Summary
نحن تصف تقنية البحوث للتنظير القصبات الالياف البصرية وغسل القصبات باستخدام منخفضة شفط الضغط. يتم استخدام تقنية لحصاد الخلايا المناعية من السطوح القصبات الرئة. يتم استخدام مخدر موضعي والتخدير الواعي المعتدل (ميدازولام). مواضيع تتسامح البئر الداخلي والخبرة آثار جانبية أقل.
Abstract
نحن تصف تقنية البحوث للتنظير القصبات الالياف البصرية مع غسل القصبات (BAL) باستخدام اليد دليل عقد شفط لإزالة الخلايا غير ملتصق الرئة والسوائل بطانة من سطح المخاطية. في بيئات البحوث، وأخذ عينات من BAL يسمح الفطرية (بلعم الرئة) الخلوية (B-T والخلايا)، والخلطية (الغلوبولين المناعي) ردود داخل الرئة.
يتم قبول BAL دوليا لأغراض البحث ومنذ عام 1999 وقد تم تنفيذ هذه التقنية في> 1،000 الموضوعات في المملكة المتحدة وملاوي من قبل مجموعتنا.
يستخدم تقنية شفط لدينا لطيف باليد من السائل ذي جذور؛ تم تصميم هذا لتعظيم حجم BAL عاد وتطبيق الحد الأدنى من القوة القص على ظهائر مهدبة من أجل الحفاظ على بنية ووظيفة الخلايا داخل السائل BAL والحفاظ على سلامة لتسهيل النمو من الخلايا في الجسم الحي السابقين الثقافة. لذا يستخدم تقنية البحث أكبر حجم الإضافيةtillate (عادة في ترتيب 200 مل) ويعمل الشفط اليدوي للحد من الأضرار الخلية.
يتم إعطاء المرضى مخدر موضعي، وعرضت التخدير الواعي (ميدازولام)، وتحمل الإجراء بشكل جيد مع آثار جانبية أقل. معلومات الموضوع شفهية وخطية يحسن التسامح والموافقة المستنيرة المكتوبة هي إلزامية. سلامة هذا الموضوع هو الهدف الأسمى. ويتم اختيار الموضوعات بعناية باستخدام الإدماج والإقصاء معايير واضحة.
ويشمل هذا البروتوكول وصفا للمخاطر المحتملة، والخطوات المتخذة للتخفيف منها، وقائمة موانع، قبل والشيكات بعد العملية، وكذلك القصبات ومختبر تقنيات دقيقة.
Introduction
خلفية
وقد وضعت القصبات الالياف البصرية للممارسة السريرية، ويستخدم على نطاق واسع سواء في التشخيص وعلاجيا 1،2. غسل القصبات (BAL) يزيل خلايا الرئة غير ملتصق والسوائل بطانة من سطح المخاطية، ويستخدم لأخذ عينات الخزعة الأنسجة المخاطية وتحت المخاطية. في بيئات البحوث، BAL يسمح استجابات عينة من الفطرية (الضامة الرئة 3-5) الخلوية (B-T والخلايا 6)، والخلطية (الغلوبولين المناعي 7) داخل الرئة.
يتم قبول BAL دوليا لأغراض البحث و8 منذ عام 1999 وقد تم تنفيذ هذه التقنية في> 1،000 الموضوعات في المملكة المتحدة وملاوي من قبل مجموعتنا. ونحن نستخدم هذه التقنية في دراسة الاستجابات المناعية الفطرية، الخلوي، والخلطية لمستضد المكورات الرئوية بما في ذلك النقل تجريبية الإنسان المكورات الرئوية 9،17، والكتلة الحيوية الدخان 5، فيروس نقص المناعة البشرية والتطعيم، والعلاج ستو مساعديموت في الشفاء من الالتهاب الرئوي. يستخدم تقنية شفط لدينا لطيف باليد من السائل ذي جذور؛ تم تصميم هذا لتعظيم حجم BAL عاد وتطبيق الحد الأدنى من القوة القص على ظهائر مهدبة من أجل الحفاظ على بنية ووظيفة الخلايا داخل السائل BAL.
في سياق البحوث BAL يستخدم تقنية مختلفة عن تلك التي تمارس من قبل الأطباء والرعاية التنفسية المركزة (غالبا ما يطلق غسل القصبي، الغسيل، غسيل، أو BAL) الذين يهدفون إلى كسب فائدة تشخيصية أو علاجية. تم تصميم تقنية البحوث لحصاد الخلايا والحفاظ على سلامة لتسهيل نمو الخلايا في الجسم الحي السابقين الثقافة. لهذه الأسباب تقنية البحوث يستخدم instillate حجم أكبر (عادة في ترتيب 200 مل) ويعمل الشفط اليدوي للحد من تلف الخلايا. يتم إعطاء المرضى مخدر موضعي، وعرضت التخدير الواعي (ميدازولام)، وتحمل الإجراء بشكل جيد مع آثار جانبية أقل. subjec اللفظي والكتابيالمعلومات ر يحسن التسامح والموافقة المستنيرة المكتوبة هي إلزامية 1.
هدف
الهدف العام هو أن هذا الإجراء ينبغي أن تكون آمنة وفعالة. يجب أن المواضيع لا تواجه أي اضطراب الفسيولوجية وينبغي أن مشغلي جمع باستمرار في أكثر من 100 مل من BAL من الموضوعات. بعد العملية، يجب الموضوعات تجربة آثار جانبية أقل.
سلامة
سلامة هذا الموضوع هو الهدف الأسمى. ويتم اختيار الموضوعات بعناية باستخدام الإدماج والإقصاء معايير واضحة. ويشمل هذا البروتوكول وصفا للمخاطر المحتملة والخطوات المتخذة للتخفيف منها.
ويمكن التعبير عن موانع لتنظير القصبات البحوث على النحو المطلق أو النسبي، ويتم تضمينها في البروتوكول دراستنا كمعايير الإقصاء والإدماج. يتم فحص جميع المواد الدراسية لدينا لضمان صحة كاملة.
موانع مطلقةوتشمل العمود الفقري العنقي غير مستقرة، نقص الأكسجة لا تستجيب، والذبحة الصدرية غير المستقرة، والنزيف أهبة، وعدم انتظام ضربات القلب الخبيثة.
موانع نسبية، بما في ذلك تلك الظروف المرتبطة مع زيادة معدلات المضاعفات، وتشمل:
العام: سوء التعاونية الموضوع (1)، أي مشكلة طبية عامة مثل الصرع كبيرة، السابقة القصبات سيئة التسامح، والمعروفة ردود الفعل السلبية على يدوكائين أو ميدازولام، والحمل، وسوء التغذية.
الجهاز التنفسي: [تشبع (تكبدتها الشركة) على الهواء <94٪] نقص الأكسجة، hypercapnia، والربو غير مستقرة 1، ضعاف بشكل ملحوظ وظيفة الجهاز التنفسي 1 (FEV 1 <1 L) وارتفاع ضغط الدم الرئوي.
القلب والأوعية الدموية: يوريمية، على بعد 6 أسابيع من احتشاء عضلة القلب 1، متفوقة انسداد الوريد الأجوف.
الأخرى: كبت المناعة (مجموعتنا يؤدي بانتظام هذه اإلجراءاتملعرفة في مواضيع بفيروس نقص المناعة البشرية).
انظر الجدول 1 - المخاطر المرتبطة بال للبحوث.
Protocol
1. تم استيفاء الموضوعات على وصول من قبل ممرضة أبحاث الجهاز التنفسي
- وقد تم هذا الموضوع صيام> 4 ساعة لتناول الطعام الصلب و 2 ساعة للسوائل واضحة 1.
- يتم تنفيذ الإجراء كحالة اليوم مع الشيكات قبل وبعد الإجراء المناسب (وفقا لسياسة المستشفى قياسي).
- موضوع ترتدي ثوب المستشفى.
- يتم إدخال قنية صغيرة قياس (مثالي في اليد اليسرى) ويبقى في الموقع حتى نهاية فترة النقاهة بعد العملية 1.
- تؤخذ الملاحظات Preprocedure (ضغط الدم ومعدل ضربات القلب، تشبع الأكسجين [تكبدتها الشركة]).
- يتم نقل هذا الموضوع إلى جناح القصبات.
2. وقد أعد هذا الموضوع للإجراء في جناح من قبل الطبيب أبحاث الجهاز التنفسي من ذوي الخبرة في القصبات
- ويرد معدات الرصد بما في ذلك؛ 3 من الرصاص تخطيط القلب، نبض oximeter 1،10 ومقياس ضغط الدم. Anesthetليست هناك حاجة جيم الدعم بما في ذلك الموافقة المسبقة عن مكتوب.
- قد يتم تسليم الأوكسجين عبر قنية الأنف على ما يصل إلى 4 لتر / دقيقة، لتحقيق تكبدتها الشركة> 90٪ 1.
- المشغل يتحقق القصبات، وهذا يشمل ضمان شفط فعالة بواسطة الشفط ملحي معقم.
- ويتحقق تخدير موضعي مع يدوكائين في الممرات الأنفية (باستخدام Instillagel 1) والغشاء المخاطي للفم (باستخدام الزيلوكائين)
- إذا التخدير المناسب والموضوع المطلوب، تدار عن طريق الوريد ميدازولام 1. وكيل عكس المناسب (فلومازينيل) تتوفر على الفور.
- وينبغي أن تكون متاحة بسهولة 1،10 أجهزة الإنعاش.
3. يتم إدخال منظار القصبات وضعه
- التنبيب هو عادة عن طريق الأنف. إذا لم يكن ذلك ممكنا بسبب الزوائد الأنفية، التهاب القرائن، أو أي إزعاج ثم يتم مدخل أنبوب الموضوع عن طريق الفم (يتم استخدام الفم لمنع الحرسالأضرار التي لحقت نطاق أو أسنان الشخص المعني).
- التخدير الموضعي يتم الانتهاء في الحنجرة باستخدام 4٪ ليدوكائين، وعادة ما تستخدم ما مجموعه 4-6 مل. عادة هذا يسبب السعال على تقطير.
- يتم تمرير الحبال الصوتية، وكذلك التخدير المخاطية باستخدام 2 مل aliquots من 2٪ ليدوكائين في كارينا، في تقسيم الحق الفص السفلي (RLL) والفص الأوسط الحق (RML) وعند مدخل RML.
- يتم وضع القصبات داخل RML، في موقع مثالي في الجزء الأنسي، في وضع تكون فيه القاصي بما يكفي لتكون في وضع آمن ولكن ليس البعيدة جدا بحيث ينهار مجرى الهواء عندما يتم تطبيق الشفط ('اختبار غمزة' باستخدام زر شفط ).
- يشار المواقع جيدة أثناء الاختبار غمز من قبل القصبات التي لا يمكن الحفاظ عليه بشكل كامل في الموقف من bronchoscopist والهوائية التي لا تغلق تماما على الفور شفط لطيف.
4. يتم تنفيذ BAL
- أربعة 60 مل الحقن هي ما قبلمليئة حرارة محلول ملحي - 60 مل، 50 مل، 50 مل، 40 مل في والحقن المتتالية. عندما يكون الموضوع وbronchoscopist مستعدون وتغرس الحقنة الأولى من المياه المالحة من قبل مساعد القصبات في حين يحافظ على bronchoscopist الموقف في RML.
- ثم يتم تنفيذ طيف اليد شفط من قبل مساعد باستخدام نفس المنفذ و 50 مل حقنة.
- ثم يتم تكرار هذا الإجراء لمزيد من 3X، مع حجم أقصى من 200 مل المستخدمة في تقنية محددة لدينا.
- وطرد السوائل BAL استرجاع بلطف في حاويات وصفت عقدت بالفعل على ذوبان الجليد. يمكن presiliconized العبوات الزجاجية من أجل كبح مرفق الخلية وتعظيم العائد الخلية.
- يظهر السائل BAL ضبابي ضد الضوء مع فقاعات الصابون سطح شكلتها السطحي.
- يتم سحب ببطء تماما القصبات.
- ويتم نقل السائل BAL دون تأخير على الجليد لمعالجته فورا.
5. موضوع الاسترداد
6. يتم عزل الخلايا في المختبر - نفذ على ذوبان الجليد حيثما أمكن
- يتم تسجيل حجم السائل BAL وتصفيتها من خلال طبقة مزدوجة من الشاش المعقم المسحةلإزالة المخاط المقابس في prechilled، أنابيب معقمة 50 مل الطرد المركزي.
