Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

En molekylær Avlesning av Long-term olfactory Tilpasning i Published: December 22, 2012 doi: 10.3791/4443
Automatic Translation
1, 2, 3, 1
1Department of Biological Sciences and Institute for Neuroscience, George Washington University, 2Fred Hutchinson Cancer Research Center, 3Department of Cell and Tissue Biology, University of California San Francisco

Summary

Her beskriver vi en molekylær avlesning av langsiktig olfactory tilpasning i

Abstract

Under vedvarende stimulering mest sensoriske nevroner vil tilpasse deres respons ved å redusere deres følsomhet til signalet. Tilpasning respons hjelper form oppmerksomhet og også beskytter cellene fra overstimulering. Omstilling i olfactory krets av C. elegans ble først beskrevet av Colbert og Bargmann 1,2. Her forfatterne definerte parametere av olfactory tilpasning paradigme, som de brukte til å designe en genetisk skjermen for å isolere mutanter defekt i sin evne til å tilpasse seg flyktige lukt avfølt av Amphid Wing celler type C (AWC) sensoriske nerveceller. Når wildtype C. elegans dyr er utsatt for en attraktiv AWC-avfølt lukt 3 i 30 min vil tilpasse sin reaksjonsevne til lukt og vil da ignorere tilpasse lukt i en kjemotaksis atferdsdata analysen for ~ 1 time. Når wildtype C. elegans dyr er utsatt for en attraktiv AWC-ante lukt for ~ 1 hr de vil da ignorere tilpasse lukt i achemotaxis atferdsmessige analyse for ~ 3 timer. Disse to fasene av olfactory tilpasning i C. elegans ble beskrevet som kortsiktig olfactory tilpasning (indusert etter 30 min lukt eksponering), og langsiktig olfactory tilpasning (indusert etter 60 min lukt eksponering). Senere arbeidet fra L'Etoile et al., Avdekket fire en protein kinase G (PKG) kalt EGL-4 som er nødvendig for både den kortsiktige og langsiktige olfactory tilpasning i AWC nerveceller. EGL-4 protein inneholder en kjernefysisk lokalisering sekvens som er nødvendig for langsiktig olfactory tilpasning svar, men unnværlig for kortsiktige olfactory tilpasning svarene i AWC 4. Etter merking EGL-4 med et grønt fluorescerende protein, var det mulig å visualisere lokalisering av EGL-4 i AWC under langvarig lukt eksponering. Ved hjelp av dette fullt funksjonell GFP-merket EGL-4 (GFP :: EGL-4) molekylet vi har vært i stand til å utvikle en molekylær avlesning av langsiktig olfactory tilpasning i AWC 5. Ved hjelp av denne molecular avlesning av olfactory tilpasning vi har vært i stand til å utføre både fremover og bakover genetiske skjermer for å identifisere muterte dyr som viser defekte subcellulære lokalisering mønstre av GFP :: EGL-4 i AWC 6,7. Her beskriver vi: 1) bygging av GFP :: EGL-4 uttrykker dyr, 2) protokollen for dyrking av dyr for langsiktig lukt-indusert kjernefysiske translokasjon analyser og 3) scoring av den langsiktige lukt-indusert kjernefysisk translokasjon hendelsen og gjenvinning (re-allergi) fra kjernekraftverket GFP :: EGL-4 tilstand.

Protocol

1. Bygging av GFP Tagged EGL-4 Uttrykke Dyr

  1. Klone translasjonsforskning fusion GFP :: EGL-4 under arrangøren for ODR-3-genet (bruk 2678 bp direkte oppstrøms for startkodon): (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4. Den ODR-3 promoter stasjoner uttrykk i amphid Nevron parene: AWA, AWB, AWC, og svakt i ASH.
  2. Injisere plasmid (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4 i wildtype (N2) dyrene på 50 ng / ul med co-injeksjon markører ved hjelp av standard bakterie-line transformasjon teknikker 8: (p) ofm-1: : GFP 9 (25 ng / pl), og (p) ODR-1 :: dsRed 10 (25 ng / pl). Den ODR-1 promoter stasjoner uttrykk i AWC og AWB amphid Nevron par, og ofm-1 promoter stasjoner uttrykk i coelomocytes.
  3. Utsett transgene dyr uttrykker ekstrakromosomalt arrays beskrevet i trinn 1.2 til Ultra Violet (UV) / trimethylpsoralen (TMP) integrering protokollen11.
  4. Bleach synkronisere dyrene 12 og dyrke dem på nematode vekstmedier (NGM) plater som inneholder OP50 E. coli til L4 stadiet. Vask L4 dyr av NGM plater med M9 buffer for å fjerne OP50 E. coli bakterier.
  5. Fjern M9 buffer og tilsett 50-100 pl 30 pg / ml TMP arbeidsoppløsning på ormen pelleten i 1,5 ml mikrosentrifugerør. Pakk 1,5 ml mikrosentrifugerør i folie for å blokkere lys fra omgivelsene, og rist forsiktig på en rotator for 15 min i folie-innpakket 1,5 ml mikrosentrifugerør. Overfør ormer i TMP / orm løsning til en stor unseeded NGM plate.
  6. Avdekke ormer på NGM plate til UV 350 μJ (X100) med en Stratalinker 2400. Deretter legge ormer til en OP50 inneholder NGM plate og inkuber i mørket for 5 timer.
  7. Plukk 50 transgene ormer til ca 10 seeded plater (2-5 ormer hver plate). Transfer P0 er til nye plater hver 24-timers i 3 dager.
  8. Plukk 250 klonal F1 ennimals (1 dyr per plate). Klone ut 2-4 F2 dyr fra hver F1 plate. Sjekk F3 dyr å se etter en 100% overføring linje ved å se på (p) ofm-1 :: GFP uttrykk mønster under et dissecting fluorescerende mikroskop.
  9. Outcross den endelige integrert (e) med wildtype N2 dyr 5 ganger. Vi vil referere til den endelige integrerte linje som pyIs500, og GFP-merket EGL-4 molekyl som GFP :: EGL-4.

2. Dyrking og vedlikehold av dyr for Nuclear translokasjon Assays

  1. Dyrke pyIs500 dyrene ved 25 ° C på standard 10 cm NGM plater (se nedenfor for oppskrift) seeded med OP50 E. coli bakterier 13 (figur 1).
  2. På dag 1, plukke 04:56 L4 pyIs500 dyr fra platene dyrket ved 25 ° C på fem separate 10 cm OP50 E. coli utsådd plater og inkuber ved 25 ° C (det vil si, 4-5 L4 dyr pr plate).
  3. På dag 4, vaske voksen populations av pyIs500 dyr utenfor de store NGM platene ved hjelp av S-Basal buffer (se nedenfor for oppskrift). Bruk engangs glass pipetter for å overføre dyr, som de vil holde seg til den siden av plast pipettespissene.

3. Langsiktig lukt Induced Nuclear translokasjon Assays

  1. Vask pyIs500 dyr 3 ganger i S-Basal å fjerne bakterier. Ikke sentrifuger dyr mellom vasker, snarere at dyrene å løse ved gravitasjon i en stasjonær 1,5 ml mikrosentrifuge-rør. Det er kritisk for å sikre at alle bakterier blir fjernet, og at NGM pates er fri for urenheter, som gjenværende bakterier vil negativt påvirke utfallet av translokasjon analysen. Også, har vi funnet at autoklavering de 1,5 ml mikrosentrifugerør produserer en "klebrig" egenskap på de indre vegger av røret som fører dyr å holde seg til sidene, og så bruke ikke-autoklaverte 1,5 ml mikrosentrifugerør.
  2. Mens dyr er settling mellom hver vask, utgjør than tilpasning løsning. Legg 100 ml S-Basal buffer til en 100 ml avgangsstudent sylinder. Legg tilpasse lukt til S-Basal og forsegle sylinderen ved hjelp av en stripe av Parafilm. Hvis utfører benzaldehyd tilpasning legge 7,5 pl benzaldehyd til 100 ml S-Basal, for butanon tilpasning legge 11 pl 2-butaone til 100 ml S-Basal. Vend forsiktig (ikke rist) avgangsklassen sylinder som inneholder S-Basal og lukt 30 ganger for å skape en enhetlig emulsjon.
  3. Etter den siste vask i S-Basal, la dyrene å bosette og fjerne all væske. Produsent en tube "ve" eller "tilpasses" og det andre røret "-ve" eller "unadapt". Deretter tilsett 1 ml av tilpasning miks til tilpasning mikrosentrifugerør (+ ve), og tilsett 1 ml S-Basal til unadapted kontroll mikrosentrifugerør (-ve). Prøv å holde antall dyr mellom 100 og 200 i hvert rør. Med litt øvelse er det mulig å estimere det omtrentlige antall dyr i en pellet på øyemål.
  4. Plasser en 1,5 ml mikrosentrifugerør cap protectortil hvert rør (hindrer lokk fra spratt åpen) og plassere rørene på en rotator for 80 min. Vi har funnet ut at lukt eksponering mellom 60 min og 80 min gir lignende resultater (både resultat i langsiktige tilpasningsstrategier svar). Imidlertid gir 80 min eksponering mer konsistente resultater i våre hender. Dermed alle våre langsiktige tilpasning analysene er standardisert ved hjelp av en 80 min lukt eksponering (figur 2).
  5. Etter 80 min, vask dyr 3 ganger i S-Basal. Tillater dyr å løse ved tyngdekraften mellom hver vask.

4. Kortsiktige Lukt-indusert Nuclear translokasjon Assays

  1. I tilfelle av kortsiktige lukt tilpasning, bruke samme protokoll som per langsiktige lukt-induced translokasjon analyser (trinn 3.1 til 3.4), men i stedet for å inkubere pyIs500 dyr i å tilpasse lukt for 80 min, bruk en 30 min eksponering . Kvantifisering av lukt-induced kjernefysiske translokasjon analyser beskrevet nedenfor (Trinn 5) er den samme for langsiktig og kortsiktig term eksponeringer.

5. Scoring Lukt-indusert Nuclear Translokasjon begivenhet

  1. Lag 2% agarose pads inneholder 5 mM natriumazid (NaN 3) ved å løse opp gelelektroforese agarose i dH 2 0. Plasser en eneste dråpe av smeltet agarose inneholder NaN 3 på et glass objektglass. Umiddelbart plassere et glass objektglass på det første lysbildet å flate dråpe av smeltet agarose. Permisjon for 30 sek, og deretter forsiktig erte hverandre mikroskopet lysbilder forlate en objektglass med en flat agarose pute av ~ 1 mm.
  2. Etter den siste vask i S-Basal, la ormer å bosette seg i 1,5 ml mikrosentrifugerør og fjerne all væske. Deretter legge dyrene drop-messig på de agarose pads av flere mikroskop lysbilder. Det er viktig å holde antall dyr per lysbilde til mellom 50 og 100. For mange dyr per lysbilde vil komplisere scoring og ofte skape en spredning glød etter blått lys eksitasjon. Overflødig væske kanvære ugudelige fra agarosen puten ved hjelp av en liten Kim-tørk. Plasser en 0,5 mm glassdeksel-slip på puten og la stå i 2 min for å tillate for NaN 3 å immobilisere dyrene. Notat, kan dyrene bli utvunnet fra lysbildene etter scoring. Dyrene vil gjenopprette fra NaN 3 bedøvelse etter ~ 1 time hvis overført til en seeded NGM plate inn i en dråpe M9 Buffer.
  3. På dette punktet er det viktig at hver eksperimentator tenke ut en nøkkel til å spore hvilke slide er den eksperimentelle (+ ve) lysbilde og som glir er kontroll (-ve) lysbilde, og bestå lysbilder til en annen person som vil blindt score GFP: EGL-4 lokalisering mønster. Dette vil kontrollere for eventuelle eksperimentator bias.
  4. Resultat mellom 50 og 100 dyr pr lysbilde med en oppreist fluorescerende mikroskop med 10x, 40x og 63x forstørrelse mål og GFP / RFP filtre. For det første, finn dyr under 10x forstørrelse med lys-feltet belysning. Dernest finner AWC nervecellen ved å slå av bright-felt belysning og bruker RFP filteret. De (p) ODR-1 :: dsRed stasjoner uttrykk i AWB og AWC nerveceller. De AWC nevroner har særegne ovale celle organer sammenlignet med AWB celle organer som er mindre og sirkulær i form (figur 2).
  5. Når AWC cellen kroppen har blitt plassert, bytte til GFP filteret og ta lokalisering av GFP: EGL-4 som kjernefysisk eller cytoplasmisk. Ved hjelp av en teller lar eksperimentator å holde utkikk i okularet mens scoring lysbildet. Merk: Trinn 5.1 til 5.5 er gjentatt minst 3 ganger på forskjellige dager for å produsere statistisk signifikante data (figur 1-2).

6. Overvåking GFP-merket EGL-4 under Recovery fra Long-term Lukt Tilpasning

  1. Etter trinn 3.5, dele befolkningen i pyIs500 dyr i flere porsjoner og score for kjernefysisk versus cytoplasmisk GFP :: EGL-4 i AWC på tidspunktet nullpunkt (det vil si etter 80 min eksponering) og multiple tidspunkter (figur 3).
  2. Overføre både kontrollen (-ve) og eksperimentelle (+ ve) dyr bruker engangs glass pipetter på NGM plater.
  3. Tillate dyr å gjenopprette for kortere eller lengre tid, og revurdere lokalisering av GFP :: EGL-4in AWC på hvert tidspunkt som i trinn 5.1 til 5.5.

7. Materialer

NGM plater: For 1 L legge til en L DDH 2 0: 21 g Bacto-Agar, 3 g Natriumklorid (NaCl), 2,5 g Bacto-Peptone. Autoclave Media. Etter autoklavering, kule agar før temperaturen leser 54 ° C. Legg til følgende løsninger: 25 ml 1M kaliumfosfatbuffer, 1 ml 1 M magnesiumsulfat (MgSo4), 1 ml 1 M kalsiumklorid (CaCl 2), 1 ml kolesterol i etanol (5 mg / ml lager).

1 M dibasic K 2 HPO 4 174,2 g / mol: For 500 ml: I 400 ml DDH 2 O, oppløse 87,1 g Dibasic K 2 HPO 4. Justere volumet til 500 L med DDH 2 O. Filter sterilisere med en 500 ml sterilt filter Unit.

1 M monobasic KH 2 PO 4 136,1 g / mol: For 1 L: I 800 ml DDH 2 O, oppløse 136,1 g monobasic KH 2 PO 4. Justere volumet til 1 L med DDH 2 O. Filter sterilisere med en 500 ml sterilt filter Unit.

1 M kaliumfosfat (K 3 PO 4) Buffer pH 6,0: For 1 L: I en 1 L sterilt filter Unit, tilsett 868 ml 1 M monobasic KH 2 PO 4. La enheten filtrere gjennom, og deretter legge 132 ml av en M dibasisk K 2 HPO 4. La enheten filtrere all væsken. Ta ut filterenheten og juster pH til 6,0. Oppbevar ved romtemperatur.

S-Basal: For 1 L: tilsett 50 ml 1M K 3 PO 4 Buffer, pH ~ 6,0, og 20 ml 5M NaCl aq. Fyll til 1 L medDDH 2 O. Autoklaveres Solution.

M9: For en L: 3 g KH 2 4 PO, 6 g Na 2 4 HPO, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO 4, 2 H O. Fyll til 1 L med DDH 2 0. Sterilisere ved autoklavering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Et eksempel på lokalisering mønster av GFP :: EGL-4in den AWC før og etter langvarig lukt eksponering er vist i figur 2. Før langvarig lukt eksponering, GFP :: EGL-4 er lokalisert til cytosol av AWC (figur 2B), og etter 80 min lukt eksponering GFP :: EGL-4 er lokalisert til kjernen av AWC (figur 2D). På atferdsmessige nivå, er dyr med cytosolic GFP :: EGL-4 i AWC tiltrukket til et punkt kilde lukt (Figur 2C plotter representative resultater fra chemotaxis analyser av unadapted dyr - legg merke til chemotaxis indeksen 3 er nær 1). Dyr stiller kjernefysisk GFP :: EGL-4 i AWC er ikke tiltrukket av en punktkilde av tilpasse lukt (Figur 2E grafer representative resultater fra chemotaxis analyser av tilpasset dyr - Vær oppmerksom på chemotaxis indeksen er nær null). Å generere statistisk signifikante data fra lukt-induserte kjernefysiske translokasjon assays,forsøkene bør kjøres i minst 3 ganger og på forskjellige dager. For en detaljert beskrivelse av chemotaxis analysen kan det være nyttig å referere til Jove artikkel 2490 14.

Gang EGL-4 entrer kjernen av AWC nevroner det forårsaker stabile og langvarige endringer i AWC fysiologi som vedvarer selv når EGL-4 er ikke lenger i kjernen (fig. 3). Etter 80 min lukt eksponering dyr vil ignorere en punktkilde av tilpasse lukt (Figur 3 øvre panel, lys bar på venstre), og denne tilpasningen vil vedvare selv etter 120 min for utvinning (figur 3 øvre panel, lys bar til høyre). Etter 80 minutter av lukt eksponering GFP: EGL-4 er observert i kjernen av AWC (Figur 3 nedre panel, lys bar på venstre). Denne kjernefysiske oppføringen er både nødvendig og tilstrekkelig til å indusere langsiktig tilpasning i AWC 5. Etter 120 min utvinning, disse dyrene ikke lenger viser kjernefysisk GFP :: EGL-4 (figur 3 nedre panel, lys bar på høyre) ennå vil fortsatt ignorere en punktkilde av tilpasse lukt benzaldehyd på de atferdsmessige nivå.

Figur 1
Figur 1. Oversikt over protokoll for langsiktig lukt-indusert kjernefysiske translokasjon analyser. For det første er dyr uttrykker GFP :: EGL-4 (pyIs500 dyr) dyrket ved 25 ° C på NGM plater sådd med OP50 E. coli. Dernest blir dyr utsettes for en lukt tilpasning mix (eksperimentell gruppe) eller S-Basal buffer (kontrollgruppen). For det tredje, er dyr scoret blindt ved å telle antall dyr som utviser kjernefysisk GFP :: EGL-4 i AWC og antall dyr som utviser cytoplasmisk GFP :: EGL-4 i AWC.

Figur 2
Figur 2. et al. 6 Figur 2B. Før langvarig lukt eksponering, GFP :: EGL-4 er lokalisert til cytosol av AWC. Figur 2C. Ved atferdsmessige nivå, dyr med cytosoliske GFP :: EGL-4 i AWC er tiltrukket til et punkt surce av lukt. Denne grafen ble generert fra representative resultater fra analyser av kjemotaksis unadapted dyr. Legg merke til chemotaxis indeksen er nær en. Figur 2D. Etter 80 min lukt eksponering GFP :: EGL-4 er lokalisert til kjernen av AWC. Figur 2E. Dyr utviser kjernefysisk GFP :: EGL-4 i AWC er ikke tiltrukket til en punktkilde av tilpasning lukt. Denne grafen ble generert fra representative resultater fra analyser av kjemotaksis tilpasset dyr. Legg merke til chemotaxis indeksen er nær null.

Figur 3
Figur 3. Når EGL-4 kommer inn i kjernen av AWC nevroner det forårsaker stabile og langvarige endringer i AWC fysiologi som vedvarer selv når EGL-4 er ikke lenger i kjernen. Dyr eksponert for lukt (80 min) får lov til å komme seg fra den langsiktige lukt eksponering og scoret for cytoplasmisk versus kjernefysisklokalisering av GFP :: EGL-4. (Øvre panel) Etter 120 minutter utvinning dyrene som ble eksponert for lukt for 80 min er fortsatt tilpasset på atferdsmessige nivå. (Lower Panel) Etter 120 minutter utvinning dyr som ble eksponert for lukt for 80 min lenger viser kjernefysisk GFP :: EGL-4. Dermed påkaller kjernefysisk EGL-4 stabile langvarige endringer i fysiologi av AWC som vedvarer etter EGL-4 er ikke lenger i kjernen. Figuren er modifisert med tillatelse fra Lee et al. 5. Figur 3 øvre panel. Etter 80 min lukt eksponering dyr vil ignorere en punktkilde av tilpasse lukt, og denne tilpasningen vil vedvare selv etter 120 min for utvinning. Figur 3 nedre panel. Etter 80 minutter av lukt eksponering GFP :: EGL-4 er observert i kjernen av AWC. Denne kjernefysiske oppføringen er både nødvendig og tilstrekkelig til å indusere langsiktig tilpasning i AWC. Etter 120 min utvinning, disse dyrene ikke lenger viser kjernefysisk GFP :: EGL-4, men vil fortsatt ignorere et punkt souRCE av tilpasse lukt benzaldehyd på atferdsmessige nivå.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Lukt-indusert kjernefysiske oppføring av en GFP-merket EGL-4 molekyl som er beskrevet her gir en robust molekylær avlesning av olfactory tilpasning i C. elegans. De lukt-indusert kjernefysiske translokasjon analysene er grei og krever bare noen få dager med forberedelser tid. Den pyIs500 dyr som vi har bygget for disse analysene, uttrykker en markør som lyser opp AWC nervecellen samt uttrykker GFP-merket EGL-4 protein. Dermed føler vi at en eksperimentator med liten eller ingen erfaring med denne klassen av nervecellen kan svært raskt (kanskje etter å ha undersøkt et par dusin dyr) begynner å føle deg komfortabel å identifisere riktig celle og scoring for kjernefysisk versus cytoplasmisk EGL-4. Det kan være nyttig for leseren å referere til JOVE artikkel 835 som beskriver GFP analyse i C. elegans 15.

For å sikre at data som genereres er av høyeste kvalitet vi foreslår følgende retningslinjer:1) alle scoring bør gjøres blindt, 2) dyrking plater som inneholder noen spor av forurensning (sopp eller bakteriell) ikke kan brukes, 3) ormer som erfarne sult under dyrking bør aldri brukes, og 4) tilpasningstiltak mikser må gjøres fersk på dag eksperimentering.

Alle sensoriske systemer viser eksempler på neuronal plastisitet. Overføring av signaler til kjernen er en svært konservert trekk stabile former av neuronal plastisitet 16. Ved å utvikle en molekylær avlesning av olfactory plastisitet som representerer en kjernefysisk translokasjon av en PKG i stimulerte nevroner, tilbyr vi en plattform for rask og detaljert disseksjon av neuronal plastisitet i en in vivo-modell. Ved hjelp av vår molekylær avlesning av olfactory tilpasning har vi begynt å beskrive noen av de hendelsene som former olfactory tilpasning i C. elegans 5,6,7. Men dette er bare en begynnelse, og ved å studere denne prosessen som en funksjon av enge, kjønn, infeksjon, eller diett vi kan avdekke viktige temaer neuronal plastisitet på krets og systemnivå.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Vi vil gjerne takke Scott Hamilton, og medlemmer av O'Halloran lab for grundig lesning av dette manuskriptet. Vi vil også takke våre anonym anmelder for gode forslag og innsiktsfulle kommentarer.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bacto Agar Difco DF0140-07-4 NGM plates
Sodium Chloride Fisher Chemical S671-10 NGM plates
Bacto Peptone Difco DF0118-07-2 NGM plates
Potassium Phosphate Dibasic Fisher Chemical S375-500 S-Basal buffer and NGM plates
Potassium Phosphate Monobasic Fisher Chemical P285-500 S-Basal buffer and NGM plates
Kimwipes - Small Kimberly-Clark LS2770
Ethanol 100% Gold Shield Chemical Co. 43196-115 diluting odors for chemotaxis assays
Calcium Chloride Sigma-Aldrich C8106-500G NGM plates
Magnesium Sulphate MP Biomedicals 150136-500G NGM plates
Sodium Azide 99% Fisher Scientific ICN10289180 Anesthetic
Agarose - UltraPure Invitrogen 16500-500 Agarose pads
Benzaldehyde Sigma-Aldrich B1334-100G AWC odor
Butanone, ACS Grade Sigma-Aldrich 360473-500ML AWC odor
Microcentrifuge Tubes - 1.5 ml Colored Denville LS8147
Pasteur Pipet Disposable Glass 5-3/4" Fisher Scientific 13-678-20B
Stratalinker Stratagene Stratalinker 2400 UV integration
Filter Vacuum Bottle - 500 ml Nalgene 09-740-25B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans. Neuron. 14 (4), 803 (1995).
  2. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans. Learning and Memory. 4 (2), 179 (1997).
  3. Bargmann, C. I., et al. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Neuron. 74 (3), 515 (1993).
  4. L'Etoile, N. D., et al. The cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 regulates olfactory adaptation in C. elegans. Neuron. 36, 1079-10 (2002).
  5. Lee, J. I., et al. Nuclear entry of a cGMP-dependent kinase converts transient into long-lasting olfactory adaptation. PNAS. 107 (13), 6016 (2010).
  6. O'Halloran, D. M., et al. Regulators of AWC-mediated olfactory plasticity in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5 (12), e1000761 (2009).
  7. O'Halloran, D. M., et al. Changes in cGMP levels affect the localization of EGL-4 in AWC in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7 (2), e31614 (2012).
  8. Mello, C. C., et al. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO Journal. 10, 3959-39 (1991).
  9. Miyabayashi, T., et al. Expression and function of members of a divergent nuclear receptor family in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 215, 314 (1999).
  10. L'Etoile, N. D., Bargmann, C. I. Olfaction and odor discrimination are mediated by the C. elegans guanylyl cyclase ODR-1. Neuron. 25 (3), 575 (2000).
  11. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451 (1995).
  12. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. , (2006).
  13. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71 (1974).
  14. Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays. J. Vis. Exp. (49), e2490 (2011).
  15. Berkowitz, L. A., Hamamichi, S., Knight, A. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes. J. Vis. Exp. (17), e835 (2008).
  16. Pittenger, C., Kandel, E. R. In search of general mechanisms for long-lasting plasticity: Aplysia and the hippocampus. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 358 (1432), 757 (2003).

Tags

Developmental Biology Neuroscience Molecular Biology cellebiologi olfactory tilpasning C. elegans EGL-4 kjernekraft translokasjon luktesans
En molekylær Avlesning av Long-term olfactory Tilpasning i<em&gt; C. elegans</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N.,… More

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter