Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Böcek doi: 10.3791/4392 Published: December 11, 2012

Summary

Büyük bal mumu güvesi larvalarının Ağız ve intra haemocolic enfeksiyonu

Abstract

Bakteriyel ölümcüllüğün çalışması genellikle uygun bir hayvan modeli gerektirir. Enfeksiyon Memeli modelleri pahalı ve etik sorunlar doğurabilir. Enfeksiyon modelleri olarak böceklerin kullanımı değerli bir alternatif sunuyor. Bu tür nematod gibi diğer non-omurgalı modeli ana karşılaştırıldığında, böcekler antimikrobiyal savunma nispeten gelişmiş sisteme sahip ve böylece daha fazla memeli enfeksiyon süreci ile ilgili bilgi üretmek olasıdır. Memeliler gibi, böcekler karmaşık bir doğuştan gelen bağışıklık sistemi 1 sahiptirler. Hemolimf hücreler mikrobik işgalciler phagocytosing veya encapsulating yeteneğine sahiptir ve hümoral yanıtlar lizozim ve küçük antibakteriyel peptidler 2,3 indüklenebilir üretimini içermektedir. Buna ek olarak, görevdeş böcek larva sindirim sistemleri ve memeli sindirim sistemi bağırsak hücrelerinin epitelyal hücreleri arasında bulunur. Son olarak, hücre adezyonu, direnç olarak bakteriyel enfeksiyon süreci için gerekli birkaç temel bileşenlerantimikrobiyal peptidler, doku bozulması ve oksidatif strese adaptasyon böcekler ve memeliler 1 hem de önemli olması muhtemeldir. Böylece, böceklerin memeli enfeksiyonlar dahil Mikrobiyal virulans faktörlerinin belirlenmesi ve tanımlanması için çok değerlikli araçlardır.

Büyük bal mumu güvesi Galleria mellonella larvaları gibi Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris gibi memeli mantar (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) ve bakteriyel patojenler içeren mikrobiyal enfeksiyonlar, geniş bir yelpazede patogenezinde dair yararlı bir içgörü sağlamak için gösterilmiştir , Serratia Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes ve Enterococcus faecalis 4-7. Ne olursa olsun bakteri türlerinin, sonuçlar manikür yoluyla direkt enjeksiyonu ile enfekte Galleria larvaları ile tutarlı simi olanlar ile korele eldelar memeli çalışmaları: memeli modelleri zayıflatılmış olan bakteri suşları Galleria düşük virulans göstermek ve ciddi insan enfeksiyonlarına yol açan suşların Galleria modeli 8-11 oldukça kışkırtıcı. Galleria Oral enfeksiyon, belirli toksinler gibi, çok daha az kullanılan ve bileşikler ilave edilir mortalite ulaşmak için ihtiyaç vardır.

G. mellonella larvaları mevcut birçok teknik avantajları: böylece bakteri tanımlanmış dozlarda enjeksiyonu sağlayan, (pupa devresi öncesi son evre larvaları yaklaşık 2 cm uzunluğunda ve ağırlığı 250 mg vardır) nispeten büyük; 20 (değişik sıcaklıklarda yetiştirilen olabilir ° 30 ° C-C) ve enfeksiyon çalışmalar, bir memeli ortam taklit deneyler sağlar, 37 ° C üstünde 12,13 ile 15 ° C arasında yürütülebilir. Buna ek olarak, böcek yetiştirme basit ve nispeten ucuz. Larvaların Enfeksiyon çeşitli yollarla, includin bakteriyel virülans izleme sağlarLD 50 14 g hesaplanması, bakteriyel sağkalım 15,16 ve enfeksiyon süreci 17 muayene ölçümü. Burada, G. tüm yaşam evrelerinde kapsayan, böceklerin yetiştirme tarif mellonella. Oral ve intra haemocoelic: Biz inokülasyon iki güzergah enfeksiyonu ayrıntılı bir protokol sağlar. Bu protokolde kullanılan bakteri örnek Bacillus cereus, mide-bağırsak yanı sıra diğer ağır lokal ya da sistemik fırsatçı enfeksiyonlar 18,19 karışmış bir Gram pozitif patojendir.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Böcek Yetiştirme

Yumurtadan son evre larvalar için tüm döngü 25 ° C'de yaklaşık 5 hafta sürer Bir ya da 2 hafta daha yetişkin kelebekleri elde etmek için gereklidir.

  1. En az 100 pupa veya yeni birleştirilen yetişkin G. yerleştirin 5 litrelik tel örgü kafes mellonella kelebekler. Erkek kelebekleri 10 ila 15 mm ölçer. Yetişkin erkek güve soluk ışık ve koyu işaretler ile bej olduğunu. 20 mm çapında Dişi kelebekler ölçüsüdür. Dişiler kahverengi / gri renk ile erkeklerden daha koyu vardır.
  2. Yumurta-döşenmesi için kafes içinde dört katmanlı kağıt, iki paket süspanse edin. 2 gün sonra, erişkin dişi kağıtları arasındaki kenarında yumurtalarını olacaktır.
  3. Haftada iki kez, polen ve arı balmumu içeren, hava sirkülasyonu izin ızgaraları ile yeni plastik yetiştirme kutularında yumurta kağıt paketlerini yerleştirin. Yumurtalar yaklaşık 3 gün içinde yumurtadan ve küçük larva balmumu ve polen beslenerek gelişmeye başlar. Alternatif olarak, yapay larva bir diyet consistin yerleştirilebilir500 g sıvı bal, gliserin 400 g, 100 g kurutulmuş bira mayası, 250 g buğday unu, 200 g yağsız süt tozu ve 400 g polenta bir karışımı g. Larva başına gıda uygun oranı sağlamak için, düzenli olarak yeni kutular içine larva ayırmak ve her iki günde bir yiyecek doldurmak.
  4. Larva larva stadyum altı aşamalarında yetiştirilir. Her bir stadyum larva baş kapsül kayması ile karakterize edilir. Larvalar pupa devresi önceki son aşamaya ulaşmak zaman, onlar besleme durdurmak ve hafif ipek kozası oluşturmaya başlayabilirsiniz.
  5. Onların koruyucu koza içinde, larva dinlendirir ve pupa haline dönüştürmek. Wax solucanlar erişkin kelebekleri ortaya bir iki hafta için pupa kalır. Yetişkin güveler içki de yemem. Çiftleşme oluşur ve balmumu solucanlar 'yaşam döngüsü tekrar başlar.
  6. Patoloji testi standardize etmek için, son larva aşamasında larvaları alır. Bu aşamada onlar besleme durdurmak, yetiştirme kutusunun kapağını taşımak ve ipek üretmeye başlarlar. Bu stage 5 gün civarında sürer.

2. Enfeksiyon için Böcek Seçimi

  1. Enfeksiyonlar öncesi son dönem ağırlığı 2-3 cm uzunluğunda ve 180-250 mg olan larva, 24 saat seçin ve onları açlıktan boş bir kutu içine koymak.
  2. Larvaları etrafında doğmakta ipek kozası çıkarın.

3. Bakteriyel Hazırlık

  1. Kob / ml 1x10 8 kob / yenmesi için ml (kob elde etmek için 10 4 koloni oluşturan birim (cfu) / ml 'den 10 8 kob / intra haemocoelic enjeksiyon ml ve 3x10 6 arasında değişen nihai konsantrasyonlar elde etmek için Bacillus bakteriyel süspansiyonlar hazırlayın bir LD 50) bakteri türlerine bağlıdır. Bizim durumumuzda, B. cereus 'un Luria-Bertani broth ortamda yetiştirilir (LB, 10 g / L tripton, 5 g / l maya ekstresi, 10 g / l NaCl) 37 ° C' de karıştırma altında kadar büyüme eğrilme karşılık gelen durağan faz girmesi eğrisi. OD 600 nm (ölçünB. 1 ila 2 cereus) ve daha önceden yapılmış titrasyon eğrisi kullanarak bakteriyel konsantrasyon değerlendirmek için kullanabilirsiniz. Oda sıcaklığında ve fosfat içinde tekrar süspansiyon 10 dakika için 5000 x g'de santrifüj ile hasat bakteriler (: 1M KH 2 PO 4, 1M K 2 HPO 4, 5M NaCl, pH 7.2 PBS) Tamponlu Tuzlu. Her bir larva istenen konsantrasyonda bakteriyel süspansiyon 10 ml alır.
  2. Alternatif olarak, spor süspansiyonu enfeksiyon için hazırlanabilir. Sporlanma orta HCT (5 g / L tripton, 2 g / L kazein hidrolizat, 12.5 mM K 2 HPO 4, 12.5 mM MgSO4, 0.05 mM MnSO 4, 1.2 mM ZnSO 4, 1.2 mM Fe kültür bakterileri tarafından sporların Edinme 2 (SO4) 3,% 0.5 H2 3 gün süre ile 30 ° C 'de, 25 mM CaCl2) 20, 4 SO. Hasat santrifüj tarafından sporların (10,000 xg, 15 dk), ve steril distile su içinde iki kez yıkayın. Spor pel süspanseKalan vejetatif bakteriler kaldırmak için 78 az 15 dakika ° C için steril distile su ve ısı sağlar. LB agar plaklarına seri dilüsyonları kaplama ile süspansiyon numaralamak. Her bir larva istenen konsantrasyonda spor süspansiyonu 10 ml alır.

4. Toksin Hazırlık Cry

  1. B. Cry1C toksin hazırlayın thuringiensis suşu 407, geninin kodlama Cry1C taşıyan plazmid pHTF31C 21 ile dönüştürülebilir. 30 100 ml HCT ortam içinde kültür suşu ° ile 72 saat süre ile tam sporlanma C, kültür yüzey maddesinde kristal toksin üretimi ve kurtuluş sağlamak için (eritromisin 10mg/ml) antibiyotik.
  2. 72% -79% sakkaroz degradede süpernatantı kristalleri arındırın. İlk olarak, bir 40 ml tüp içinde% 79 sakaroz 17 ml eklenir. % 79 sakkaroz üstüne% 72 sakkaroz dikkatlice tabakası 17 ml. Son olarak, katman 5-6 10X konsantre sporlu kültür ml tüp kapatın. 20,00 az 14 saat boyunca tüp Santrifüj0 xg, 4 ° C, sporlar kristaller ayırmak için. Degrade arayüzü kristalleri toplayın. Yıkamak için 25 ml soğuk steril su içinde kristal pelet yeniden süspanse edin. 20 dakika için 8000 x g'de santrifüjleyin. Bu adım, kristaller yapışmasını tüm sakaroz çıkarmak için üç kez tekrarlanır. 5 ml steril su içinde yeniden süspanse edin ve kristallerin saflığı değerlendirmek için mikroskop altında dikkate alınmalıdır.
  3. 50 mM NaOH içinde presolubilized kristal çözüm üzerinde klasik Bradford boyama ile toksin protein konsantrasyonu değerlendirin. Toksin kristaller, kullanılıncaya kadar -20 ° C'de muhafaza edilebilir.

5. Enjektör Hazırlık

  1. Hassas enjeksiyon hacmi kontrol etmek için, 1 ul / sn (Şekil 1A) kurulum hızı ile otomatik şırınga pompası (örn. KD Scientific KDS 100) kullanın.
  2. 300 ul su ile 1 ml derialtı şırınga veya 20-25 larva enfeksiyon bakteri solüsyonu (koşul başına 1 şırınga) doldurun. Dikkatle ta tarafından kabarcıklarını çıkarınşırınga pping, daha sonra şırınga ile bir 0.45 x 12 mm iğne ekleyin.
  3. Enjektör içinde enjektör yerleştirin.
  4. Enjekte ses seviyesini kontrol etmek boş bir tüp içinde 10 ul boş bir enjeksiyon gerçekleştirin.

6. Böcek Intrahaemocoelic Enjeksiyon

  1. Başparmak ve işaret parmağı arasında elle böcek yerleştirin. Sonra Larva deri (epiderm) (Şekil 1C) olarak enjektör sabit iğne takın.
  2. 10 ul bakteriyel solüsyonu (spor veya vejetatif bakteriler) enjekte ederken yerde böcek tutun.
  3. Dikkatlice iğne böcek çıkarın.
  4. Küçük bir Petri kabı (çapı 5 cm), tabak başına 5 larvaları enfekte böcek yerleştirin.
  5. Her bir deneysel koşul için en az 20 larva Infect.
  6. 48 saat için bir kuluçka makinesi içinde 37 ° C 'de bulaşık yerleştirin.

