Summary
Vi beskriver en elektrokemisk sensor analysemetode for hurtig påvisning af bakterier og identifikation. Assayet involverer et sensorarray funktionaliseret med DNA oligonucleotid capture prober til ribosomale RNA (rRNA) artsspecifikke sekvenser. Sandwich hybridisering af mål-rRNA med indfangningsproben og en peberrodsperoxidase-bundet DNA-oligonukleotid detektorprobe frembringer en målelig amperometrisk strøm.
Abstract
Elektrokemiske sensorer er almindeligt brugt til hurtig og præcis måling af blodsukker og kan tilpasses til påvisning af en lang række analytter. Elektrokemiske sensorer virker ved at transducere et biologisk anerkendelse begivenhed til et nyttigt elektrisk signal. Signaltransduktion forekommer ved kobling af aktiviteten af en redox-enzym til en amperometrisk elektrode. Sensor specificitet er enten en iboende egenskab af enzymet glucoseoxidase i tilfælde af en glukosesensor, eller et produkt af binding mellem enzymet og et antistof eller proben.
Her beskriver vi en elektrokemisk sensor analysemetode til direkte detektere og identificere bakterier. I hvert tilfælde er proberne beskrevet her DNA-oligonukleotider. Denne metode er baseret på sandwich-hybridisering af opsamling og detektor sonder med target ribosomale RNA (rRNA). Opfangningsproben er forankret til sensoroverfladen, mens detektorproben er knyttet til horseradish peroxidase (HRP). Når et substrat, såsom 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidin (TMB) sættes til en elektrode med capture-target-detektor komplekser bundet til sin overflade er substratet oxideres af HRP og reduceret med arbejdselektroden. Denne redox cyklus medfører shuttling af elektroner fra substratet fra elektroden til HRP, der producerer strøm i elektroden.
Introduction
Brug rRNA som en målmolekyle til bakteriel detektion og identifikation har en række fordele. Den overflod af rRNA i bakterieceller giver en følsomhed grænse så lav som 250 bakterier per milliliter uden behov for målamplifikation 1.. Bakteriel rRNA indeholder unikke arter-specifikke sekvenser, der er tilgængelige for hybridisering med DNA-prober. Følgelig kan et array af elektrokemiske sensorer anvendes til at identificere ukendte bakterier, hvor hver sensor er funktionaliseret med en anden arts-specifik opfangningsprobe. Positive Sensorer bør medtages for et syntetisk oligonukleotid mål om, at "broer" til opsamling og detektorprober at skabe et indre kalibrering signal.
Elektrokemiske sensorer har en bred vifte af grundlæggende og translationel forskning applikationer. For eksempel som beskrevet assayet her er blevet anvendt til præcist at måle effekten af E. coli vækstfase på rrnA og præ-rRNA kopiantal, som er af stor interesse for forskere interesseret i bakteriel fysiologi 2.. Følsomheden af den elektrokemiske sensor assayet bestemmes af signal-støj-forholdet. En række af signalforstærkning og støjreduktion metoder er blevet udforsket. Vi finder, at en forbedring af kemien i sensorens overflade er nøglen til at reducere ikke-specifik binding af detektorprobe og / eller HRP enzym. Navnlig har en blandet monolag af alkanedithiols og mercaptohexanol vist sig at reducere baggrund ved at dække elektroden overflade mere fuldstændigt samtidig bevare tilgængeligheden af indfangningsproben til target-hybridisering 3.. Disse overfladekemien behandlinger er særligt vigtige for analyser, der involverer komplekse biologiske prøver.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1.. Funktionalisering af elektrokemiske sensorer
- Forbered thiolerede opfangningsprobe ved en koncentration på 0,05 uM i 300 uM 1,6-hexandithiol (HDT), 10 mM Tris-HCI, pH 8,0, 0,3 M NaCl, 1 mM EDTA og inkuberes i mørke ved stuetemperatur i 10 min . Inkubation af thiolerede indfangningsproben med HDT sikrer, at thiolgruppe på opfangningsproben er reduceret, hvilket resulterer i mere ensartede resultater.
- Påfør en strøm af nitrogen til bare guld 16 sensor-chip (r) i 5 sekunder for at fjerne fugt og / eller partikler.
- Påfør 6 ul af HDT-thiolerede capture probe mix til arbejdselektroden af alle 16 sensorer sensorarrayet og gemme sensorchippen (r) i en overdækket petriskål ved 4 ° C natten over. Thioleret opfangningsprober binde direkte til den nøgne guld elektrode og HDT arbejder for at forhindre overpakning af indfangningsproberne og holde dem i en udvidet konformation, der fremmer hybridisering med målet.
- Denefter dag, sensor chip med deioniseret H2O vask i 2-3 sek og tørres under en strøm af nitrogen i 5 sek.
- Påfør 6 ul 10 mM Tris-HCI, pH 8,0, 0,3 M NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM 6-mercapto-1-hexanol (MCH) til arbejdselektroden af alle 16 sensorer og inkuber i 50 min. Denne og alle efterfølgende sensor chip inkubationer udføres i en overdækket petriskål ved stuetemperatur. MCH fungerer som et blokerende middel, udfylde eventuelle huller, hvor den thiolerede opfangningsprobe eller HDT ikke er til stede på elektrodeoverfladen.
2.. Prøveforberedelse
- Overfør 1 ml bakteriekultur i log-fase af vækst (OD600 ≈ 0,1) til et mikrocentrifugerør og centrifugeres ved 16.000 xg i 5 min. Fjern kultursupernatanten. Den bakterielle pellet kan forarbejdes straks eller opbevares ved -80 ° C til senere brug.
- Grundigt resuspenderes bakteriepelleten i 10 pi 1 M NaOH ved at anvende pipettespidsen botTom af mikrocentrifugerør og pipettering op og ned adskillige gange. Inkuber suspensionen ved stuetemperatur i 5 min.
- Neutralisere bakterielysat ved at tilsætte 50 pi 1 M phosphatpuffer, pH 7,2, indeholdende 2,5% bovint serumalbumin (BSA) og 0,25 mM af et fluorescein-modificeret detektorprobe. Inkubér neutraliserede lysat i 10 minutter ved stuetemperatur. Fluorescein-modificerede detektorprober hybridisere med bakterielle rRNA målmolekyler.
3.. Elektrokemisk sensor Assay
- Vask MCH fra sensoren chip med deioniseret H2O i 2-3 sek og tørres under en strøm af nitrogen i 5 sek.
- Påfør 4 pi neutraliseret bakterielysat til arbejdselektroden i hver af 14 sensorer og inkuberes i 15 min. Target-detektorprobe komplekser hybridiserer til immobiliserede thiolerede indfangningsprober.
- Påfør 4 pi 1 nM brodannende oligonukleotid i 1 M phosphatpuffer, pH 7,2, indeholdende 2,5% BSA og 0,25 &mu, M fluorescein-modificeret detektorprobe til 2 positive Sensorer (anvendes til signal normalisering) og inkuberes i 15 min.
- Vask sensor chip med deioniseret H2O i 2-3 sek og tørres under en strøm af nitrogen i 5 sek.
- Påfør 4 pi 0,5 U / ml anti-fluorescein-HRP i 1 M phosphatpuffer, pH 7,2, indeholdende 0,5% kasein til arbejdselektroden af alle 16 sensorer og inkuberes i 15 min. Den anti-fluorescein-HRP binder til de immobiliserede fluorescein-modificerede detektorprober.
- Vask sensor chip med deioniseret H2O i 2-3 sek og tørres under en strøm af nitrogen i 5 sek.
- Påfør en film godt klistermærke til overfladen af sensoren chip og belastning i sensorchippen mount. Tilsæt 50 ul TMB substrat, på alle 16 sensorer og lukke sensorchippen mount.
- Anskaf amperometri og cykliske voltammetri målinger for alle 16 sensorer med Helios Chip Reader. Amperometriske strøm er proportional med hastigheden af TMB reduction på sensorens overflade (se figur 1).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi beskriver en elektrokemisk analyse, der er struktureret på samme måde som en sandwich-ELISA. Som vist i figur 1, mål ribosomale RNA (rRNA) hybridisering med opsamling og detektor sonder er udviklet af et redox reaktion katalyseret af HRP konjugeret til anti-fluorescein-antistof-fragmenter, der binder til 3'fluorescein binding på detektoren sonden. En vigtig del af analysesensitivitet er overfladen kemi guldelektroden. Vi har fundet, at en ternær monolag bestående af thiolerede indfangningsprober, mercaptohexanol og hexandithiol forbedrer signal-støj-forholdet ved at reducere ikke-specifik baggrund binding af reporter protein 3.. Assayene beskrevet her anvender en GeneFluidics 16 sensor-chip vist i figur 2. Hver af sensorerne i arrayet indeholder tre elektroder, der arbejder, reference, og hjælpestoffer, som har kontaktpunkter på kanten af chippen 4.. Chippen læsesis har pogo pins, der forbinder med hver af kontaktpunkter. Chippen læseren fungerer som en grænseflade for sensoren array med et potentiometer styret af en computer algoritme.
Eksempler på elektrokemisk sensor strøm er vist i figur 3.. Strøm i sensorerne er kunstigt høj i løbet af de første par sekunder efter amperometriske målinger begynde grund af akkumuleringen af oxideret substrat, i tiden fra anvendelsen af TMB til føleroverfladen at indlede læseren algoritme. Aktuelt flow hurtigt når en steady state og nøjagtige sensoraflæsninger pålideligt kan opnås inden for 60 sekunder. Sensor-assays udføres typisk i to eksemplarer som en intern kontrol til sensor variabilitet. Vi har fundet, at sensor-til-sensor variabilitet er relativt konstant, så det er muligt at udføre 16 forskellige sensor assays parallelt på GeneFluidics 16-sensor-chip. Positive og negative kontroller er essentiale. Som en positiv kontrol, omfatter vi en syntetisk "bridging" DNA-oligonukleotid, der hybridiserer til både indfangning og detektorprober og tjener som et syntetisk mål af kendt koncentration. På denne måde opnåede resultater ved hjælp af de brodannende oligonukleotid fungerer som en intern kalibrering for at minimere chip-til-chip variation.
Ved testning opsamling og detektorprober, bør detektionsgrænsen bestemmes ved seriel fortynding af en prøve med kendt koncentration. Som vist i figur 4, der er en lineær log-log korrelation mellem prøvekoncentration og signalet i det dynamiske område for analysen. Detektionsgrænsen er defineret som koncentrationen af mål kræves for at generere et signal, der er 3,29 standardafvigelser større end middelværdien af baggrundssignaler 5. Til identifikation af bakterier i en ukendt prøve, er et panel af relevant opsamling og detektor probepar valgt. Valget af prober is bestemmes af de typer af bakterier mistænkes i en bestemt type prøve. Selvfølgelig kan usædvanlige bakterier lejlighedsvis findes i nogen prøve, så vi anbefaler at en eubakterielle sonde par medtages der har kapacitet til at hybridisere til konserverede regioner af rRNA eventuelle bakterier. Figur 5 viser repræsentative resultater for prøver indeholdende E. coli og K. pneumoniae, som ofte findes i urinen hos patienter med urinvejsinfektion. Signaler for de fleste sensorer vil være lav og lignende, og disse negative resultater kan samles som baggrunden signal.
Figur 1. Skematisk diagram af elektrokemisk sensor assay. Guldet elektrode er overtrukket med mercaptohexanol og hexandithiol og funktionaliseres ved tilsætning af thiolerede DNA-oligonukleotid indfangningsprober (blå). Sandwich hybridization af målet 16S rRNA med DNA Oligonukleotidbindingsproben og fluorescein-mærket DNA-oligonukleotid detektorprobe (rød), resulterer i et kompleks, der påvises ved tilsætning af anti-fluorescein - peberrodsperoxidase (HRP) konjugat og TMB-substrat. Amperometriske strøm genereres af redox cyklus, der resulterer fra oxidation af TMB ved HRP og reduktion af TMB ved elektroner fra elektroden.
Figur 2. . Bakteriel identifikation føleropstilling og chip mount Hver sensor i arrayet består af tre elektroder: en central arbejdselektrode, en perifer referenceelektrode og en ekstra elektrode for signal stabilisering. De arbejdende elektroder af hver sensor i arrayet funktionaliseres med et panel af indfangningsprober specifikke for bakterielle arter af interesse (se tabel 3), som vi ll som EU (eubakteriel) indfangningsprobe som hybridiserer til alle bakterielle 16S rRNA molekyler og en Brol "passerelle" oligonucleotid, der fungerer som positiv kontrol for signal kalibrering. Signal måles ved at anbringe array i en chip læser med pogo pins at interface med sensorelektroden kontaktpunkter.
Figur 3. Amperometriske strømudgang under målingen. Amperometrisk strøm måles parallelt for alle 16 sensorer i array. Aktuelt flow er i første omgang meget negativ på grund af ophobning af oxideret TMB substrat før tilslutning array til chip-læser og starte måling. Derefter strøm hurtigt stabiliserer sig, og sensoraflæsninger optages til 60 sek. Elektroder med større negativ strøm har de højeste signaler.
"Figur 4" src = "/ files/ftp_upload/4282/4282fig4.jpg" />
Figur 4.. Seriel tifold fortynding af E. coli bestemme detektionsgrænsen. sensorer blev testet i duplikat med serielle tifoldigt fortyndinger af en kendt koncentration af E. coli lysat. De observerede signal aflæsninger, afbildet som sorte cirkler, blev anvendt til at forudsige en idealiseret signal kurve. Den poolede standardafvigelse for alle replikater og baggrunden signalet ved den laveste målkoncentration blev anvendt til at beregne detektionsgrænsen (blå linie), defineret som 3,29 standardafvigelser end baggrunden.
Figur 5. Repræsentative elektrokemiske sensor analyseresultater for Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae. E. coli og K. pneumonIAE blev testet for reaktivitet med probepar beskrevet i tabel 2 og 3. Reaktivitet med KE sonde parret adskiller K. pneumoniae fra E. coli. Den bro oligonukleotid (Brol) tjener som positiv kontrol og intern kalibrering standard.
| Probe Name | Ribosomale Subunit og placering * | Sequence |
| KE Cap 10m | 16S 74 | 5'-S-AGCTCTCTGT |
| KE There 11m | 16S 63 | 5'-GCTACCGYTCG-F |
| EK Cap 15m | 23S 1492 | 5'-AGCCTTGATTTTCCG-S |
| EK There 15m | 23S 1507 | 5'-F-TCGTCATCACACCTC |
| EL Cap 17m | 23S 1507 | 5'-AGCGTTAAAAGGTACCG-S |
| EL Cap 18m | 23S 1507 | 5'-AGCGTTAADAAGGTACCG-S |
| EL There 15m | 23S 1492 | 5'-F-TCGTCATCACACCTC |
| EB Cap 23m | 16S 1275 | 5'-S-ACTTTATGAGGTCCGCTTGCTCT |
| EB There 23m | 16S 1252 | 5'-CGCGAGGTCGCCTTCCTTTGTAT-F |
| PM Cap 15m | 16S 183 | 5'-S-TTTGGTCCGTAGACA |
| PM There 17m | 16S 166 | 5'-TTATGCGGTATTAGCCA-F |
| PA Cap 11m | 16S 453 | 5'-S-ACTTACTGCCC |
| PA There 14m | 16S 439 | 5'-TTCCTCCCAACTTA-F |
| EU GN Cap 19m | 16S 1502 | 5'-S-GTTCCCCTACGGTTACCTT |
| EU There 18m | 16S 1484 | 5'-GTTACGACTTCACCCCAG-F |
| EU Brol 37m | 5'-CTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAAC |
Tabel 2. DNA oligonucleotidprobe Pair sekvenser. Capture (Cap) sonder er syntetiseret med thiolgrupper bindinger (S). Detektor (There) prober syntetiseret med fluorescein (F) modifikationer. Bemærk at probepar involvere enten en 5'-thioleret opfangningsprobe og en 3'-fluorescein-modificeret detektor sonde eller en 3'-thiolerede opfangningsprobe og en 5'-fluorescein-modificeret detektorprobe. De to EL Indfangningsproberne blandes før brug. For at forenkle analysen, kan detektorprober påføres hver sensor som en blanding uden væsentlig krydsreaktivitet. KE - Klebsiella og Enterobacter, EK - E.coli og K. pneumoniae, EL - E. cloacae, EB - Enterobacteriaceae familien, PM - P. mirabilis, PA - P. aeruginosa, EU - eubakteriel, Brol - Bridging Oligonucleotide. * - Lokation numbra refererer til afstanden fra starten af 16S eller 23S-genet.
| Bakteriearter | Reaktive probepar |
| Escherichia coli | EK + EB |
| Klebsiella pneumoniae | KE + EK + EB |
| Proteus mirabilis | PM + EB |
| Pseudomonas aeruginosa | PA |
| Enterobacter arter | KE + EB eller EL + EB eller KE + EL + EB |
Tabel 3. Anerkendelse af bakteriearter ved probepar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den elektrokemiske sensor assay beskrevet her muliggør hurtig påvisning af nukleinsyremål. Sensitivitet og specificitet til dels afhænge af den frie energi for target-probehybridisering, hvilket igen afhænger af længden og GC indhold opsamling og detektorprober. Vi udfører typisk hybridiseringstrin ved stuetemperatur (~ 20 ° C) 5, 6. Dog kan hybridiseringstrin (3.2 og 3.3) også udføres ved højere temperaturer i en hybridisering ovnen, hvis chippen er placeret i en overdækket kammer indeholdende fugtet filtrerpapir for at forhindre fordampning 7, 8. Signalkvalitet opnås med capture-detektor probepar der hybridiserer til tilgrænsende steder på målnucleinsyren uden mellemrum mellem hybridiserings sites 8.. Dette signal enhancement menes at virke ved basepar stabling og ved at øge hybridisering tilgængelighed tilstødende regioner, der er kendt som en "hjælper sonde"-effekt. Capture-detektor probe hybridisering til tilgrænsende sites er også vigtigt, fordi alkalisk lysis af bakterier resulterer i fragmentering af rRNA target 5. Denne metode kan anvendes til detektering af enten RNA eller DNA-mål, med en bred vifte af kliniske og forskning applikationer. For eksempel bør det være muligt at anvende denne metode til at studere cellulære funktioner, der reguleres af små RNA'er eller til at detektere antibiotikaresistens genmål enten som enten DNA eller mRNA. Pre-amplifikation kan være nødvendigt at opspore mål stede ved lave kopital. Desuden bør RNAse inhibitorer tilsættes under prøveforberedelse at hindre nedbrydning af potentielt ustabile RNA-targets.
Denne metode har flere fordele frem for andre metoder til påvisning og identifikation af bakterier. Standard klinisk mikrobiologiske metoder kræver bakterievækst på agarmedium til kvantificering og anvendelse af identifikationsmetoder. Vækst af bakterier til synlige kolonier typisk involvererinkubation natten signifikant forsinker tiden fra prøvetagning til rapportering af resultater. Der er stor interesse i udvikling af mere hurtige, molekylære metoder til påvisning af patogener, herunder elektrokemisk biosensorer 9.. Imidlertid har lidt opmærksomhed blevet givet til udførelse af DNA biosensorer i rå biologiske prøver. Den elektrokemiske sensor assay her beskrevne kan udføres direkte på serum-og urinprøver uden et betydeligt tab af følsomhed 7.. Brugen af thiolerede indfangningsprober og blandet monolag her beskrevne gør sensoroverfladen modstå ikke-specifikt protein absorption, bevarer følsomhed i rå biologiske prøver, herunder serum eller urin 10.. Så få som 1 bakteriecelle pr sensor (250 bakterier per milliliter) er påviselige, hvilket er sammenlignelig med følsomheden af PCR amplifikationsteknikker 1.. Flere PCR bakterielle identifikation metoder er blevet beskrevet 11, 12.. Selvom PCR potentielt kan detektere færre målmolekyler end den elektrokemiske sensor assayet beskrevet her, har PCR-baserede metoder opnåede begrænset vedtagelse grund af den høje anskaffelse af udstyr og / eller reagens omkostninger i forhold til standard klinisk mikrobiologiske metoder. I modsætning hertil er elektrokemiske sensorer relativt billig at producere. Selvom elektroderne er fremstillet af guld sputtering, mængden af guld per chip er lavt, fordi elektroden tykkelse er kun 1.000 Ångstrøm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfattere er opfindere om patenter er relevante for de beskrevne metoder. En af disse patenter er licenseret til Qvella Corporation. BMC og DAH har ejerandel i Qvella Corporation. VG er formand for GeneFluidics, som er producenten af den elektrokemiske sensor-chip, chip mount, og chip-læser er beskrevet i dette dokument.
Acknowledgments
Denne undersøgelse blev støttet af Cooperative aftale Award AI075565 (til DAH) fra National Institute of Allergy og smitsomme sygdomme samt af Wendy og Ken Ruby Fund for Excellence i Pediatric Urology Research. BMC er Judith og Robert Winston Chair i Pediatric Urology.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 6-mercapto-1-hexanol (MCH) | Sigma | 451088 | Store at room temperature |
| 1,6-hexanedithiol (HDT) | Sigma | H-12005 | Store at room temperature |
| Thiolated capture probes | Operon | N/A | Store at 100 μM in 0.1x TE at -20 °C |
| Fluorescein-modified detector probes | Operon | N/A | Store at 100 μM in 0.1x TE at -20 °C |
| Bridging Oligonucleotide | Operon | N/A | Store at 100 μM in 0.1x TE at -20 °C |
| Anti-Fluorescein-HRP, Fab fragments | Roche | 11 426 346 910 | Store at 4 °C |
| Helios Chip Reader | GeneFluidics | GFR-2009 | |
| Sensor Chip Mount | GeneFluidics | GFR-003 | |
| Film well sticker | GeneFluidics | Shipped with sensor chips | |
| Bare gold 16-sensor array chips | GeneFluidics | SC1000-16X-B | Store in 100% N2 at room temperature |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A7906 | Store at 4 °C |
| 1M Phosphate Buffer, pH 7.2 | 0.35M NaH2PO4, 0.65M K2HPO4, adjusted to pH 7.2 | ||
| Blocker Casein in PBS | Pierce | 37528 | Dilute with an equal volume of 1M Phosphate Buffer, pH 7.2, store at 4 °C |
| Table 1. Reagents and Equipment. | |||
References
- Wu, J., Campuzano, S., Halford, C., Haake, D. A., Wang, J. Ternary Surface Monolayers for Ultrasensitive (Zeptomole) Amperometric Detection of Nucleic Acid Hybridization without Signal Amplification. Anal. Chem. 82, 8830-8837 (2010).
- Halford, C., et al. Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing by Sensitive Detection of Precursor Ribosomal RNA Using a Novel Electrochemical Biosensing Platform. Antimicrob. Agents Chemother. 56, In Press (2012).
- Campuzano, S., et al. Ternary monolayers as DNA recognition interfaces for direct and sensitive electrochemical detection in untreated clinical samples. Biosens. Bioelectron. 26, 3577-3584 (2011).
- Gau, V., et al. Electrochemical molecular analysis without nucleic acid amplification. Methods. 37, 73-83 (2005).
- Patel, M., et al. Target Specific Capture Enhances Sensitivity of Electrochemical Detection of Bacterial Pathogens. J. Clin. Microbiol. 49, 4293-4296 (2011).
- Mastali, M., et al. Optimal probe length and target location for electrochemical detection of selected uropathogens at ambient temperature. J. Clin. Microbiol. 46, 2707-2716 (2008).
- Liao, J. C., et al. Use of electrochemical DNA biosensors for rapid molecular identification of uropathogens in clinical urine specimens. J. Clin. Microbiol. 44, 561-570 (2006).
- Liao, J. C., et al. Development of an advanced electrochemical DNA biosensor for bacterial pathogen detection. J. Mol. Diagn. 9, 158-168 (2007).
- Pedrero, M., Campuzano, S., Pingarron, J. M. Electroanalytical sensors and devices for multiplexed detection of foodborne pathogen microorganisms. Sensors (Basel). 9, 5503-5520 (2009).
- Kuralay, F., Campuzano, S., Haake, D. A., Wang, J. Highly sensitive disposable nucleic acid biosensors for direct bioelectronic detection in raw biological samples. Talanta. 85, 1330-1337 (2011).
- Ecker, D. J., et al. Ibis T5000: a universal biosensor approach for microbiology. Nat. Rev. Microbiol. 6, 553-558 (2008).
- Casalta, J. P., et al. Evaluation of the LightCycler SeptiFast test in the rapid etiologic diagnostic of infectious endocarditis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 28, 569-573 (2009).