- ومكعبات الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 500 x ج في 4 درجات مئوية لمدة 5-10 دقيقة، وغسلها من قبل vortexing في 50 مل محلول ملحي بارد. ويتكرر الطرد المركزي مرة واحدة.
- ومعلق الخلايا في مستنبت (RPMI-1640 + 10٪ مصل بقري جنيني + 2 مم L-الجلوتامين البنسلين + [40 وحدة دولية / مل]، الستربتوميسين [75 وحدة دولية / مل]، والأمفوتريسين B [0.5 وحدة دولية / مل]) و العد التفريقي تنفيذها باستخدام حجم مساو من التريبان الأزرق وعدادة الكريات.
- تعليق الخلية هو تطبيع للكثافة المطلوبة (التي نستخدمها 1 × 10 6 خلية / مل)، قدم من قبل pipetting في لوحات زراعة الأنسجة المناسبة، وحضنت في 37 درجة مئوية لمدة 3 ساعة للسماح بلعم الالتزام. 1 مل من هذا التعليق الخلية لكل بئر غير مناسبة لوحات الثقافة 24 أيضا.
- للعمل اللمفاويات، وبعد 3 ساعة من الحضانة، وpipetted مستنبت بلطف صعودا ونزولا 3X، والتي تم جمعها. هذه الوسيلة يحتوي على الخلايا الليمفاويةوالضامة غير ملتصق، ويمكن استخدامه لتقييم وظيفة الخلايا اللمفاوية، بل يمكن أيضا أن تستخدم في تنقية الخطوات على سبيل المثال مع CD14 حبات مغناطيسية لإزالة الضامة.
- للعمل البلاعم، وبعد 3 ساعة من الحضانة، يتم إزالة المتوسطة بعناية مع الحد الأدنى من pipetting لواستبدالها مع الطازجة والمتوسطة الحارة دون المضادات الحيوية (1640 RPMI + 10٪ مصل بقري جنيني + 2 مم L-الجلوتامين). الضامة هي ملتصقة إلى لوحة زراعة الأنسجة (انظر الشكل 1).
Representative Results
النتائج السريرية الجيدة هي حجم BAL من أكثر من 100 مل وموضوع الذي شهد على الأكثر، وعدم الراحة طفيفة (انظر الجدول 1). هذا يتطلب الموضوع استرخاء والتعاونية. يجب أن يكون الطبيب واثق، على استعداد تام (المواد)، والتفاهم تجاه المتطوعين.
وقد وصفت التباين بين وداخل الموضوع في العائد الخلوية (بما في ذلك التهم التفاضلي). عدد الخلايا التفاضلية من الاشخاص الاصحاء وعادة ما تكون> 90٪ الضامة مع أعداد صغيرة من العدلات (<2٪) والخلايا اللمفية (5-10٪). الخلايا BAL طرد على الشرائح المجهر ويمكن ملطخة وصمة عار النووية التفاضلية للحصول على هذه المعلومات (الشكل 1). في الشكل 1، وقد تم إصلاح الخلايا BAL والملون باستخدام Hemacolor تلطيخ وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. ينبغي أن يحسب لا يقل عن 300 الخلايا للحصول على نتائج يمكن الاعتماد عليها لالضامة،العدلات واللمفاويات؛ 500 الخلايا لأنواع الخلايا نادرة.
| خطر | خطر | انخفاض في هذا البروتوكول من قبل: |
| تأثير القصبات وBAL 1، 14 | ||
| انزعاج خفيف | <25٪ 14، # | تسكين المناسبة والتخدير. نهج ثقة ورعاية لهذا الموضوع. |
| رعاف | <1٪ # | ضغط خفيف للالتنبيب الأنفي فقط. إذا الانزعاج الموضوع أو الفتحة ضاقت - التنبيب عن طريق الفم بدلا من ذلك. |
| نزف داخل القصبة (نفث الدم) | <0.1٪ * 15 | لا الخزعات اتخاذها. التحكم الدقيق أثناء تنظير القصبات - تجنب الغشاء المخاطي في الجهاز التنفسي. |
| Nausعصام والقيء والالتهاب الرئوي الطموح | <0.02٪ 14، # | الصيام عن الطعام الصلبة> 4 ساعة preprocedure 1. التخدير الموضعي كافية. موقف مستلق جزئيا خلال الإجراء. دقيق الملاحظة بعد العملية. |
| حمى | 0.01 14-1٪ # 16 | يتصل التهاب، وربما التقليل من جمع القصوى من BAL. الفص واحد فقط BAL # |
| التهاب الأنف / الحنجرة وبحة في الصوت | <25٪ 14، # | التخدير الموضعي كاف من الأنف والحلق والحنجرة (التقليل من السعال). |
| عدوى | <0.1٪ في فيروس نقص المناعة البشرية السلبية، 1٪ في فيروس نقص المناعة البشرية إيجابية 14، # | الإجراء غسل القصبات القياسية 1. الفص واحد فقط BAL # التعرف المبكر للعدوى: الفحص السريري في حدود 1 ساعة والاتصال السريرية د بعد 1-5 أيام القصبات. |
| ألم في الصدر / السعال | <0.2٪ 14، # | الفص واحد بال فقط. جمع القصوى BAL # |
| آثار المخدرات: يدوكائين، ميدازولام | ||
| عدم انتظام ضربات القلب | نادرة جدا * | الحد الأقصى من 5 ملغ / كغ 14 يدوكائين المستخدمة. تحسنت ملحي عادي تغرس # التأكسج النبض (تكبدتها الشركة> 90٪ مع التزويد بالأكسجين)، ورصد القلب على مدار الإجراء. خصم البنزوديازيبين (فلومازينيل) متاحة على الفور. |
| توهان / التحريض | <0.1٪ † # | |
| الاكتئاب في الجهاز التنفسي وأمراض القلب | نادرة جدا * | |
* ليس من ذوي الخبرة في مجموعتنا في أكثر من 1،500 إجراءات البحث.
† Idiosyncratic بدلا من رد الفعل تعتمد على الجرعة.
# خبرة مجموعتنا في أكثر من 1،500 إجراءات البحث.
الجدول 1. المخاطر المرتبطة بال للبحوث. ويشمل هذا الخطر أو خطر وكيف يتم تقليل هذا باستخدام التقنية المذكورة. وشملت آثار القصبات / BAL وكذلك آثار أي عقاقير الطبية المستخدمة.
الشكل 1. شريحة المجهر عرض BAL الضامة والعدلات العرضية. وقد تم إصلاح الخلايا BAL في الميثانول وملطخة Hemacolor الحمراء (يوزين Y) والأزرق (الأزرق السماوي B).
Discussion
من أجل تحقيق نتائج جيدة فيما يلي مفيدة:
- anesthetisation جيدة عند قاعدة اللسان والبلعوم الخلفي. هذا مهم لأنه يحسن التسامح الإجرائية الموضوع والراحة الشاملة.
- إما الأطفال (القطر الخارجي 3،4-3،6 مم) أو منظار القصبات الكبار (القطر الخارجي 4،8-5،9 مم) يمكن استخدامها.
- إذا كان هناك أي إزعاج أثناء التنبيب الأنفي، ويفضل التنبيب عن طريق الفم. بشكل عام التنبيب الأنفي إما مباشرة أو تقنية ينبغي التخلي عنها.
- بعد تقطير الأولي ليدوكائين إلى البلعوم، وهذا الموضوع قد تفضل القصبات الى سحب انتظار بداية التخدير، وخاصة إذا تم إدخال منظار القصبات شفويا.
- ضمان مملوءة مسبقا لا يقل عن 10 × 10 مل المحاقن مع فقط 2-4 مل من الليدوكائين. الهواء ينبغي أن يترك في المحاقن السماح تحسين إيصال التخدير مباشرة على الحبال والمخاطي داخل القصبةسا.
- منذ السعال أثناء الإجراء يقلل بشكل ملحوظ BAL العائد، واستخدام المياه المالحة تحسنت وجود التخدير المخاطية الجيدة هي مهمة للحد من هذا.
- يجب مملوءة مسبقا 50 مل الحقن بمحلول ملحي تحسنت. ومن الشائع للمل 50 الأولى من ملحي عادي غرست لانتاج بين 10-20 مل بسبب فقدان الفضاء القتلى والباقي على التوالي في الشعب الهوائية الطرفية. مأخوذة مزيد من إرجاع نسبة أكبر من السوائل.
- يجب على المشغل دائما التحقق من القصبات قبل التنبيب، بما في ذلك ضمان شفط فعالة بواسطة الشفط ملحي معقم. فقدان شفط يمكن أن يحدث عادة بسبب مجعد من الأنبوب أو التسريبات حول اتصالات مع القصبات أو جهاز الشفط.
- خلال شفط دليل، من الناحية المثالية مجرى الهواء يجب أن لا تنهار. إذا شفط انهيارات متكررة في مجرى الهواء، وتخفض عوائد BAL إلى آلية صمام، والتهاب المحلية والنزيف أكثر احتمالا: وهذا بدوره يجعل الهوائية مخام العصبي والسعال أكثر احتمالا. وبالتالي اختيار أنسب فرع subsegmental RML واستخدام الضغوط شفط منخفض كلاهما مهم.
- عندما يستنشق الهواء باستمرار إعادة فحص الاتصال من المحقنة إلى القصبات، وكذلك الموقف من منظار القصبات الهوائية في القاصية. إذا هذه مشكلة متكررة، بعد العملية ضمان عدم وجود ثقوب في القصبات نفسها.
- BAL من المدخنين غالبا ما يكون أغمق بسبب وجود الجسيمات داخل الخلايا. المدخنون قد تحمل القصبات أقل بشكل جيد، ولها زيادة السعال.
- والأفضل BAL حجم العائد> 100 مل. A العائد من> 150 مل ممتاز. نحن لم تشهد أي عوائد> 170 مل. ليس هناك علاقة خطية بين العائد الخلية وBAL حجم الغلة.
- غلة <100 مل هي، في تجربتنا، من المرجح أن يؤدي إلى آثار جانبية مثل السعال، ألم الصدر والحمى. ونحن ننصح أن الموضوعات مع غلة <100 مل يكون ريكوفيرد في الموقف الجانبي الأيسر، وهذا قد يساعد تصريف أي سوائل الرئة المتبقية.
- وينبغي بذل اتصال السريرية مع هذا الموضوع في غضون 1-5 أيام لضمان عدم وجود آثار جانبية.
- ويستخدم التخدير ميدازولام ل<50٪ من الموضوعات في المملكة المتحدة و<5٪ في ملاوي. لا تظهر ميدازولام لتحسين التحمل مباشرة، وبعض مشغلي يشعرون بأن التخدير قد يكون في بعض الأحيان إلى نتائج عكسية في الحفاظ على متماسكة (ومطمئنة) الحوار مع هذا الموضوع.
- في تجربتنا، هناك منحنى التعلم كبيرة مع هذه التقنية. على سبيل المثال التنسيق بين الطبيب والممرضة يستغرق وقتا طويلا وغالبا ما تكون أقل العوائد في بداية عملية التعلم.
- في مواضيع بفيروس نقص المناعة البشرية، ونحن نستخدم المضادات الحيوية بشكل وقائي prebronchoscopy.
Disclosures
ويتم تمويل أندريا M. كولينز من قبل مؤسسة بيل وميليندا غيتس، وليس المصالح المتعارضة المحتملة. وقالت انها تلقت أموالا من شركة ميرك (MSD) وGSK لحضور المؤتمرات والرسوم المحاضرة. 50 بالز البحوث يؤديها بشكل مستقل.
ويتم تمويل جيمي Rylance من قبل ويلكوم ترست، وليس له أي تضارب في المصالح. وقد حصل على أي أموال أخرى. 70 بالز البحوث يؤديها بشكل مستقل.
ويتم تمويل دانيال G. تون من قبل دكتوراه زمالة NIHR، وليس له أي تضارب في المصالح. 40 بالز البحوث يؤديها بشكل مستقل.
أنجيلا رايت D. لا يوجد لديه مصالح متضاربة المحتملة. ساعد مع أكثر من 100 بالز البحوث.
آدم KA رايت لا يوجد لديه مصالح متضاربة المحتملة. عالجت انه أكثر من 50 عينات BAL.
دنكان G. فولرتون
ستيفن جوردون B. لا يوجد لديه مصالح متضاربة المحتملة. وقد حصل على أموال من شركة ميرك (MSD) ونوفارتيس لحضور المؤتمرات. 400 بالز البحوث يؤديها بشكل مستقل.
Acknowledgments
شكرا لكم لايلينا Mitsi (مساعد للبحوث) والأب كارول هانكوك (ممرضة للبحوث) وموظفي المسرح لمساهمتهم في التصوير، وديفيد شو (ممرضة البحوث) لدعمه مع bronchoscopies أبحاثنا. وذلك بفضل المتطوعين لدينا أيضا ريبيكا دنفي لسماحها هذا الإجراء ليتم تصويره.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
Fiberoptic bronchoscope, light, and suction source |
unspecified | ||
| Surgical gown, sterile gloves |
unspecified | ||
| Sphygnomanometer |
unspecified | For continuous patient monitoring |
|
| Pulse oximeter |
unspecified | For continuous patient monitoring |
|
3-lead ECG monitor |
unspecified | For continuous patient monitoring |
|
Nasal oxygen delivery 2-4 L/min |
unspecified | ||
| Lidocaine 10% spray (Xylocaine) |
AstraZeneca | For topical anesthesia |
|
| Lidocaine hydrochloride 2% |
unspecified | For topical anesthesia |
|
| Lidocaine gel (Instillagel) |
Farco-Pharma, Germany | Alternative products available from other suppliers |
|
Normal saline, sterile, 200 ml |
unspecified | Warm to 30 °C |
|
10 ml taper-end syringe (x10) |
unspecified | For administration of lidocaine |
|
Intravenous cannula 18 G |
unspecified | For administration of midazolam |
|
| Midazolam |
unspecified | For sedation |
|
| Flumazenil |
unspecified | Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only) |
|
60 ml taper-end syringes (x4) |
unspecified | For normal saline injection and BAL fluid withdrawal. May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope. |
|
| Sterile gauze swab |
Vernaid, UK | Alternative products available from other suppliers |
|
| Sterile container for BAL fluid |
See text and comments | Siliconized glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50 ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200 ml) |
|
| Sigmacote |
Sigma, UK | SL2 |
Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS |
| Centrifuge |
unspecified | At least 4 x 50 ml tube capacity. Refrigeration to 4 °C preferred. |
|
| Shandon Cytospin centrifuge |
Thermo Scientific, UK | For differential count only |
|
| RPMI 1640 medium with L-glutamine |
Sigma, UK | R8758 |
Alternative products available from other suppliers |
| Fetal bovine serum |
Sigma, UK | F6178 |
Alternative products available from other suppliers |
| Penicillin-Streptomycin |
Sigma, UK | P4333 |
Alternative products available from other suppliers |
| Amphotericin B |
Sigma, UK | A2942 |
Alternative products available from other suppliers |
| Tissue culture plates |
Greiner Bio-One, UK | 662160 |
Alternative products available from other suppliers |
| Glass microscope slides |
unspecified | For differential count only |
|
| Shandon cytofunnel |
Thermo Scientific, UK | A78710003 |
For differential count only |
| Shandon cytoclip |
Thermo Scientific, UK | 59910052 |
For differential count only |
| Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents) |
Merck, Germany | 111661 |
Use according to manufacturer’s instructions |
References
- BTS, The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society. Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).
- Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group. Eur. Respir. , 561-585 (1989).
- Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins. Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).
- Gordon, S. B., et al. Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults. J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).
- Fullerton, D. G., et al. Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load. Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).
- Jambo, K. C., et al. Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults. Thorax. 66, 375-382 (2011).
- Eagan, R., et al. Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci. Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).
- Rose, A. S., Knox, K. S. Bronchoalveolar lavage as a research tool. Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).
- Wright, A. K. A., et al. Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage. PLoS Pathog. , (2012).
- Bolliger, C. T., et al. ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society. Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).
- Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability. Chest. 94, 275-280 (1988).
- Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability. Chest. 94, 281-285 (1988).
- De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted. Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).
- Mtunthama, N., et al. Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare. J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).
- Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy. Chest. 73, 813-816 (1978).
- Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage. Chest. 129, 1565-1569 (2006).
- Gritzfeld, J. F., et al. Experimental Human Pneumococcal Carriage. J. Vis. Exp. (72), (2013).
