Summary
Sıçanlarda transplantasyon'a biyomedikal araştırmalar için vazgeçilmez bir deneysel model. Burada% 50 parsiyel greft kullanılarak hepatik arter rekonstrüksiyonu ile ortotopik sıçan karaciğer nakli için cerrahi işlemler sunuyoruz.
Abstract
Bir bütün veya kısmi greft kullanılarak sıçanlarda transplantasyon'a (OKT) graft korunması ve iskemi-reperfüzyon hasarı 1,2, immünolojik yanıtları 3,4, hemodinami 5,6 üzerinde çalışmalar transplantasyon çalışmaları için vazgeçilmez bir deneysel model, ve küçük-için-boyutlu sendromu 7. Sıçan OKT deneysel cerrahide en zor hayvan modelleri arasında yer alıyor ve öğrenmek için uzun bir zaman alabilir gelişmiş mikrocerrahi becerileri gerektirir. Sonuç olarak, bu modelin kullanımı sınırlı kalmıştır. Sonuçların güvenilirlik ve tekrarlanabilirlik gibi karmaşık hayvan modellerinde kullanıldığı deneyler temel bileşenleri olduğu için, bu model için iyi standardize ve sofistike prosedürleri yetiştirilmek üzere sıçan OKT katılan cerrahlar için önemlidir.
İlk model describ beri çeşitli teknikler ve sıçanlarda OKT modifikasyonları 8 bildirilmiştir ikenOnlar büyük ölçüde rekonstrüksiyon prosedürleri basitleştirilmiş çünkü Lee ve ark ed. 1973 yılında 9, hepatik arteriyel rekonstrüksiyon 10 ve Kamada ark manşet anastomoz tekniğinin tanıtılması ortadan kaldırılması. 11, bu modelin önemli bir gelişme idi . Kamada ve diğ. Modelinde, hepatik rearterialization de ortadan kaldırılmıştır. Sıçanlarda karaciğer transplantasyonu sonrasında hepatik arteryel akımı olmadan hayatta olabilir bu yana, hepatik arterleştirilmelerine değeri üzerinde önemli tartışmalara vardı. Bununla birlikte, arterialized modelinin fizyolojik üstünlük giderek özellikle safra kanalı sisteminde 8,12 ve karaciğer 8,13,14 bütünlüğünün korunması açısından kabul edilmiştir.
Bu yazıda, ex vivo karaciğer rezeksiyonu sonrasında% 50 kısmi greft kullanılarak hepatik arter rekonstrüksiyonu ile OKT bir sıçan modeli için detaylı cerrahi işlemler sunuyoruztion. Ve ve hepatik arter stent tekniği; portal ven için bir manşet tekniği; supra-ve infrahepatic vena kava için 7-0 polipropilen devamlı sütür: Her damar ve safra kanalı için rekonstrüksiyon girişimleri aşağıdaki yöntemlerle yapılmaktadır safra kanalı.
Protocol
1. Temel Teknikleri ve Genel Yordamlar
- Tüm prosedürler temiz ama steril olmayan koşullarda yapılmaktadır.
- Sıçan karın açıldıktan sonra, bütün işlemler bir 16x büyütmede bir ameliyat mikroskobu altında gerçekleştirilir. Safra yolları ve hepatik artere stent yerleştirilmesi ve hepatik arter rekonstrüksiyonu, infrahepatic vena kava: İstisnalar 10x hızında gerçekleştirilir ex vivo karaciğer rezeksiyonu, ve aşağıdaki yordamları, 25x yapılmaktadır vardır (IHVC) ve safra kanalı.
- Pamuklu bezler organların yumuşak manipülasyonu, dokuların diseksiyon, hemostaz ve sıkıştırma için kullanılır. Laktatlanmış Ringer çözeltisi ile ıslatılır gazlı bezlerden (5 x 5 cm) karaciğer ya da bağırsaklar ile geri çekmek ve organların nemli tutmak için kullanılır. Satinsky kelepçe sola ya da IHVC etrafında cerrahi alanına genişletmek için sıçanın kuyruk doğru gazlı bez kaplı bağırsak geri çekilmesi için kullanılabilir.
- Tüm ligasyonu 4-0 ipek ipliği kullanılır ex vivo karaciğer rezeksiyonu sırasında karaciğer lob pedikülleri haricinde 6-0 ipek ipliği ile yapılır. Bağ ikinci bağ ilk bir mesafe de yapılabilir, ve bağlanan iki nokta arasındaki bölünme uygun bir şekilde yapılabilir, böylece bağlanan noktasına yeterli gerilim sağlamak için bir DeBakey Bulldog kelepçe ya da diğer araçlar ile çekilebilir.
- Tüm intravenöz enjeksiyonlar penil ven yoluyla yapılır.
- Suprahepatik vena kava (SHVC), portal ven, hepatik arter ve safra yolları, petrol bazlı kil küçük bir yumru için rekonstrüksiyon girişimleri sırasında periferik vasküler klemp veya sivrisinek forseps bir parmak yüzük tutmak için kullanılır pozisyonda onları sabit tutmak için.
2. Preoperatif Hazırlık
- 230 ve 250 g ağırlığında erkek Lewis fareleri karaciğer nakli için alıcı ve verici olarak kullanılır. Sıçanlar hepsiAnestezi indüksiyonundan kadar su ve yiyecek ücretsiz erişim borçluydu.
- Portal ven (Şekil 1) Kolluk: mikroskop altında No 11 Bistüri ile 14 gauge kateter keserek portal ven için manşet hazırlayın. Manşon bir gövde ve bir uzantı, 2 mm'lik bir uzunluğa sahip her oluşur. Bir iplik kaymasını olmadan manşet üzerine sıkıca bağlanır, böylece bir sivrisinek forseps ile çepeçevre adım manşet adım duvar sıkma tarafından Manşeti çevresel oluklar olun.
