Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

寡肽测定气相酸性

Published: June 24, 2013 doi: 10.3791/4348
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Department of Chemistry, University of the Pacific

Summary

含半胱氨酸的寡肽的气相酸度的测定进行说明。使用三重四极杆质谱仪进行实验。肽的相对酸度均采用碰撞诱导解离实验，，使用扩展厨师动力学方法确定定量酸度。

Abstract

位于折叠的蛋白质在不同位置的氨基酸残基往往表现出不同程度的酸度。例如，一个位于或靠近螺旋的N-末端的半胱氨酸残基通常是酸性比在或接近C-末端1-6。虽然大量的实验研究已经进行了简明的阶段，尤其是在水溶液中6-8酸碱性肽，其结果往往是复杂的由溶剂效应7。事实上，大多数的蛋白质的活性部位位于附近的内陆地区溶剂效应已降到9,10。为了理解内在的多肽和蛋白质的酸碱性，重要的是在无溶剂的环境中进行研究。

我们提出了一种方法来测量气相中的寡肽的酸度。我们使用一个含有半胱氨酸的寡肽，丙氨酸3 CysNH 2（3 CH）为模型化合物。测量是基于完善的扩展厨师动力学方法（ 图1）11-16。实验进行了使用三重四极杆质谱电喷雾电离（ESI）离子源（ 图2）连接。对于每种肽的样品中，选择了几个参考羧酸。参考酸的有机化合物在结构上类似于已知的气相酸度。的肽和一个参考酸的混合物的溶液被引入到质谱仪，气相质子结合形成肽参考羧酸阴离子簇。质量分离的质子结合的集群，并随后分散，通过碰撞诱导解离（CID）的实验。使用的酸度和簇离子解离动力学之间的关系，由此产生的碎片离子的丰度分析。然后±1的肽的气相酸度定义线性回归的热动力学地块17,18。

该方法可以应用到各种分子的系统，包括有机化合物，氨基酸及其衍生物，寡核苷酸，寡肽。通过比较，实验测量与计算出的值不同的构象气相酸度，酸度的构象的影响进行评估。

Introduction

的氨基酸残基的酸度是最重要的热化学性能的影响的结构，反应性，展开折叠的蛋白质的过程9,19。个别氨基酸残基往往表现出不同的有效的酸度，这取决于他们的位置的蛋白质。特别是，位于活性位点的残基常常表现出明显扰动酸度。这样的一个例子是驻留在的硫氧还蛋白超家族中的酶20,21的活性部位的半胱氨酸残基。活性位点的半胱氨酸是不寻常的酸性相比那些在折叠蛋白3-5。曾有人建议，螺旋构象的不寻常的酸度可以具有显着的贡献。有酸碱性肽开展的解决方案，尤其是在水溶液中2,6-8广泛的实验研究。结果往往是复杂的溶剂效应7。事实上，大多数蛋白质的活性位点位于附近的内部区域，在溶剂的影响降到最小9,10。

为了理解内在的多肽和蛋白质的酸碱性，重要的是在无溶剂的环境中进行的研究。在这里，我们介绍一种基于质谱法测定气相酸性。这种方法被称为扩展厨师动力学方法。该方法已成功地应用到了广泛的化学系统的各种热化学性质的测定，如气相酸度，质子亲合力的金属离子亲和，电子亲和势和电离能11-15， 22-26。我们已采用此方法来确定一系列的半胱氨酸聚丙氨酸和半胱氨酸聚甘氨酸寡肽17,18,27气相酸度。这些研究表明，肽链的N-末端半胱氨酸上课是明显比相应的C-末端的酸性。硫醇盐阴离子与螺旋宏观偶极相互作用强烈稳定的螺旋构象的影响很可能是由于前者的高酸度。由于非易失性的，热不稳定的肽的性质，动力学法是最实用的方法，可在目前产生合理的准确酸碱热化学量的肽28。

图1中所示的总体方案和动力学的方法与方程。测定的气相酸性肽（AH）开始，形成了一系列的质子结合簇阴离子[A•H•A I]¯（或[A¯•H•A I¯] ¯），质谱仪的离子源中的区域，其中，A¯A I¯的去质子化形式的肽，并参考氨基酸。参考的酸是已知的气相酸性的有机化合物。参考酸应该有彼此相似的（但不一定是类似的肽）的结构。参考酸的结构之间的相似性，可确保它们之间的去质子化的熵的相似性。质子结合集群 阴离子质量选择和碰撞激活，随后解离的碰撞诱导解离（CID）的实验，得到相应的单体阴离子，甲¯A I¯，与速率常数k和k分别， 如图1a所示。如果二次碎裂是可以忽略不计，CID碎片离子丰度比，[¯] / [A I¯]，代表的速率常数，K / K I的比例大致衡量。根据假设，有没有反向的激活两个解离通道分支比的CID产物离子的离子屏障，LN [甲¯] / [A I¯]个，将线性相关的肽的气相酸性（Δ 酸 H）和那些参考羧酸（Δ 酸 H 一）， 如图1b所示。在此公式中，Δ 酸 H avg为平均参考酸的气相酸性，Δ（ΔS）是熵的项（可假定为恒定的，如果参考酸的结构彼此相似的），R是通用气体常数，T 效率是有效的系统的温度。实际温度是一个经验参数，取决于几个实验变量，包括将碰撞能量。

气相酸度的值确定通过构建两套热动力学的重复。第一组为OB禀通过绘制LN（¯] / [A I¯]）对H I - ΔΔ 酸酸 H 平均 ， 如图4a所示。线性回归将产生一组直线的斜坡X = 1 / RT eff和拦截的Y = - [ - ΔΔ 酸 H 酸 H AVG] / RT 副作用 - Δ（ΔS）/ R。第二组重复，得到作图得到的截获（Y）对相应的道的来自第一组（X）， 如图4b所示。线性回归产生一个新行的坡度Δ 酸 H - 酸 H平均 ΔΔ（ΔS）/ R，截距。 Δ 酸 H的值，然后从斜率获得和熵项，Δ（ΔS），是从拦截。

实验是使用三重四极杆质谱仪电喷雾电离（ESI）离子源接口。质谱仪的示意图如图2所示。的CID的实验进行质量选择与第一级四极杆单元的簇阴离子的质子结合，并允许他们接受泄漏到大约0.5毫乇的压力下被保持在碰撞室的氩原子的碰撞。分解产物离子质量分析的第三个四极杆单元。 CID谱记录m / z范围广泛，足以涵盖所有可能的二次片段在一些碰撞能量。的CID的产品的离子强度的测量仪器通过设置在选择反应监测（SRM）模式，在该模式下，扫描集中在选定的产物离子。的CID的实验是在四个不同的碰撞能量进行，对应于中心的质量分别为1.0，1.5，2.0，和2.5 eV的能量（E 厘米 ）。质量中心的能量计算公式：E 厘米（cm）= E 实验室 [M /（M +）]， 其中E 实验室是在实验室帧的碰撞能量，m是氩气的质量，M是的质子结合的簇离子的质量。

在这篇文章中，我们使用了寡肽阿拉3 CysNH 2（3 CH）为模型化合物。的C-末端是酰胺化的，将是酸性位的半胱氨酸残基的硫醇基（SH）。为成功地进行测量的气相酸度的合适的参考酸的选择是至关重要的。理想的参考氨基酸结构相似的（互相）拥有良好的气相酸度值的有机化合物。参考酸的酸度值接近的肽。 ，六肽A 3 CH卤化carboxyliÇ酸的选择作为参考的酸。的的六个参考羧酸MCAH氯乙酸，溴乙酸（Mbah的），二氟乙酸（DFAH），二氯乙酸（DCAH），二溴乙酸（DBAH），三氟乙酸（TFAH）。他们两个，DFAH和Mbah的，将被用来说明协议。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1。样品溶液的制备

  1. 首先准备的肽储备液，使用在体积比为1:1的甲醇和水的混合溶剂的6个参考羧酸。原液的浓度为约10 -3 M。
  2. 称取1毫克的固体肽样品，A 3的CH，在1.5毫升的Eppendorf管中，并加入1.0毫升的甲醇和水的混合溶剂中，并混合使用涡流。
  3. 称取1毫克二氟乙酸（DFAH）的，并加入1.0毫升的甲醇和水的混合溶剂中，并混合使用涡流。
  4. 使用相同的步骤，使股票的解决方案等五大参考酸氯乙酸（MCAH），溴乙酸（巴莫特），二氯乙酸（DCAH），二溴乙酸（DBAH），三氟乙酸（TFAH）。
  5. 绘制肽原液约50微升至1.5 ml Eppendorf管中，并绘制成一个约50微升原液DFAH我Eppendorf管。稀的混合溶液与900微升甲醇和水的混合溶剂中，以达到终浓度为10 -4 M左右此稀释液将被用于质谱法测量作为样品溶液。参考羧酸以及样品溶液的最终浓度的肽的实际比率将被调整的基础上的离子质谱仪中观察到的信号丰度。
  6. 使用相同的步骤来准备样品溶液中的肽与其他五个参考酸。

