متساوي التوتر لمنع جفاف.
- تشريح بعناية الأنسجة الدهنية مع ملقط دومون تلميح بزاوية (دومون SS-45 الملقط اينوكس الطبية، أدوات العلوم الجميلة، رقم الكاتالوج 11203-25) يغلف الحالب الأيسر. تجنب أي اتصال مباشر مع الحالب، بدلا من ذلك، مع تعبئة ما يكفي من الأنسجة الدهنية المحيطة بها.
- فصل الوريد الكلوي الأيسر من الشريان الكلوي باستخدام ملقط دومون تلميح الزاوية. إزالة جميع الأنسجة الضامة والدهون من كل السفن ويكوي الأوعية الكظرية والخصية.
- تشريح الشريان الأبهر والوريد الأجوف السفلي (IVC) أعلاه وأدناه تقاطع مع اليسار الشريان الكلوي والوريد، على التوالي، ويكوي كل الشرايين المنتهية ولايته.
- المشبك الشريان الأورطي الكظرية مع المشبك المجهرية (مايكرو Serrefines، أدوات العلوم الجميلة، 18055-04 رقم الكاتالوج) فوق الشريان الكلوي الأيسر، كما قرب ممكن إلى الشريان المساريقي العلوي. Ligate الشريان الأورطي infrarenal باستخدام الحرير الجراحية (5-0، Vömel، والفن لا. 14739) ما يقرب من 5 مم تحت الشريان الكلوي الأيسر.
- Ligate في IVC infrarenal مع الحرير الجراحية (5-0، Vömel)، والمشبك IVC الكظريةمع المشبك المجهرية (Serrefines مايكرو، أدوات العلوم الجميلة، 18055-03 رقم الكاتالوج).
- قطع الوريد الكلوي في أقرب وقت ممكن إلى IVC باستخدام مقص غرامة (مقص القزحية - ToughCut مستقيم 11.5 سم، أدوات العلوم الجميلة، 14058-11 رقم الكاتالوج).
- يروي ببطء الكلى في الموقع مع 2 مل من الجليد الباردة HTK حل نضح (CUSTODIOL HTK، الدكتور فرانز كولر كيمي) عن طريق إدراج قنية (3 Microlance 27G ¾، BD، رقم الكاتالوج 302200) في الشريان الأورطي infrarenal. تأكد من أن يتغير لون الكلوي (الآن الزيتون ملون).
- أولا، القطع الشريان الأورطي الكظرية، ثم الشريان الأورطي infrarenal وأخيرا الحالب في أقرب وقت ممكن إلى المثانة البولية.
- إزالة الكلى وسلاسل التوريد ذات الأوعية الدموية جنبا إلى جنب مع الحالب وتخزينها في HTK حل نضح على الجليد.
- الموت ببطء الفئران المانحة عن طريق إزالة المشابك الأوعية الدموية والختان متتالية من القلب تحت التخدير.
2. المتلقي إعداد وTransplantaنشوئها
- إعداد المجهر المجسم، الوزن قياسي من الفئران.
- تخدير الفئران المتلقية (لويس) باستخدام isoflurane و4٪. الحفاظ على التخدير عن طريق خفض isoflurane وإلى 2-2.5٪.
- وضع فأر تخدير على لوحة الجراحة. إصلاح الأطراف في الجرذ مع شريط لاصق على وسادة وتطبيق مرهم للعين للعيون الفئران سيصدره. رصد ومراقبة درجة حرارة الجسم الأساسية باستخدام جهاز استشعار درجة الحرارة والمستقيم وسادة الاحترار. أثناء الجراحة السيطرة على درجة الحرارة بشكل متكرر، والتنفس ومعدل ضربات القلب من الحيوان.
- حلاقة وتعقيم البطن وإجراء شق خط الوسط بطني من العانة إلى الحدود الذيلية من الكبد. استخدام مشرط forcutting الجلد من أجل تقليل الصدمة الجلد. فضح الكلية اليسرى وسفنها عن طريق تحريك الأمعاء إلى الجانب الأيمن.
- بعناية إزالة الكبسولة الكلوي باستخدام ملقط دومون تلميح بزاوية ومسحات القطن.
- انسداد الشريان الكلوي الأيسر، والوريد الكلوي الحالب قربنقير مع اثنين من عملية ربط باستخدام خيط الجراحية (Mersilene 4-0، [إثيكن، القط. لا. EH6732H). استئصال الجزء الأكبر من الكلى، ولم يتبق سوى نقير كلوي. تنظيف سطح قطع مع مسحات القطن والتحقق من وجود نزيف. إضافة ضمد آخر إذا لزم الأمر.
- تشريح بعناية بصراحة من خلال النسيج الضام الذي يغطي الشريان الأورطي infrarenal والوريد الأجوف على موقع الذيلية مع مسحات القطن.
- فصل أي العصب مرئية من الشريان الأورطي infrarenal والوريد الأجوف باستخدام ملقط دومون تلميح الزاوية.
- تشريح بعناية من خلال ورقة النسيج الضام بين الشريان الأبهر والوريد الأجوف infrarenal، وتشكيل فتحتين من 2-4 مم طول: الأول تحت المتفرعة من السفن الخصية، والثانية فوق المتفرعة من الأوعية الحرقفية المشتركة. يكوي الشرايين والأوردة الحرقفي القطني في بين.
- رسم موضوع الجراحية واحد (Mersilene 0؛. [إثيكن، القط no.EH6665E) من خلال كل من فتحتي. باستخدام هذه المواضيع سحب infrarenalالشريان الأبهر والوريد الأجوف بلطف إلى الجانب الأيمن من الحيوان للوصول إلى الأوعية المتفرعة على موقع الظهرية. يكوي أي من هذه السفن بين فتحتي وإزالة المواضيع جراحية بعد ذلك.
- المقبل، تسد الشريان الأورطي وIVC بواسطة تطبيق اتجاه عقارب الساعة من أربع المشابك المجهرية (مايكرو Serrefines، أدوات العلوم الجميلة، 18055-04 رقم الكاتالوج) تبدأ في افتتاح العلوي مع الشريان الأورطي وتنتهي مع الوريد الأجوف العلوي في افتتاح (مايكرو Serrefines ، أدوات العلوم الجميلة، 18055-03 رقم الكاتالوج).
- بعد ذلك بعناية بيرس النهاية العليا من الجزء المعزول من الشريان الأورطي مع إبرة (Microlance 3 27G ¾، BD، رقم الكاتالوج 302200)، إدراج شفرة أقل من مقص الربيع الجميلة (Vannas مقص الربيع - 3 ملم شفرات، الجميلة علم أدوات، cat.no 15000-00) من خلال فتح ثقب وإجراء شق طولي قصير. تدفق الشريان الأورطي معزولة مع الثلج الباردة HTK حل نضح لإزالة أي الدم المتبقي.
- وبالمثل، بعناية بيرسإنهاء السفلي من الجزء المعزول من الوريد الأجوف مع إبرة، إدراج شفرة أقل من مقص الربيع الجميلة من خلال فتح ثقب وإجراء شق طولي تنتهي قريبا أدناه شق الأبهر. مرة أخرى، تدفق سفينة لإزالة أي الدم المتبقي.
- إزالة الكسب غير المشروع الكلى من حلول التخزين. وضعه تحت الموقف السابق من الكلية اليسرى، وتأكد من أنها موجهة بشكل صحيح.
- تحقق أولا من اتجاه من الشريان الكلوي ترقيع وضمان عدم وجود اللفات. ثم ضع ورقة رقيقة من الشاش على الكسب غير المشروع وبلل مع الثلج الباردة HTK حل نضح لتبريده، ومنع جفاف.
- يحملق افتتاح الجزء الكظرية للقطعة الأبهر الذي الشريان الكلوي من الكسب غير المشروع يفتح في بخيوط جراحية (Ethilon 9-0، [إثيكن، والقط لا 2809G.) - لأول مرة في الجزء العلوي، ثم في الطرف الأدنى من شق الأبهر. إغلاق شق في اتجاه عقارب الساعة مع خياطة المستمر باستخدام خيط جراحي(Ethilon 9-0)، ملقط دومون تلميح بزاوية ومنحني Castroviejo حامل إبرة (أدوات العلوم الجميلة، القط. لا. 12061-01). بعد ذلك، تغطية وخياطة الأولى مع النسيج الضام من خلال خياطة مستمرة الثاني عكس اتجاه عقارب الساعة. الآن، فقط الجزء السفلي من قطعة الأبهر من الكسب غير المشروع لا يزال يتعين مغلقة. يبرد بانتظام الكسب غير المشروع مع الثلج الباردة HTK حل نضح.
- يروي الكسب غير المشروع مع 1 مل من الجليد الباردة HTK حل نضح من خلال إبرة حادة إدراجها في نهاية مفتوحة للترقيع الشريان الأبهر قطعة التحقق من صحة ضيق وسلامة خياطة، وكذلك إزالة الدم المتبقي في الكسب غير المشروع. بعد ذلك، ligate نهاية مفتوحة للقطعة الأبهر مع الحرير الجراحية (5-0، Vömel).
- تحقق اتجاه ترقيع الوريد الكلوي وضمان عدم وجود اللفات.
- يحملق افتتاح الوريد من الكسب غير المشروع مع الموضوع الجراحية (Ethilon 9-0) - لأول مرة في الجزء العلوي، ثم في الطرف الأدنى من شق في الوريد الأجوف. إغلاق شقفي اتجاه عقارب الساعة مع خياطة المستمر باستخدام خيط الجراحية (Ethilon 9-0)، ملقط دومون تلميح بزاوية ومنحني Castroviejo حامل الإبرة. يبرد بانتظام الكسب غير المشروع مع الثلج الباردة HTK حل نضح.
- عكس إزالة المشابك المجهرية، بدءا من الوريد الأجوف العلوي المشبك. بعد إزالة المشبك الأبهر الماضي، ووقف نزيف خفيف في نهاية المطاف بعناية مع قطعة قطن. بعد بضع ثوان الكسب غير المشروع سوف تتحول وردية، ويجب أن تظهر تقلصات uretric.
- لإدخال الحالب الطعوم في المثانة سيصدره المتلقي إزالة بعناية رقعة صغيرة من العضلات في الجزء العلوي من المثانة باستخدام مقص الربيع Vannas (طالب Vannas مقص الربيع على التوالي، وأدوات العلوم الجميلة، 91500-09 رقم الكاتالوج ). ثم، وإزالة الأنسجة المحيطة بها (ومعظمهم من الدهون) من الحالب الكسب غير المشروع باستخدام ملقط دومون تلميح الزاوية. ولذلك، والاستيلاء بعناية غيض من الحالب وبلطف فصل الدهون والأنسجة الضامة المحيطة والأوعية جزءا لا يتجزأ من جيئة وذهابام فإنه بسحبها في الاتجاه المعاكس. يحملق غيض uretric في نهاية الموضوع الجراحية (البرولين 6-0، [إثيكن، القط. لا. 8697H) وخرم أعلى أعدت مسبقا من المثانة مع إبرة المرفقة. سحب الحالب من خلال المثانة والخروج عليه في القاعدة من خلال ثقب الثانية.
- يحملق في وقت سابق من الحالب فصل الأنسجة في الجزء العلوي من المثانة مع الموضوع الجراحية (Ethilon 9-0). قطع غيض من الحالب مع الموضوع الجراحية المرفقة وسحب الحالب مرة أخرى في المثانة عن طريق دفع بلطف من الأسفل. بعد ذلك، إغلاق ثقب المثانة الثانية مع الموضوع الجراحية (Ethilon 9-0).
- إغلاق جدار البطن والجلد من قبل اثنين من الغرز مستمر ولكن منفصلة باستخدام خيوط الجروح الجراحية (Mersilene 0). تطهير الجرح باستخدام اليود Pividon وإدارة البوبرينورفين (0.1 ملغ لكل كغ / BW / المزايدة) الشوري لمدة ثلاثة أيام بعد الجراحة للسيطرة على الألم الجرح.
3. التصوير الرفض طعم خيفي
- تخدير الفئران غير الصيامية باستخدام isoflurane و2-2.5٪.
- تدار 30 من MBq FDG (30 من MBq FDG في 0.1 مل 0.9٪ كلوريد الصوديوم) في الوريد عن طريق القسطرة في الوريد الذيل الأفقي باستخدام القسطرة G 24 (براون، Introcan، 4252500-01). بعد ذلك، تطهير القسطرة مع 0.9 مل 0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم.
- ترك الفئران في كابح بدون تخدير حتى بداية المسح الضوئي وهيدرات للحيوان عن طريق حقن الرابع من 1 مل من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ كل ساعة.
- الفئران إعادة تخدير باستخدام isoflurane و2٪ على الفور قبل أن يبدأ المسح الضوئي.
- وضع فأر تخدير في عالية الدقة متعددة الأسلاك غرفة المستندة الحيوانية PET كاميرا quadHIDAC (أكسفورد البوزيترون أنظمة المحدودة، أكسفورد، المملكة المتحدة). القرار المكانية من الماسح الضوئي PET هو 1.0 ملم وثابت على مدى FOV كامل (قطر، 165 مم؛ طول محوري، 280 مم). رصد ومراقبة درجة حرارة الجسم أثناء الفحص باستخدام جهاز استشعار درجة حرارة الجسم والتخدير التحكم مع مقياس التأكسج النبض.
- بدء اكتساب ديناميكية ل60 مفي البداية 180 دقيقة بعد FDG حقن للحد من تراكم التتبع في الكلى الناجمة عن إفراز الكلى من FDG.
- تطبيق 5 من MBq 18 الرابع F-الفلورايد وإجراء مسح PET أخرى مباشرة بعد 18 حقن F-الفلورايد لمدة 60 دقيقة دون تحريك الموقف من الفئران في الماسح الضوئي لتحديد حمة الكلوي و لحساب من 18 F-5 التخليص. إعادة بناء الصور من كلا بالاشعة. تتبع يدويا حجم الفائدة (أصوات العراق) على الصور التي أعيد بناؤها بعد 2 دقيقة 18 حقن F-فلوريد (المرحلة نضح) حول القشرة الكلوية ونقل أصوات العراق إلى الصور FDG. استبعاد بعناية الحوض الكلوي من أصوات العراق. إعادة بناء الصور من على حد سواء يدويا والمسح الضوئي وتتبع حجم الفائدة (أصوات العراق) حول القشرة الكلوية. تم بناؤها بيانات القائمة وضع في الصور مع حجم فوكسل من 0.4 × 0.4 × 0.4 مم 3. استبعاد بعناية الحوض الكلوي من أصوات العراق.
- حساب FDG امتصاص نسبة سو مجموع التهم والحجم، وحساب النسبة المئوية للجرعة حقن (٪ ID). كنا MATLAB (النسخة R2011b، ماثووركس، ناتيك، MA، الولايات المتحدة الأمريكية) وتصوير الشعاعي الطبقي التصوير (TIM) الإصدار 2.8 لتحليل الصور.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
علم الأنسجة
خلال الكريات البيض AR، يتم تجنيد أي أساسا الخلايا اللمفاوية التائية في عملية الزرع، في حين ينعكس شدة الرفض حسب درجة الالتهاب. في الحمضية الدورية الرفيعة شيف (PAS) تلطيخ يصور هنا (الشكل 1)، ويبين طعم خيفي كلوي علامات النسيجي الكبير من AR، وهي التهاب الكبيبات، tubulitis، endothelialitis وتسلل الكسب غير المشروع (الشكل 1، ATX POD4) (POD = اليوم ما بعد الجراحة) بينما علامات الرفض غائبة في الكلى تحكم أصلي (الشكل 1، CTR)، وخلايا التسلل الكسب غير المشروع هي خلايا نشطة أيضي للغاية والتي تستهلك كميات كبيرة من الجلوكوز. ومع ذلك، إذا يتم استبدال هذا الأخير مع FDG، وهذا سوف تتراكم في الخلايا ويمكن قياسها كميا وبواسطة PET.
صور PET
صور PET ممثل دينامية الاستحواذ الجسم كله من سلسلة من آلزرع logeneically الفئران بعد حقن الوريد الذيل من 30 من MBq FDG (الحد الأقصى إسقاط الخريطة الخلفي، 180 دقيقة PI) (الشكل 2). تم العثور على توزيع FDG نموذجية مع تراكم الفسيولوجية متميزة في الدماغ والقلب ونخاع العظام والغدد هاردر. وعلاوة على ذلك، مجانا مرشح FDG يتراكم في المسالك البولية. في ترقيع الكلوي تمر AR لحمة (دائرة صفراء، الكلى اليسرى) يتراكم غاية FDG باستعراضات على POD4، في حين أن الكلى الأصلي (دائرة خضراء، الكلية اليمنى) لا تظهر أي تراكم على الإطلاق. منذ الحوض الكلوي يمكن أن تحتوي مجانية القضاء FDG، إلا أنه مستبعد من قياسات أخرى. الرقم مأخوذ من 3.
التقييم الكمي
لتم بناؤها الصور التقييم الكمي، عزي حجم الفائدة يدويا في جميع أنحاء الكلى وفقا ل18 نضح F-الفلورايد والمتوقعة على الصور FDG. بعد استبعاد الكلوي PElvis يعني تم احتساب FDG امتصاص في حمة الكلوي من قبل نسبة من إجمالي تعداد للحجم (٪ ID ± SEM). وأظهرت الكلى النامية AR زيادة كبيرة FDG تراكم على POD4 (0.8 ± 0.06٪) بالمقارنة مع الضوابط الأصلي (0.2 ± 0.02٪) أو الكلى زرع syngeneically (0.37 ± 0.04٪). وعلاوة على ذلك، لم اثنين تشخيصات تفريقية الرئيسية للAR، نخر أنبوب صغير وهي الحادة مثل نقص التروية في / إصابة ضخه (IRI) (0.31 ± 0.02٪) والحادة الكالسينيورين المانع سمية (CSA) (0.16 ± 0.01٪) لا تظهر تراكم وFDG مرتفعة ولذلك يمكن تمييزها عن AR (الشكل 3 مأخوذة من 3).
الشكل 1. تم العثور على الأنسجة. علامات الرفض الحاد، وهي التهاب الكبيبات، tubulitis، endothelialitis، وتسلل الكسب غير المشروع، في المجموعة طعم خيفي (ATX) وكانت غائبة تماما في الكلى التحكم (CTR).
الشكل 2. صورة FDG-PET. الممثل PET-صور دينامية الاستحواذ الجسم كله من سلسلة من الفئران المزروعة allogeneically. مقارنة الكلى التحكم (الدوائر الخضراء) يتراكم لحمة من المغايرة الكلوي (الدوائر الصفراء) FDG باستعراضات على POD4. منذ الحوض الكلوي يمكن أن تحتوي مجانية القضاء FDG تم استبعادها من القياسات. الرقم مأخوذ من 3.
الشكل (3). التقييم الكمي. الكشف عن الرفض الحاد عن طريق قياس معرف٪ من FDG. المغايرة الكلوي (ATX) يحمل هام F أعلىتراكمات من DG الكلى التحكم (CTR)، syngeneically المغايرة (STX)، الكلى مع نخر أنبوب صغير الحاد (ATN) أو الكلى الحاد مع الكالسينيورين سمية المانع (CSA) بحد أقصى على POD4 (ATX: 0.8 ± 0.06٪ نسبة النقر إلى الظهور: 0.2 ± 0.02 ٪، STX: 0.37 ± 0.04٪٪، ATN: 0.31 ± 0.02٪٪، CSA: 0.16 ± 0.01٪). الرقم مأخوذ من 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
FDG-PET التصوير هو خيار جديد لتشخيص الرفض الحاد. بسبب طبيعته غير الغازية ومحددة، FDG-PET هي المزايا بالمقارنة مع التشخيص الكلاسيكية بواسطة إبرة الخزعة الأساسية. في المقابل لصغر حجم عينة من خزعة، تحليل FDG-PET الكسب غير المشروع كله. وعلاوة على ذلك، يمكن للمرء تطبيقه على المرضى على العلاج المضاد للتخثر، ويمكن للمرء أن أداء التدابير PET مثلا متكررة لرصد كفاءة العلاج 4. وبالإضافة إلى ذلك، ونحن بالفعل قد أظهرت أن اثنين من التشخيص التفريقي الرئيسي لAR، نخر أنبوب صغير وهي الحادة الناجمة عن نقص التروية الحاد والاصابة ضخه الكالسينيورين سمية المانع، يمكن أن تكون متباينة من AR-PET باستخدام FDG 3. منذ FDG-PET التصوير يتطلب كميات منخفضة نسبيا من النشاط والتصوير إما مرضى زرع و / أو المرضى الذين يعانون من اختلال وظائف الكلى لا يرتبط مع زيادة خطر حدوث مضاعفات شديدة هذا النهج يمكن نقلها بسهولةفي روتينك اليومي السريرية.
ومع ذلك، يتعين على المرء أن نضع في اعتبارنا أن FDG هو التتبع بدلا غير محددة تقييم النشاط الأيضي الإقليمية. وهكذا، والعدوى الكسب غير المشروع أو الأورام قد تؤدي إلى نتائج إيجابية كاذبة أيضا. الصرف من FDG إلى الحوض الكلوي قد يكون هناك مشكلة عند تقييم FDG امتصاص في لحمة الكلوي. ولذلك، اخترنا وقت متأخر اكتساب بعد ثلاث ساعات حقن للحد من تراكم التتبع في الكلى الناجمة عن إفراز الكلى من FDG. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الحوض الكلوي لابد من استبعاد بعناية عند قياس FDG امتصاص الكلى. ويمكن وفقا لهذا البروتوكول PET أن تستخدم لغير جراحية كشف AR، لتمييزه عن ATN وكالة الفضاء الكندية، وأداء التحقيقات متسلسل للمتابعة أو لتقييم كفاءة العلاج 3 و 4 و 6. PET باستخدام 18 F-الفلورايد هو مفيد أيضا لتقييم (تقسيم) وظيفة الكلى من حساب إزالة الفلوريد الكلوي كما نشرت فرنكاخام 5.
نموذج خيفي زرع الكلى باستخدام LBN F1 المانحة والمتلقية لويس الفئران هو نموذج مثالي للتحقيق من الرفض الحاد طعم خيفي الخلوية. في غياب المناعة والكلى طعم خيفي تطوير علامات النسيجية نموذجية من AR وفقا لتصنيف بانف 7. وعلاوة على ذلك، اعتمادا على طريقة اختيار (أحادي مقابل binephrectomized زرع 3، 8-10) البيانات الأيضية يمكن تقييمها وكذلك لرصد وظيفة طعم خيفي. ونظرا لغياب المعالجة المثبطة للمناعة، الجرح أو التهابات جهازية من الفئران نادرة للغاية. المضاعفات الجراحية شيوعا لهذا النموذج تشمل تضيق الأوعية، ينظر في الغالب على نقطة الإدراج في الأوعية الكسب غير المشروع في الشريان الأورطي أو ICV للمتلقي. قد يسبب هذا نقص التروية أو تخثر الكسب غير المشروع. يمكن للمرء تجنب هذه المضاعفات باستخدام شقوق تعد موجودة في الشريان الأورطي وIVC. أحيانا يتم العثور يوريمية بسبب فشل الكسب غير المشروع أو Uتسرب reter الناجمة عن نخر الحالب أو انقطاع الحالب من المثانة. إذا علامات اللامبالاة مثل يوريمية، وفقدان الشهية أو زيادة الوزن عفوية تحدث، ينبغي أن يتم التخلص من الحيوانات فورا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من قبل جمعية الألمانية للبحوث (SFB 656، مونستر، ألمانيا، مشاريع C7 و C6) وIZKF مونستر (كور وحدة سماب). المؤلفون ممتنون لتروك فان لو، آن Kanzog، يوت Neugebauer، Wiebke Gottschlich والرومانية Priebe للحصول على مساعدة فنية ممتازة ودانيال بوركرت وسفين Fatum لإنتاج بالدلائل المشعة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Mathieu Needle Holder - 14 cm | Fine Science Tools | 12010-14 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder - 9 cm | Fine Science Tools | 12061-01 | |
| Surgical Scissors - Sharp_Blunt | Fine Science Tools | 14001-12 | |
| Iris Scissors - ToughCut Straight 11.5 cm | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-09 | |
| Vannas Spring Scissors - 3 mm Blades | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Dumont SS-45 Forceps - Inox Medical | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| Micro-Serrefine Clip Applicator with Lock | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Micro-Serrefine 6 mm x 1 mm | Fine Science Tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine 4 mm x 0.75 mm | Fine Science Tools | 18055-04 | |
| Reagent | |||
| Isoflurane (e.g. Forene 100% v/v) | Abott | ||
| cutane antiseptic (e.g. Octeniderm) | Schülke | ||
| Povidone Iodine (e.g. Betaisodona) | Mundipharma | ||
| ophthalmic ointment (e.g. Bepanthen) | Bayer | ||
| Buprenorphin (e.g. Temgesic) | RB Pharmaceuticals | ||
| HTK perfusion solution (e.g. CUSTODIOL HTK) | Dr. Franz Köhler Chemie | ||
| surgical thread Mersilene 0 | Ethicon | EH6665E | |
| surgical thread Mersilene 4-0 | Ethicon | EH6732H | |
| surgical thread Prolene 6-0 | Ethicon | 8697H | |
| surgical thread Ethilon 9-0 | Ethicon | 2809G | |
| surgical silk 5-0 | Vömel | 14739 | |
| Canula (e.g. Microlance 3, 27G ¾) | BD | 302200 | |
References
- Wu, O., Levy, A. R., Briggs, A., Lewis, G., Jardine, A. Acute rejection and chronic nephropathy: a systematic review of the literature. Transplantation. 87, 1330-1339 (2009).
- Miller, B. F., Gonzales, E., Wilchins, L. J., Nathan, P. Kidney transplantation in the rat. Nature. 194, 309-310 (1962).
- Reuter, S., Schnöckel, U., Schröter, R., Schober, O., Pavenstädt, H., Schäfers, M., Gabriëls, G., Schlatter, E. Non-invasive imaging of acute renal allograft rejection in rats using small animal F-FDG-PET. PLoS. One. 4, e5296 (2009).
- Reuter, S., Schnöckel, U., Edemir, B., Schröter, R., Kentrup, D., Pavenstädt, H., Schober, O., Schlatter, E., Gabriëls, G., Schäfers, M. Potential of noninvasive serial assessment of acute renal allograft rejection by 18F-FDG PET to monitor treatment efficiency. J. Nucl. Med. 51, 1644-1652 (2010).
- Schnöckel, U., Reuter, S., Stegger, L., Schlatter, E., Schäfers, K. P., Hermann, S., Schober, O., Gabriëls, G., Schäfers, M. Dynamic 18F-fluoride small animal PET to noninvasively assess renal function in rats. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 35, 2267-2274 (2008).
- Grabner, A., Schnöckel, U., Kentrup, D., Schäfers, M., Reuter, S. Strategies for Non-Invasive Molecular Imaging of Acute Allograft Rejection by Gamma Scintigraphy and Positron Emission Tomography. Curr. Radiopharm. 4, 10-23 (2011).
- Racusen, L. C., Solez, K., Colvin, R. B., Bonsib, S. M., Castro, M. C., Cavallo, T., Croker, B. P., Demetris, A. J., Drachenberg, C. B., Fogo, A. B., et al. The Banff 97 working classification of renal allograft pathology. Kidney Int. 55, 713-723 (1999).
- Edemir, B., Reuter, S., Borgulya, R., Schröter, R., Neugebauer, U., Gabriëls, G., Schlatter, E. Acute rejection modulates gene expression in the collecting duct. J. Am. Soc. Nephrol. 19, 538-546 (2008).
- Velic, A., Gabriëls, G., Hirsch, J. R., Schröter, R., Edemir, B., Paasche, S., Schlatter, E. Acute rejection after rat renal transplantation leads to downregulation of Na+ and water channels in the collecting duct. Am. J. Transplant. 5, 1276-1285 (2005).
- Reuter, S., Velic, A., Edemir, B., Schröter, R., Pavenstädt, H., Gabriëls, G., Bleich, M., Schlatter, E. Protective role of NHE-3 inhibition in rat renal transplantation undergoing acute rejection. Pflugers Arch. 456, 1075-1084 (2008).