- Safra kanalı ve hepatik arter (Şekil 1) için stentler: safra kanalı için bir hepatik arter 4 mm uzunluğunda ve 5 mm olan kateterin iki ucunda eğim üretmek için mikroskop altında bir bisturi ile kesilmiş 24-gauge kateter .
3. Donör Operasyonu
Donör sıçan karaciğer kaldırılması şeması Şekil 2 'de gösterilmiştir. Bu işlem yaklimately 30-35 dk.
- Bakım için 2 L / dak anestezi indüksiyonu için 4 L / dak akış hızında% 100 oksijen, ve 1.5% hacim izofluran 4 hacimce% solunması ile sıçan uyuştur. Bir analjezik olarak subkutan buprenorfin (0.1 mg / kg) enjekte edilir. Bir ısıtma yastığı sıçan yerleştirin ve manyetik fiksatör retraksiyon sistemi (Şekil 3a) kullanarak üst kol düzeltmek. Sıçan tüm karın bölgesinden kürk Tıraş ve povidon-iyot çözeltisi ile ilgili cilt sterilize.
- Ikili uzantıları ile bir orta hat kesi ile karın açın. SHVC ventral yükselir, böylece sıçan arka altında, 5 ml şırınga yerleştirin. Bir sivrisinek forseps kullanma, kelepçe ve baş doğru ksifoid süreci çekin ve cerrahi alan (Şekil 3a) açmak için subkostal Retraktörler geçerlidir.
- Orak şeklinde ligaman ve sol üçgen bağ teşrih. Daha sonra, bağlanır ve sol frenik damar bölün.
- Retrıslak bir gazlı bezle yukarı medyan ve sol lateral lob hareket. Bipolar forseps kullanarak, koagüle ve sol lateral ve anterior kaudat lob arasındaki para-özofageal gemiler bölün.
- Sıçan sol tarafına takılır karın dışında bağırsak taşıyın ve ıslak bir gazlı bez ile bunları kapatın. Islak bir gazlı bezle yukarı sağ lateral lob katlayınız. Retroperitoneal dokudan IHVC ayırın, ve sadece greft kaldırma önce, daha sonra bölünecektir sağ adrenal ven, Arter.
- Safra kanalı (Şekil 3b) içine stent takmak için:
- Gastroduodenal arter dallanma düzeyinde safra kanalı Arter. Safra kanalı çevreleyen yumuşak dokuların mümkün olduğunca korunması gerekir ve hepatik arter kanalı safra ayrılması koledok yeterli arteriyel kan akımı sağlamak için kaçınılmalıdır.
- Düz mikro makas ile, anterior küçük bir kesi yaparveya bağlanan noktasına proksimal koledok duvar. Sol elinde bir düz mikro forseps ile kesi ön duvar tutarken, sağ elinde bir eğri mikro forseps kullanarak kanal içine stent takın ve 6-0 ipek iplik ile sabitleyin. Iplik daha sonra anastomoz boyunca tutulabilir, böylece kesik bir safra kanalı üzerinde iplik uçlarının 4 mm arasında bir uzunluk tutulur.
- Ligating ve onları bölerek pilorik ve splenik damarlar portal ven Özgürleştirin.
- Gastroduodenal arter bağlanır ve bölmek, sonra da kök pankreas baş ortak hepatik arter (CHA) izole. Pamuklu çubukla sağ karaciğer döndürün ve karaciğer ve yemek borusu arka etrafında bağ teşrih.
- Karaciğer ekskizyonu için hazırlıklar tamamlandığında, retraktörlerin, kılıç şeklinde olan işlem için forseps sivrisinek ve sıçan arka altında 5 ml'lik şırınga çıkarın. ABDOMİNAL için bağırsak Dönüşl boşluğu.
- Penil ven yoluyla normal salin solüsyonu 2 ml Heparin-Natrium 500 IU enjekte edilir. Yaklaşık 3 dakika sonra, 5 ml şırınga, sivrisinek forseps ve retraktörler sıfırlayın. Kendi kök proksimalinde CHA Arter. Kesim tutun uzun bir CHA için bağlandı iplik biter.
- Bir sivrisinek forseps ile sağ renal ven IHVC yakın sıkma sonra splenik ven güdük altında bir tek mikro damar klempi ile portal ven kelepçe. Portal ven ön duvar kesilirken ve portal ven içine 18'lik bir kateter yerleştirin.
- 20 cm H 2 O. bir hidrostatik basınçta soğuk histidine-triptofan-ketoglutarat (HTK) çözeltisi ile 60 ml ile in situ karaciğer serpmek Hemen sonra, diyafram kesip intratorasik vena kava transeksiyonu ve perfüzyon çözüm karaciğer (Şekil 3c) dışarı durulanır izin IHVC açık ön duvar kesti.
- Bir di ile IHVC kelepçesposable mikro gemi sadece karaciğer altında kelepçe. Hafif karaciğer ve sağ renal ven arasındaki orta noktasının altında IHVC diseksiyon tarafından ÖTV karaciğer, dalak damar güdük aşağıdaki portal ven, diyafram, karaciğer arkasında kalan ligamentler, sağ adrenal ven, ve kökünden CHA. Ezilmiş buz dolu bir plastik kutu içinde monte edilen bir metal kap içinde soğuk HTK çözelti içinde çıkarıldı karaciğer yerleştirin.
4. Ex vivo Greft Hazırlanması
Karaciğer aşı için tüm işlemler buz gibi soğuk HTK çözeltisi ile doldurulmuş metal kap içinde gerçekleştirilir. Ex vivo olarak aşı hazırlama yaklaşık 30 dakika gerektirir.
- Portal ven (Şekil 4) için bir manşet eki için:
Bir DeBakey Bulldog kelepçe ile portal venöz gövde Kelepçe. Fincan (Şekil 4a, b) üzerindeki bir köprü konumda kıskaç yerleştirin. Manşet yoluyla portal ven koyun ve kelepçetekrar birlikte 12 pozisyonunu (Şekil 4c) de manşet uzantısı ile portal ven. 7 pozisyonunda (Şekil 4d) de manşet dışında splenik ven güdük konumlandırmak için manşet üzerinde portal ven duvarı Evert ve 6-0 ipek iplik (Şekil 4e) ile portal ven sabitlemek . - Hepatik arter (Şekil 5) içine stent takmak için:
Forseps ile diyaframın her iki kenarları sıkma ile karaciğer Fix ve düz DeBakey Bulldog kelepçe (Şekil 5a) ile bağlanan iplik tutarak CHA çekin. Düz mikro makas ile CHA ön duvarında küçük bir kesi yapmak. Sol el ile, düz bir mikro forseps ile kesi ön duvar tutun ve sağ eli ile, kavisli bir mikro forseps kullanarak CHA içine stent yerleştirin. Stent önceden Heparine Sodyum çözeltisi (100 IU / ml) (Şekil 5b-d) ile yıkanır. Secure 6-0 ipek iplik ile stent ve kesim birini tutmak 4 mm uzunluğunda iplik biter. HTK soğuk çözelti 5 ml arteriyel kateter vasıtasıyla karaciğer yıkayın. - :% 50 karaciğer rezeksiyonu (Şekil 6) için
- Yerde bunu düzeltmek için bir sivrisinek forseps ile posterior kaudat lob Kelepçe. 4-0 ipek iplik (Şekil 7a) ile pedikül bağlanmasından sonra lob rezeksiyonu. Aynı şekilde, ön lop kaudat çıkarın.
- Plastik kutu 90 derece döndürün. Diyafram ve medyan lob sol kısmının sağ kenarına sıkıştırın. Medyan lob ikili bölümlerini sınır üst kenarında küçük bir kesi yapın ve sonra ligasyon sonrası sol bölümünü (Şekil 7b) çıkarın. 4-0 ipek iplik ile pedikül bağlanmasından sonra sol lateral lob çıkarın. Bipolar forseps ile dikkatlice rezeke karaciğer yüzeyi Dağlamak. Bunun sonucu olarak, karaciğer bir kütle ile azaltılırpproximately 50% 15 (7c Şekil, d).
- : SHVC of plasti (Şekil 8) için
Bir sivrisinek forseps (Şekil 8a) ile diyaframın her iki kenarları sıkma tarafından karaciğer konumunu saptamak. Karşılık gelen diyafram kaldırarak SHVC ön duvar kesin. Daha sonra anastomoz (Şekil 8b) için sütür olarak her iki köşe dışarıdan içeriye doğru iki 7-0 polipropilen dikiş takın. Sonra SHVC ve arka duvar kırpın. - 4 de karaciğer aşı depolayın ° bir soğuk su banyosu içinde HTK çözelti C 'dir.
5. Alıcı Operasyonu
Alıcı sıçan içinde greft bir şema, Şekil 9'da gösterilmiştir. Alıcı, işlem anhepatic süresinin 10-11 dakika ve IHVC sıkıştırma süresi yaklaşık 23-24 dakika içerir 60-70 dakika gerektirir.
- Do aynı prosedürleri gerçekleştirinikili uzantıları (Şekil 10a) olmadan bir orta hat kesi ile karın açılması, dışında ne operasyonu (3,1-3,4).
- IHVC etrafında bir cerrahi alan elde etmek için duodenum ve tüm bağırsak sağ tarafında üzerinde ıslak bir gazlı bezi yerleştirin. Sol subfrenik boşluğuna sol lateral ve median lobu koyun ve ıslak bir gazlı bezle yukarı sağ lateral lob geri çekin. Retroperitoneal dokudan IHVC ayırın. Arter ve sağ adrenal ven (Şekil 10b) bölün. Islak bir gazlı bez ve pamuk bezlerden ile sola karaciğer döndürmek ve karaciğer arka etrafında bağ teşrih.
- Anatomik pozisyona sağ lateral lob dönün. Yukarı medyan ve sol lateral lob kapak ve geri çekmek için ıslak bir gazlı bezi yerleştirin. Sadece kaudat lob dalı altında koledok transeksiyonu. Safra kanalı çevreleyen yumuşak dokuların mümkün olduğunca korunması gerekir. Kesim tutun biri inci biteruzun 4 mm safra kanalı için bağlandı okuyun.
- Arter ve CHA dallanma için 3 mm mesafeden gastroduodenal arter ve proper hepatik arter bölün. Daha sonra, CHA sonunda arterin bir Y-yapı yapmak. Kesim tutun uzun bir 4-mm proper hepatik arter ligasyonu iplik biter. Pamuklu çubukla sağ karaciğer döndürün ve sol taraftan karaciğerin arka etrafında bağ teşrih.
- Laktatlı Ringer solüsyonu 2 ml intravenöz enjeksiyonundan sonra, sadece sağ renal venin üzerinde bir metal mikro damar klempi ile IHVC kelepçe. Sıçan sol tarafında bir sivrisinek forseps ile karaciğer hilusu kendi çatallanma seviyesinde portal damar kelepçe. Bir periferik vasküler klemp ile sağ taraftan diyafram ile birlikte SHVC Kelepçe ve yağ bazlı kil bir yumru olarak kelepçenin parmak yüzük düzeltmek.
- (Süresi anhepatic süresinde 0,4% hacim için izofluran ile anestezi azaltınarasında) portal ven çapraz sıkma. Vergi SHVC, portal ven ve aşağıdaki seviyelerde IHVC diseksiyon tarafından alıcının yerli karaciğer: SHVC, SHVC ve karaciğer arasındaki sınırda, sadece sivrisinek forseps çene yukarıda, ve portal ven ve hafif karaciğer ve sağ renal ven (Şekil 10c) arasındaki orta noktanın altında IHVC. Orthotopically karaciğer greft yerleştirin.
- : Sürekli bir sütür (Şekil 11) tarafından SHVC arasında anastomoz için
- Damar duvarı tutarak veya dikilmesi iğne tutan dikilmesi işlemi sırasında sol kavisli bir mikro forseps kullanın. İlk olarak, bir düğüm (veya tüm dikilmesi işlemleri tamamlandıktan sonra bu kravat) bağlayarak ardından greft sağ köşesinde ekli 7-0 polipropilen kullanılarak içeriden dışarıya alıcı SHVC üzerinde kalmak sütür koyun. Ardından, sol mısır de aynı şekilde ikinci kalmak dikiş yerleştirmekdevamlı bir dikiş başlangıç dikiş olacak er,. Anastomoz genişletmek için, kavramak ve superiolaterally nazik traksiyon (Şekil 11a, b) Her iki köşelerinde DeBakey buldog kelepçeler kullanarak sütürler korumak.
- Pierce yakından düğüm dışında içeriye dışarıdan greft tarafındaki duvardan sol köşesinde dikiş ve sağ köşesinde (Şekil 11c) için 7 ila 8 dikiş ile intrelüminal SHVC ise posterior satır dikiş. Dikkatle böylece iç lümen birbirlerine karşı karşıya olduğu ilk birkaç dikiş olun. Dışarıya greft tarafta damar yoluyla sağ köşesinde, delmek 7-0 polipropilen.
- Sonra, yaklaşık 10 dikiş (Şekil 11d) ile, sağdan sola, dışarıdan ön satır dikiş. Ön sıranın tamamlanmasından önce, hava kabarcıklarını çıkarmak için laktatlanmış Ringer çözeltisi ile iç yıkayın. Yakın olarak ön satırdaki son dikiş yapınfiyatının sol köşede dikiş, ve sonra onları bir araya bağlamak mümkündür.
- : Bir manşet tekniği (Şekil 12) ile portal ven rekonstrüksiyonu için
- Islak bir gazlı bezle yukarı medyan ve sol lateral lob katlayınız. Doğru bir tek mikro damar kelepçe kullanarak pilorik ven ile birleştiği noktada alıcı portal ven Kelepçe. Sivrisinek forseps o kelepçeler kil portal ven Fix ve karaciğer hilus (Şekil 12a, b) doğru forseps ucu çekin.
- Sadece sivrisinek forseps çene altındaki portal ven ön duvar kesilirken. Alıcı portal ven ve Laktatlı Ringer solüsyonu ile manşet içini yıkayın. Sol elinde bir düz mikro forseps ve sağ elinde bir eğri mikro forseps ile manşet bir uzantısı ile kesi ön duvar tutun. Derinden alıcı portal ven içine manşet yerleştirin ve sabitleyinçevresel 6-0 ipek iplik (Şekil 12c-f).
- Portal ven ve SHVC ve kelepçeler bırakın ve daha sonra karaciğer reperfüzyonu. Sıçan arkasından 5 ml şırınga çıkarın ve 0.8% hacim için izofluran konsantrasyonu artırır.
- Bir stent teknik 16 (Şekil 13) ile hepatik arterin yeniden için:
- İlk olarak, sol taraftan bir sivrisinek forseps ile alıcının proper hepatik arter ipliği tutun ve karaciğer hilus doğru çekin ve sonra pankreas sağ tarafına yakın (Şekil 13a) dan alıcı CHA kelepçe.
- Düz bir mikro forseps ile bir huni-şekilli açıklık sağlamak için alıcı CHA sonunda Y-yapısının bir çatallanma küçük bir kesi yapmak. Kavisli bir mikro forseps ile greft CHA yerleştirilen stent tutun. Heparin-Sodyum çözeltisi (100 IU / ml), her bir lümen ile yıkama işleminden sonra, yeniden içine stent slaytcipient CHA ve 6-0 ipek iplik ile sabitleyin. Birlikte çok hem Chas birbirine yakın anastomoz (Şekil 13b) azaltılmış gerilim ile almak istediğiniz bir alıcı CHA bu thread sonu ve greft CHA üzerine 4 mm diş bağla. Bundan sonra, kelepçe bırakın.
- : Sürekli bir sütür (Şekil 14) tarafından IHVC arasında anastomoz için
SHVC için aynı şekilde anastomoz, ama ince lokma ile daha dikiş (Şekil 14a-d) kullanın. Son dikiş de dikiş Bağlama bertaraf edilebilir, ya da bağlama çok sıkı bir şekilde bağlayarak neden anastomoz darlığı önlemek için bir büyüme faktörü ile gerçekleştirilebilir. Klempin alınması sonrası, 1.0 vol% anestezi konsantrasyonu artırır. Anastomoz stenotik görünüyorsa, ikili kalmak sütürler çekerek veya anastomoz genişletmek için hafifçe ön satır genişleterek anastomoz genişler. - % 8.4 sodyum bikarbonat eriyik 0.5 ml Yönetn intravenöz laktatlanmış Ringer çözeltisi, 1.0 ml.
- Kanama ve safra kaçağının önlenmesi için rezeke karaciğer yüzeyi mühür Tachosil küçük parçaları sürün.
- Stent tekniği ile koledok rekonstrüksiyonu için:
- Sol taraftan bir sivrisinek forseps ile alıcının koledok parçacığı tutun. Kil sivrisinek forseps Fix ve karaciğer hilus doğru forseps ucu çekin.
- Yeniden safra kanalı çok uzun olmaz, böylece uygun düzeyde safra kanalı küçük bir kesi olun. Bir büküm önlemek için dikkat ile alıcının kanal içine greft safra kanalı yerleştirilen stent yerleştirin ve 6-0 ipek iplik ile sabitleyin. Greft kanal üzerine alıcı kanalı ve 4 mm diş bu thread Tie birlikte böylece hem kanalların anastomoz azaltılmış gerilim ile birbirine yakın olsun.
- Yeniden prosedürler tamamlandığında, 1 m enjekte% 5 glikoz çözeltisi l intravenöz (Şekil 15).
- Yeterli hemostaz onaylayın ve sonra iki kat sürekli 4-0 Vicryl dikiş ile abdominal insizyon kapatın.
6. Postoperatif Tedavi ve Takip
Ameliyattan hemen sonra, normal salin solüsyonu, 1.5 ml 'lik bir toplam bir subkutan enjeksiyon sefuroksim sodyum (16 mg / kg) ve buprenorfin (0.1 mg / kg) ile alıcı sıçan tedavi. Sıçan ısındı hava (30-35 ° C) ve bir oksijen kaynağı ile özel bir yoğun bakım ünitesinde kafeste 60 dakika kurtarmak için izin ver. 3 gün boyunca deri altından buprenorfinin analjezik olarak (0.1 mg / kg), her 12 saat için enjekte edilir. Daha sonra normal bir kafese sıçan taşımak, su ve gıda ad libitum erişim sağlar.
Representative Results
Tüm alıcı ratlar (n = 20) (her zaman noktasında n = 5) portalı reperfüzyon sonrası (7 gün) 1, 3, 24, ve 168 saat kan örnekleri için planlı ötanazi kadar belirgin komplikasyon olmadan atlattı. Kan örnekleri 27-gauge iğne ile doğrudan bir şırınga ile IHVC toplanmıştır. 10 dakika boyunca 5.340 xg'de santrifüj sonrasında serum örnekleri alındı ve transplantasyon sonrası hepatosellüler hasarın derecesini yansıtan alanin aminotransferaz (ALT) düzeyleri için analiz. Serum ALT seviyeleri değişikliklerin zaman ders Şekil 16 'de gösterilmiştir. ALT düzeyleri 24 saatte zirveye ulaştı (ortalama ± standart sapma: 212.6 ± 67.9 IU / L) ve daha sonra 168 saat (33.6 ± 6.8 IU / L) normal sınırlarda gerilemiştir.
Şekil 1. Bir 1 portal ven (PV) için manşet4-gauge kateter ve 24 gauge kateter gelen hepatik arter (HA) ve safra kanalı (BD) için stentlerin.
Şekil 2. Donör sıçan karaciğer kaldırılması Şema BD, safra kanalı,. HA, hepatik arter; IHVC, infrahepatic vena kava, PV, portal ven; SHVC, suprahepatik vena kava.
Şekil 3,. Donör operasyonu. a. sıçan, bir manyetik fiksatör geri çekme sistemi ile bir ısıtma pedi üzerine yerleştirilir. Karın ikili uzantıları ile bir orta hat kesi ile açılır. B. Stent yerleştirilmesi safra kanalı içine. C. Karaciğer Perfüzyon portal ven yoluyla. Kısaltmalar açıklar vardırŞekil 2 'de ed.
Şekil 4. Portal ven bir manşet Ek. a, b. portal venöz gövde kavrar DeBakey Bulldog kelepçe metal kupanın üzerine yerleştirilir. Fincan ezilmiş buz. C ile dolu plastik bir kutu içinde monte edilir. Portal ven manşet yoluyla alınır. D. Portal ven duvarı 7 manşet dışında splenik ven güdük ile manşet üzerinde everte edilir pozisyonunda ve 12 pozisyonunda manşet bir uzantısı. e. portal ven manşet üzerinde çevresel 6-0 ipek iplik ile güvence altına alınır. Siyah oklar splenik ven güdük göstermektedir.
Şekil 5,. Ex vivohepatik artere stent yerleştirilmesi. Bir. Karaciğer, diyaframın her iki kenarını sıkma ile sabittir ve hepatik arter düz arter ligasyonu parçacığı tutarak çekilir. b. hepatik arter üzerindeki küçük kesi ön duvarının düz bir mikro forseps ile yapılır . c, d. stent hepatik arter içine yerleştirilmiş ve 6-0 ipek iplik ile güvence altına alınır.
Şekil 6. Ex vivo% 50 karaciğer rezeksiyonu şema. Gri renkte Loblar kaldırılır. ACL, anterior kaudat lob; PCL, posterior kaudat lob; LLL, sol lateral lob; LML, medyan lobu sol kısmı, medyan lobun RML, sağ bölümü; SRL, üstün sağ lateral lob; IRL, inferior sağ lateral lob.
Şekil 7. Ex vivo% 50 karaciğer rezeksiyonu. medyan lobu. c sol kısmının pedikül bir. posterior kaudat lob pedikül Ligasyonu. b. Ligasyonu.% 50 rezeksiyonu öncesi karaciğer. d.% 50 rezeksiyon sonrası karaciğer.
Şekil 8. Suprahepatik vena kava ex vivo plasti. Bir. Karaciğer sivrisinek forseps ile diyaframın her iki kenarını sıkma ile sabittir. b. kalın dikişler 7-0 polipropilen iki köşesinden de bağlıdırlar.
9 Şekil. Alıcı sıçan greft implantasyonu Şeması. Rekonstrüksiyon girişimleri 7-0 sürekli dikiş, bir manşet tekniği ile portal ven (PV), ve karaciğer yetmezliği olan supra-ve infrahepatic vena kava (SHVC ve IHVC) için yapılır stent tekniği ile arter (HA) ve safra kanalı (BD).
10 Şekil. Doğal karaciğer çıkarılması kadar Alıcı işlem. Bir. karın orta hat kesi ile açılır. b. sağ adrenal ven ligasyonu edilir. c. Yerel karaciğer eksize edilir. Kısaltmalar Şekil 2 'de açıklanmaktadır.
11 Şekil. Suprahe anastomozuhepatik vena kava. a, b. suprahepatik vena kava için periferik vasküler klemp yağ bazlı kil bir yumru giderilmiştir. Her iki köşelerinde kalmak dikişler superiolaterally anastomoz genişletmek için hafif çekme ile korunur. C. Sürüyor posterior satırın Sürekli intraluminal sütür. D. Sürüyor anterior satır Kontinü sütür.
Şekil 12. Portal ven rekonstrüksiyonu. a, b. portal ven sıkma sivrisinek forseps yağ bazlı kil giderilen ve karaciğer hilus doğru çekilir. krş. portal ven içine manşet yerleştirilmesi.
13 Şekil. Hepatik arter rekonstrüksiyonu. a, b. g proper hepatik arter (PHA) ve gastroduodenal arterden (GDA) ve bifürkasyonunda alıcının ortak hepatik arter (CHA) içine stent> Ekleme.
14 Şekil. Infrahepatic vena kava Anastomoz. infrahepatic vena kava bir. hem köşelerde kalmak dikişler. b. posterior satır Kontinü sütür. c. anterior satır Kontinü sütür. d. Reperfüzyon. Kısaltmalar Şekil 2 'de açıklanmaktadır.
Şekil 15. Tüm rekonstrüksiyon işlemleri tamamlanmıştır. Kısaltmalar Şekil 2 'de açıklanmaktadır.
"Şekil 16" src = "/ files/ftp_upload/4376/4376fig16.jpg" />
Şekil 16 serum alanin aminotransferaz (ALT) düzeylerinde değişiklikler zaman ders Postoperatif (n = 20; n her zaman noktasında = 5).. Veriler standart sapmaları belirten hata çubukları ile araç olarak ifade edilmiştir. ALT düzeyleri 24 saatte bir tepe (212.6 ± 67.9 IU / L) ulaştığı ve daha sonra 168 saat (33.6 ± 6.8 IU / L) normal sınırlarda gerilemiştir.
Discussion
Sıçan OKT ilk modeli Lee ve ark tarafından rapor edilmiştir. 1973 9, hepatik arter dahil tüm gemiler bir el-dikili yöntemi ile yeniden inşa edildi ve ekstrakorporeal portosistemik şant kullanıldığı. Bu model teknik ve karmaşık gerçekleştirmek zordu. Sonraki model 1975 yılında 10 aynı yazarlar tarafından geliştirilen hepatik arteriyel rekonstrüksiyon ve ekstrakorporeal şant olmadan biriydi. Daha sonra 1979 yılında, Kamada ark. Hepatik rearterialization 11 olmadan modeli için manşet anastomoz tekniğini tanıttı. Bu değişiklikler ile, sıçanlarda OKT alıcı operasyonları kısaltılmış anhepatic zaman basitleştirilmiş ve yaygın olarak kabul edilen bir deneysel model olarak kullanılmıştır.
Arterleştirilmelerine zorlu bir görevdi ama, çünkü Ancak, sıçanlarda hepatik arterleştirilmelerine OKT 8 önemi üzerinde o zamandan beri oldukça tartışmalı olmuştur diTransplantasyon sonrası sağkalım etkilemez d. Çeşitli teknikler kullanılarak yeniden karaciğer arterleştirilmelerine üzerinde çok sayıda çalışma böyle bir aort kademeli-to-aort anastomoz 3,9,17, bir manşon anastomoz teknik 18,19,20, bir teleskopik teknik 5, bir stent teknik olarak 13 8, rapor edilmiştir, 16, ve bir kol anastomoz teknik 12,21-23. Sıçan OKT için tekniği bugün hala standart değil iken, arterialized modeli giderek onun fizyolojik üstünlüğü 8,12,13,14 açısından tercih edilmiştir. Yukarıda bahsedilen yöntemler arasında gerçekleştirmek için basit ve hızlı bir stent teknik Lehmann et al tarafından rapor edilmiştir. 2005 16. Çalışma mükemmel sonuçlar gösterdi: hayır oklüzyon oranı reperfüzyon sonrası 8 saat, 24 saat ve 6 ay sonunda yeniden hepatik arterde idi. Bu nedenle hepatik arterleştirilmelerine için bu tekniği benimsemiştir.
Biz perforSHVC ve IHVC yeniden inşası için ma el-dikili anastomoz. Bu yöntem tromboz 8 sıklığının azaldığı yol optimal fizyolojik durumu ile anastomoz sağlar ve iyi mikrocerrahi simülasyon ve cerrahlar için eğitimdir. Buna ek olarak, anastomoz hatta kısa damar kütükleri ile mümkün olabilir. IHVC ve anastomoz ile ilgili olarak, bu yöntem manşon anastomoz tekniği ile karşılaştırıldığında greft tarafında bir uzun IHVC gerektirmez. Bu nedenle, verici renal damar uzun greft IHVC yapmak için parçalanmıştır zaman, bu yöntem, böyle bir kısa intrahepatik ile sağ yan lobların kaudat ve oluşan bir aşı olarak% 30 bir uzun IHVC, gerektiren, küçük bir graft transplantasyonu için geçerlidir SHVC 2 olmadan vena kava.
Çeşitli yöntemler bugüne kadar sıçanlarda, karaciğer rezeksiyon teknikleri İlişkin bildirilmiştir; iki büyük teknikleri klasik kitle ligature tekniktirve damar odaklı tekniği 24. Biz% 50 karaciğer rezeksiyonu 15 klasik bağ tekniği gerçekleştirmek, ancak cerrahi bir mikroskop altında prosedürü daha ince yapmak için, ve kalan lob ve yapılara zarar vermemek için.
Biz modelinde alıcı fareler temsilcisi sonuçları açıklanan; sıçanlarda belirgin komplikasyon olmadan 7 günlük gözlem döneminde kurtuldu. Model, uzun süreli soğuk depolama, kalp ölümünden sonra bağış içerir uzamış sıcak iskemi, ve karaciğer yaralanma veya hastalıkların deneysel modellerden daha küçük karaciğer greft veya greft kullanımı gibi farklı ayarlar, seçerek deneylerin farklı amaçlar için modifiye edilebilir.
; Operasyon süresi, e kan kaybı miktarı: Bizim tecrübelerimize göre, transplantasyon, sıçan OKT sonuçlarının en güvenilir parametresi sonrasında sağkalım etkileyebilir prosedürler boyunca üç önemli faktör vardırözel portal ven ve IHVC zaman sıkma ve her bir geminin yeniden yeterliliği, hangi darlık, tromboz neden olabilir, veya kanama. Bu modelin bir eğitim döneminde, başarısızlık büyük olasılıkla bu faktörlere bağlı olabilir. Bu video yazıda, hepatik arteriyel rekonstrüksiyon ile kısmi OKT bizim sıçan modeli için cerrahi işlemler için adım-adım talimatlar sunuyoruz. OKT bir sıçan modeli karmaşık ve gelişmiş mikrocerrahi becerileri gerektirir iken, bu makalede, bu modelin eğitim ve öğrenme için iyi bir kılavuz olarak işlev görecek pratik bilgiler bol sağlar. Verimli bu model öğrenme, öğrenme sürenin kısaltılması uygulama için gerekli hayvan ve maliyetlerini sayısını azaltarak, daha sonra deneylerde güvenilir sonuçlar üreyen için özellikle önemlidir. Bu Russell ve Burch tarafından öne edildi hayvan deneyleri 3R'si kavramı (değiştirme, azaltma, ve arıtma) ile uyumludur1959 25.
Disclosures
Biz ifşa etmek çakışan çıkarları var. Sıçanlar Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri (FELASA) için Federasyonu'nun kurallarına göre spesifik patojen free koşullar altında yerleştirilmiştir. Tüm deneyler hayvanların korunması ve "Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu" (Sağlık yayını No 86-23 National Institutes, 1985 revize) ile ilgili Alman federal yasalara uygun olarak yapılmıştır.
Acknowledgments
Yazarlar kendi teknik yardım Pascal Paschenda ve Mareike Schulz ederim.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Light source | Schott | KL1500LCD | |
| Cotton swabs | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
| Gauze swabs (5x5 cm) | Fuhrmann | 10002 | |
| povidone-iodine solution | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
| Oil-based clay | Debika corporation | 090148 | |
| TachoSil | Takeda Pharmaceuticals International GmbH | EU/1/04/277/001-004 | Applied to resected liver surface |
| Scalpel blade No. 11 | Pfm medical | 200130011 | Preparation of cuff and stents |
| 14-gauge catheter | B. Braun | 4268210S | Cuff for PV |
| 18-gauge catheter | B. Braun | 4268130S | Perfusion via PV |
| 24-gauge catheter | B. Braun | 4269071S | Stent for BD and HA |
| 4-0 silk suture | Resorba | H3F | Liver resection |
| 6-0 silk suture | Resorba | H1F | |
| 7-0 Prolene (polypropylene) suture | Ethicon | 8701H | SHVC and IHVC |
| 4-0 Vicryl suture | Ethicon | V304H | Abdominal closure |
| 5-ml syringe | Terumo | SS+T05ES1 | Back pillow |
| Heating pad | Thermo | 190 x 260 mm | |
| Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools Inc. | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 |
|
| Cold water bath | Huber | 740.000X | Graft preservation |
| Bipolar forceps | Söring | MBC-200 | |
| Mosquito forceps | BONIMED | 451-476-03 | Two pairs used |
| Adson micro forceps | Dimeda | 10.176.12 | |
| Curved micro forceps | AESCULAP | FD281R | |
| Straight micro forceps | Bonimed | 451-476-03 | |
| Curved micro scissors | Medicon | 05.15.83 | |
| Straight micro scissors | AESCULAP | FD12 | Fine incision |
| Scissors | AESCULAP | BC211W | |
| Micro needle holder | AESCULAP | FD241R | Reconstruction |
| Mayor-Hegar Needle holder | Mizuho Ikakogyo | 06-798-00 | Abdominal closure |
| DeBakey Bulldog clamp (straight) | ULRICH | CV3054 | |
| DeBakey Bulldog clamp (curved) | CODMAN | 37-1062 | |
| Satinsky clamp | Mizuhoika | 09-230-24 | |
| Peripheral vascular clamp | Teleflex Medical | 353494 | Recipient SHVC |
| Micro vessel clamp (disposable) | AROSurgical Instruments Corporation | TKM-1-60 g | PV, graft IHVC, and recipient HA |
| Micro vessel clamp (metal) | Fine Science Tools Inc. | 18052-01 | Recipient IHVC |
| Lactated Ringer solution | Fresenius Kabi | 6150917.00.00 | |
| Normal saline solution | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
| HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | 31268.00.00 | Preservation solution |
| Heparin-Natrium | Ratiopharm | 5394.02.00 | 500 IU before graft perfusion |
| 8.4% sodium bicarbonate | Fresenius Kabi | 4399.97.99 | 0.5 ml after reperfusion |
| 5% Glucose solution | B. Braun | 6714567.06.00 | 1.0 ml after reperfusion |
| Cefuroxim sodium | Fresenius Kabi | 38985.01.00 | Antibiotic, 16 mg/kg |
| Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Painkiller, 0.1 mg/kg |
| Intensive Care Unit Cage | Brinsea Products Ltd. | Vetario S10 | Postoperative care |
References
- Puhl, G., et al. Low viscosity histidine-tryptophan-ketoglutarate graft flush improves subsequent extended cold storage in University of Wisconsin solution in an extracorporeal rat liver perfusion and rat liver transplantation model. Liver Transpl. 12, 1841-1849 (2006).
- Yagi, S., et al. Improved Preservation and Microcirculation with POLYSOL After Partial Liver Transplantation in Rats. J Surg Res. 167, e375-e383 (2011).
- Engemann, R., Ulrichs, K., Thiede, A., Muller-Ruchholtz, W., Hamelmann, H. Value of a physiological liver transplant model in rats. Induction of specific graft tolerance in a fully allogeneic strain combination. Transplantation. 33, 566-568 (1982).
- Sumimoto, R., Shinomiya, T., Yamaguchi, A. Influence of hepatic arterial blood flow in rats with liver transplants. Examination of donor liver-derived serum class I MHC antigen in rats with liver transplants with or without hepatic arterial reconstruction. Transplantation. 51, 1138-1139 (1991).
- Chaland, P., et al. Orthotopic liver transplantation with hepatic artery anastomoses. Hemodynamics and response to hemorrhage in conscious rats. Transplantation. 49, 675-678 (1990).
- Imamura, H., Rocheleau, B., Cote, J., Huet, P. M. Long-term consequence of rat orthotopic liver transplantation with and without hepatic arterial reconstruction: a clinical, pathological, and hemodynamic study. Hepatology. 26, 198-205 (1997).
- Zhong, Z., Theruvath, T. P., Currin, R. T., Waldmeier, P. C., Lemasters, J. J. NIM811, a mitochondrial permeability transition inhibitor, prevents mitochondrial depolarization in small-for-size rat liver grafts. Am. J. Transplant. 7, 1103-1111 (2007).
- Spiegel, H. U., Palmes, D. Surgical techniques of orthotopic rat liver transplantation. J. Invest. Surg. 11, 83-96 (1998).
- Lee, S., Charters, A. C., Chandler, J. G., Orloff, M. J. A technique for orthotopic liver transplantation in the rat. Transplantation. 16, 664-669 (1973).
- Lee, S., Charters, A. C. 3rd, Orloff, M. J. Simplified technic for orthotopic liver transplantation in the rat. Am. J. Surg. 130, 38-40 (1975).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Howden, B., Jablonski, P., Grossman, H., Marshall, V. C. The importance of the hepatic artery in rat liver transplantation. Transplantation. 47, 428-431 (1989).
- Gao, W., Lemasters, J. J., Thurman, R. G. Development of a new method for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation. Reduction of liver injury and improvement of surgical outcome by arterialization. Transplantation. 56, 19-24 (1993).
- Zhao, D., Zimmermann, A., Wheatley, A. M. Morphometry of the liver after liver transplantation in the rat: significance of an intact arterial supply. Hepatology. 17, 310-317 (1993).
- Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. Fifty-percent partial liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 292-293 (1996).
- Lehmann, T. G., Bunzendahl, H., Langrehr, J. M., Neuhaus, P. Arterial reconstruction in rat liver transplantation--development of a new tubing technique of the common hepatic artery. Transpl. Int. 18, 56-64 (2005).
- Reck, T., et al. Impact of arterialization on hepatic oxygen supply, tissue energy phosphates, and outcome after liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 582-587 (1996).
- Hasuike, Y., et al. A simple method for orthotopic liver transplantation with arterial reconstruction in rats. Transplantation. 45, 830-832 (1988).
- Steffen, R., Ferguson, D. M., Krom, R. A. A new method for orthotopic rat liver transplantation with arterial cuff anastomosis to the recipient common hepatic artery. Transplantation. 48, 166-168 (1989).
- Knoop, M., Bachmann, S., Keck, H., Steffen, R., Neuhaus, P. Experience with cuff rearterialization in 600 orthotopic liver grafts in the rat. Am. J. Surg. 167, 360-363 (1994).
- Hickman, R., Engelbrecht, G. H., Duminy, F. J. A technique for liver transplantation in the rat. Transplantation. 48, 1080 (1989).
- Liu, T., Freise, C. E., Ferrell, L., Ascher, N. L., Roberts, J. P. A modified vascular "sleeve" anastomosis for rearterialization in orthotopic liver transplantation in rats. Transplantation. 54, 179-180 (1992).
- Li, J., et al. Modified sleeve anastomosis for reconstruction of the hepatic artery in rat liver transplantation. Microsurgery. 22, 62-68 (2002).
- Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. Rodent models of partial hepatectomies. Liver Int. 28, 3-11 (2008).
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. , Methuen & Co. Ltd. London. reprinted by UFAW (1992).