2。质谱测量1：质子结合团簇离子形成

  1. 质谱法测量的第一个步骤是，以产生稳定的质子结合簇离子与基准酸的肽。
  2. 本设备设置为负离子MS模式与ESI针头电压为-4.5 kV，毛细管电压在约-35 V，和干燥气体的温度保持在150℃。将Q1峰宽和Q3峰宽刻度尺（峰宽仪器参数，可以用来调整分辨率的山峰。“刻度”设置允许显示窄峰的峰的分离度更好）。毛细管电压和干燥气体的温度可以调节，以提高所观察到的离子丰度。
  3. 约0.5毫升的样品溶液肽DFAH的注入到1毫升Hamilton注射器，将注射器连接到ESI针入口使用PEEK（聚醚醚酮）管。然后将注射器的注射泵上。打开注射泵注入样品溶液以10微升/分钟的流量与进入ESI针。
  4. 打开ESI喷针电压激活ESI过程。打开在检测器上。应观察质谱显示器配置文件中的模式。如果显示的是在质心模式，切换到情景模式。观看团簇离子质子结合形成由monitori高峰在M / Z 428。可以通过调整微调仪器的簇离子的信号丰度。其中一个重要的参数是毛细管电压。可以手动改变毛细管电压（通常在-20到-50V的范围内）的峰在m / z 428的丰度最大化。

3。质谱测量2：CID包围实验

  1. 接下来的步骤是，执行CID包围实验。
  2. 一旦集群离子丰度达到所需的值（约100毫伏），仪器切换到MS / MS模式。在这种模式下，Q1的功能作为质量过滤器作为质量分析器分离的团簇离子，Q2充当碰撞室，和Q3功能。
  3. 设置碰撞气体（氩气，在这种情况下），在0.5毫乇的压力，并在17 eV的碰撞能量。应遵守三个峰的质谱显示窗口。在m / z 428的峰值对应的簇离子，[DFA•H•A 3 CS]。在M / Z = 332和m / z 95的两个峰，分别对应（3 CS¯）的去质子化的肽和去质子化的二氟乙酸（DFA¯）。小峰在m / z 298是一个辅助的去质子化的肽片段。 2分钟， 图3a中获取的CID谱。
  4. 执行类似的CID的实验和获取的CID谱Mbah的溴乙酸（）， 图3b中的肽供试品溶液。
  5. 执行类似CID实验，并与其他所有参考氨基酸的肽样品溶液获得的CID谱。将由此产生的CID谱性质上类似于图3a和3b，但将是不同的m / z值和相对峰高。

4。质谱测量3：动力学方法

  1. 最后一步是获得SRM光谱。
  2. 频谱显示切换到质心和仪器设置为选择反应监测（SRM）模式。作为孤立的离 ​​子保持M / Z 428的第一个四极杆（Q1），填写在四个群众（大众荷比）要监视的第三个四极杆（Q3）。的四个群众米/ z为 428（簇离子），M / Z 332（肽离子），M / Z 298（片段的肽离子），和m / z 95（的DFA¯离子）。碰撞气体压力保持在0.5毫乇。
  3. 将碰撞能量设置为11.7电子伏特，5分钟，获得的光谱。
  4. 改变它的碰撞能量为17.6电子伏特，5分钟，获得的光谱。
  5. 变更23.4电子伏特，29.3 eV的碰撞能量，5分钟，获得在两个碰撞能量光谱。
  6. 执行类似测量与所有其他的参考氨基酸肽。

5。数据分析

  1. 复制离子强度从人的价值升SRM光谱到Excel工作表。
  2. CID产品离子分支比计算，LN（[¯] / [A I¯]），测量所有6个质子结合集群在所有四个碰撞能量。样品的值示于表1。
  3. 值绘制的 ln（[¯] / [A I¯]）对I - ΔΔ 酸 H 酸 H 平均的值。这会给四个碰撞能量， 图4a中的数据相对应的4个重复。
  4. 提取的值通过线性回归的四个地块的斜坡和拦截。在这种情况下，斜坡的正面的价值观和截距为负值。给符号“X”的斜坡和符号“Y”型拦截。其结果示于表2。的Y的值乘以-1，用符号Y'表示的正的值（这将允许在y轴上显示玩正值）。请注意，这种转换是可选的，只要使用相应的值，使情节为下一步。
  5. 绘制Y'的值对X， 图4b的值。线性回归的情节产生了一个1.706的斜率和截距-0.536。的斜率对应- ΔΔ 酸 H 酸 H平均 。是已知的值Δ 酸 H平均为330.5千卡/摩尔，这是由该组选定的参考羧酸。然后，从斜率获得的肽的气相酸度的值：Δ 酸 H（CH 3）= 332.2千卡/摩尔。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

  1. 的CID包围实验提供信息相比，选定的参考氨基酸的肽的相对酸度。两个有代表性的与两个参考酸，DFAH和Mbah的肽（A 3 CH），CID谱示于图3。在图3a中的肽离子的离子丰度（峰的高度）是弱于的DFA¯，在图3b中，肽离子的离子丰度是强的MBA¯的。两光谱表明，该肽的气相酸度是在这两个参考酸的酸度之间的范围内。
  2. 气相酸度的肽的定量值，确定从定量CID实验。重复的解离的质子结合的簇的肽与六参考羧酸的热动力学如图4所示。根据热动力学relati重复的线性回归onship之间的气相酸味和CID产物离子的分支比（ 图1b）给出的值的气相酸性肽A 3 CH，这是332.2千卡/摩尔。样品的斜率和截距值在表1和表2所示。

图1
图1。总体方案的扩展厨师动力学方法。一个质子结合团簇离子解离）方案二）气相酸性和离子分支比的CID产品的热动力学关系。在此公式中，Δ 酸 H i是单独的参考酸的气相酸度值，Δ 酸 H avg为一个届满年份气相参考酸的酸度酸 H，Δ，Δ（ΔS）的肽的气相酸度是熵来说，R是通用气体常数，和T EFF的是系统的有效温度。

图2
图2。示意图的三重四极杆质谱仪。ESI电喷雾离子源。 Q1和Q3分别代表第一个和第三个四极杆单元，。执行CID实验后，质子结合的簇离子进行质量选择由Q1，被引导到碰撞室，氩（Ar）与原子碰撞室泄漏到碰撞，产生的碎片离子的分析由Q3。

图3 图3。该 质子结合团簇离子肽有两个参考酸）[DFA•H•A 3 C]¯和b）[MBA•H•A 3 C]¯。光谱绘制相对CID谱对m / z值的离子丰度。

图4
图4。热动力学图六四个碰撞能量收集参考酸肽。一）情节的Y = LN（[¯] / [A I¯]）对X = I - ΔΔ 酸 H 酸 H 平均 B）Y'的情节= [Δ 酸上 H - Δ 酸 H </ EM> AVG / RT EFF - Δ（ΔS）/ R与X = 1 / RT 副作用 。

表1中。 CID产品离子分支比的值，LN（[¯] / [A I¯]），集群离子肽与DFAH和巴莫特。

哈哈我 11.7 EV 17.6 EV 23.4 EV 29.3 EV
MCAH 3.68 3.50 3.39 3.45
巴莫特 2.83 2.65 2.45 2.24
DFAH -0.442 -0.268 -0.0921 0.167
DCAH -2.60 -2.41 -2.22 -2.13
DBAH -2.43 -2.44 -2.49 -2.60
TFAH -5.41 -5.02 -4.71 -4.44
表2中。道的值（X）和（Y），从而从所述第一组的热动力学曲线的线性回归的截距。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

成功的肽的气相酸度测量在很大程度上依赖于选择合适的参考羧酸。理想的参考氨基酸结构相似的有机物，拥有良好的气相酸度值。参考酸彼此具有相似的结构。这将确保对于集合中的每个参考酸脱质子化作用类似的熵。参考酸的酸度值接近的肽。对于较短的寡肽的酰胺化的C-末端含有半胱氨酸的卤代羧酸是合适的参考羧酸的。 CID实验走向成功的一个关键步骤是高丰度稳定团簇离子与质子结合形成的。调整参考酸，样品溶液的浓度，和仪器条件（如针的电压，干燥的肽的比例，可以在很大程度上提高了的稳定性和丰富气体的温度，毛细管电压）。一个关键的仪器条件是毛细管电压（或一些其他类型的仪器）的锥孔电压。需要注意的是要避免使用过于集中的样品溶液。

所描述的方法并不限于寡肽。该方法可以适用于各种各样的分子系统，包括极性有机化合物，氨基酸和它们的衍生物，有机金属化合物，寡核苷酸，肽模仿聚合物。实验除了使用三重四极杆质谱仪，也可以进行使用离子阱和Q-TOF质谱仪。

本实验中使用的肽是在我们的实验室合成的，使用的是标准的固相肽合成方法29-31。 Rink酰胺树脂，作为固相载体上，得到的C-末端酰胺。厨师的动力学方法的优点是，在t细微杂质肽样品的酸度不影响测量，只要杂质不具有相同的作为参考酸的肽或群众。

可耦合实验测量与计算的研究，研究的酸度的构象的影响。计算研究提供了符合他们的计算酸度肽的构象的预测。通过比较计算出的值与实验测量的酸度的肽的构象进行评估。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

没有透露。

Acknowledgments

Materials

ê 碰撞 ，EV

X

1 / RT 副作用的

Ÿ

- [（Δ 酸 H - 平均 Δ 酸 H）/ RT EFF - Δ（ΔS）/ R]

11.7 0.744 -0.728
17.6 0.700 -0.665
23.4 0.665 -0.611
29.3 0.645 -0.553
Name Company Catalog Number Comments
Mass Spectrometer Varian 1200 L and 320 L
Chloroacetic acid Sigma-Aldrich 402923
Bromoacetic acid Sigma-Aldrich B56307
Difluoroacetic acid Sigma-Aldrich 142859
Dichloroacetic acid Sigma-Aldrich D54702
Dibromoacetic acid Sigma-Aldrich 242357
Trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich T6508

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Forsyth, W. R., Antosiewicz, J. M., Robertson, A. D. Empirical relationships between protein structure and carboxyl pKa values in proteins. Proteins: Struct. Funct. Genet. 48 (2), 388-403 (2002).
  2. Huyghues-Despointes, B. M. P., Scholtz, J. M., Baldwin, R. L. Effect of a single aspartate on helix stability at different positions in a neutral alanine-based peptide. Protein Sci. 2 (10), 1604-1611 (1993).
  3. Takahashi, N., Creighton, T. E. On the Reactivity and Ionization of the Active Site Cysteine Residues of Escherichia coli Thioredoxin. Biochemistry. 35 (25), 8342-8353 (1996).
  4. Gan, Z. R., Sardana, M. K., Jacobs, J. W., Polokoff, M. A. Yeast thioltransferase - the active site cysteines display differential reactivity. Archives of Biochemistry and Biophysics. 282 (1), 110-115 (1990).
  5. Philipps, B., Glockshuber, R. Randomization of the Entire Active-site Helix alpha 1 of the Thiol-disulfide Oxidoreductase DsbA from Escherichia coli. J. Biol. Chem. 277 (45), 43050-43057 (2002).
  6. Joshi, H. V., Meier, M. S. The effect of a peptide helix macrodipole on the pKa of an Asp side chain carboxylate. J. Am. Chem. Soc. 118, 12038-12044 (1996).
  7. Kortemme, T., Creighton, T. E. Ionization of cysteine residues at the termini of model α-helical peptides. Relevance to unusual thiol pKa values in proteins of the thioredoxin family. J. Mol. Biol. 253 (5), 799-812 (1995).
  8. Gallo, E. A., Gellman, S. H. Effect of a C-Terminal Cationic Group on the Competition between α-Helical Turn and β-Turn in a Model Depsipeptide. J. Am. Chem. Soc. 116 (25), 11560-11561 (1994).
  9. Honig, B., Nicholls, A. Classical electrostatics in biology and chemistry. Science. 268 (5214), 1144-1149 (1995).
  10. Warshel, A. Electrostatic basis of structure-function correlation in proteins. Acc. Chem. Res. 14 (9), 284-290 (1981).
  11. Cooks, R. G., Patrick, J. S., Kotiaho, T., McLuckey, S. A. Thermochemical determinations by the kinetic method. Mass Spectrom. Rev. 13 (4), 287-339 (1994).
  12. Cooks, R. G., Koskinen, J. T., Thomas, P. D. The kinetic method of making thermochemical determinations. J. Mass Spectrom. 34 (2), 85-92 (1999).
  13. Cheng, X., Wu, Z., Fenselau, C. Collision Energy Dependence of Proton-Bound Dimer Dissociation: Entropy Effects, Proton Affinities, and Intramolecular Hydrogen-Bonding in Protonated Peptides. J. Am. Chem. Soc. 115 (11), 4844-4848 (1993).
  14. Cerda, B. A., Wesdemiotis, C. Li+, Na+, and K+ Binding to the DNA and RNA Nucleobases. Bond Energies and Attachment Sites from the Dissociation of Metal Ion-Bound Heterodimers. J. Am. Chem. Soc. 118 (47), 11884-11892 (1996).
  15. Cooks, R. G., Wong, P. S. H. Kinetic Method of Making Thermochemical Determinations: Advances and Applications. Acc. Chem. Res. 31 (7), 379-386 (1998).
  16. Armentrout, P. B. Entropy Measurements and the Kinetic Method: a Statistically Meaningful Approach. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 11 (5), 371-379 (2000).
  17. Ren, J., Tan, J. P., Harper, R. T. Gas-Phase Acidities of Cysteine-Polyalanine Peptides I: A3,4CSH and HSCA3,4. J. Phys. Chem. A. 113 (41), 10903-10912 (2009).
  18. Morishetti, K. K., Huang, B. D. S., Yates, J. M., Ren, J. Gas-Phase Acidities of Cysteine-Polyglycine Peptides: The Effect of the Cysteine Position. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 21 (4), 603-614 (2010).
  19. Fersht, A. Structure and mechanism in protein science. , W.H. Freeman & Co. New York. (1999).
  20. Martin, J. L. Thioredoxin-a fold for all reasons. Structure. 3 (3), 245-250 (1995).
  21. Carvalho, A. P., Fernandes, P. A., Ramos, M. J. Similarities and Differences in the Thioredoxin Superfamily. Progress in Biophysics & Molecular Biology. 91 (3), 229-248 (2006).
  22. Bouchoux, G., Sablier, M., Berruyer-Penaud, F. Obtaining Thermochemical Data by the Extended Kinetic Method. J. Mass Spectrom. 39 (9), 986-997 (2004).
  23. Bouchoux, G., Desaphy, S., Bourcier, S., Malosse, C., Bimbong, R. N. B. Gas-Phase Protonation Thermochemistry of Arginine. J. Phys. Chem. B. 112 (11), 3410-3419 (2008).
  24. Bouchoux, G., Bimbong, R. N. B., Nacer, F. Gas-Phase Protonation Thermochemistry of Glutamic Acid. J. Phys. Chem. A. 113 (24), 6666-6676 (2009).
  25. Zheng, X., Cooks, R. G. Thermochemical Determinations by the Kinetic Method with Direct Entropy Correction. J. Phys. Chem. A. 106 (42), 9939-9946 (2002).
  26. Jones, C. M., Bernier, M., Carson, E., Colyer, K. E., Metz, R., Pawlow, A., Wischow, E. D., Webb, I., Andriole, E. J., Poutsma, J. C. Gas-phase acidities of the 20 protein amino acids. Int. J. Mass Spectrom. 267 (1-3), 54-62 (2007).
  27. Tan, J. P., Ren, J. Determination of the Gas-Phase Acidities of Cysteine-Polyalanine Peptides Using the Extended Kinetic Method. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 18 (2), 188-194 (2007).
  28. Harrison, A. G. The gas-phase basicities and proton affinities of amino acids and peptides. Mass Spectrom. Rev. 16 (4), 201-217 (1997).
  29. Peptides: Synthesis, Structures, and Applications. Gutte, B. , (1995).
  30. Barany, G., Merrifield, R. B. Solid-phase peptide synthesis. The Peptides. 2, Academic Press. New York. 1-284 (1979).
  31. Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. Chan, W. C., White, P. D. , (2000).

Tags

化学，第76期，生物化学，分子生物学，酸度，动力学方法，碰撞诱导解离，三重四极杆质谱，寡肽，多肽，质谱，MS
寡肽测定气相酸性
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ren, J., Sawhney, A., Tian, Y.,… More

Ren, J., Sawhney, A., Tian, Y., Padda, B., Batoon, P. Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides. J. Vis. Exp. (76), e4348, doi:10.3791/4348 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter