Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

The Insect doi: 10.3791/4392 Published: December 11, 2012

Summary

Mundtlig og intra haemocolic infektion af larver af den større voks møl

Abstract

Undersøgelsen af ​​bakteriel virulens kræver ofte en egnet dyremodel. Mammale modeller af infektion er dyre og kan give anledning til etiske spørgsmål. Brugen af ​​insekter som infektionsmodeller giver et værdifuldt alternativ. Sammenlignet med andre ikke-hvirveldyr model værter, såsom nematoder, har insekter et relativt avanceret system af antimikrobielle forsvar og er derfor mere tilbøjelige til at producere relevante oplysninger om pattedyr infektion processen. Ligesom pattedyr, besidder insekter et komplekst medfødte immunsystem 1. Celler i hæmolymfe er i stand til phagocytosing eller indkapslende mikrobielle invasion, og humorale responser indbefatter den inducerbare produktion af lysozym og små antibakterielle peptider 2,3. Desuden er analogier fundet mellem epitelcellerne af insekt larvestadium midguts og intestinale celler af pattedyr fordøjelse. Endelig har flere grundkomponenter væsentlige for den bakterielle infektion proces såsom celleadhæsion, resistens over forantimikrobielle peptider, vævsnedbrydning og tilpasning til oxidativ stress sandsynligvis vil være vigtig i både insekter og pattedyr 1. Således insekter er polyvalente værktøjer til identifikation og karakterisering af mikrobielle virulensfaktorer involveret i mammale infektioner.

Larver af den større voks moth Galleria mellonella har vist sig at give en nyttig indsigt i patogenesen af et bredt område af mikrobielle infektioner, herunder pattedyr svampe (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) og bakterielle patogener, såsom Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris , Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes eller Enterococcus faecalis 4-7. Uanset de bakteriearter, resultater opnået med Galleria larver smittet med direkte indsprøjtning gennem neglebånd konsekvent korrelerer med de similar pattedyr studier: bakteriestammer, der er svækket i mammale modeller viser lavere virulens i Galleria, og stammer, der forårsager alvorlige infektioner hos mennesker er også meget udtalt i Galleria model 8-11. Oral infektion af Galleria er langt mindre anvendt og yderligere forbindelser, såsom specifikke toksiner, der er nødvendig for at opnå mortalitet.

G. mellonella larver stede flere tekniske fordele: de er relativt store (sidste stadiums larver, før forpupningen er omkring 2 cm lang og vægt 250 mg), således at injektionen af definerede doser af bakterier, de kan opdrættes ved forskellige temperaturer (20 ° C til 30 ° C) og infektion undersøgelser kan udføres mellem 15 ° C til over 37 ° C 12,13, således at forsøg, der efterligner en mammal miljø. Desuden er insekt opdræt let og forholdsvis billigt. Infektion af larverne tillader overvågning bakteriel virulens på flere måder, including beregning af LD 50 14, måling af bakteriel overlevelse 15,16 og undersøgelse af infektionen proces 17. Her beskriver vi opdræt af insekter, som omfatter alle stadier af G. mellonella. Vi giver en detaljeret protokol af infektion med to ruter injiceret: oral og intra haemocoelic. Den bakterielle model anvendt i denne protokol er Bacillus cereus, en grampositiv patogener impliceret i mave såvel som i andre alvorlige lokale eller systemiske opportunistiske infektioner 18,19.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Insect Opdræt

Hele cyklus fra æg til sidste stadiums larver varer cirka 5 uger ved 25 ° C. En eller 2 ekstra uger er nødvendige for at opnå voksne sommerfugle.

  1. Anbring mindst 100 pupper eller nyfusionerede voksen G. mellonella sommerfugle i en 5-liters wire-mesh buret. Mandlige sommerfugle foranstaltning 10 til 15 mm. Den voksne mand møl er beige med svagt lys og mørke aftegninger. Kvinde sommerfugle måler cirka 20 mm. Hunnerne er mørkere end hanner med en brun / grå farve.
  2. Suspender to pakker med fire-lags papir i buret for æglægning. Efter 2 dage, vil den voksne kvinde lægge æg på kanten mellem papirerne.
  3. To gange om ugen, skal du placere æg-papir pakker i nye plast opdrætsmetoder kasser med net for at lade luften cirkulere, som indeholder pollen og bivoks. Æg klækkes på cirka 3 dage og små larver begynder at udvikle ved at fodre på voks og pollen. Alternativt kan larver anbringes på en kunstig diæt consisting af en blanding af 500 g flydende honning, 400 g glycerin, 100 g tørret ølgær, 250 g hvedemel, 200 g skummetmælkspulver og 400 g polenta. At yde passende forhold mellem mad pr larve, regelmæssigt adskille larverne i nye kasser og genbestille maden hver to dage.
  4. Larverne opdrættes i de seks faser af larve stadion. Hvert stadium er kendetegnet ved glidning af hovedet kapsel af larver. Når larverne når den sidste etape før pupation, de stopper fodring og begynde at opbygge en lys silke kokon.
  5. I deres beskyttende kokoner, vil larverne hvile og forvandles til pupper. Voks orme forblive i puppe stadie i en til to uger for at dukke op til voksne møl. De voksne møl ikke drikker eller spiser. Parring indgår, og de voks orme 'livscyklus begynder igen.
  6. At standardisere patologi assay tage larver i sidste larvestadium. I denne fase de stopper fodring, flytte til dækning af opdræt boksen og begynde at producere silke. Dette stake varer omkring 5 dage.

2. Insect Selection for Infektion

  1. Vælg sidste stadiums larver, der er 2-3 cm lange og 180-250 mg i vægt, 24 timer før infektioner og sætte dem ind i en tom kasse til at sulte dem.
  2. Fjern den spirende silke kokon omkring larverne.

3. Bakteriepræparat

  1. Forbered Bacillus bakteriesuspensioner at opnå slutkoncentrationer i området fra 10 4 kolonidannende enheder (CFU) / ml til 10 8 cfu / ml for intra haemocoelic injektion og fra 3x10 6 cfu / ml til 1x10 8 CFU / ml for indtagelse (CFU til opnåelse en LD 50 afhænger af de bakteriearter). I vores tilfælde, B. cereus dyrkes i Luria-Bertani-bouillon medium (LB, 10 g / l trypton, 5 g / l gærekstrakt, 10 g / l NaCI) ved 37 ° C under omrøring, indtil adgang til stationær fase, svarende til incurvation af væksten kurve. Mål OD 600 nm (mellem 1 og 2 for B. cereus) og bruge det til at vurdere bakterielle koncentration, ved hjælp af en tidligere lavet titreringskurve. Høst bakterier ved centrifugering ved 5000 x g i 10 minutter ved stuetemperatur og resuspender i phosphatbufret saltvand (PBS: 1M KH 2 PO 4, 1 M K 2 HPO 4, 5 M NaCl, pH 7,2). Hver larve vil modtage 10 pi bakteriesuspension i den ønskede koncentration.
  2. Alternativt kan sporesuspension fremstilles til infektion. Opnåelse af sporer ved at dyrke bakterierne i sporulering medium HCT (5 g / l trypton, 2 g / L caseinhydrolysat, 12,5 mM K 2 HPO 4, 12,5 mM MgSO4, 0,05 mM MnSO 4, 1,2 mM ZnSO 4, 1,2 mM Fe 2 (SO4) 3, 0,5% H 2 SO 4, 25 mM CaCl2) 20 ved 30 ° C i 3 dage. Høst sporer ved centrifugering (10.000 x g, 15 min) og vaskes to gange i sterilt destilleret vand. Resuspender spore pelLad i sterilt destilleret vand og opvarmes i 15 minutter ved 78 ° C til fjernelse af resterende vegetative bakterier. Numerate suspensionen ved udpladning af serielle fortyndinger på LB-agarplader. Hver larve vil modtage 10 ul sporesuspension i den ønskede koncentration.

4. Cry Toxin Forberedelse

  1. Forbered Cry1C toksin fra B. thuringiensis stamme 407 transformeret med plasmidet pHTF31C 21 bærer genet kodende Cry1C. Kultur af stammen i 100 ml HCT medium ved 30 ° C i 72 timer med antibiotika (erythromycin 10mg/ml) for at tillade fuld sporulering, toksin krystal produktion og frigørelse i kultursupernatanten.
  2. Renses krystaller fra supernatanten på en 72% -79% sucrosegradient. Først tilsættes 17 ml 79% sucrose i et 40 ml rør. Omhyggeligt lag 17 ml 72% sucrose oven på 79% saccharose. Endelig lag 5-6 ml af 10X koncentreret sporeform kultur og luk røret. Centrifuger røret i 14 timer ved 20,000 x g, 4 ° C, for at adskille krystallerne fra sporerne. Saml krystallerne ved gradient interface. Resuspender krystallen pellet i 25 ml koldt sterilt vand for at vaske det. Centrifuger ved 8.000 x g i 20 min. Dette trin gentages tre gange for at fjerne alt saccharose klæber til krystallerne. Resuspender krystallerne i 5 ml sterilt vand og observere under mikroskop for at vurdere renhed.
  3. Evaluere toksinprotein koncentration af klassiske Bradford farvning på krystalopløsning presolubilized i 50 mM NaOH. Toksin krystaller kan opbevares ved -20 ° C indtil anvendelse.

5. Injektor Forberedelse

  1. At styre den præcise injektionsvolumen, bruges en automatiseret sprøjtepumpe (f.eks KD Scientific KDS 100) med opsætning hastighed på 1 ul / sek (figur 1A).
  2. En 1 ml injektionssprøjte med 300 gl vand eller den bakterielle opløsning (1 sprøjte per tilstand) til infektion af 20-25 larver. Fjern boblerne ved omhyggeligt tapping sprøjten, lægger derefter et 0,45 x 12 mm til sprøjten.
  3. Læg sprøjten i injektoren.
  4. Udfør en tom injektion af 10 gl i et tomt rør for at styre den injicerede volumen.

6. Insect Intrahaemocoelic Injection

  1. Anbring insekt manuelt mellem tommel og pegefinger. Sæt derefter nålen sidder fast i injektoren i larve huden (neglebånd) (figur 1C).
  2. Hold insekt på plads, mens indsprøjtning af 10 pi bakteriel opløsning (Spore eller vegetativt bakterier).
  3. Fjern forsigtigt insekt fra kanylen.
  4. Placer den inficerede insekt i en lille petriskål (5 cm i diameter), 5 larver per skål.
  5. Infect mindst 20 larver for hver forsøgsbetingelse.
  6. Placere skåle ved 37 ° C i en inkubator i 48 timer.

7. Insect tvangsfodring (Indtagelse)

  1. I en 2 ml Eppendorf-rør, blandes 0,2 ug / & mu, l Cry1C toksin med enten sporer eller vegetativ cellesuspension til opnåelse af slutkoncentrationer i området fra 3x10 4 til 1x10 7 per 10 pi.
  2. En 1 ml sprøjte med en 30G, 25 mm kanyle med 300 pi af det bakterielle-Cry1C toxin løsning til infektion af 20-25 larver. Fjern bobler fra sprøjten.
  3. Anbring insekt manuelt, så dens munding kommer ind i nålen fast i injektoren (figur 1D), og kraft-feed den med 10 pi af den bakterielle opløsning under anvendelse af den automatiserede sprøjtepumpe.
  4. Infect mindst 20 larver for hver forsøgsbetingelse.
  5. Placer den inficerede insekt i en lille 5 cm petriskålen (5 larver per skål). Placere skåle ved 37 ° C i en inkubator i 48 timer.

8. Optagelse Insect Dødelighed

  1. Efter tvangsfodring eller injektion eksperimenter, holde larverne i petriskålen uden mad ved 25 ° C eller 37 ° C. Check larvernes mortality regelmæssigt over en 48 timers periode. Døde larver er inerte og normalt blive sort (figur 1B).
  2. Dødeligheden data kan analyseres ved hjælp af log-probit-programmet 14. Dette program tester linearitet af dosis dødelighed kurver og giver dødelige doser (LD 50). Alternativt kan andre programmer, såsom Prism (Graph Pad), analysere overlevelse eller dødelighed data anvendes.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Intra haemocoelic injektion af bakterier ind i G. mellonella har vist sig meget nyttig til identifikation af mange virulensfaktorer beskæftiger sig med vævsbeskadigelse og modstandsdygtighed over for medfødte immunfaktorer af flere humane patogener. Som et eksempel, repræsenterer figur 2A insekt dødelighed efter injektion af forskellige doser af B. cereus bakterier (vildtype-og mutantstammer) 22. Figur 2B repræsenterer bakteriel overlevelse efter infektion med G. mellonella af Pseudomonas aeruginosa 4.

Anvendelsen af Galleria som en oral infektion model for B. cereus og B. thuringiensis beror på evaluering af den synergistiske virkning af de vegetative bakterier eller sporer på den insekticide aktivitet af Cry1C toxin 10. Larverne er modtagelige for indtagelse af spore / toksin blanding, men kun svag modtagelige for indtagelse af Cry1C-toksin alene. De larve død skyldes septikæmi efter bakterier har nået haemocoel efter sammenbruddet i den intestinale barrierer. Figur 3 repræsenterer larvernes dødelighed efter indtagelse af krystaller og enten vildtype eller mutantstammer af Bacillus bakterier 10.

Få bakterier er blevet testet for oral smitte i Galleria. Blandt de humane patogener testet, B. cereus stammer med Cry1C toksin var de mest virulente for G. mellonella efter oral smitte 24. Denne fremgangsmåde kan anvendes til at overvåge infektion / kolonisering af mave-tarmkanalen. Som vist i figur 4, kan larven fordøjelseskanalen skal ekstraheres efter infektion, og værtscellens modifikationer såvel som bakteriel kolonisering kan visualiseres på histologiske paraffinsnit. Desuden kan indtagelse af fluorescerende bakterier anvendes til at følge banen, og koloniseringen proCESS langs de forskellige rum af larverne. Endelig kan den specifikke ekspression af et gen i de forskellige insekt rum overvåges ved fluorescensmikroskopi 25.

Figur 1
Fig. 1. (A) Automatiseret sprøjtepumpe injektor. (B) Dead (top, sort) og levende (bund, hvid) G. mellonella larver. (C) Bakterier injiceres i haemocoel af G. mellonella larver. (D) G. mellonella larver er tvangsfodret med bakteriepræparationen: nålen går ind i mundingen af insektlarver.

Figur 2
Figur 2. Resultater efter intra haemocoelic injektion. (A) CwpFM virulens mod G. mellonella larver 22. Forskellige koncentrationer af B. cereus wild-type (Bt 407) og ΔcwpFM mutantstammer blev inokuleret i haemocoel af 20. G. mellonella larver. Mortaliteten blev optegnet efter 24 timer ved 37 ° C. (B) Tidsforløb af Pseudomonas aeruginosa PA14 infektion i G. mellonella 4. Femogtyve bakterier pr larve blev injiceret på tidspunkt nul. Larver blev knust på de angivne tidspunkter efter infektion og bakterielle tællinger blev bestemt ved udpladning. Hvert datapunkt repræsenterer middelværdien og standardafvigelsen for bakterielle tællinger fra 10 grupper af 10 larver. Larver døde omkring 48 timer efter indsprøjtning, når bakterielle koncentrationer nåede 10 9 / g.

Figur 3
Figur 3. Synergi af sporer og Cry1C toksin krystaller som en evaluering af patogenicitet i G. mellonella larver efter oral indtagelse 10. G. mellonella larvee blev oralt inficeret med enten Cry1C toxin krystaller (1 ug pr larve), eller med 10 6 B. thuringiensis sporer, eller med en blanding af Cry1C toksin og B. thuringiensis sporer. Larver mortalitet blev vurderet efter 48 timer ved 25 ° C.

Figur 4
Figur 4 Oral infektion af larver:. Kolonisering og vævslokalisering af bakterier. (A) 10 pi af blå farveopløsning blev indført ved tvangsfodring i munden på en G. mellonella larve. Larven blev dissekeret for at afsløre tarmen fyldes med det blå farvestof. (B) En blanding af Bt 407-stammen og Cry1C toksin blev indført i G. mellonella larver ved tvangsfodring. Efter 24 timer var hele larver paraffinindlejret, snittet og fikseret. Histologiske langsgående snit blev farvet (hematoxylin & eosin og Gram belastende). Den lysmikroskopisk fotografi (400X) viser tarmen (mørklilla) og Gram farvede Bacillus (mørk violet) lokaliseret ved den intestinale overflade. (C) En blanding af Bt 407-GFP fluorescens-stamme og Cry1C toksin blev indført i G. mellonella larver ved tvangsfodring. Efter 24 timer har bakterierne nået haemocoel og insektet døde krop fyldt med B. cereus, der udtrykker grønt fluorescerende protein. (D) Analyse af Ilsa ekspression in vivo 25. Mikroskopiske bemærkninger ved epifluorescens blev udført på B. cereus transporterer pHT315-pilsA'gfp. Bakterierne blev isoleret fra hemocoel af døde larver 24 timer efter oral infektion. Grønne bakterier indikerer ekspression af GFP som følge af aktivering af Ilsa promotoren. Dette viser den specifikke ekspression af dette gen (ILSA), når bakterierne har nået haemocoel.

Movie 1. Spredning af opløsning i insektets tarmen efter oral indtagerion. 10 pi af blå farveopløsning blev indført ved tvangsfodring i munden af den europæiske majsborer Ostrinia nubilalis larver. Farvestoffet hurtigt fyldes i den intestinale lumen i insektlarver. se filmen .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Anvendelsen af ​​insekter og især larvestadiet, som infektionsmodeller for flere patogener, bliver er hyppige. En model af valg for nogle aspekter er Drosophila (flue model), der anvendes som både voksne og larvestadiet 1,2. Den lepidopteran insekt G. mellonella er også anvendes primært til analyse bakteriel virulens ved injektion. Fordelen ved at tolerere højere temperaturer (over 37 ° C) end Drosophila (maks. 25 ° C) er vigtigt, når pattedyr patogener skal undersøges. Også størrelsen af Galleria er mere bekvemt for at studere infektion kinetik og vævsskader. Endelig vores protokol beskriver muligheden for at anvende Galleria til oral infektion, hvilket er en fordel til undersøgelser vedrørende fordøjelseskanalen. Tilsvarende er larvestadiet af en anden stor caterpillar, Manduca sexta, anvendes til at undersøge infektioner ved injektion i haemocoel og senere til oral smitte 26.B. mori og Spodoptera arter, som genomer sekventeret 27 også tilbyde spændende alternativer, og værtsgener kan blive lukket ned af RNAi metoder eller andre gen manipulationer 28. Her beskriver vi på en enkel måde, hvordan man kan opfostre Galleria larver, hvordan man kan inficere dem, og nogle eksempler på, hvordan at følge infektionen processen og score dødelighed for at vise potentialet af disse modeller.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklæret.

Acknowledgments

Vi vil gerne takke Elisabeth Guillemet, Christophe Buisson og Ludovic Bridoux for fremragende teknisk bistand. Vi er i stor gæld til Sylvie Salamitou og Sinda Fedhila for den oprindelige system setup.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Wax and pollen La Ruche Roanaise 303000 Any honey producer
Automated syringe pump KD Scientific KDS 100
Syringe 1 ml Terumo BS 01T
Needle 0.45 x 12 mm Terumo NN 2613R
Petri dish 5 cm VWR 89000-300
Needle 30G, 25 mm hypodermic Burkard Mfg. Co. Ltd. PDE0005

