Summary
טכניקה ניסויית לטיפול בפגמי osteochondral במפרק הברך של הארנב מתוארת. ההשתלה של תאי גזע מזנכימיים אלוגניות לפגמי osteochondral מספקת פיתוח מבטיח בתחום הנדסת רקמות. הכנת הפיברין-תא קרישים
Protocol
הכנת א ארנב תורם לבידוד של תאי גזע mesenchymal (חדר ניתוח)
- תאים מבודדים מזכר לבן (NZW) ארנבי ניו זילנד בגיל 4 חודשים וכ 3 ק"ג משקל גוף.
- לגרום הרדמה פרופופול על ידי (10 מ"ג / ק"ג משקל הגוף ד) ותקריב עם נתרן pentobarbital (משקל גוף מ"ג / ק"ג 100 ד).
- לגלח את הפרווה מגפיים אחוריות, גב ובטן עם גוזז חשמלי ולשאוב את הפרווה.
- לחטא את האזור המגולח ביסודיות עם אתנול 70%.
- השתמש במלקחיים בוטים, מספריים חדים (או סכין מנתחים) וחותכים לרקמת עצם ורצועות.
- עושה חתך לאורך משטח הגולגולת של הרגל והעגל.
- משקף עור ורקמה התת עורית או על ידי נתיחה חדה או קהה.
- שרירים ורצועות נפרדים מעצם השוק וירך. שמור על קיצוצים כקרובים לעצם ככל האפשר כדי להפוך את חיתוך נקי. אל תפריד בין עצם ירך מעצם השוק בשלב זה.
- חותכים through מפרק הירך להפריד את ראש עצם הירך ממרחשת.
- לרומם מורכב השוקה-הירך.
- השתמש בלהב סכין המנתחים כדי לגרד את כל רקמות רכות שנותרו מהעצמות או לשפשף את העצמות עם רקמות בד סטריליים. בשלב זה, עצם הירך ועצם השוק עדיין מחוברות.
- הסר את פיקת הברך על ידי חיתוך, ואז לחתוך רצועות מפרק הברך לעצמות נפרדות סוף סוף.
- ספריי הופרדו עצמות עם 70% אתנול, לתת אוויר יבש ולמקם כל עצם לתוך צינור צנטריפוגה 50 מ"ל עם תרבית תאים בינוניות (DMEM + 1% פניצילין סטרפטומיצין / (עט / סטרפטוקוקוס)) כדי לשמור עליהם לח.
- לעבור עכשיו מתחת למכסת מנוע מינרית סטרילי תרבית תאי זרימה.
ב 'פלאשינג של MSC ארנב מעצמות והרחבה (הוד תרבות תאים)
- לאסוף עצמות מצינורות ולמקם אותם לתוך 150 מנות מ"מ באמצעות מלקחיים סטריליים.
- להסיר גם עצם מסתיים עם מסור סטרילי וחתיכות לעבור למנות חדשות 150 מ"מ.
- ממלאי מזרק 10 מ"ל עם Mediאום (DMEM), לצרף מחט מד 18 ולהכניס לתוך הפתח של מח העצם.
- לאחר מכן, יש לשטוף את חלל מח עם מדיום כדי לשטוף את מח העצם לתוך הצלחת. לאחר מכן, יש לשטוף מהקצה השני, אם אפשר. במידת צורך, ראה את יותר מהקצוות. אם צריכה לשבור עצמות, פשוט לשטוף את החלק הפנימי של העצם.
- לשאוב השעיה מדיום סלולרי לתוך המזרק ולשטוף את מח העצם שוב ושוב עד שההשעיה היא צף חופשי דרך חלל מח העצם ולא עצם נוסף מח קרישים יופיעו.
- ברגע שמוח עצם שנאסף מכל העצמות, לשבש את גושי מח על ידי עובר דרך מחט מד 18: למלא מזרק עם המחט מחוברת ולאלץ החוצה לתוך מדיום.
- לאחר מכן, לסנן את ההשעיה דרך פילטר תא לתוך צינור 50 מ"ל. על מנת למנוע אובדן תא, לשטוף 2x צלחת התרבות עם מדיום 10 מ"ל ולסנן גם כן.
- צנטריפוגה השעיה על XG 500 במשך 5 דקות ב RT.
- הסר supernatant ו resuspend התא פלet במדיום 10 מ"ל (עט% + 1 / סטרפטוקוקוס DMEM).
- תאי דם נפרדים מתאי דם היקפיים (mononuclear PBMC) ותאי גזע mesenchymal (MSC) באמצעות פתרון הפרדת Biocoll.
- מלא 5 מ"ל של Biocoll הפרדת פתרון לתוך שפופרת 15 מ"ל ולהוסיף 5 מ"ל של השעיה תא בזהירות על גבי וצנטריפוגות ב XG 800 עבור 20 דקות ב RT (ללא בלמים).
- תוצאות אפשריות ראו איור 1: צפוף יותר מאשר להיות Biocoll, דם משקע תאים אדום בתחתית ואילו תאי גזע PBMC וmesenchymal להישאר בממשק.
- בזהירות להסיר את הממשק לתוך צינור 15 מ"ל ולשטוף עם 5 מ"ל PBS.
- צנטריפוגה כמתואר בשלב 22, resuspend ב 5 מ"ל PBS ולחזור על 2-3x.
- ואז, שוב בצנטריפוגה XG 350 עבור 10 דקות ב RT (עם בלמים).
- Resuspend במדיום 10 מ"ל ולספור תאים בhemocytometer.
- פלייט תאים בצפיפות זריעה ראשונית של כ 5 x 10 6 מנות ב -150 מ"מ.
- לאחר 2-3 ימים, מחדשלהעביר תאים שאינם חסיד. ייתכן שתצטרך לשטוף עם PBS הראשון על מנת להסיר תא פסולת. הוסף בינונית מלא טרי (DMEM + עגל עוברי 10% בסרום (FCS) + 1% עט / סטרפטוקוקוס) לאחר מכן.
- להאכיל את תאים כל 3-4 ימים (איור 2).
- לאחר 5-10 ימים, מעבר התאים בפעם הראשונה.
הכנת ג קרישי הפיברין במבחנה
- ביום של השתלה, לשחרר תאים חסיד מצלוחיות / מנות על ידי חשיפת 3 דקות-0.25% טריפסין-EDTA. תפסיק trypsinization ידי הוספה בינונית מלאה.
- הפץ תאים בצינור פלקון 50 מ"ל ולשטוף אותם פעמיים עם PBS.
- לקבוע כדאיות תא ומספרים על ידי צביעת trypan הכחולה.
- הוסף 50,000 תאים / צינור microcentrifuge ולאסוף כדורים על ידי צנטריפוגה בXG 500 במשך 5 דקות ב RT. הכן mastermix לקריש אחד לפחות יותר במידת צורך.
- Resuspend התא גלולה ב 17 PBS μl ולערבב 25 μl של הרכיב של פיברינוגן TissuCOL-קיט עם ההשעיה MSC μl זה 17.
- קח צלחת סטרילית עם חורים שנקדחו מראש (3x3.6 מ"מ) בהתאם לחורי מקדח in vivo (איור 3).
- ראשית, לחסן 4 פתרון תרומבין μl (500 IU / מ"ל) לתוך חור אחד, ואחריו תוספת מיידית של 42 שוב 4 פתרון תרומבין μl על גבי תאי פיברינוגן השעיה וμl. אין לערבב את ההשעיה, כדי למנוע קרישה בקצה פיפטה. ראשית, נפח μl 50 של פיברינוגן-תא ההשעיה pipetted יבלוט שפה של החורים שנקדחו מראש ללא מסה בשל מתח הפנים. עם זאת, לאחר קרישה מלאה (לאחר 60 דקות) הקריש הוא מתכווץ ונכנס לתוך החור שנקדח מראש.
- הסר את הקריש באמצעות מלקחיים בזהירות ומקום קהים לתוך צינור microcentrifuge עם PBS. להכין 2 קרישים / בעלי חיים.
- קח את קרישים לחדר הניתוח.
ההשרשה ד תאי גזע mesenchymal אלוגנאית בקרישי הפיברין
- לגרום הרדמה לארנב (NZW, זכר, 3.5-4.0 ק"ג משקל גוף, ישן 5-6 חודשים) על ידי הזרקה של IV פרופופול (10 משקל גוף מ"ג / ק"ג).
- לגלח את הברך להיות מופעלת על עם גוזז חשמלי וואקום הפרווה. כל ההליכים בשם לפני שמבוצעים בחדר ניתוח בהכנה, כדי למנוע זיהום של סביבת סטרילית של חדר הניתוח.
- לאחר אינטובציה, לשמור על הרדמה עם 1.5 מ"ג / ק"ג / דקה propofol ו0.05 מ"ג / ק"ג / פנטניל דקות לוריד. לפקח הרדמה באמצעות capnography, oximetry דופק ודופק.
- לחטא את הברך מגולח ביסודיות ולכסות את שאר ארנב עם רוטב סטרילי.
- למשש את פיקת הברך ולבצע חתך בעור המדיאלי לפיקת הברך.
- פתח את מפרק הברך על ידי arthrotomy parapatellar המדיאלי בתנאים סטריליים. נסו להימנע מחיתוך כל כלי דם שטחיים קטנים.
- לעקור את פיקת הברך רוחבית (איור 4).
- לאחר inspection של מפרק הברך לכל נגעי סחוס נלווים או סטיות משותפות, ליצור שני פגמי osteochondral (3 מ"מ עמוק, דמות בצורת שמונה) בחריץ trochlear עם מקדחת הפעלה אוויר סטרילי (3.6 מ"מ קוטר) עם עצירה-מכשיר (איור 5).
- נקה את הפגמים ולשטוף אותם עם תמיסת מלח סטרילית.
- לפני ההשתלה, למלא 20 μl של דבק הפיברין לפגמים ולהפיץ אותם באופן שווה על החלק התחתון של הפגם.
- ואז להשתיל את קרישי עיתונות מצויד לתוך הפגם בצורת שמונה הדמות.
- לאחר קרישה, מיקום מחדש של הפיקה בתוך חריץ trochlear ולכופף ולמתוח את הברך כמה פעמים.
- לעקור את פיקת הברך רוחבית שוב ולבדוק אם פיברינוגן לתא, לקרישים עדיין נמצאים במקום.
- החלף את פיקת הברך שוב ולסיים את המבצע עם סגירת פצע בשכבות עם תפרי כפתור אחת (Vicryl 4-0) ותפר עורית רציף (Monocryl 4-0) (שניהם עם תפר נספגחומר).
- לבסוף, לאטום את הפצע עם תרסיס הלבשה חדירה לאדי מים.
- לטיפול שלאחר ניתוח, הפצע הוא בדק ביום למשך 7 ימים. הארנבונים מקבלים לשיכוך כאבים שלאחר ניתוח Carprofen 4 מ"ג / ק"ג SC כל 24 שעות (במשך 4 ימים) וBuprenorphin 0.03 מ"ג / ק"ג SC כל 12 שעות (עבור 2.5 ימים). ייצוב של הברך (רוטב למשל) הוא לא הכרחי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הטכניקה כירורגית תאר מאפשרת בידוד מוצלח והשתלה של תאי גזע מזנכימיים אלוגניות לפגם osteochondral מלאכותי. ההתקנה הניסיונית הביאה לשילוב מוצלח של השתל לתוך הסחוס שמסביב.
הפגם היה מלא על ידי רקמת תיקון עם מאפיינים דומים biomechanical ועמידות דומה בהשוואה לסחוס שמסביב. הפיברין-תא הקריש הוכן במבחנה על צלחת סטרילית עם חורים שנקדחו מראש, אשר היו באותו גודל כמו פגם osteochondral (איור 3). כתוצאה מכך, לא היו בין בתרי קריש הפיברין המושתל והסחוס שמסביב, אשר יהיה גורם סיכון להתנוונות מוקדם או delamination (איור 6). ריפוי בסיסי של רקמת התיקון היה להבטיח כי עצם subchondral היה חדר, ובכך פעל נגד גז. היבט חשוב נוסף היה Stif fness של רקמת התיקון, שאמורה להתאים את רקמת הסחוס הבריא שמסביב, כדי למנוע עומס מוגבר עליו והתנוונות מוקדמת אפשרית. בניסויים הראשוניים שלנו (מידע לא מוצג), הראינו כי לאחר 12 שבועות יכולים כבר להיות מושגת קשיחות מספקת. יתר על כן, משטח שלם ואחיד של ההשתלה נמצא, שהקטין את מאמץ גזירה ונזק אפשרי שתל (איור 6).
איור 1. הפרדת תאי דם והפלזמה מPBMCs וMSCs באמצעות פתרון הפרדת Biocoll.
איור 2. Monolayer של תאי גזע mesenchymal (ניו זילנד ארנב לבן) לאחר 5 ימים בתרבות.
בתוך מספר עמודים = "תמיד"> 
איור 3. צלחת סטרילית עם חורים שנקדחו מראש (3x3.6 מ"מ) ראש אחד להיות מלא הפיברין-תא קריש דם.
איור 4. נפתח מפרק הברך לאחר arthrotomy parapatellar המדיאלי.
איור 5. פגמי Osteochondral (3 מ"מ עמוק, בקוטר 3 מ"מ, בצורת ספרה שמונה) בחריץ trochlear.
איור 6. 12 שבועות נפתחו מפרק הברך לאחר ההשתלה של שני הפיברין לתא, לקרישים לשני פגמי osteochondral שנקדחו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בשנים האחרונות, את האפשרות של טיפול במומים מורכבים מפרק osteochondral - כגון אלה הנובעים מdissecans osteochondritis, נמק וטראומה - עם הנדסת רקמות גישות הפכה ליותר ויותר אטרקטיבי. בגופים פתולוגיים שהוזכרו קודם לכן, נזק לרקמות משתרעת על עצם subchondral וכוללת שתי רקמות המתאפיינות ביכולות ריפוי פנימיות שונות 1. יש עניין גובר בתפקידה של עצם subchondral לתהליכים פתוגניים של נזק במפרק osteochondral 11,23. התנאים התפקודיים של סחוס במפרק והעצם התומך אותה מחוברים בחוזקה. פציעות של רקמות או משפיעות על הסביבה מכאנית, כמו גם את מצב האיזון של 24 משותפים כולו לרעה. שינויים ביחידת osteochondral באמצעות הפרעה מכאנית של תנועה משותפת, היווצרות גוף רפויה, בלאי מכאני בתא המעורב ותשה שלהיריב משטחים עלולה להוביל להתפרצות מוקדמת של דלקת מפרקים ניוונית ופיתוח 1,11. לכן, גישות להנדסת רקמות ההתחדשות של פגמי osteochondral צריכים להיות מלווה בשיקום נאות של עצם subchondral הבסיסי כדי לשפר את האיחוד היעיל עם רקמות הסובבים מארחות 2. נראים תאי גזע mesenchymal להיות מקור תא אידיאלי על מנת לספק דרישות ספציפיות אלה של תיקון osteochondral. הפרוטוקול מדגיש את הקידום של עצם ושיקום רקמת סחוס על ידי פוטנציאל גרימת הבידול סלקטיבי של תאי הגזע המושתלים בmesenchymal שושלות osteogenic וchondrogenic.
בהשוואה לכונדרוציטים, יש תאי גזע mesenchymal כמה יתרונות עיקריים: ניתן לבודדם בקלות ממוח עצם, רקמת שומן synovialis וללא כל תחלואת צד תורם גדולה יותר. תאי גזע mesenchymal אינם מבחינים בהרחבה במבחנהלכן יכול להיות התרבות התרחב במספרים גדולים לטיפול בפגמי סחוס במפרק גדול. יתר על כן, נראה שהם מדכאים את מערכת חיסון ו-- בתגובה לגירויים מתאימים - יכול להתמיין לכונדרוציטים וosteocytes 25,26. עוד יתרון מרשים של תאי גזע mesenchymal מציג hypoimmunity שלהם, מה שאומר שתאי גזע mesenchymal אלוגניות ניתן להשתמש בו ללא כל סימן של תגובת דחיית 27. לכן, תאי בריכת מאחד או שניים בעלי חיים יכולה להיות תורמים מספיק לכל הניסויים. פעולה זו מפחיתה את הזמן ונזק נוסף לבעלי החיים.
מספר ניסויים הראו תוצאות מבטיחות בשימוש בדבק הפיברין לתיקון osteochondral 19,20. בדרך כלל, החיסון של פיברינוגן-תא ההשעיה עם פתרון תרומבין תואר כפי שנעשה באתרו הליך, ישירות לתוך נגעי osteochondral המלאכותיים. לאחר תקופה קצרה של זמן של טרום קרישה (אחרי כמה דקות) המבצע מסתיים בדרך כלל על ידי העברת פיקת הברך וסגירת פצע.
בכמה מבחני טייס, התברר לנו שלקרישה מספקת של הפיברין-תא ההשעיה זה לוקח יותר מ -60 דקות באתרו -. במהלך המבצע - זה כמעט בלתי אפשרי לחכות יותר מ -60 דקות לכל הקרישה. יתר על כן, על ידי שימוש בצלחת סטרילית עם חורים שנקדחו מראש לדמות את נגעי osteochondral, ניתן היה להראות כי כמות דבק הפיברין, ששמשה מן הסתם כדי למלא את הפגם לחלוטין, לא מספיק הייתה בשל התכווצות של קריש ההתקשות . זה דורש נפח גבוה יותר של דבק הפיברין מראש על מנת להשיג מילוי חופף ומלא של הפגם. ביצוע הכנת הקריש במבחנה ניתן להתאים בקלות את צורת המבנה לגודל המתאים של פגם קדח ולכן, מלא את פגם osteochondral לחלוטין וcongruently.
בנוסף,n במבחנה הכנת קרישים הסלולריים מונעת דליפה של הדבק אבל (רק לאחר כמה דקות) לא הפיברין-תא השעיה מוקשה באופן מלא. לכן, ניתן להבטיח את זה שנועד בתחילה הנפח יישאר בפגם ויתחיל עם שילוב סחוס ושיפוץ.
הטכניקה המתוארת מאפשרת שיטה סטנדרטית למחקר בתאי גזע ניסיוני בתחום של תיקון osteochondral. הפרוטוקול מספק דרך לשחזור לבודד תאי גזע mesenchymal כדי להשתילם מחדש מאוחר יותר בפגמי סחוס osteochondral של מפרק ברכו של הארנב. כונדרוציטים אוטולוגית כבר מושתלים לתוך פגמי osteochondral בפיברין תאי מודל 19. שימוש במבחנה מודל של הכנת קריש כמו גם תאי גזע mesenchymal במקום כונדרוציטים נראה כי גישה חדשה יותר יתרון ומבטיח לשיפוץ ותיקון של נגעי osteochondral.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
פרויקט זה מומן על ידי אגודת המחקר הגרמני (מענק HE 4578/3-1) וחלקו על ידי האיחוד האירופי FP7-הפרויקט "גמבה" NMP3-SL-2010-245,993.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Biochrom AG | F 0415 | |
| FCS | PAN Biotech GmbH | 0401 | |
| Propofol | Fresenius Kabi | ||
| Penicillin/Streptomycin | Biochrom AG | A 2210 | 1,000 units/10 μg/μl in 0.9% NaCl |
| PBS Dulbecco (1X) | Biochrom AG | L1815 | |
| Ethanol (70%) | Merck KGaA | 410230 | |
| Trypan Blue Solution (0.4%) | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Biocoll Separation Sol. | Biochrom AG | L6115 | Isotonic solution Density: 1,077 g/ml |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Invitrogen GmbH | 25300-054 | |
| Fentanyl | DeltaSelectGmBH | 1819340 | |
| NaCl solution (0.9%) | BBraun | 8333A193 | |
| Syringes (Injekt) | BBraun | 4606108V | |
| Needles (Sterican) | BBraun | 4657519 | |
| Forceps (blunt/sharp) | Aesculap | ||
| Scissors | Aesculap | ||
| Scalpels | Feather Safety Razor Co | 02.001.30.022 | |
| Pipettes research | Eppendorf | ||
| Bone Cutter | Aesculap | ||
| Tissue culture dishes 100 mm/150 mm | TPP AG | 93100/93150 | Growth area 60.1 mm2/147.8 mm2 |
| Tissue culture flasks 25/75 mm2 | TPP AG | 90025/90075 | 25 mm2, 75 mm2 |
| Centrifuge Tubes (50 ml) | TPP AG | 91050 | Gamma-sterilized |
| CO2 Incubator | Forma Scientific Inc. | ||
| Cell culture laminar flow hood Hera Safe | Heraeus Instruments | ||
| Sterile saw | Aesculap | ||
| Centrifuge Megafuge 2.0 R | Heraeus Instruments | ||
| Hemocytometer | Brand GmbH+Co KG | 717810 | Neubauer |
| Air operated power drill | Aesculap | ||
| TISSUCOL-Kit 1.0 ml Immuno | Baxter | 2546648 | |
| Fibers (4-0 Monocryl, 4-0 Vicryl) | Ethicon | ||
| Spray dressing (OpSite) | Smith&Nephew | 66004978 | Permeable for water vapor |
References
- Kon, E., et al. Novel nano-composite multilayered biomaterial for osteochondral regeneration: a pilot clinical trial. The American Journal of Sports Medicine. 39, 1180-1190 (2011).
- Kon, E., et al. Orderly osteochondral regeneration in a sheep model using a novel nano-composite multilayered biomaterial. Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 28, 116-124 (2010).
- Hangody, L., et al. Autologous osteochondral grafting--technique and long-term results. Injury. 39, 32-39 (2008).
- Marcacci, M., et al. Arthroscopic autologous osteochondral grafting for cartilage defects of the knee: prospective study results at a minimum 7-year follow-up. The American Journal of Sports Medicine. 35, 2014-2021 (2007).
- Ochs, B. G., et al. Remodeling of articular cartilage and subchondral bone after bone grafting and matrix-associated autologous chondrocyte implantation for osteochondritis dissecans of the knee. The American Journal of Sports Medicine. 39, 764-773 (2011).
- Aurich, M., et al. Autologous chondrocyte transplantation by the sandwich technique. A salvage procedure for osteochondritis dissecans of the knee. Unfallchirurg. 110, 176-179 (2007).
- Williams, R. J. 3rd, Ranawat, A. S., Potter, H. G., Carter, T., Warren, R. F. Fresh stored allografts for the treatment of osteochondral defects of the knee. The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 89, 718-726 (2007).
- Szerb, I., Hangody, L., Duska, Z., Kaposi, N. P. Mosaicplasty: long-term follow-up. Bull. Hosp. Jt. Dis. 63, 54-62 (2005).
- Brittberg, M., et al. Treatment of deep cartilage defects in the knee with autologous chondrocyte transplantation. N. Engl. J. Med. 331, 889-895 (1994).
- Peterson, L., Vasiliadis, H. S., Brittberg, M., Lindahl, A. Autologous chondrocyte implantation: a long-term follow-up. Am. J. Sports Med. 38, 1117-1124 (2010).
- Gomoll, A. H., et al. The subchondral bone in articular cartilage repair: current problems in the surgical management. Knee Surg. Sports Traumatol. Arthrosc. 18, 434-447 (2010).
- Steinhagen, J., et al. Treatment of osteochondritis dissecans of the femoral condyle with autologous bone grafts and matrix-supported autologous chondrocytes. Int. Orthop. 34, 819-825 (2010).
- Guo, X., et al. Repair of large articular cartilage defects with implants of autologous mesenchymal stem cells seeded into beta-tricalcium phosphate in a sheep model. Tissue Eng. 10, 1818-1829 (2004).
- Centeno, C. J., et al. Increased knee cartilage volume in degenerative joint disease using percutaneously implanted, autologous mesenchymal stem cells. Pain Physician. 11, 343-353 (2008).
- Niederauer, G. G., et al. Evaluation of multiphase implants for repair of focal osteochondral defects in goats. Biomaterials. 21, 2561-2574 (2000).
- Nagura, I., et al. Repair of osteochondral defects with a new porous synthetic polymer scaffold. J. Bone. Joint Surg. Br. 89, 258-264 (2007).
- Schlichting, K., et al. Influence of scaffold stiffness on subchondral bone and subsequent cartilage regeneration in an ovine model of osteochondral defect healing. The American Journal of Sports Medicine. 36, 2379-2391 (2008).
- Schagemann, J. C., et al. Cell-laden and cell-free biopolymer hydrogel for the treatment of osteochondral defects in a sheep model. Tissue Engineering. Part A. 15, 75-82 (2009).
- Vogt, S., et al. The influence of the stable expression of BMP2 in fibrin clots on the remodelling and repair of osteochondral defects. Biomaterials. 30, 2385-2392 (2009).
- Schillinger, U., et al. A fibrin glue composition as carrier for nucleic acid vectors. Pharm. Res. 25, 2946-2962 (2008).
- Ahmed, T. A., Giulivi, A., Griffith, M., Hincke, M. Fibrin glues in combination with mesenchymal stem cells to develop a tissue-engineered cartilage substitute. Tissue Engineering. Part A. 17, 323-335 (2011).
- Haleem, A. M., et al. The Clinical Use of Human Culture-Expanded Autologous Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Transplanted on Platelet-Rich Fibrin Glue in the Treatment of Articular Cartilage Defects: A Pilot Study and Preliminary Results. Cartilage. 1, 253-261 (2010).
- Pape, D., Filardo, G., Kon, E., van Dijk, C. N., Madry, H. Disease-specific clinical problems associated with the subchondral bone. Knee Surg Sports Traumatol. Arthrosc. 18, 448-462 (2010).
- Shirazi, R., Shirazi-Adl, A. Computational biomechanics of articular cartilage of human knee joint: effect of osteochondral defects. Journal of Biomechanics. 42, 2458-2465 (2009).
- Jorgensen, C., Gordeladze, J., Noel, D. Tissue Engineering through autologous mesenchymal stem cells. Curr. Opin. Biotechnol. 15, 406-410 (2004).
- Chen, F. H., Tuan, R. S. Mesenchymal stem cells in arthritic diseases. Arthritis Res. Ther. 10, 223 (2008).
- Le Blanc, K., Tammik, C., Rosendahl, K., Zetterberg, E., Ringden, O. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells. Exp. Hematol. 31, 890-896 (2003).
