Summary
और एक उपन्यास के रूप में luciferase vivo इमेजिंग सिस्टम (IVIS) में उपयोग करने के लिए रोग endpoints की पहचान पहले क्लिनिकल घटनाक्रम होने का मतलब है. IVIS हमें वास्तविक समय में कई दिनों से अधिक encephalitic वायरस के आक्रमण कल्पना करने के लिए, भविष्य के अध्ययन के लिए एक और अधिक सटीक रोग मॉडल प्रदान करने के लिए अनुमति दी गई है. यह भी हमें antivirals और टीकों की संभावित सुरक्षात्मक सुविधाओं की पहचान करने के लिए वर्तमान में उपयोग किया पशु मॉडल की तुलना में तेजी से करने के लिए अनुमति दी गई है. कई बार बिंदुओं पर व्यक्तिगत जानवरों का उपयोग करने की क्षमता कम पशु आवश्यकताओं, लागत, और रोग के अध्ययन के लिए एक अधिक मानवीय और अधिक वैज्ञानिक साधन सुनिश्चित करने का उपयोग जानवरों के लिए समग्र रुग्णता सुनिश्चित करता है.
Abstract
आधुनिक इमेजिंग तकनीक में प्रगति के आगे विकास और वायरल अनुसंधान पूरा रास्ते में शोधन प्रोत्साहित करते हैं. शुरू में ह्यूम 3Rs में रसेल और Burch द्वारा प्रस्तावित (प्रतिस्थापन, शोधन कमी), वैज्ञानिक अनुसंधान के क्षेत्र में पशु मॉडल का उपयोग जानवर के उपयोग को कम करने, जबकि वैज्ञानिक सटीकता और गति में सुधार करने के लिए नए तरीकों की पहचान के लिए निरंतर दबाव के तहत है. ह्यूम प्रिंसिपलों के लिए एक बड़ी चुनौती है, लेकिन कैसे सुनिश्चित करने के लिए अध्ययन के सांख्यिकीय सही कर रहे हैं, जबकि पशु रोग रुग्णता और कुल संख्या को कम करने. वैक्सीन प्रभावकारिता के अध्ययन वर्तमान में पशुओं की एक बड़ी संख्या की आवश्यकता है क्रम में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण माना जा और अक्सर उच्च और प्रतिरक्षा संरक्षण के पहचान के लिए रुग्णता और मृत्यु दर endpoints में परिणाम. हम एक जुगनू bioluminescent एंजाइम के साथ संयोजन के रूप में vivo इमेजिंग सिस्टम (IVIS) में उपयोग करने के लिए उत्तरोत्तर एक खिलाडि़यों द्वारा केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) के आक्रमण को ट्रैकएक murine मॉडल में phalitic वायरस. आमतौर पर, रोग अपेक्षाकृत धीरे प्रगति, लेकिन वायरस प्रतिकृति तेजी से है, CNS के भीतर विशेष रूप से, और एक बार है, घातक परिणाम के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. TC83 ल्यूक के साथ चूहों के intranasal संक्रमण के बाद, एक तनु विनीज़वीलियन घोड़े इन्सेफेलाइटिस वायरस तनाव luciferase जीन व्यक्त संशोधित, हम मस्तिष्क के भीतर नैदानिक रोग के लक्षणों के विकास से पहले कम से कम तीन दिनों वायरस प्रतिकृति कल्पना कर सकते हैं. एक कुंजी encephalitic रोग विकास endpoint हम जल्दी TC83 ल्यूक संक्रमण के खिलाफ चिकित्सीय और टीका सुरक्षा की पहचान पहले नैदानिक लक्षण विकसित कर रहे हैं के रूप में उपयोग CNS आक्रमण. IVIS तकनीक के साथ हम दवा चिकित्सा विज्ञान और टीकों की तेजी और सटीक परीक्षण दिखाना है जबकि पशु संख्या और रुग्णता को कम करने में सक्षम हैं.
Protocol
1. पशु तैयारी
- पशु आगमन: पशु जैव सुरक्षा स्तर 2 (ABSL2) की सुविधा के लिए आगमन पर, जानवरों 2 दिनों की एक न्यूनतम करने के लिए अपने नए वातावरण के लिए acclimate की अनुमति. इस आराम की अवधि के बाद, पशुओं का निरीक्षण करने के लिए उनके स्वास्थ्य और समग्र शारीरिक उपस्थिति का मूल्यांकन.