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annu. Rev. Immunol. 25, 697-743 (2007).
  2. Vodovar, N., Acosta, C., Lemaitre, B., Boccard, F. Drosophila: a polyvalent model to decipher host-pathogen interactions. Trends Microbiol. 12, 235-242 (2004).
  3. Dalhammar, G., Steiner, H. Characterization of inhibitor A, a protease from Bacillus thuringiensis which degrades attacins and cecropins, two classes of antibacterial proteins in insects. Eur. J. Biochem. 139, 247-252 (1984).
  4. Jander, G., Rahme, L. G., Ausubel, F. M. Positive correlation between virulence of Pseudomonas aeruginosa mutants in mice and insects. J. Bacteriol. 182, 3843-3845 (2000).
  5. Purves, J., Cockayne, A., Moody, P. C., Morrissey, J. A. Comparison of the regulation, metabolic functions, and roles in virulence of the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase homologues gapA and gapB in Staphylococcus aureus. Infect. Immun. 78, 5223-5232 (2010).
  6. Chadwick, J. S. Serological responses of insects. Fed. Proc. 26, 1675-1679 (1967).
  7. Chadwick, J. S., Caldwell, S. S., Chadwick, P. Adherence patterns and virulence for Galleria mellonella larvae of isolates of Serratia marcescens. J. Invertebr. Pathol. 55, 133-134 (1990).
  8. Gao, W., et al. Two novel point mutations in clinical Staphylococcus aureus reduce linezolid susceptibility and switch on the stringent response to promote persistent infection. PLoS Pathog. 6, e1000944 (2010).
  9. Peleg, A. Y., et al. Reduced susceptibility to vancomycin influences pathogenicity in Staphylococcus aureus infection. J. Infect. Dis. 199, 532-536 (2009).
  10. Salamitou, S., et al. The plcR regulon is involved in the opportunistic properties of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus in mice and insects. Microbiology. 146, 2825-2832 (2000).
  11. Cadot, C., et al. InhA1, NprA and HlyII as candidates to differentiate pathogenic from non-pathogenic Bacillus cereus strains. J. Clin. Microbiol. 48, 1358-1365 (2010).
  12. Rejasse, A., et al. Temperature-dependent production of various PlcR-controlled virulence factors in Bacillus weihenstephanensis strain KBAB4. Appl. Environ. Microbiol. 78, 2553-2557 (2012).
  13. Jones, R. T., et al. Photorhabdus adhesion modification protein (Pam) binds extracellular polysaccharide and alters bacterial attachment. BMC Microbiol. 10, 141 (2010).
  14. Finney, D. J. Probit analysis. Cambridge University Press. (1971).
  15. Fedhila, S., Nel, P., Lereclus, D. The InhA2 metalloprotease of Bacillus thuringiensis strain 407 is required for pathogenicity in insects infected via the oral route. J. Bacteriol. 184, 3296-3304 (2002).
  16. Guillemet, E., et al. The InhA metalloproteases of Bacillus cereus contribute concomitantly to virulence. J. Bacteriol. 192, 286-294 (2010).
  17. Nielsen-LeRoux, C., Gaudriault, S., Ramarao, N., Lereclus, D., Givaudan, A. How the insect pathogen bacteria Bacillus thuringiensis and Xenorhabdus/Photorhabdus occupy their hosts. Curr. Opin. Microbiol. 15, 1-12 (2012).
  18. Bottone, E. J. Bacillus cereus, a volatile human pathogen. Clin. Microbiol. Rev. 23, 382-398 (2010).
  19. Stenfors Arnesen, L., Fagerlund, A., Granum, P. From soil to gut: Bacillus cereus and its food poisoning toxins. FEMS Microbiol. Rev. 32, 579-606 (2008).
  20. Lecadet, M., Blondel, M. O., Ribier, J. Generalized transduction in Bacillus thuringiensis var. berliner 1715, using bacteriophage CP54. Ber. J. Gen. Microbiol. 121, 203-212 (1980).
  21. Sanchis, V., Agaisse, H., Chaufaux, J., Lereclus, D. Construction of new insecticidal Bacillus thuringiensis recombinant strains by using the sporulation non-dependent expression system of cryIIIA and a site specific recombination vector. J. Biotechnol. 48, 81-96 (1996).
  22. Tran, S. L., Guillemet, E., Gohar, M., Lereclus, D., Ramarao, N. CwpFM (EntFM) is a Bacillus cereus potential cell wall peptidase implicated in adhesion, biofilm formation and virulence. J. Bacteriol. 192, 2638-2642 (2010).
  23. Tran, S. L., et al. Hemolysin II is a Bacillus cereus virulence factor that induces apoptosis of macrophages. Cell Microbiol. 13, 92-108 (2011).
  24. Fedhila, S., et al. Comparative analysis of the virulence of invertebrate and mammalian pathogenic bacteria in the oral insect infection model Galleria mellonella. J. Invertebr. Pathol. 103, 24-29 (2010).
  25. Daou, N., et al. IlsA, a unique surface protein of Bacillus cereus required for iron acquisition from heme, hemoglobin and ferritin. PLoS Pathog. 5, e1000675 (2009).
  26. Mason, K. L., et al. From commensal to pathogen: translocation of Enterococcus faecalis from the midgut to the hemocoel of Manduca sexta. MBio. 2, e00065-00011 (2011).
  27. Goldsmith, M. R., Shimada, T., Abe, H. The genetics and genomics of the silkworm, Bombyx mori. Annu. Rev. Entomol. 50, 71-100 (2005).
  28. Fraser, M. J. Insect transgenesis: current applications and future prospects. Annu. Rev. Entomol. 57, 267-289 (2012).
The Insect<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftfuld Infektion modellen til bakteriel patogenese
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).More

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter