Summary
Kolajen VII 200 amino asit (aa 757-967) bir streç karşı IgG antikorları saflaştırılmış, bugünkü iş tarif hayvan modelinde kabarma fenotipi yanı sıra insan için karakteristik histolojik ve immunopatolojik özellikleri üreten farelere sürekli enjekte edilir epidermolizis bülloza (EBA)
Abstract
Otoimmün fenomenler sağlıklı bireylerde ortaya, ama öz-hoşgörü başarısız olduğunda, otoimmün yanıtı spesifik bir patoloji neden olabilir. Göre Witebsky sitesi, otoimmün bir hastalık tanısında kullanılan kriterlerden biri önermeleri otoantikorların pasif transferi ile deney hayvanlarında hastalık üreme olduğunu. Epidermolizis için bülloza (EBA), deri ve mukoza bir prototipi organ-spesifik otoimmün hastalık, çeşitli deneysel modeller yakın zamanda kuruldu. Kolajen VII 200 amino asit (aa 757-967) bir streç karşı IgG antikorları saflaştırılmış, bugünkü iş tarif hayvan modelinde kabarma fenotipi yanı sıra insan için karakteristik histolojik ve immunopatolojik özellikleri üreten farelere sürekli enjekte edilir İTÇ 1. Tam teşekküllü bir yaygın hastalık genellikle ilk enjeksiyondan sonra 5-6 gün görülen ve hastalığın yaygınlığını yönetilen c dozu ile ilişkilidir edilirollagen VII-spesifik IgG. Deneysel EBA doku hasarı (kabarcık oluşumu) -4 doku bağlı otoantikorlar 2 ile granülosit alımı ve aktivasyon bağlıdır. Örnek efferent otoimmün tepki sadece T hücre-bağımsız bir faz üretir Bu nedenle, bu model, otoimmün doku hasarına neden granülosit-bağımlı enflamatuvar yolunun diseksiyon sağlar. Ayrıca, değeri in vivo otoantikorların blister uyaran potansiyelini gösteren ve İTÇ 1,3, -6 yılında blister oluşumu mekanizması araştıran çok sayıda çalışma tarafından belirlenmektedir. Son olarak, bu model oldukça otoantikor kaynaklı hastalıklarda yeni bir anti-inflamatuar tedavilerin geliştirilmesini kolaylaştıracaktır. Genel olarak, İTÇ pasif transfer hayvan modeli, erişilebilir ve öğretici hastalık modeli ve araştırmacılar İTÇ patogenezi sadece analiz etmek değil, temel biyolojik ve klinik cevap yardımcı olacakesansiyel otoimmünite sorular.
Protocol
1. Patojenik antikorun hazırlanması
Not: antikorlar gece boyunca 0.1 M glisin pH 2.5-3 (elüsyon tampon) (ON) saklanan olmamak gibi Saflaştırılması ve antikor konsantrasyonu, aynı gün yapılmalıdır.
IgG Affinity saflaştırılması: Bağışıklık tavşan serumu 25 ml kullanın:
- 4. ON tavşan serumu çözülme ° C, 20 ° C de 1xPBS (tampon çalıştıran) ile 1:1 Karışım, 10 dakika boyunca 1260 x g de santrifüjlenir İsteğe bağlı olarak, filtre kağıdı ile filtre adım serum yağ olması durumunda santrifüj sonrası dahil olabilir.
- Bu arada, G matrisi 1XPBS (tampon) çalışan 10 yatak hacmi (yatak hacmi = matriks hacmi) ile sütun doldurulur proteini yıkayın.
- Seyreltildi ve sütuna uygulanır serum filtre edilmiş ve oda sıcaklığında (RT) de sallanan platform üzerinde 1 saat inkübe edilir.
- Collect akan (FT) 50 ml Flakon tüp. Bunu atmayın konsantrasyona kadarve saflaştırılmış IgG titreleri bilinmektedir.
- 1XPBS 5 yatak hacmi ile matris yıkayın ve arada Elüsyonlanan IgG fraksiyonu toplamak için 50 ml Falcon tüpleri hazırlayın. Pipet 1 ml pH nötralize edici tamponu: her bir tüp içinde 1 M Tris pH 10 (aksi takdirde elde edilecek arındırıldı ve miktarına bağlı olarak 1:20 TRIS tampon oranı).
- Sütun 0.1 M glisin pH 2.5-3 ve 50 ml fraksiyon (ler) toplamak: 100-150 ml elüsyon tamponu uygulanır. , Tüp 2-3x çevirin pH ölçümü ve pH 7.2-7.4 ulaşana kadar nötralize tampon eklemek.
- IgG ile arındırıldı ve birkaç damla toplayın ve etalon 280 nm'de OD ölçmek olarak elüsyon tamponu kullanılarak. OD <0.1 durağı koleksiyonculuğu ise.
- Protein G matrisi Regenerate ve üreticinin yönergelerini izleyerek saklayın.
Amicon tüpleri ile ultrafiltrasyon ile Konsantrasyon:
- 15-20 dakika santrifüj edilerek 1XPBS ile Amicon Ultra (15 ml / 30KDa) ultrafiltrasyon tüpler Yıkama4 ° C'de 3.220 x g'da Amicon gelen FT atın.
- 25-30 3.220 xg'de dk ve 4 için yıkandı, IgG fraksiyonu ve santrifüj 15 ml Amicons doldurun ° C; santrifüjleme zamanı hep eluat protein içeriğine bağlıdır.
- FT atın ve sol hiçbir Elüsyonlanan Kesir kadar ultrafiltrasyon tekrarlayın.
- Santrifüjle 1XPBS 25-30 dk, yoğun, iki kez konsantre IgG yıkayın.
- 1XPBS 1,500-2,000 arasında ul nihai hacim içinde Amicon filtreden "yapışkan", sarımsı bir çözelti antikor toplayın.
- Bir spektrofotometre Nanodrop kullanılarak IgG hazırlık Tedbir konsantrasyonu:
Kons. (Mg / ml) = A (280 nm) x seyreltme faktörü / 1,4 - Üreticinin yönergelerini takip Amicons yıkayın ve saklayın.
2. Fareler içine Kollajen VII-spesifik IgG Enjeksiyon
Gerçek deneysel prosedür başlamadan önce, emin olun deneysel proprotokolünü yazılır ve tüm malzemeler deney için hazır edilir.
- Hastalığın puanlama, ELISA'lar, immünofloresan (IF) analizi ve miyeloperoksidaz (MPO) testi 4 veri sayfalarına hazırlayın.
- Kan ve organlar, cryomolds yanı sıra histolojik işleme ve kasetler gömmek için tüpler etiketleyin.
- Antikor çözeltileri taze hazırlanmış ya da stoklarından çözülmüş ve (IF mikroskopi ve / veya ELISA ile titre) kendi reaktivite bakımından karakterize edilmelidir. Steril filtre edilmiş antikor solüsyon enjeksiyon için gerekli doz ul 250-1000 arasında değişen bir şekilde PBS ile seyreltilmelidir. Eğer tüm deneme gerçekleştirmek için yeterli IgG sahip olduğunuzdan emin olun.
- Hazırlayın taze antikoagülan: Heparin 20 U / ml ve 8.7 mg / ml ketamin / anestezi için 1.3 mg / ml xylazine karışımı. Farelerde hazırlanan% 3.7 formaldehit ile tüpler etiketli ödün zaman.
- (Neşter, makas, ince noktası ve curv cerrahi aletler sterilizeed forcipes) ve şırıngalar (insülin şırıngaları, 1 ve 2 ml şırınga), iğneler, dijital kamera ve ekstra hafıza kartı hazırlayın.
Not: ketamin / xylazine veya izofluran uyuşturulur fareler üzerindeki tüm prosedürleri gerçekleştirin fareler hızlı bir şekilde kurtarmak gibi İzofluran, günlük cilt kontrolleri için tercih edilen anestezi seçenektir.. Ancak, resim, 87 mg / kg ketamin ve 13 mg / kg xylazine çekerken genellikle cilt altına enjekte edilir. Ötenazi için ketamin / xylazine doz 130 mg / kg ketamin ve 20 mg / kg xylazine yükselmiştir.
- Genel sağlık durumu, deri ve kürk görünümü için zaten işaretlenmiş hayvanlar kontrol, onları tartmak ve (her zaman aynı kulak sopa) onların kulak kalınlığını ölçmek.
- Gözlenen değerler ve klinik değerlendirme levha değişiklikleri kaydedin.
- Antikoagülan aynı hacimde içeren bir şırınga içinde, kuyruk veni 20-30 ul (2-3 damla), kan toplamak.
- Kürk Dezenfekte ve% 80 etanol kullanılarak cilt.
- . Subkutan insülin şırınga kullanarak arkasına antikor çözüm enjekte (bazı sitelerde (örneğin, kulaklar) için sadece küçük miktarlarda (10-50 ul) enjekte edilmesi mümkün bulunmaktadır.)
Enjeksiyonlar, ikinci günde 4 kez tekrar edilmelidir. Balb / c ve yaklaşık olarak 20 g vücut ağırlığı C57BL6 fareler 3-4 günde 750 mcg / g vücut ağırlığı / enjeksiyon otoantikor için 400-500 ilk uygulamadan sonra hastalık geliştirme başlar.
Deney çalışması bittikten sonra:
- 130 mg / kg ve ketamin / xylazine subkutan 20 mg / kg enjekte ederek derin narkoz altında fareler koyun, posterior vena kava onları exsanguinate ve kalbini sökecek.
- Deri gibi organ / doku örnekleri toplayın: kuyruk, kulak, kan ve özofagus ve önceden etiketlenmiş ve PBS veya% 3,7 formaldehit dolu tüplerin koydum.
Dönen zamanlaboratuvar:
- 1.200 xg, ayrı plazma RT 10 dak kan santrifüj, düzgün etiketli tüplere plazma aktarmak ve onları uygun şekilde saklayın.
- Cilde düzgün cryomolds, etiket kullanarak Optimal Kesme Sıcaklık orta biyopsisi ve -80 saklayın Embed ° C.
- Etiketli gömme kalıplara histoloji içindir doku örnekleri yerleştirin ve parafine gömme kadar% 3,7 formaldehit içinde saklayın.
3. Hastalık Şiddeti Klinik Değerlendirme
Fare deri ve mukoza lezyonları için günlük muayene edilmeli ve bulguların uygun formları kullanarak kayıt edilmelidir. Erken ötanazi için kriterler 5 bir hastalık skoru (Tablo 1) sayma, daha o 20 vücut yüzeyinin% ve üç gün üst üste toplam vücut ağırlığının% 5-10 kilo kaybı etkileyen deri lezyonları olduğunu.
- Karnı üzerinde fare yerleştirin. Sağ, yani baş bölgesi ile başlayınkulak ve kabarcıklar, erozyonlar, iç kabuk üzerinde hem de dış tarafında kontrol edin. Sol kulak ile aynı şekilde devam edin.
- Sağ ve sol gözler alopesi, eritem belirtileri için kontrol, erozyonlar ve / veya kabuk vardır.
- Alın ve burun alan burun, dudak ve ağız mukoza ventral kısmı ile devam eden, önümüzdeki aracılığıyla fırçalanır.
- Yukarı hareketli, pençe itibaren sağ ön bacak inceleyin; sol ön bacağa geçin. Sağ ve sol arka ayakları ile aynı prosedür.
- Kavisli bir ince nokta forseps ile boyun ve sırt alanda kürk ile fırçalayın.
- Sırt üstü çevirin ve fare karın bölümü ile birlikte uzuvların ventral tarafı önceden olduğu gibi aynı şekilde kontrol edin.
- Kuyruk kontrol edin.
- Farelerde hastalığı geliştirmek vücudun ilgili fotoğraflarını çekin. Dikkat resim kalitesi ve miktarına dikkat edilmelidir.
- Klinik hastalık puanları hesaplayın.
4. Cilt ve Plazma Örneklerinin Analizi
- , Mağaza ve / hazırlayın veya planına göre toplanan tüm dokuları işlemek.
- Dondurulmuş doku kesitlerinde Cut IF tavşan antikorları ve fare kompleman sistem bileşenlerinin tespiti.
- Dondurulmuş doku ve / veya organ ekstre farklı enzim ve protein içeriği (MPO tahlil) analiz edin.
- Bölüm parafine gömülü dokuda ve doku hasarı ölçüde görselleştirmek için H & E ile leke.
- ELISA, immunoblotting tarafından plazma analiz edin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Klinik, histolojik ve immunopatolojik düzeyde insan İTÇ benzeyen farelerde tam şişmiş bir hastalık spesifik antijen antikor sonuçları, pasif transfer. Kabarcıklar, kabuklar, erozyonlar ve alopesi kulakları, burunları, pençeleri, bacaklar, sırt ve farelerin göz etrafında gelişir. Hastalığın ilk klinik bulguların muhtemelen kulak ve / veya kafa alanı görünecektir. Belirli tavşan IgG ve fare kompleman C3 çökelmesi IF perilezyonel deri cryosections içinde dermal epidermal bileşkede doğrudan tarafından tespit edilir. Lezyondan subepidermal bül ve inflamatuar infiltrasyon histoloji tarafından görülmektedir.
Patojenik kolajen VII-spesifik antikor enjeksiyonu kesilir Bununla birlikte, hastalık aktivitesinin kademeli olarak daha düşük hale gelir, ve birkaç hafta içinde lezyonlar iyileşir. Bununla birlikte, postinflamatuar sikatrisyel alopesi belirli bir dereceye süresiz devam edebilir.
KarakterizeRekombinant otoantijen suz (ve patojenik IgG)
Mürin kollajen spesifik IgG dermal-epidermal bileşkede (Şekil 2B) de bağlar. Özgüllük immunoblotting (Şekil 2C, şerit 3, 4 ve 7) ile değerlendirilir.
Hastalık aktivitesi Skorlama
Hastalığın klinik değerlendirme geliştirdik bir skorlama sistemi (Tablo 1) üzerine dayanır:, 1, deri yüzeyinin% 1'den daha az, 2, deri yüzeyinin% 1-5, 0, hiçbir lezyon 3, 5 - 10. deri yüzeyinin%, 4, deri yüzeyinin% 10-20 etkilenir. Murin kolajen VII karşı IgG tür eritem, alopesi, kabarcıklar, erozyonlar, kulaklar, gözler, burun, bacaklarda ve Balb / c fareleri (Şekil 3) gövde kabukları gibi deri lezyonları neden olur.
Doku bağlı ve dolaşan kolajen-spesifik antikorların analizi
Tavşan IgG ve fare kompleman C3 çökelmesi dedek vardırdondurulmuş, perilezyonel doku kesitlerinde ted (Şekil 4D ve E sırasıyla). Subepidermal kabarcıklar ve inflamatuar infiltrat histolojik numuneler (Şekil 4F) görülür. Sirkülasyon tavşan antikorları ELISA (Şekil 5) ile analiz edilmiştir. Dondurulmuş doku ve / veya organ özü onların protein ve enzim içeriği için farklı testler (MPO testi) ile analiz edilmiştir.
Şekil 1. In vivo olarak genel düzeni kolajen VII-spesifik antikor pasif transferi ile indüklenen kabarcıklanma. Tavşanlar murin kolajen VII ve tavşan IgG ile aşılanması, bağışıklık serumu pürifiye edilir. Daha sonra, belirli bir otoantikorlar enjeksiyon / kanama programı izleyen farelere deri altından enjekte edilir. Fare genel sağlık durumu ve günlük hastalık belirtileri kontrol ediliyor.
Şekil 2. Patojenik kolajen VII-spesifik IgG karakterizasyonu. Dolaylı IF ön-bağışık tavşan serumu ile ve murin kollajen VII-özgü bağışıklık tavşan serum yok biriktirme sonuçları (A) ve de antikorların tortu ile inkübe tuz bölünmüş, normal fare derisi bölme analizi dermal epidermal bileşkede (B), sırasıyla. Spesifik antikorlar da (C, şerit 3, 4 ve 7) rekombinant murin kolajen VII parçalarının üst üste binen bir dizi ile immunoblotting gerçekleştirildiği zaman karşı yükseltildi antijen (ler) i tanır.
Şekil 3,. Farelerin Klinik değerlendirme. IgG murin kolajen VII tür alopesi, kabarcıklar, erozyonlar, kulaklara kabuklar, gözler, burun, li gibi deri lezyonları indüklermbs ve Balb / c fareleri (AD) gövde. Kayıtsız bir proteine karşı NRIgG veya Abs enjekte olanları 0 (E) bir skor elde ederken, özgün otoantikorlar enjekte Fare, 4 puan ulaşır. Klinik puan şu şekilde hesaplanmıştır: 0, hiçbir lezyon, 1, deri yüzeyinin en az% 1, 2, deri yüzeyinin% 1-5, 3, deri yüzeyinin% 5-10, 4, 10 - deri yüzeyinin% 20 etkilenir. Final skoru fazladan bir nokta olarak üç gün üst üste sayımları sırasında toplam vücut ağırlığının% 5-10 kilo kaybı.
Şekil 4. Tavşan IgG (D), ve fare kompleman C3 (E) kolajen VII-spesifik IgG. Çökelmesi ile enjekte edilen farelerde Histo-ve immunopatolojik bulgular lezyon çevresindeki cilt cryosections da dermal epidermal hiç değilse, in vivo olarak direkt tarafından tespit edilir. Lezyondan subepidermal kabarcıklar ve inflamatuar inf olarakiltrate histoloji (F) tarafından görülür. Tavşan IgG (A), fare kompleman C3 (B), ne de herhangi bir çökelme kontrol (C) de görüldüğü subepidermal kabarcık oluşumu.
Şekil 5,. Tavşan dolaşan antikorların kolajen VII-özgü IgG enjekte farelerin plazma İmmünoassay. Plazma düzeyleri ELISA yöntemi ile ölçüldü.
Tablo 1. Hastalığı puan tablosuna kabarma Cilt. Geniş tablosunu görüntülemek için tıklayınız .
Sistemi Puanlama:
- 0, hiçbir lezyonlar;
- 1, deri yüzeyinin en az% 1;
- 2, deri yüzeyinin% 1-5;
- Su cilt 3,% 5-10 oranındarface;
- 4, deri yüzeyinin% 10-20 etkilenir.
Ekstra ipuçları puanlama:
- Final skoru 17 ekstra nokta olarak üç gün üst üste sayımları sırasında toplam vücut ağırlığının% 5-10 kilo kaybı.
- Onlar sadece gözlem altına alınmış, niceliklendirilmemektedir kabarcık veya alopesi ile eşleştirilmiş değilse pençelerinde göz çevresindeki kulak eritem, sadece devam eden bir immün reaksiyon ilk belirtileridir.
- Tail Marks mutlaka hastalık nedeniyle olmayabilir onların kötüleşmesine başlangıçta görülür eğer öyleyse, ısırık veya kavga işaretleri olabilir. Onları saymak için hava dikkatlice düşünün!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Deney hayvanlarının içine otoantikorların pasif transfer onların patojenite 7, -12 göstermek için önemli bir yaklaşımdır. Bu yöntemle elde edilen hayvan modelleri üzerinde, otoimmünite 13 için dolaylı kanıt olmanın yanı sıra, patojenik mekanizmasının efferent faz inceleme sağlar. Epidermolizis bülloza (EBA) ve kabarma antikorun neden granülosit-bağımlı cilt pasif transfer modeli otoimmün dermatozlarda doku hasarının mekanizmaları incelemek için kullanılmıştır. Biliyorsunuz kolajen VII karşı otoimmünite sınırları dışına antikor-aracılı organ-spesifik otoimmün hastalıkların temel, biyolojik ve klinik olarak önemli yönlerini incelemek amacıyla bir zarif öğretici modeli hastalık olarak da ortaya çıkmıştır. Son olarak, bu model bir bazal membran biyoloji gibi temel biyolojik ve patofizyolojik süreçler, immün kompleksler tarafından granülosit aktivasyonunu incelemek için kullanılabilird kompleman aktivasyonu.
Ex vivo ve hayvan modelleri dahil olmak üzere bir çok deneysel ayarları, otoimmün deri hastalığı İTÇ 14 için kullanılabilir olmasına rağmen, bugüne kadar granülosit-bağımlı inflamatuvar yolları incelemek için en uygun hayvanların içine otoantikorların pasif transferidir. Granülosit önceden antikorları 15 ile inkübe cilt bölümlerine eklenir ex vivo modelde, aksine, burada lökosit infiltrasyonunu kendiliğinden fareler tarafından üretilir. Biz, tavşan ve keçi gibi diğer organizmalar içinde antijene karşı ortaya çıkan özel antikorlar ile çalışmayı tercih Ayrıca, eğer, biz sınırlı bir hasta serumları kullanılabilirlik sorunu önlemek ve ayrıca kompleman aktivasyonu ve granülosit işe 16 yeniden daha iyi bir şans var.
Pasif transfer modunda granülosit-bağımlı Kabarma başarılı bir üreme içinİTÇ l, bu kabarcıklar, kabuklar ve alopesi ile erozyon yoluyla eritem ve ödem ile başlayan, yeterli hastalık belirtileri puan edebilmek için önemlidir. Farelerin değerlendirilmesi önceden öğrenilmesi için ihtiyacı olan bir süreçtir. Hastalığın puanlama ortak çalışan veya yardım kişi tarafından deney boyunca, aynı kişi tarafından yapılmıştır ve her zaman için kabul görmesi gerekir. Her deneysel hastalık için standartlaştırılmış bir puanlama sisteminin geliştirilmesi ve kullanımı büyük önem arz etmektedir. Ekteki puanlama levha okuyucu deride dermatozlar farelerde nasıl değerlendirildiğini bir fikir vermelidir.
Gibi video gösterildiği yapıldığında, otoantikor indüklenen subepidermal büllerle modeli büyük ölçüde otoantikorlar ve doku hasarı ile sonuçlanan tetiklediği granülosit-bağımlı inflamatuvar yolakların daha diseksiyonu kolaylaştıracaktır. Tıbbi araştırmalara Onun değeri yeni antijen-ler geliştirilmesi ve test umut verici bir perspektif tarafından desteklenmektedirpecific T ve B hücre anti-inflamatuar tedavilerin hedeflenmiş. Son olarak, temel biyolojik ve klinik olarak önemli otoimmün soruları yanıtlayan yardımcı olacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Yazarlar Freiburg Üniversitesi (CS) Tıp Fakültesi Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 ve BIOS'lar hibeleri ile destek için minnettarım.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund Richard Herberholz GmbH Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