- जब फ्लोरोसेंट संवाददाताओं से यह महत्वपूर्ण है कि एक एक प्रकार का पौधा जो पशुओं के चारे के काम में आता है मुक्त आहार पर सभी पशु विषयों जगह सैनिक autofluorescence और पृष्ठभूमि संकेत की राशि की सीमा का उपयोग.
- जानवरों दाढ़ी: bioluminescent इमेजिंग दौरान कपाल क्षेत्र से पता चला संकेत में सुधार, सभी जानवरों के सिर दाढ़ी. ऑक्सीजन गैस का एक मिश्रण के साथ पशुओं anesthetize और isoflurane vaporized. एक बार जानवरों पूरी तरह से anesthetized हैं, बिजली कतरनी का उपयोग करने के लिए उनके सिर दाढ़ी. हजामत बनाने के साथ एक बार समाप्त होने पर, अपने पिंजरों के लिए पशुओं को लौटने और संज्ञाहरण के प्रभाव से पूरी तरह ठीक होने के लिए निरीक्षण.
- जैव स्वास्थ्य अधिकारी डाटासिस्टम्स (BMDS) ट्रांसपोंडर (चूहों की हजामत बनाने के बाद जगह ले जबकि जानवरों को पूरी तरह से anesthetized हैं) प्रविष्टि: एक कम आक्रामक का मतलब के लिए तापमान प्रत्यारोपण को ट्रैक करने के लिए एक preprogrammed BMDS वायरलेस ट्रांसपोंडर प्रत्येक माउस के पश्चप्रदेश में subcutaneously. इन ट्रांसपोंडर वायरलेस पहचान और तापमान रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देते हैं. ट्रांसपोंडर का आरोपण के बाद घाव को एक पशु चिकित्सा ग्रेड चिपकने ऊतक लागू होते हैं.
- आधारभूत संग्रह: संक्रमण से पहले, एक आधारभूत और सभी जानवरों के लिए तापमान रिकॉर्ड, वजन. पट्टिका कमी रेट्रो कक्षीय खून बहाना (आरओ) के माध्यम से निराकरण परीक्षण विश्लेषण (PRNT) के लिए रक्त एकत्र जबकि चूहों संज्ञाहरण के तहत कर रहे हैं. रक्त संग्रह के बाद संभावित माध्यमिक बैक्टीरियल संक्रमण को कम करने के लिए लागू करने के लिए पशु चिकित्सा एंटीबायोटिक आँख मरहम. इस आधारभूत संग्रह विचार के साथ बार जानवरों संज्ञाहरण के तहत चूहों पर तनाव के कारण रखा जाता है की संख्या को पूरा किया जाना चाहिए. भविष्य आरओ संग्रहHould इमेजिंग के बाद पूरा किया जाना है, जबकि माउस संवेदनाहारी के तहत अब भी है. अधिकतम एक आरओ से एकत्र रक्त के 200 μl के आसपास होना चाहिए.
- संक्रमण: संज्ञाहरण के तहत जगह चूहों के रूप में पहले से वर्णित है. Intranasal 5x10 6 से 7 5x10 TC83-luciferase pfu 40 फास्फेट द्वारा पतला μl की कुल मात्रा में की एक खुराक का उपयोग मार्ग के माध्यम से टीका लगाना intranasal संक्रमण के माध्यम से खारा (पीबीएस) buffered. संक्रमण के बाद, उनके आवास पिंजरे के भीतर चूहों जगह और वसूली निरीक्षण.
2. पशु इमेजिंग
अस्वीकरण: उनके आवास की इकाई, जैव सुरक्षा कैबिनेट, (बीएससी) या सभी समय पर XIC रोकथाम बॉक्स के भीतर चूहों रखें. इस प्रोटोकॉल के लिए मंजूरी दे दी BSCs एक द्वितीय श्रेणी के प्रकार B1 या B2 हैं.
- Intraperitoneal Luciferin (आईपी) के शरीर के वजन के प्रति ग्राम 15 मिलीग्राम / एमएल के एक एकाग्रता में 10 μl के साथ सभी जानवरों इंजेक्षन.
- Ampligen प्राप्त चूहों को injecte हो रहे हैं12.5 मिलीग्राम / किग्रा -4 घंटा पोस्ट के संक्रमण या 48 घंटा पोस्ट संक्रमण उनके समूह पर आधारित में शरीर के वजन की एक खुराक पर आईपी.
- Luciferin साथ इंजेक्शन से पहले तीन के समूहों में चूहों को अलग करने के लिए रोकथाम XIC-3 बॉक्स के भीतर एक उचित फिट सुनिश्चित.
- सभी इमेजिंग प्रक्रिया के दौरान कॉर्निया के सुखाने को रोकने के लिए, नेत्र मरहम / स्नेहक का उपयोग.
- खोलें LivingImage सॉफ्टवेयर और प्रेस इनिशियलाइज़ इमेजिंग बॉक्स तैयार, सेट ऑटो बचत, जोखिम ऑटो के लिए समय (ऑटो LivingImage सॉफ्टवेयर 3.2 और नए की एक नई सुविधा है पर जोखिम समय), सी के लिए क्षेत्र को देखने के लिए, और फिल्टर को खोलने के लिए, क्षेत्र देखने के आप इमेजिंग चूहों की संख्या पर आधारित है, और फिल्टर अनुकूलित किया जा सकता है के रूप में अन्य इमेजिंग परियोजनाओं के लिए की जरूरत है.
- इस बात की पुष्टि करें कि हवा लकड़ी का कोयला फिल्टर नहीं समाप्त हो गई है, ऑक्सीजन टैंक भरा है, और isoflurane जलाशय भर जाता है. मैं XIC-3 में बिजली के टेप के छोटे स्ट्रिप्स प्लेसsolation बॉक्स है जो इमेजिंग के दौरान पशु आंदोलन को कम करने के साथ मदद करता है.
- Luciferin आईपी के साथ चूहों के रूप isoflurane प्रेरण कक्ष (साथ ढक्कन खोला) के भीतर 2.1 अनुभाग और जगह में 3-5 मिनट के लिए वर्णित इंजेक्षन.
- 5 मिनट के बाद, प्रेरण चैम्बर के ढक्कन बंद करें और isoflurane के प्रवाह शुरू. संवेदनाहारी लगभग 3-5% से कम ऑक्सीजन का प्रवाह दर सेट के साथ लगभग 2.0 एल / मिनट पर संचालित है. एक बार पूरी तरह से बेहोश एक अतिरिक्त 30 सेकंड रुको और अलगाव XIC-3 बॉक्स चूहों स्थानांतरण. सुनिश्चित करें कि जैव सुरक्षा कैबिनेट का उपयोग किया जा रहा isoflurane के सुरक्षित सफाई के लिए अनुमति देता है, के रूप में इस प्रक्रिया isoflurane के प्रेरण कक्ष (IVIS इकाई अपने स्वयं के निष्क्रिय मेले कनस्तरों और रोकथाम XIC-3 बॉक्स सीधे / बाहर कुर्सियां को जोड़ता है से नुकसान शामिल होगी निहित चतनाशून्य करनेवाली औषधि के प्रवाह को सुनिश्चित करने के लिए).
- XIC-3 isoflurane संबंधक के साथ अलगाव बॉक्स एक संलग्न में चिप / समूह संख्या के आधार पर चूहों स्थानांतरणघ खोलने के लिए. चूहों ताकि वे बाहर sternal अवलंबन में धीरे टेप स्ट्रिप्स पर आराम के प्रमुखों के साथ रखी हैं स्थिति.
- नीचे इथेनॉल, स्प्रे cavicide साथ और XIC-3 के नीचे हाथ के साथ XIC रोकथाम बॉक्स पोंछ, और IVIS इमेजिंग चैम्बर के लिए स्थानांतरण. इमेजिंग यूनिट के अंदर एक बार रोकथाम बॉक्स संज्ञाहरण reconnect.
- बाद Luciferin के इंजेक्शन के बाद 10 मिनट, जीवित प्रतिमा और सॉफ्टवेयर के माध्यम से चूहों छवि.
- एक खुला फिल्टर के साथ प्रारंभिक इमेजिंग के बाद, एक DLIT तीन आयामी इमेजिंग अनुक्रम विश्लेषण और छवि bioluminescent जुगनू luciferase के लिए जादूगर सेटअप का उपयोग आरंभ. इस इमेजिंग प्रक्रिया 4-5 मिनट लेने के लिए और वांछित चूहों की संख्या के लिए प्रासंगिक देखने के क्षेत्र में पूरा किया जाना चाहिए.
- पूर्व vivo विश्लेषण संभव निम्न और मस्तिष्क की पोस्टमार्टम संग्रह है. मस्तिष्क को एक बाँझ पेट्री डिश पर रखें, भारतीय सैन्य अकादमी के भीतर शीर्ष पर 50-100 शेयर Luciferin की μl, और जगह ड्रिपबॉक्स ging.
- DLIT इमेजिंग के पूरा होने पर 15-17 मिनट के बाद संक्रमण में एक दूसरा खुला फिल्टर छवि को अंतिम रूप देने के. सुनिश्चित करें अनुक्रम विश्लेषण बंद हो गया है और दृश्य और फिल्टर के क्षेत्र में पिछली सेटिंग्स को लौट रहे हैं.
3. वापसी चूहे और डेटा विश्लेषण
- Isoflurane vaporizer मुड़ें और XIC रोकथाम बॉक्स जैव सुरक्षा कैबिनेट के लिए वापस हस्तांतरण.
- चूहों उनके आवास की इकाई के भीतर वापस प्लेस, ऊपर बंद करने के लिए, उचित और आवास रैक पर वापस निस्संक्रामक जगह के साथ बाहरी स्प्रे.
- सुनिश्चित करें चूहों को पूरी तरह से संज्ञाहरण से बरामद किया है.
- दोहराएँ उपरोक्त प्रक्रिया के रूप में प्रयोग की आवश्यकता है जब तक इमेजिंग पूरा कर लिया है.
- BSC कीटाणुरहित, नीचे उपकरण बंद है, और आगे के विश्लेषण के लिए एक बाहर प्रयोगशाला स्थान पर सभी डेटा स्थानांतरण.
- डेटा विश्लेषण और 3 आयामी IVIS परिणाम यूटीआई पर आधारित छवियों को उत्पन्नlizing LivingImage सॉफ्टवेयर.
- सुनिश्चित करें छवि ठीक से उन्मुख है और प्रकाश / रंग संतुलन सेट कर दिया जाता है. उपकरण पट्टी के भीतर विकल्पों में शामिल है छवि को समायोजित करने के लिए, सुधार, छवि सूचना, और ROI उपकरण.
- ROI ज़्यादा से ज़्यादा आकार का उपयोग करने के लिए विशिष्ट संकेत स्थान पर आधारित ताकत की पहचान है.
- सतह स्थलाकृति का पुनर्निर्माण माउस शरीर को उजागर करने के लिए, 3 डी DLIT पुनर्निर्माण इनिशियलाइज़, और रैखिक फिट का उपयोग करने के लिए स्थलाकृतिक पुनर्निर्माण के लिए अंग नक्शा सेट.
- इसके अलावा वायरल अनुमापन विश्लेषण रक्त और अंगों के संग्रह के माध्यम से पूरा किया जा सकता है. इस अध्ययन में अनुमापन संशोधित ईगल मध्यम (सदस्य) में मस्तिष्क के ऊतकों के homogenization के माध्यम से पूरा किया गया. homogenate serially और पतला था और हम एक 6 1 घंटा के लिए वेरो कोशिकाओं की अच्छी तरह से थाली संक्रमित. कोशिकाओं को एक 1.5% agarose/2xMEM ओवरले के साथ कवर किया गया है और 37 डिग्री पर 2 दिनों के लिए incubated. कोशिकाओं को 30 मिनट के लिए 10 formalin% के साथ तय किया गया और साथ दागक्रिस्टल बैंगनी.
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Representative Results
एक आनुवंशिक रूप से संशोधित वायरस के साथ, TC83-luciferase, हम bioluminescent सिग्नल की शक्ति में वृद्धि के रूप में देखा वायरस प्रतिकृति केंद्रीय CNS (1 चित्रा) में नाक क्षेत्र से चलता है. उच्च वायरल प्रतिकृति दर के कारण, हम bioluminescent संकेत के उच्च स्तर (2 चित्रा) वेक्टर और पशु वेक्टर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर निर्भर देखने की उम्मीद है. हम एक चोटी के लिए जारी रखने के लिए यह संकेत में वृद्धि की उम्मीद है, दिन 5-7 पोस्ट संक्रमण के बीच CNS भीतर वायरल प्रतिकृति चोटी (चित्रा 2B) के साथ संयोजन में. संकेत और वायरल शिखर के बाद, हम दोनों वायरल प्रतिकृति में एक कमी के कारण और luciferase जीन के एक नुकसान के कारण संकेत में कमी देखने की उम्मीद है. इन संकेत मूल्यों के साथ हम वायरल सिग्नल की शक्ति पर आधारित लोड यों करने में सक्षम होने की उम्मीद है, vivo विधि में एक प्रदान करने के लिए सही रूप में उत्तरोत्तर वृद्धि हो रही एक एकल पशु विशिष्ट में वायरल लोड की गणना आईसी TC83-luciferase.
टीकों और antiviral उपचार का विश्लेषण करने के लिए एक साधन के रूप में इस मॉडल का उपयोग, हम प्रभावोत्पादक bioluminescent संकेत में एक कमी के आधार पर उपचार के बीच एक अंतर का पता लगाने में सक्षम होने की उम्मीद है. TC83-luciferase के खिलाफ हमारे मामले में, हम संक्रमण से पहले आईपी (एक टोल की तरह रिसेप्टर agonist 3) Ampligen या तीन सप्ताह के टीकाकरण का उपयोग करने के लिए काफी वायरल संक्रमण और अध्ययन के दौरान bioluminescent संकेत (3 चित्रा) को कम कर सकते हैं. इस कमी सीधे CNS (नहीं दिखाया डेटा) के भीतर किया जा सकता है वायरल लोड में कमी करने के लिए सहसंबद्ध. एक रास्ते के रूप में करने के लिए पूरी तरह से विकसित और प्रौद्योगिकी कल्पना, IVIS सॉफ्टवेयर LivingImage bioluminescent (4 चित्रा) संकेत है जो हमें आसानी से ऊतक गहराई और संरचना के आधार पर उच्च वायरल प्रतिकृति के स्थानों की पहचान करने की अनुमति देता है की तीन आयामी चित्र बनाने के लिए सक्षम है.
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चित्रा 1. TC83-luciferase तीन C57BL / 6 चूहों IVIS इमेजिंग intranasal चुनौती TC83 luciferase और imaged के साथ 2 में, 4, 6, और 8 दिनों के बाद संक्रमण (डीपीआई) के माध्यम से संक्रमित थे. छवियाँ एक autoexposure लंबाई और खुले फिल्टर के साथ आईपी Luciferin इंजेक्शन के बाद किए गए थे. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 2 चूहों के दोनों उपभेदों Luciferin के 10 मिनट के बाद इंजेक्शन के एक देरी के साथ आईपी इंजेक्शन के बाद इसी तरह bioluminescent संकेत ताकत इमेजिंग (ए) के पहले पूरा कर लिया गया था. मस्तिष्क में वायरल लोड (ऊतक / pfu ग्राम) biolumiescent संकेत करने के लिए संक्रमण भर में एक मजबूत संबंध से पता चलता है (बी).
चित्रा 3. उपचार तुलना IVIS उपयोग TC83-luciferase C3H/HeN चूहों में संक्रमण के बाद उपचार comarison. चूहे TC83 चमड़े के नीचे के साथ 23 दिन पहले प्रतिरक्षित कोई bioluminescent संकेत (ए) के साथ प्रस्तुत TC83-luciferase के साथ चुनौती. -4 और 48 घंटे के बाद संक्रमण में आईपी Ampligen प्राप्त चूहों (बी) कोई उपचार (सी) प्राप्त चूहों की तुलना में कम स्तर से पता चला है.
चित्रा 4. 3 आयामी पुनर्निर्माण इमेजिंग 3 आयामी पुनर्निर्माण उपयोग हम TC83-luciferase संक्रमण के शिखर स्थान है LivingImage DLIT पुनर्निर्माण उपकरण का उपयोग visualized. हम इस ते का उपयोग CNS के भीतर गहराई और प्राथमिक संकेत के स्थान स्थानीय बनाना करने में सक्षम हैंchnique.
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Discussion
जबकि इस प्रोटोकॉल के इमेजिंग vivo विश्लेषण में पहलुओं के लिए शामिल किया गया है, यह महत्वपूर्ण है कि भविष्य के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण कारक के रूप में bioluminescent वेक्टर पहचान. TC83 की हमारी उपयोग, VEEV की एक तनु टीका तनाव luciferase की अभिव्यक्ति के लिए एक वेक्टर के रूप में, यह सुनिश्चित करता है कि एंजाइम की एक बड़ी मात्रा सीएनएस के रूप में पहले 1-4 वर्णित में वायरस के उच्च प्रतिकृति दर की वजह से उत्पादन किया जा रहा है. जबकि एक 2 subgenomic और पुनः संयोजक वायरस के आगे क्षीणन में प्रमोटर luciferase जीन परिणामों के अलावा जंगली TC83 प्रकार की तुलना में, इस क्षीणन 5 संक्रमण के पहले 6 दिनों के भीतर रोग के नैदानिक पाठ्यक्रम में परिवर्तन नहीं प्रदर्शित करता है. हमें उम्मीद है वायरस की प्रतिकृति के माध्यम से समय पर luciferase जीन का एक नुकसान है, लेकिन फिर बाद में जब तक इस रोग के विकास में नहीं देखा है. अन्य रोगजनक वैक्टर, वायरल और बैक्टीरियल, के विकास की क्षमता और दक्षता की पुष्टिरोगज़नक़ 6-9 अनुसंधान के कई क्षेत्रों में और IVIS luciferase की.
इमेजिंग प्रक्रिया ही कुछ महत्वपूर्ण कदम है कि पहले एक पूर्ण अध्ययन लागू किया जा सकता है पूरा किया जाना चाहिए है. वेक्टर के bioluminescent ताकत का एक प्रारंभिक विश्लेषण एक पायलट जानवरों की एक न्यूनतम समूह युक्त अध्ययन में समाप्त किया जाना चाहिए. luciferase संचय के vivo में उम्मीद की स्थान वेक्टर लेकिन उम्मीद सिग्नल की शक्ति का उपयोग के कारण पहले से ज्ञात किया जाना चाहिए, एक बड़े अध्ययन शुरू करने से पहले निर्धारित किया जाना चाहिए. नए सॉफ्टवेयर के साथ एक जोखिम लंबाई विश्लेषण के रूप में ऑटो जोखिम का पता लगाने अब सॉफ्टवेयर लेकिन एक समय देरी Luciferin के इंजेक्शन पर आधारित में बनाया सुविधा की वजह से आवश्यक नहीं है अभी भी निर्धारित करने की आवश्यकता होगी. ये संकेत गणना के सभी के साथ भी, bioluminescent का पता लगाने अभी भी वेक्टर गहराई और समग्र पशु वर्णक और फर के कारण सीमित किया जा सकता है. हम दृढ़ता से जानवरों की हजामत बनाने का काम befor की सिफारिशई इमेजिंग मजबूत संभव संकेत प्राप्त करने के लिए शुरू होता है.
यहां तक कि वेक्टर क्षीणन और एंजाइम उत्पादन के लिए लेखांकन, हमें विश्वास है कि हम एक सटीक और अधिक कुशल का उपयोग luciferase तो vivo विश्लेषण में एक मानक फ्लोरोसेंट अणु प्रणाली के साथ उत्पन्न किया जा सकता है मॉडल तैयार किया है. Bioluminescence एक की शुरुआत प्रकाश स्रोत है, जो शुरू में संकेत के नुकसान में जिसके परिणामस्वरूप ऊतकों के माध्यम से पारित करना होगा होने तक सीमित नहीं है. यह भी उच्च पृष्ठभूमि ऑटो फ्लोरोसेंट उनके फर पर और यहां तक कि अपने आहार से चूहों के साथ देखा समस्या नहीं है. Luciferin सब्सट्रेट से विषाक्तता का खतरा आसानी से उचित छानने का काम और खुराक के माध्यम से नियंत्रित किया जाता है, bioluminescent बस के रूप में पशुओं के लिए सुरक्षित बनाने के. दोनों फ्लोरोसेंट और bioluminescent प्रणाली काफी vivo विश्लेषण में पशु के कारण उपयोग को कम कर सकते हैं जो भविष्य के अनुसंधान के लिए महत्वपूर्ण कारण पशु अनुसंधान और आगे के लिए हम पालन की दिशा में बदलते राजनीतिक रवैया होगापशु 10 उपयोग की दिशा में ई 3Rs (प्रतिस्थापन, शोधन कमी).
वायरल रोगजनन और antiviral प्रभाव के विश्लेषण के हमारे आवेदन के लिए, vivo मॉडलिंग में कई कारणों के लिए वर्तमान 11,12 प्रणालियों की तुलना में अधिक कुशल है. हम विशिष्ट रोग के विकास, TC83 के मामले में CNS 1 आक्रमण, के लिए महत्वपूर्ण कदम का पता लगाने से पहले किसी भी नैदानिक रोग विकसित करने में सक्षम हैं. प्रारंभिक आक्रमण का पता लगाने से, हम बार बार एक एकल जानवर और वायरस के प्रसार को प्रतिकृति रोग 5 प्रगति का अध्ययन का एक और अधिक सटीक साधन उपलब्ध कराने में कल्पना करने में सक्षम हैं. मॉडल हम तैयार भी है बलिदान और अंग संग्रह, क्षमता प्रमुख रोग प्रगति का पता लगाने से पहले नैदानिक रोग पशु चिड़चिड़ापन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, और हमारी प्रणाली के लिए विशिष्ट की कमी की आवश्यकता के कारण शोधकर्ताओं के लिए सुरक्षित है, हम इन अध्ययनों को पूरा कर सकते हैं के बजाय ABSL3 ABSL2 में एक तनु वायरल वेक्टर मेंएक का चयन एजेंट का उपयोग.
भविष्य रोग अध्ययनों तेजी bioluminescent IVIS मॉडलिंग का उपयोग करेंगे. आधुनिक आण्विक जीव विज्ञान तकनीक और क्लोनिंग प्रगति में एक luciferase जीन के दोनों वायरल और बैक्टीरियल वैक्टर में जल्दी से और सस्ते में प्रविष्टि की अनुमति देते हैं. ट्रांसजेनिक एक प्रमोटर निर्भर luciferase जीन व्यक्त चूहों को विकसित करने की क्षमता भी bioluminescent अध्ययन के लिए एक और प्रणाली प्रदान करता है. अंत में, नली का व्यास Rediject सूजन जांच के रूप में नव विकसित bioluminescent जांच myeloperoxidase भक्षककोशिकीय सूजन प्रतिक्रिया के vivo दृश्य में करने के लिए अनुमति के साथ प्रतिक्रिया करता है. इन नए कैमरों और सॉफ्टवेयर की दक्षता में वृद्धि के साथ संयुक्त प्रौद्योगिकियों bioluminescent IVIS अध्ययन के कई अलग अलग क्षेत्रों में भविष्य के अनुसंधान के लिए एक व्यवहार्य प्रणाली बनाता है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
इस पांडुलिपि के लिए वीडियो संपादन के साथ उसकी सहायता के लिए translational विज्ञान UTMB NIH 1UL1RR029876-01 अनुदान और अलीशा Prather के लिए संस्थान.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| D-Luciferin | |||
| Isoflurane | |||
| Xenogen IVIS System (Spectrum) | Caliper Life Sciences | ||
| XGI-8-gas Anesthesia System | Caliper Life Sciences | ||
| XIC-3 Containment Box | Caliper Life Sciences | ||
| LivingImage 4.0 Software | Caliper Life Sciences | ||
| Telemetry/identification chips | Bio Medic Data Systems | IPTT-300 | Animal ID and Temperature |
| BD Integra 1ml TB syringe with 26 g x 3/8” needle | Fisher Scientific | 305279 | |
| Vet Bond tissue adhesive | Fisher Scientific | NC9259532 | |
| Vetropolycin Ophthalmic Ointment | Webster Veterinary Products | 78444656 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline 1X | Invitrogen | 14190-144 | |
| BMDS Chip Reader | Bio Medic Data Systems | DAS-7007S | |
| DAS-HOST Software | Bio Medic Data Systems | Used to download probe information |
References
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