Summary
في نموذج حيواني وصفها في عملنا الحالي، وتنقية الأجسام المضادة IgG ضد تمتد من 200 الأحماض الأمينية (أ أ 757-967) من السابع الكولاجين يتم حقن الفئران مرارا إلى إعادة إنتاج النمط الظاهري عنيفا وكذلك histo والسمات المميزة لimmunopathological الإنسان انحلال البشرة الفقاعي المكتسب (EBA)
Abstract
الظواهر المناعة الذاتية تحدث في الأفراد الأصحاء، ولكن عندما يفشل التسامح الذاتي، استجابة المناعة الذاتية قد يؤدي إلى أمراض محددة. وفقا لفي Witebsky المسلمات، واحدة من المعايير في تشخيص مرض المناعة الذاتية كما هو استنساخ هذا المرض في حيوانات التجارب عن طريق نقل الأجسام المضادة من السلبي. لانحلال البشرة الفقاعي المكتسب (EBA)، وهو الجهاز prototypic محددة من أمراض المناعة الذاتية الأغشية المخاطية والجلد، وأنشئت مؤخرا نماذج تجريبية عدة. في نموذج حيواني وصفها في عملنا الحالي، وتنقية الأجسام المضادة IgG ضد تمتد من 200 الأحماض الأمينية (أ أ 757-967) من السابع الكولاجين يتم حقن الفئران مرارا إلى إعادة إنتاج النمط الظاهري عنيفا وكذلك histo والسمات المميزة لimmunopathological الإنسان EBA 1. وينظر عادة كاملة المرض على نطاق واسع 5-6 أيام بعد الحقن الأول ومدى انتشار المرض يرتبط مع جرعة من ج تدارVII-ollagen محددة مفتش. وتلف الأنسجة (تشكيل نفطة) في EBA التجريبية واعتمادا على تجنيد وتنشيط الأجسام المضادة من قبل المحببة محدد الأنسجة 2، -4. لذلك، هذا النموذج يسمح للتشريح لمسار محببة التهابات التي تعتمد على المشاركة في تلف الأنسجة الذاتية، باعتباره نموذجا يستنسخ فقط T-خلية مستقلة المرحلة من استجابة المناعة الذاتية صادر. علاوة على ذلك، أكد قيمته من قبل عدد من الدراسات التي تدلل على إمكانية نفطة الذي يحفز الأجسام المضادة في الجسم الحي من والتحقيق في آلية تشكيل نفطة في EBA 1،3، -6. وأخيرا، فإن هذا النموذج يسهل إلى حد كبير في تطوير علاجات جديدة مضادة للالتهابات التي يسببها الأجسام المضادة في أمراض. وعموما، فإن الحيوانات السلبي نقل نموذج EBA هو نموذج يمكن الوصول إليها المرض ومفيدة وسوف تساعد الباحثين على تحليل ليس فقط EBA المرضية ولكن للرد على بيولوجيا الأساسية والسريريةالأسئلة الأساسية المناعة الذاتية.
Protocol
1. إعداد الأجسام المضادة الإمراض
ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ تنقية وتركيز الأجسام المضادة في نفس اليوم، والأجسام المضادة ليست ليتم تخزينها في 0.1 درجة الحموضة جليكاين M 2،5-3 (شطف العازلة) بين ليلة (ON).
تنقية تقارب من مفتش الحكومة: استخدام 25 مل من مصل الأرنب المناعي:
- ذوبان الجليد في مصل الأرنب ON في 4 درجات مئوية، ومزجها 1:1 مع 1xPBS (تشغيل المخزن المؤقت) وأجهزة الطرد المركزي في 1260 XG ذلك لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة 20 º اختياريا، يمكن إدراج خطوة الترشيح مع ورق الترشيح بعد الطرد المركزي في حالة المصل هو الدهنية.
- وفي الوقت نفسه، يغسل البروتين G مصفوفة ملء عمود السرير مع وحدات التخزين 10 (حجم السرير حجم المصفوفة =) من 1XPBS (تشغيل المخزن المؤقت).
- تطبيق المخفف وتصفية المصل إلى العمود واحتضان 1 ساعة على منصة متحركة في درجة حرارة الغرفة (RT).
- جمع التدفق من خلال (FT) في أنبوب 50 مل القنينة. لا تخلص منه حتى تركيزوكما هو معروف من عيار مفتش المنقى.
- غسل المصفوفة مع وحدات التخزين السرير 5 من 1XPBS وفي هذه الأثناء إعداد 50 مل أنابيب الصقر لجمع الكسر مفتش مزال. ماصة 1 مل العازلة الرقم الهيدروجيني تحييد: 1 M TRIS الرقم الهيدروجيني 10 في كل أنبوب (وإلا نسبة العازلة TRIS 1:20 النسبية لكمية شطافة التي يتعين جمعها).
- تطبيق 100-150 مل العازلة شطف: 0.1 M الرقم الهيدروجيني 2،5-3 جليكاين إلى العمود وجمع 50 مل جزء (ق). الوجه الأنبوب 2-3X، وقياس درجة الحموضة وإضافة العازلة تحييد حتى كنت قد وصلت إلى درجة الحموضة 7،2-7،4.
- جمع قطرات قليلة من شطافة مفتش واستخدام شطف العازلة كما ETALON قياس OD في 280 نانومتر. إذا كان OD هو <جمع توقف 0.1.
- تجديد المصفوفة G بروتين وتخزينه باتباع إرشادات الشركة المصنعة.
تركيز من الترشيح الفائق مع أنابيب Amicon:
- غسل الترا Amicon (15 مل / 30KDa) أنابيب الترشيح الفائق مع 1XPBS بواسطة الطرد المركزي 15-20 دقيقةفي 3220 XG في C. ° 4 تجاهل FT من Amicon.
- ملء Amicons مع 15 مل من جزء مفتش مزال وأجهزة الطرد المركزي لمدة 25-30 دقيقة في XG 3220 و 4 ° C؛ الوقت الطرد المركزي يعتمد دائما على البروتين المتواجد في شطافة.
- FT تجاهل وتكرار الترشيح الفائق حتى لديك أي جزء مزال اليسار.
- غسل مفتش المركزة على نطاق واسع، مرتين، مع الحد الأدنى من 25-30 1XPBS الطرد المركزي.
- جمع "لزجة"، الحل الأجسام المضادة مصفر من تصفية Amicon في الحجم النهائي من 1،500-2،000 ميكرولتر من 1XPBS.
- تركيز قدر من إعداد مفتش باستخدام الطيف أو NanoDrop:
اضرب. (ملغ / مل) = A (280 نانومتر) × عامل تخفيف / 1،4 - غسل وتخزين Amicons باتباع إرشادات الشركة المصنعة.
2. حقن الكولاجين من السابع محددة مفتش في الفئران
قبل البدء في إجراء التجارب الفعلية، تأكد من أن برو التجريبيةهو مكتوب tocol ونحن على استعداد لجميع المواد التجربة.
- إعداد ورقة البيانات للسجل المرض، ELISAs، المناعي (IF) وتحليل الميلوبيروكسيداز (MPO) فحص 4.
- تسمية أنابيب للدم والأعضاء، وكذلك cryomolds الأنسجة تجهيز الأشرطة وتضمينها.
- وينبغي إعداد الحلول الأجسام المضادة طازجة أو إذابة من الأسهم وتتميز فيما يتعلق نشاطها (عيار بواسطة / IF والمجهري أو ELISA). يجب تخفيفه والعقيمة الحل الأجسام المضادة التي تمت تصفيتها في PBS بطريقة الجرعة المطلوبة للحقن يتراوح بين 250-1000 ميكرولتر. تأكد من أن لديك ما يكفي من مفتش الحكومة لتنفيذ التجربة بأكملها.
- إعداد جديدة للتخثر: الهيبارين 20 سنة FIFA / مل و 8.7 ملغ / مل الكيتامين / 1.3 خليط زيلازين ملغ / مل للتخدير. عندما التضحية الفئران وصفت أنابيب مع الفورمالديهايد 3.7٪ إعدادها.
- تعقيم الأدوات الجراحية (مشرط، مقص، ونقطة والمنحنيات الجميلةforcipes ED) وإعداد الحقن (الحقن الأنسولين، 1 مل والمحاقن 2)، والإبر، وكاميرا رقمية بطاقة الذاكرة الإضافية و.
ملاحظة: تنفيذ جميع الإجراءات مخدر الكيتامين على الفئران / زيلازين أو isoflurane Isoflurane هو الخيار المفضل لتخدير الجلد الشيكات اليومي، حيث الفئران يتعافى سريعا. ومع ذلك، يتم حقن عادة عند التقاط الصور، 87 الكيتامين ملغ / كغ و 13 زيلازين ملغ / كغ تحت الجلد. القتل الرحيم ليتم زيادة الجرعة الكيتامين / زيلازين لالكيتامين ملغ / 130 كيلوجرام و 20 زيلازين ملغم / كغم.
- تحقق من الحيوانات تميزت بالفعل للبشرة في مجال الصحة العامة، وظهور حالة الفراء، وقياس وزن لهم سمك على الأذن (عصا دائما إلى الأذن نفسها).
- تسجيل القيم المرصودة والتغيرات في ورقة التقييم السريري.
- جمع 20-30 ميكرولتر (2-3 نقطة) الدم من الوريد ذيل حقنة تحتوي على في نفس الحجم من تخثر.
- تطهير الفراء والجلد باستخدام الايثانول 80٪.
- حقن تحت الجلد الحل الأجسام المضادة في الجزء الخلفي باستخدام حقنة الأنسولين. (لمواقع معينة (على سبيل المثال، الأذنين) حجم صغيرة فقط (10-50 ميكرولتر) قابلة للتنفيذ ليتم حقنه.)
وينبغي تكرار الحقن كل يوم الثاني على التوالي، 4 مرات. BALB / ج الفئران وC57BL6 من وزن الجسم ما يقرب من 20 غراما بداية لتطوير هذا المرض 3-4 أيام بعد أول إدارة من 400-500 تصل إلى 750 ميكروغرام / غرام وزن الأجسام المضادة / حقن الجسم.
عندما الانتهاء من التجربة:
- وضع الفئران تحت الخدر العميق عن طريق حقن 130 ملغ / كغ و 20 ملغم / كغم من الكيتامين / زيلازين تحت الجلد، يستنزف منهم من الوريد الأجوف الخلفي وقطع القلب بها.
- جمع الأجهزة / عينات الأنسجة مثل الجلد: الذيل، والدم والأذن والمريء ووضعها في أنابيب المسمى سابقا وشغل PBS أو 3.7٪ الفورمالديهايد.
عند عودته إلىالمختبر:
- أجهزة الطرد المركزي في الدم XG 1200، 10 دقيقة في RT لبلازما منفصلة، نقل البلازما إلى أنابيب صفت وتخزينها بشكل صحيح وفقا لذلك.
- تضمين الجلد خزعة في درجة الحرارة المثلى من القطع الوسط باستخدام cryomolds، صحيح التسمية، وتخزينها في -80 درجة مئوية.
- وضع عينات الأنسجة المخصصة للعلم الأنسجة في قوالب صفت التضمين والاحتفاظ بها في الفورمالديهايد 3.7٪ حتى تضمين البارافين.
3. السريرية تقييم شدة المرض
ينبغي دراسة الفئران يوميا لآفات الجلد والغشاء المخاطي ويجب تسجيل النتائج باستخدام الأشكال المناسبة. معايير القتل الرحيم في وقت مبكر هو الآفات الجلدية التي تؤثر على أكثر من 20٪ من سطح الجسم وفقدان الوزن من 5-10٪ من وزن الجسم الكلي في ثلاثة أيام متتالية، عد لدرجة المرض من 5 (الجدول 1).
- ضع الماوس على بطنها. تبدأ منطقة الرأس، وهي مع الحقالأذن وتحقق من وجود بثور وتقرحات والقشرة الداخلية على وكذلك على الجانب الخارجي. تواصل بنفس الطريقة مع الأذن اليسرى.
- يتم التحكم العينين اليمنى واليسرى بحثا عن علامات على حمامي، وثعلبة، تقرحات و / أو القشرة.
- ونحى الجبهة ومنطقة خطم من خلال المقبل، واستمرار مع الجزء البطني من الخطم، والشفة والغشاء المخاطي للفم.
- دراسة الساق الأمامية اليمنى بدءا من مخلب، تتحرك صعودا؛ التبديل إلى الساق الأمامية اليسرى. نفس الإجراء مع الساقين الخلفيتين الأيمن والأيسر.
- فرشاة من خلال الفراء على الرقبة ومنطقة الظهر مع ملقط غرامة نقطة منحنية.
- تحويل الماوس على ظهرها وتحقق الجزء البطني وكذلك بطني الجانبين في الأطراف بنفس الطريقة من قبل.
- تحقق من الذيل.
- التقاط صور لأجزاء الجسم ذات الصلة حيث الفئران يصابون بالمرض. ويجب إيلاء الاهتمام لنوعية وكمية من الصور.
- حساب عشرات الأمراض السريرية.
4. تحليل عينات الجلد والبلازما
- إعداد وتخزين وو / أو معالجة جميع الأنسجة التي تم جمعها وفقا لهذه الخطة.
- قطع الأنسجة المجمدة لأقسام IF الكشف عن الأجسام المضادة الأرنب والفأر مكونات نظام مكمل.
- تحليل محتوى البروتين والانزيم مختلفة (مقايسة MPO) من المجمدة و / أو الأنسجة مستخلصات عضوية.
- جزءا لا يتجزأ من البارافين قسم الأنسجة وصمة عار مع H & E لتصور مدى الضرر الأنسجة.
- تحليل البلازما بواسطة ELISA، طخة مناعية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
نقل نتائج سلبية المستضد محددة الأجسام المضادة في مرض مهب كاملة في الفئران، تشبه في مستويات السريرية والنسيجية وجمعية رجال الأعمال المصريين immunopathological الإنسان. بثور، قشور، تقرحات وتطوير ثعلبة على أذنيه، الخطم، الكفوف، والساقين والظهر وحول العينين من الفئران. وأول علامات سريرية للمرض على الارجح تظهر على الأذنين و / أو منطقة الرأس. تم الكشف عن ترسب الأرانب مفتش محددة، والماوس C3 تكملة مباشرة بواسطة IF في تقاطع للطريق الجلد البشرة من الجلد في محيط بالآفة cryosections. في ظهور بثور الجلد تحت البشرة والتهاب التقرحي وينظر التسلل من الأنسجة.
ومع ذلك، إذا تم التوقف عن حقن من الأجسام المضادة المسببة للأمراض الكولاجين السابع محددة، ويصبح نشاط المرض تدريجيا أقل، وخلال عدة أسابيع شفاء الآفات. ومع ذلك، قد درجة معينة من ثعلبة ندبية postinflammatory تستمر إلى أجل غير مسمى.
Characterizأوجه من مستضد ذاتي المؤتلف (ومفتش المسببة للأمراض)
الفئران الكولاجين محددة تربط مفتش عند تقاطع طريق الجلد البشرة (الشكل 2B). ويتم تقييم خصوصية من طخة مناعية (الشكل 2C، والممرات 3 و 4 و 7).
سجل نشاط المرض
ويستند التقييم السريري للمرض على نظام التسجيل ونحن المتقدمة (الجدول 1): 0، لم الآفات؛ 1، أقل من 1٪ من سطح الجلد، 2، 1-5٪ من سطح الجلد، 3، 5 - يتأثر 4، 10-20٪ من سطح الجلد، و 10٪ من سطح الجلد. مفتش الحكومة ضد الفئران الكولاجين السابع يدفع الآفات الجلدية مثل حمامي، وثعلبة، وظهور بثور وتقرحات والقشور على الأذنين والعينين والخطم والأطراف والجذع من BALB / ج الفئران (الشكل 3).
تحليل الأجسام المضادة الخاصة الكولاجين الأنسجة محددة وتعميم
ترسب مفتش الأرنب، والفأرة هي تكملة C3 DETEC تيد في المجمدة وأقسام الأنسجة محيط بالآفة (الشكل 4D وE على التوالي). وينظر للبثور تحت البشرة والتسلل إلى التهابات في عينات نسيجية (4F الشكل). ويتم تحليل الأجسام المضادة الأرنب تعميم من قبل ELISA (الشكل 5). ويتم تحليل الأنسجة المجمدة و / أو مقتطفات من الجهاز المقايسات مختلفة للبروتين ومحتوى انزيم (مقايسة MPO).
الشكل 1. يتم تنقيته عنيفا بفعل الخطة الشاملة للفي الجسم الحي عن طريق نقل الأجسام المضادة السلبي السابع محددة الكولاجين. الأرانب وتحصين الفئران مع الكولاجين السابع ومفتش الأرنب من الأمصال المناعية. وبعد ذلك، يتم حقن الأجسام المضادة في الفئران تحت الجلد محددة بعد حقنة / جدول النزيف. ويجري فحص الفئران لحالة الصحة العامة وعلامات المرض يوميا.
معشوقة = "jove_content" FO: المحافظة على together.within صفحة = "دائما"> 
الشكل 2. توصيف مفتش المسببة للأمراض السابع محددة الكولاجين. غير المباشرة إذا كان التحليل من الملح العادي أقسام انقسام الجلد الماوس المحتضنة مع الأرانب المصل المناعي قبل ومع الفئران الكولاجين السابع محددة النتائج الأرانب المناعي المصل في أي ترسب (A) وترسب الأجسام المضادة في البشرة تقاطع طريق الجلد (B)، على التوالي. الأجسام المضادة للمستضد محددة الاعتراف (ق) ورفعوا ضد طخة مناعية عند تنفيذ مع مجموعة من الفئران تداخل المؤتلف الكولاجين شظايا السابع (C، الممرات 3 و 4 و 7).
الشكل 3. التقييم السريري من الفئران. مفتش لالفئران الكولاجين السابع يدفع الآفات الجلدية مثل الثعلبة، بثور وتقرحات والقشور على الأذنين والعينين والخطم، لىMBS والجذع من BALB / ج الفئران (AD). الفئران حقن الأجسام المضادة مع التوصل إلى نقاط محددة من 4، في حين أن تلك مع حقن NRIgG أو القيمة المطلقة ضد بروتين غير مبال كان على درجة من 0 (E). تم احتساب نقاط السريرية كما يلي: 0، لم الآفات؛ 1، أقل من 1٪ من سطح الجلد، 2، 1-5٪ من سطح الجلد، 3، 5-10٪ من سطح الجلد، 4 10، - ويتأثر 20٪ من سطح الجلد. فقدان الوزن من 5-10٪ من وزن الجسم الكلي خلال ثلاث تهم أيام متتالية كنقطة إضافية في النتيجة النهائية.
الشكل 4. تم الكشف عن نتائج Histo وimmunopathological في الفئران حقن الكولاجين مع ترسب مفتش السابع محددة من مفتش الأرانب (D)، والماوس C3 المتممة (E) عن طريق الاتصال المباشر على مفترق IF في البشرة الجلدية في cryosections من الجلد محيط بالآفة، في الجسم الحي. في ظهور بثور الجلد تحت البشرة والتقرحي التهاب INFوينظر iltrate من الأنسجة (F). لا ترسب مفتش الأرانب (A)، والماوس C3 مكملا (B)، ولا هو تحت البشرة تشكيل نفطة ينظر في عناصر التحكم (C).
الشكل 5. تم قياس مستويات البلازما المناعية من البلازما من الفئران حقن الكولاجين مع VII-مفتش محددة. تعميم الأجسام المضادة التي كتبها الأرنب ELISA.
الجدول 1. تحوصل الجلد المرض ورقة التسجيل. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر الجدول .
سجل النظام:
- 0، لم الآفات؛
- 1، أقل من 1٪ من سطح الجلد؛
- 2، 1-5٪ من سطح الجلد؛
- 3، 5-10٪ من الجلد سوrface؛
- 4، وتتأثر 10-20٪ من سطح الجلد.
تلميحات إضافية عندما سجل:
- فقدان الوزن من 5-10٪ من وزن الجسم الكلي خلال ثلاث تهم أيام متتالية كنقطة إضافية في ال 17 النتيجة النهائية.
- حمامي على أذنيه، حول العينين على الكفوف ليست سوى الإشارات الأولى للتفاعل مناعي الجارية، إن لم يكن يقترن ظهور بثور أو ثعلبة أنها لا كميا، الذي اتخذ للتو تحت الملاحظة.
- يمكن علامات على الذيل يكون لدغة أو علامات المعركة، حتى إذا كانت موجودة من البداية تفاقم بهم قد لا يكون بالضرورة بسبب هذا المرض. النظر بعناية إلى تجاوز الاعتماد عليها!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نقل الأجسام المضادة من السلبي إلى حيوانات التجارب هو نهج الرئيسية لإثبات المرضية الخاصة بهم 7، -12. النماذج الحيوانية التي تم الحصول عليها من خلال هذه الطريقة، بالإضافة إلى كونه دليلا غير مباشر لالمناعة الذاتية 13، تسمح التحقيق في المرحلة صادر الآلية المسببة للأمراض. تم استخدام نموذج نقل السلبي من الجلد التي تعتمد على الأجسام المضادة محببة الناجم عن ظهور تقرحات في انحلال البشرة الفقاعي المكتسب (EBA) لتشريح آليات تلف الأنسجة في الجلادات المناعة الذاتية. اتضح أيضا، كمرض نموذج رائع لدراسة مفيدة الأساسية، والجوانب الحاسمة بيولوجيا السريرية أمراض المناعة الذاتية بوساطة الأضداد الجهاز الخاصة التي تمتد إلى ما وراء حدود المناعة الذاتية ضد VII الكولاجين. وأخيرا، يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة العمليات البيولوجية الأساسية والمرضية في جسم المريض، بما في ذلك علم الأحياء الغشاء القاعدي، وتفعيل محببة من قبل المركبات المناعية علىد تكملة التنشيط.
على الرغم من أن العديد من الإعدادات التجريبية، بما في ذلك الجسم الحي السابقين والنماذج الحيوانية، وتتوفر لهذا المرض المناعة الذاتية الجلد EBA 14، إلى حد بعيد الأكثر ملاءمة لدراسة مسارات محببة التهابات التي تعتمد على نقل السلبي هو من الأجسام المضادة في الحيوانات. وعلى النقيض من نموذج الجسم الحي السابقين، حيث يتم إضافة المحببة للأقسام الجلد المحتضنة في السابق مع الأجسام المضادة 15، ويرد هنا تلقائيا تسلل الكريات البيض من الفئران. وعلاوة على ذلك، إذا اخترنا العمل مع الأجسام المضادة المحددة التي أثيرت ضد مستضد في الكائنات الحية الأخرى، مثل الأرانب والماعز، ونحن تجنب مشكلة محدودة المريض الأمصال توافر وكما ان لدينا فرصة أفضل لإعادة إنتاج تكملة التنشيط والتوظيف محببة 16.
لاستنساخ نجاح محببة التي تعتمد على تقرحات في وضع النقل السلبيلتر من EBA، من المهم أن تكون قادرا على تسجيل نحو كاف علامات المرض، بدءا من حمامي ووذمة من خلال بثور وتقرحات مع القشور وثعلبة. تقييم الفئران هي عملية لا بد من تعلم مسبقا. التسجيل للمرض لابد من إجراء من قبل الشخص نفسه، في كافة مراحل التجربة وإعارة دائما متعاونا أو الشخص المساعدات. تطوير واستخدام نظام التسجيل الموحد لكل مرض التجريبية هو من أهمية قصوى. يجب أن الورقة التسجيل المغلقة تعطي القارئ فكرة كيف يتم تقييم الجلادات الجلد في الفئران.
عندما يقوم كما هو موضح في الفيديو، فإن الأجسام المضادة من طراز الناجمة عن تقرحات تحت البشرة ييسر إلى حد كبير تشريح مزيد من المسارات التي تعتمد على محببة التهابات الناجمة عن الأجسام المضادة مما أدى إلى وتلف الأنسجة. ويدعم قيمته في البحوث الطبية من منظور واعدة من تطوير واختبار مستضد-S جديدةاستهدفت pecific T والخلايا B العلاجات المضادة للالتهابات. وأخيرا، سوف يساعد في الإجابة الأساسية وبيولوجيا سريريا الأسئلة الأساسية المناعة الذاتية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
الكتاب نعترف دعم من المنح المقدمة من جمعية الألمانية للبحوث وSI-1281/4-1 BIOSS من كلية الطب في جامعة فرايبورغ (لCS).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund Richard Herberholz GmbH Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