7. Böcek Kuvvetleri Besleme (Yutma)

  1. 2 ml Eppendorf tüp, 0.2 mikrogram / & m mixu; ya da spor veya vejetatif hücre süspansiyonu ile Cry1C toksin l 3x10 4 ila 10 ul başına 1x10 7 arasında değişen nihai konsantrasyonlar elde edilmiştir.
  2. 20-25 larva enfeksiyon için bakteriyel-Cry1C toksin çözelti 300 ul, bir 30G ile 25 mm hipodermik iğne bir 1 ml'lik şırınga doldurun. Şırıngadan kabarcıklarını çıkarın.
  3. Elle yüzden onun ağzından iğne (Şekil 1D) enjektör sabit ve otomatik şırınga pompası kullanılarak bakteri solüsyonu 10 ml ile zorla beslemek girdiği böcek yerleştirin.
  4. Her bir deneysel koşul için en az 20 larva Infect.
  5. Küçük 5 cm Petri kabı (tabak başına 5 larva) olarak enfekte böcek yerleştirin. 48 saat için bir kuluçka makinesi içinde 37 ° C 'de bulaşık yerleştirin.

8. Kayıt ve böceklerin ölüm

  1. Zorla besleme veya enjeksiyon deneylerden sonra, 25 gıda olmadan Petri kabındaki larvalar tutmak ° C veya 37 ° C Larva mo Giriş48 saat süre boyunca düzenli rtality. Ölü larvalar inerttir ve genellikle siyah (Şekil 1B) çevirin.
  2. Mortalite verileri log-probit programı 14 kullanılarak analiz edilebilir. Bu program doz ölüm eğrileri doğrusallık testleri ve öldürücü doz (LD 50) sağlar. Alternatif olarak, Prism (Grafik Pad), sağkalım analiz veya mortalite verileri gibi diğer programlar, kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

G. içine bakteri içi enjeksiyon haemocoelic mellonella birçok insan patojenleri doğuştan gelen bağışıklık faktörleri doku hasarına ve direniş ile ilgili birçok virülans faktörlerinin tanımlanması için çok yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bir örnek olarak, Şekil 2a, b, çeşitli doz enjeksiyonundan sonra Böcek ölümleri temsil eder cereus bakterisi (yabani tip ve mutant suşlar) 22. Şekil 2B G. enfeksiyon sonrası bakteriyel sağkalım temsil Pseudomonas aeruginosa 4 ile mellonella.

B. için oral bir enfeksiyon modeli olarak Galleria kullanımı cereus ve B. thuringiensis Cry1C toksin 10 insektisidal aktivite vejetatif bakteri veya sporların sinerjik etki değerlendirmesine dayanır. Larvalar spor / toksin karışımı yenmesi duyarlıdır ancak Cry1 yenmesi zayıf bir şekilde duyarlıYalnız C toksin. Bakteri sonra sepsis larva ölüm sonuçlar bağırsak engellerin dökümünü izleyen haemocoel ulaştı. Şekil 3 kristalleri alımından sonra larva ölümü temsil eder ve yabani türü veya Bacillus 10 mutant suşlar ya.

Kaç bakteri Galleria oral enfeksiyon için test edilmiştir. Insan patojenleri, B. test Arasında Cry1C toksin cereus suşları G. için en şiddetli idi ağız enfeksiyonu 24 sonra mellonella. Bu yöntem, enfeksiyon / mide bağırsak kolonizasyon izlemek için kullanılabilir. Şekil 4'te gösterildiği gibi, aslında larva sindirim yolu enfeksiyonu sonrası elde edilebilir, ve konak hücre değişiklik yapılması gibi bakteri kolonize histolojik kesitler üzerinde görüntülenebilir. Buna ek olarak, floresan bakterilerin yeme yörünge ve kolonizasyon pro takip etmek için kullanılabilirlarvaların farklı bölmeleri boyunca girilmesini sağlar. Son olarak, çeşitli böcek bölümlerinde bir genin spesifik ifade floresan mikroskobu 25 ile izlenebilir.

Şekil 1
Şekil 1. (A) Automated şırınga pompası enjektör. (B) Ölü (siyah, üst) ve canlı (alt, beyaz) G. mellonella larvaları. (C) Bakteri G. haemocoel enjekte edilir mellonella larvaları. (D) G. mellonella larvaları bakteriyel hazırlanması ile zorla beslenen vardır: iğne böcek larvalarının ağzına girer.

Şekil 2,
Şekil 2. Içi haemocoelic enjeksiyonu sonrası sonuçları. G. karşı (A) CwpFM virülans mellonella larvaları 22. B. farklı konsantrasyonlarda cereus wild-tipi (Bt 407) ve ΔcwpFM mutant suşlar 20 G. haemocoel ekildi mellonella larvaları. Mortalite 37 ° C de 24 saat sonra kaydedilmiştir G. Pseudomonas aeruginosa PA14 enfeksiyon (B) Zaman kursu mellonella 4. Larva başına yirmi beş bakteri sıfır anındaki enjekte edildi. Larva belirtilen zaman noktalarında sonrası enfeksiyon da ezildi ve bakteri sayımı kaplama ile belirlenmiştir. Her veri noktası 10 larva 10 grup bakteriyel sayar ortalama ve standart sapmasını temsil etmektedir. Bakteri konsantrasyonları 10 9 / g ulaştığında Larva, enjeksiyondan sonra yaklaşık 48 saat öldü.

Şekil 3
Şekil 3. G. patojenite değerlendirilmesi gibi sporlar ve Cry1C toksin kristallerinin Sinerji Oral alımından sonra 10 mellonella larvaları. G. mellonella larvaE sözlü Cry1C toksin kristallerinin (larva başına 1 mg) ya bulaşmış veya 10 6 B. ile yapıldı thuringiensis sporları veya Cry1C toksin ve B. karışımı ile thuringiensis sporları. Larva ölümleri 25 ° C'de 48 saat sonra değerlendirildi

Şekil 4,
Şekil 4 larva Oral enfeksiyonu:. Kolonizasyonu ve bakteri doku yerelleştirme. (A) mavi boya çözeltisi 10 ul Bir G. ağzına zorla besleme tarafından tanıtıldı mellonella larva. Larva mavi boya ile dolu bağırsak ortaya diseke edildi. (B) Bt 407 zorlanma ve Cry1C toksin karışımı G. girmiştir zorla besleyerek mellonella larvaları. 24 saat sonra, bütün larva parafin, gömülü kesip sabit. Histolojik boyuna kesitler (hematoksilen & Eosine ve Gram ıkınma) boyandı. Işık mikroskobik fotoğraf (400X) gut (koyu mor) gösterir ve Gram boyama Bacillus (koyu mor) bağırsak yüzeyinde lokalize. (C) Bt karışımı 407-Gfp floresan zorlanma ve Cry1C toksin G. girmiştir zorla besleyerek mellonella larvaları. 24 saat sonra, bakteriler haemocoel ulaştı ve böcek kadavra B ile doldurulur Yeşil floresan proteini ifade cereus. In vivo 25 Ilsa ifade (D) Analiz. Epifloresans tarafından Mikroskobik gözlemler B. yapıldı pHT315-pilsA'gfp taşıyan cereus. Bakteriler ağız enfeksiyonu sonrasında ölü larva 24 hr hemocoel izole edilmiştir. Yeşil bakteri Ilsa promotör aktivasyonu nedeniyle GFP ifade etmektedir. Bu, bakterilerin haemocoel ulaştığı bu gen (Ilsa) belirli ifadesini gösterir.

Film 1. Yutmayın Oral takiben böcek gut çözüm Yayılmaiyon. Mavi boya solüsyonu 10 ml Mısır kurdu Ostrinia nubilalis larva ağzına zorla besleme tarafından tanıtıldı. Boya hızla böcek larvalarının bağırsak lümeni doldurur. filmi görmek için buraya tıklayın .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Böceklerin ve özellikle larva olarak kullanımı, birçok patojen enfeksiyon modelleri olarak, sık hale gelmektedir. Bazı yönleri için seçim modeli yetişkin ve larva aşamasında 1,2 ikisi olarak kullanılan Drosophila (sinek modeli) olduğunu. Lepidopteran böcek G. mellonella, aynı zamanda esas olarak enjeksiyon yoluyla bakteriyel virülans test edilmesi için kullanılmıştır. Memeli patojenlere çalışılan yok edilmesi gerektiği zaman, Drosophila daha yüksek sıcaklıklarda (37 ° C üstü) (en fazla 25 ° C) tolere avantaj önemlidir. Ayrıca Galleria boyutu enfeksiyon kinetiği ve doku hasarı incelemek için daha uygundur. Son olarak, iletişim kuralı, sindirim sistemi ile ilgili araştırmalar için bir avantaj, ağız enfeksiyonları, Galleria için kullanma imkanı açıklanmaktadır. Benzer şekilde, bir başka büyük tırtıl, Manduca Sexta, larval dönem ağız enfeksiyonu 26 daha yakın haemocoel içine enjeksiyonla enfeksiyonları incelemek için kullanılır ve.B. mori ve 27 dizilerek genomları Spodoptera türler, ayrıca ilginç alternatifler sunmak ve ana genler RNAi yöntemleri veya diğer gen manipülasyonu 28 tarafından kapatıldı olabilir. Burada, nasıl Galleria larva, onları nasıl bulaştırmak için ve bu modellerin potansiyelini göstermek için enfeksiyon süreci ve skoru mortalite nasıl izleyeceğiniz konusunda bazı örnekler yetiştirmek için basit bir yolu, tarif.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Biz mükemmel teknik yardım Elisabeth Guillemet, Christophe Buisson ve Ludovic Bridoux teşekkür etmek istiyorum. Biz ilk sistem kurulumu için Sylvie Salamitou ve Sinda Fedhila büyük ölçüde borçlu.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Wax and pollen La Ruche Roanaise 303000 Any honey producer
Automated syringe pump KD Scientific KDS 100
Syringe 1 ml Terumo BS 01T
Needle 0.45 x 12 mm Terumo NN 2613R
Petri dish 5 cm VWR 89000-300
Needle 30G, 25 mm hypodermic Burkard Mfg. Co. Ltd. PDE0005

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annu. Rev. Immunol. 25, 697-743 (2007).
  2. Vodovar, N., Acosta, C., Lemaitre, B., Boccard, F. Drosophila: a polyvalent model to decipher host-pathogen interactions. Trends Microbiol. 12, 235-242 (2004).
  3. Dalhammar, G., Steiner, H. Characterization of inhibitor A, a protease from Bacillus thuringiensis which degrades attacins and cecropins, two classes of antibacterial proteins in insects. Eur. J. Biochem. 139, 247-252 (1984).
  4. Jander, G., Rahme, L. G., Ausubel, F. M. Positive correlation between virulence of Pseudomonas aeruginosa mutants in mice and insects. J. Bacteriol. 182, 3843-3845 (2000).
  5. Purves, J., Cockayne, A., Moody, P. C., Morrissey, J. A. Comparison of the regulation, metabolic functions, and roles in virulence of the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase homologues gapA and gapB in Staphylococcus aureus. Infect. Immun. 78, 5223-5232 (2010).
  6. Chadwick, J. S. Serological responses of insects. Fed. Proc. 26, 1675-1679 (1967).
  7. Chadwick, J. S., Caldwell, S. S., Chadwick, P. Adherence patterns and virulence for Galleria mellonella larvae of isolates of Serratia marcescens. J. Invertebr. Pathol. 55, 133-134 (1990).
  8. Gao, W., et al. Two novel point mutations in clinical Staphylococcus aureus reduce linezolid susceptibility and switch on the stringent response to promote persistent infection. PLoS Pathog. 6, e1000944 (2010).
  9. Peleg, A. Y., et al. Reduced susceptibility to vancomycin influences pathogenicity in Staphylococcus aureus infection. J. Infect. Dis. 199, 532-536 (2009).
  10. Salamitou, S., et al. The plcR regulon is involved in the opportunistic properties of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus in mice and insects. Microbiology. 146, 2825-2832 (2000).
  11. Cadot, C., et al. InhA1, NprA and HlyII as candidates to differentiate pathogenic from non-pathogenic Bacillus cereus strains. J. Clin. Microbiol. 48, 1358-1365 (2010).
  12. Rejasse, A., et al. Temperature-dependent production of various PlcR-controlled virulence factors in Bacillus weihenstephanensis strain KBAB4. Appl. Environ. Microbiol. 78, 2553-2557 (2012).
  13. Jones, R. T., et al. Photorhabdus adhesion modification protein (Pam) binds extracellular polysaccharide and alters bacterial attachment. BMC Microbiol. 10, 141 (2010).
  14. Finney, D. J. Probit analysis. Cambridge University Press. (1971).
  15. Fedhila, S., Nel, P., Lereclus, D. The InhA2 metalloprotease of Bacillus thuringiensis strain 407 is required for pathogenicity in insects infected via the oral route. J. Bacteriol. 184, 3296-3304 (2002).
  16. Guillemet, E., et al. The InhA metalloproteases of Bacillus cereus contribute concomitantly to virulence. J. Bacteriol. 192, 286-294 (2010).
  17. Nielsen-LeRoux, C., Gaudriault, S., Ramarao, N., Lereclus, D., Givaudan, A. How the insect pathogen bacteria Bacillus thuringiensis and Xenorhabdus/Photorhabdus occupy their hosts. Curr. Opin. Microbiol. 15, 1-12 (2012).
  18. Bottone, E. J. Bacillus cereus, a volatile human pathogen. Clin. Microbiol. Rev. 23, 382-398 (2010).
  19. Stenfors Arnesen, L., Fagerlund, A., Granum, P. From soil to gut: Bacillus cereus and its food poisoning toxins. FEMS Microbiol. Rev. 32, 579-606 (2008).
  20. Lecadet, M., Blondel, M. O., Ribier, J. Generalized transduction in Bacillus thuringiensis var. berliner 1715, using bacteriophage CP54. Ber. J. Gen. Microbiol. 121, 203-212 (1980).
  21. Sanchis, V., Agaisse, H., Chaufaux, J., Lereclus, D. Construction of new insecticidal Bacillus thuringiensis recombinant strains by using the sporulation non-dependent expression system of cryIIIA and a site specific recombination vector. J. Biotechnol. 48, 81-96 (1996).
  22. Tran, S. L., Guillemet, E., Gohar, M., Lereclus, D., Ramarao, N. CwpFM (EntFM) is a Bacillus cereus potential cell wall peptidase implicated in adhesion, biofilm formation and virulence. J. Bacteriol. 192, 2638-2642 (2010).
  23. Tran, S. L., et al. Hemolysin II is a Bacillus cereus virulence factor that induces apoptosis of macrophages. Cell Microbiol. 13, 92-108 (2011).
  24. Fedhila, S., et al. Comparative analysis of the virulence of invertebrate and mammalian pathogenic bacteria in the oral insect infection model Galleria mellonella. J. Invertebr. Pathol. 103, 24-29 (2010).
  25. Daou, N., et al. IlsA, a unique surface protein of Bacillus cereus required for iron acquisition from heme, hemoglobin and ferritin. PLoS Pathog. 5, e1000675 (2009).
  26. Mason, K. L., et al. From commensal to pathogen: translocation of Enterococcus faecalis from the midgut to the hemocoel of Manduca sexta. MBio. 2, e00065-00011 (2011).
  27. Goldsmith, M. R., Shimada, T., Abe, H. The genetics and genomics of the silkworm, Bombyx mori. Annu. Rev. Entomol. 50, 71-100 (2005).
  28. Fraser, M. J. Insect transgenesis: current applications and future prospects. Annu. Rev. Entomol. 57, 267-289 (2012).
Böcek<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bakteriyel Patogenez İnceleyecek Güçlü Enfeksiyon Model olarak
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).More

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter