Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

En molekylär Avläsning av långsiktigt Olfactory anpassning i doi: 10.3791/4443 Published: December 22, 2012

Summary

Här beskriver vi en molekylär avläsning av långvarig lukt anpassning

Abstract

Under ihållande stimulering mest sensoriska neuroner kommer att anpassa sina svar genom att minska deras känslighet för signalen. Anpassningen svar hjälper form uppmärksamhet och även skyddar cellerna från över-stimulering. Anpassning inom lukt kretsen av C. elegans beskrevs först av Colbert och Bargmann 1,2. Här författarna definierade parametrarna för luktsinnet anpassningen paradigm, som de använde för att utforma en genetisk skärm för att isolera mutanter defekta i sin förmåga att anpassa sig till flyktiga lukt avkännas av Amphid Wing celler av typ C (AWC) sensoriska neuroner. När vildtyp C. elegans djur utsätts för en attraktiv AWC-kände lukt 3 för 30 minuter som de kommer att anpassa sin lyhördhet för lukt och kommer då att ignorera anpassa lukt i en kemotaxi beteende analys för ~ 1 timme. När vildtyp C. elegans djur utsätts för en attraktiv AWC-kände lukt för ~ 1 timme som de sedan kommer att ignorera anpassa lukt i AChemotaxis beteende analys för ~ 3 timmar. Dessa två faser lukt anpassning i C. elegans beskrevs som kortvarig lukt anpassning (induceras efter 30 min lukt exponering), och långsiktig lukt anpassning (induceras efter 60 min lukt exponering). Senare arbete från L'Etoile et al. Avslöjat 4 en proteinkinas G (PKG) kallas EGL-4 som krävs för både kort och lång sikt lukt anpassning i AWC nervceller. Det EGL-4-protein innehåller en nukleär lokalisering sekvens som är nödvändig för långsiktiga lukt anpassningsåtgärder men umbärliga för kortfristiga lukt anpassningsåtgärder i AWC 4. Genom märkning EGL-4 med ett grönt fluorescerande protein, var det möjligt att visualisera lokaliseringen av EGL-4 i AWC under långvarig lukt exponering. Med hjälp av denna fullt fungerande GFP-märkta EGL-4 (GFP :: EGL-4)-molekylen har vi kunnat utveckla en molekylär avläsning av långvarig lukt anpassning i AWC 5. Med användning av denna molecular avläsning av luktsinnet anpassning har vi kunnat utföra både framåt och bakåt genetiska skärmar för att identifiera muterade djur som uppvisar defekta subcellulära lokalisering mönster av GFP :: EGL-4 i AWC 6,7. Här beskriver vi: 1) konstruktion av GFP :: EGL-4 uttryckande djur, 2) protokollet för odling av djur för långsiktiga lukt-inducerad nukleär translokation analyser, och 3) poäng i den långsiktiga lukt-inducerad nukleär translokation händelse och återhämtning (åter allergi) från den nukleära GFP :: EGL-4 tillstånd.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Konstruktion av GFP Tagged EGL-4 uttryckande djur

  1. Klona translationell fusion GFP :: EGL-4 under promotom för ODR-3-genen (användning 2678 bp direkt uppströms om startkodonet): (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4. ODR-3 promotorn driver uttryck i amphid neuron par: AWA, AWB, AWC och svagt ASH.
  2. Injicera plasmiden (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4 till vildtyp (N2) djur vid 50 ng / ul med co-injektion markörer med standard bakterie-line transformationstekniker 8: (p) OFM-1: : GFP 9 (25 ng / | il), och (p) ODR-1 :: dsRed 10 (25 ng / pl). ODR-1 promotorn driver uttryck i AWC och AWB amphid neuron par och OFM-1 driver promotor uttryck i coelomocytes.
  3. Utsätta de transgena djur uttrycker extrakromosomala arrayer beskrivs i steg 1,2 till ultraviolett (UV) / trimetylpsoralen (TMP) integrering protokoll11.
  4. Blekmedel synkronisera djuren 12 och odla dem på Media nematod Tillväxt (NGM) plattor innehållande OP50 E. E. coli till L4 scenen. Tvätta L4 djur från NGM plattor med M9 buffert för att avlägsna OP50 E. coli-bakterier.
  5. Avlägsna M9-buffert och tillsätt 50-100 pl 30 pg / ml TMP arbetslösning på masken pelleten i 1,5 ml mikrocentrifugrör. Linda 1,5 röret ml mikrocentrifug i folie för att blockera omgivande ljus, och skaka försiktigt på en rotator under 15 minuter i folie-lindade 1,5 ml mikrocentrifugrör. Överför maskar i TMP / masken lösning till en stor oympade NGM tallrik.
  6. Exponera maskarna på NGM plattan för UV 350 μJ (X100) med en Stratalinker 2400. Sedan lägga maskar i en OP50 innehåller NGM plattan och inkubera i mörker i 5 timmar.
  7. Välj 50 transgena maskar till cirka 10 seedade plattor (2-5 maskar varje platta). Överför P0 är nya plattor varje 24 timmar under 3 dagar.
  8. Välj 250 klonal F1 ennimals (1 djur per platta). Klon ut 2-4 F2 djur från varje F1 platta. Kontrollera F3 djur för att leta efter en 100% kraftledning genom att titta på (p) OFM-1 :: GFP uttryck mönster under ett dissekera fluorescensmikroskop.
  9. Utparning den sista integrerade linjen (er) med vildtyp N2 djur 5 gånger. Vi kommer att hänvisa till den slutliga integrerade linjen som pyIs500, och GFP-märkta EGL-4-molekylen som GFP :: EGL-4.

2. Odling och underhåll av djur för nukleär translokation Analyser

  1. Odla pyIs500 djuren vid 25 ° C på vanliga 10 cm NGM plattor (se nedan för recept) ympades med OP50 E. coli-bakterier 13 (figur 1).
  2. Dag 1, plocka 4-5 L4 pyIs500 djur från plattor odlas vid 25 ° C på fem separata 10 cm OP50 E. E. coli såddes plattor och inkubera vid 25 ° C (dvs. 4-5 L4 djur per platta).
  3. Dag 4, tvätta vuxna populations av pyIs500 djur utanför de stora NGM plattor med S-Basal buffert (se nedan för recept). Använd engångs glaspipetter att överföra djur, eftersom de kommer att hålla fast vid sidan av plast pipettspetsar.

3. Långsiktig lukt Induced nukleär translokation Analyser

  1. Tvätta pyIs500 djuren 3 gånger i S-Basal att ta bort bakterier. Centrifugera inte djur mellan tvättningarna, utan att djuren att reglera genom tyngdkraften i en stationär 1,5 ml mikrocentrifugrör. Det är viktigt att se till att alla bakterier avlägsnas och att NGM pates är fria från föroreningar, som resterande bakterier negativt påverkar resultatet av translokationen analysen. Dessutom har vi funnit att autoklavering de 1,5 ml mikrorör ger en "klibbig" egendom på innerväggarna i röret som orsakar djuren att hålla sig till sidorna, och så använder icke-autoklaverade 1,5 ml mikrorör.
  2. Medan djuren betalar mellan tvättar, smink than anpassning lösning. Tillsätt 100 ml av S-Basal buffert till en 100 ml cylinder examen. Lägg anpassa lukt till S-basal och försegla cylindern med hjälp av en remsa av parafilm. Om utförande bensaldehyd anpassning lägg 7,5 pl bensaldehyd till 100 ml S-basal, för anpassning butanon lägg 11 pl 2-butaone till 100 ml S-basal. Vänd försiktigt (inte skaka) examen cylinder som innehåller S-Basala och lukt 30 gånger för att skapa en enhetlig emulsion.
  3. Efter den slutliga tvätten i S-Basal, att djuren att sedimentera och avlägsna all vätska. Märk ett rör "+ ve" eller "anpassa" och det andra röret "-ve" eller "unadapt". Tillsätt sedan 1 ml av anpassning blandningen till anpassning mikrocentrifugrör (+ ve) och tillsätt 1 ml av S-Basal den inte anpassad kontroll mikrocentrifugrör (-ve). Försök att hålla antalet djur mellan 100 och 200 i varje rör. Med lite övning är det möjligt att uppskatta det ungefärliga antalet djur i en pellet med ögat.
  4. Placera en 1,5 ml mikrocentrifugrör lock Protectortill varje rör (förhindrar lock från poppar öppen) och placera rören på en rotator under 80 minuter. Vi har funnit att lukt exponering mellan 60 min och 80 min ger liknande resultat (både resulterar i långsiktiga anpassningsåtgärder). Emellertid ger 80 min exponering jämnare resultat i våra händer. Således alla våra långsiktiga anpassning analyser är standardiserade genom att använda en 80 exponering min lukt (Figur 2).
  5. Efter 80 minuter, tvätta djuren 3 gånger i S-Basal. Låt djuren att reglera genom gravitation mellan varje tvätt.

4. Kortfristiga Lukt-inducerade nukleär translokation Analyser

  1. I fallet med kortsiktiga lukt anpassning använder samma protokoll som per långsiktiga lukt-inducerade translokation analyser (steg från 3,1 till 3,4), men i stället för att inkubera de pyIs500 djur att anpassa lukt under 80 minuter, använd en 30 min exponering . Kvantifiering av lukt-inducerade nukleär translokation analyser som beskrivs nedan (steg 5) är samma för långsiktig och kort-term exponeringar.

5. Scoring lukten-inducerade nukleär translokation händelse

  1. Gör 2% agaros kuddar innehållande 5 azid mM natriumfosfat (NaN 3) genom upplösning agarosgelelektrofores i dH 2 0. Placera en droppe av smält agaros innehållande NaN 3 på ett glas objektglas. Placera omedelbart en annan bild glas mikroskop på den första bilden för att platta till droppe smält agaros. Låt stå 30 sekunder, och sedan försiktigt retas isär objektglas lämnar en mikroskopobjektglas med en platt agaros kudde av ~ 1 mm.
  2. Efter den sista tvätten i S-Basal, låta maskar att bosätta sig i 1,5 ml mikrocentrifugrör och ta bort all vätska. Tillsätt sedan djuren droppvis på agarosen kuddar flera objektglas. Det är viktigt att hålla antalet djur per bild till mellan 50 och 100. Alltför många djur per bild kommer att komplicera poäng och ofta skapar en spridning sken efter blått ljus excitation. Överskottsvätska kanvara onda från agarosen plattan med hjälp av en liten Kim-torka. Placera en 0,5 mm glas täckglas på dynan och låt stå under 2 min för att medge NaN 3 att immobilisera djuren. Notering kan djuren återvinnas från bilderna efter poäng. Djuren kommer återhämta sig från NaN 3 narkos efter ~ 1 timme om de överförs till en seedade NGM platta till en droppe M9 buffert.
  3. Vid denna punkt är det viktigt att varje försöksledaren fram en nyckel för att spåra vilken bild är den experimentella (+ ve) bild och som glider är kontrollen (-ve) bild och skicka bilderna till en annan person som blint gör det GFP: EGL-4 lokalisering mönster. Detta kommer att styra för alla experimentet förspänning.
  4. Poäng mellan 50 och 100 djur per bild med en upprätt fluorescerande mikroskop med 10X, 40X och 63X förstoring mål och GFP / RFP filter. Först, leta djur i 10X förstoring med ljus-fältet belysning. Dels lokalisera AWC neuron genom att stänga av bright-fältbelysning och använder RFP filtret. De (p) ODR-1 :: dsRed enheter uttryck i AWB och AWC nervceller. De AWC nervceller har distinkta ovala cellkroppar jämfört med AWB cellkroppar som är mindre och rund i formen (Figur 2).
  5. När AWC cellkroppen har lokaliserats, växla till GFP filtret och registrera lokaliseringen av GFP: EGL-4 som kärnkraft eller cytoplasmiska. Med hjälp av en räknare kan försöksledaren att fortsätta leta i okularet när poäng bilden. Obs! Steg 5,1-5,5 upprepas minst 3 gånger på olika dagar för att ge statistiskt signifikanta data (figur 1-2).

6. Övervakning GFP-märkta EGL-4 under återhämtningen från långsiktig Lukt Anpassning

  1. Efter steg 3,5, dela befolkningen i pyIs500 djur i flera portioner och värdering för nukleär kontra cytoplasmisk GFP :: EGL-4 i AWC vid tidpunkten noll (det vill säga efter 80 min exponering) och mggr efterföljande tidpunkter (figur 3).
  2. Överför både kontroll (-ve) och experimentella (+ ve) djur med disponibel glaspipetter på NGM plattor.
  3. Tillåta att djur återhämta olika lång tid och ompröva lokaliseringen av GFP :: EGL-4I AWC vid varje tidpunkt som i steg från 5,1 till 5,5.

7. Material

NGM plattor: För 1 L Lägg till 1 L DDH 2 0: 21 g Bacto-Agar, 3 g natriumklorid (NaCl), 2,5 g Bacto-pepton. Autoklav Media. Efter autoklavering, kyla agar tills temperaturen läser 54 ° C. Lägg följande lösningar: 25 ml 1 M kaliumfosfatbuffert, 1 ml 1 M magnesiumsulfat (MgSO 4), 1 ml 1 M kalciumklorid (CaCb 2), 1 ml kolesterol i etanol (5 mg / ml förråd).

1 M Dibasiskt K 2 HPO 4 174,2 g / mol: För 500 ml: I 400 ml DDH 2 O, lös 87,1 g Dibasic K 2 HPO 4. Justera volymen till 500 L med DDH 2 O Filtersterilisera med användning av en 500 ml steril filterenhet.

1 M Monobasiskt KH 2 PO 4 136,1 g / mol: För 1 L: I 800 ml DDH 2 O, lös 136,1 g Monobasiskt KH 2 PO 4. Justera volymen till 1 liter med DDH 2 O Filtersterilisera med användning av en 500 ml steril filterenhet.

1 M kaliumfosfat (K 3 PO 4) Buffert pH 6,0: För 1 L: I en 1 L sterilfilter enhet, tillsätt 868 ml 1 M monobasiskt KH 2 PO 4. Låt enheten filtrera genom, tillsätt sedan 132 ml 1 M Dibasiskt K 2 HPO 4. Låt enheten filtrera all vätska. Avlägsna filterenhet och justera pH till 6,0. Förvara i rumstemperatur.

S-Basal: För 1 L: tillsätt 50 ml 1 M K 3 PO 4, pH ~ 6,0, och 20 ml 5M NaCl aq. Fyll till 1 L medDDH 2 O. Autoklav lösning.

M9: För 1 L: 3 g KH 2 PO 4, 6 g Na 2 HPO 4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO 4, H 2 O. Fyll till 1 L med DDH 2 0. Sterilisera genom autoklavering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ett exempel på lokalisering mönstret av GFP :: EGL-4I den AWC före och efter långvarig lukt exponering visas i figur 2. Före långvarig lukt exponering, GFP :: EGL-4 är lokaliserad till cytosolen av AWC (figur 2B), och efter 80 minuter lukt exponering GFP :: är EGL-4 lokaliserad till kärnan av AWC (figur 2D). På beteendemässiga nivå, djur med cytosoliskt GFP :: EGL-4 i AWC attraheras av en punktkälla av lukt (Figur 2C grafer representativa resultat från kemotaxi analyser av inte anpassad djur - notera kemotaxi index 3 är nära 1). Djur som uppvisar nukleär GFP :: EGL-4 i AWC inte attraherad av en punktkälla av anpassning lukt (figur 2E grafer representativa resultat från kemotaxi analyser av anpassade djur - notera den kemotaxi index är nära noll). För att generera statistiskt signifikanta data från lukt-inducerade nukleär translokation analyser,experimenten bör köras minst 3 gånger och på olika dagar. För en detaljerad beskrivning av kemotaxi-analysen kan det vara lämpligt att hänvisa till Jove artikel 2490 14.

När EGL-4 in i kärnan av de AWC nervceller det orsakar stabila och långvariga förändringar i AWC fysiologi som kvarstår även när EGL-4 är inte längre i kärnan (Figur 3). Efter 80 exponering min lukt djur kommer att ignorera en punktkälla av anpassning lukt (Figur 3 övre panelen lätt bar på vänster), och denna anpassning kommer att bestå även efter 120 minuter av återhämtning (figur 3 övre panelen ljus bar till höger). Efter 80 minuter av lukt exponering GFP: EGL-4 observeras i kärnan av AWC (Figur 3 nedre panelen, ljus bar på vänster). Denna nukleära posten är både nödvändigt och tillräckligt för att framkalla en långsiktig anpassning i AWC 5. Efter 120 minuter återhämtning, dessa djur inte längre uppvisar nukleär GFP :: EGL-4 (figur 3 undre panelen, ljus bar på höger) men kommer fortfarande ignorerar en punktkälla av anpassning lukt bensaldehyd på beteendemässiga nivå.

Figur 1
Figur 1. Översikt över protokoll för långsiktiga lukt-inducerad nukleär translokation analyser. För det första är djur som uttrycker GFP :: EGL-4 (pyIs500 djur) odlades vid 25 ° C på NGM-plattor ympade med OP50 E. coli. Andra är djur utsätts för en lukt anpassning blandning (experimentgrupp) eller S-Basal buffert (kontrollgrupp). För det tredje djuren gjorde blint genom att räkna antalet djur som uppvisar nukleär GFP :: EGL-4 i AWC och antalet djur som uppvisar cytoplasmisk GFP :: EGL-4 i AWC.

Figur 2
Figur 2. et al.. 6 Figur 2B Före långvarig lukt exponering, GFP :: EGL-4 är lokaliserad till cytosolen i AWC. Figur 2C. På beteendemässiga nivå djur med cytosoliskt GFP :: EGL-4 i AWC lockas till en punkt surace av lukt. Detta diagram genererades från representativa resultat från kemotaxi analyser av inte anpassad djur. Observera kemotaxi index är nära 1. Figur 2D. Efter 80 minuter lukt exponering GFP ::-EGL 4 är lokaliserad till kärnan av AWC. Figur 2E. Djur uppvisar kärn GFP :: EGL-4 i AWC inte lockas till en punktkälla av anpassning lukt. Detta diagram genererades från representativa resultat från kemotaxi analyser av anpassade djur. Observera kemotaxi index är nära noll.

Figur 3
Figur 3. När EGL-4 in i kärnan av de AWC nervceller det orsakar stabila och långvariga förändringar i AWC fysiologi som kvarstår även när EGL-4 är inte längre i kärnan. Djur som utsätts för lukt (80 min) får återhämta sig från den långsiktiga lukt exponering och gjorde för cytoplasmisk kontra kärnkraftlokalisering av GFP :: EGL-4. (Övre panelen) Efter 120 min återhämtning de djur som exponerats för lukt för 80 minuter fortfarande anpassas på beteendemässiga nivå. (Nedre panelen) Efter 120 djur min återhämtning som exponerats för lukt för 80 minuter längre uppvisar nukleär GFP :: EGL-4. Således åberopar nukleära EGL-4 stabila långvariga förändringar i fysiologi AWC som kvarstår efter EGL-4 är inte längre i kärnan. Figur modifieras med tillstånd från Lee et al. 5.. Figur 3 övre panelen Efter 80 exponering min lukt djur kommer att ignorera en punktkälla av anpassning lukt, och denna anpassning kommer att bestå även efter 120 minuters återhämtning. Figur 3 undre panelen. Efter 80 minuter av lukt exponering GFP :: EGL-4 observeras i kärnan av AWC. Denna nukleära posten är både nödvändigt och tillräckligt för att framkalla en långsiktig anpassning i AWC. Efter 120 minuter återhämtning, dessa djur inte längre uppvisar kärnkraft GFP :: EGL-4 men kommer fortfarande ignorerar en punkt souRCE av anpassning lukt bensaldehyd på beteendemässiga nivå.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Den lukt-inducerad kärnkraft inmatning av en GFP-märkt EGL-4-molekylen som beskrivs här ger en robust molekylär avläsning av luktsinnet anpassning C. elegans. De lukt-inducerade nukleär translokation analyser är enkla och kräver bara några dagars förberedelsetid. Den pyIs500 djur som vi har konstruerat för dessa analyser, uttrycker en markör som belyser AWC neuron samt uttrycker GFP-märkta EGL-4-proteinet. Därför anser vi att en försöksledaren med liten eller ingen erfarenhet av att arbeta med denna typ av neuron kan mycket snabbt (kanske efter att ha undersökt ett tiotal djur) börjar känna sig bekväma att identifiera rätt cellen och poäng för nukleär kontra cytoplasmiskt EGL-4. Det kan vara användbart för läsaren att hänvisa till Jove artikel 835 som beskriver GFP analys C. elegans 15.

För att säkerställa att de data som genereras är av högsta kvalitet föreslår vi följande riktlinjer:1) alla poäng bör göras blint, 2) odling plattor innehållande något spår av föroreningar (svamp-eller bakteriella) inte kan användas, 3) maskar som upplevde svält under odling aldrig bör användas, och 4) anpassning mixar måste färskt på dagen för experiment.

Alla sensoriska system uppvisar exempel på neuronal plasticitet. Överföringen av signaler till kärnan är en mycket konserverad del av stabila former av neuronal plasticitet 16. Genom att utveckla en molekylär avläsning av luktsinnet plasticitet som representerar en nukleär translokation av PKG i stimulerade nervceller, erbjuder vi en plattform för snabb och detaljerad dissekering av neuronal plasticitet i en in vivo-modell. Med vår molekylära avläsning av luktsinnet anpassning har vi börjat beskriva några av de händelser som formar lukt anpassning i C. elegans 5,6,7. Detta är dock bara en början, och genom att studera denna process som en funktion av enGE, kön, infektion eller diet kan vi avslöja viktiga teman neuronal plasticitet vid kretsen och systemnivå.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Acknowledgments

Vi vill tacka Scott Hamilton och medlemmar av O'Halloran labb för noggrann läsning av detta manuskript. Vi tackar också våra anonyma granskare för utmärkta förslag och kommentarer insiktsfulla.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bacto Agar Difco DF0140-07-4 NGM plates
Sodium Chloride Fisher Chemical S671-10 NGM plates
Bacto Peptone Difco DF0118-07-2 NGM plates
Potassium Phosphate Dibasic Fisher Chemical S375-500 S-Basal buffer and NGM plates
Potassium Phosphate Monobasic Fisher Chemical P285-500 S-Basal buffer and NGM plates
Kimwipes - Small Kimberly-Clark LS2770
Ethanol 100% Gold Shield Chemical Co. 43196-115 diluting odors for chemotaxis assays
Calcium Chloride Sigma-Aldrich C8106-500G NGM plates
Magnesium Sulphate MP Biomedicals 150136-500G NGM plates
Sodium Azide 99% Fisher Scientific ICN10289180 Anesthetic
Agarose - UltraPure Invitrogen 16500-500 Agarose pads
Benzaldehyde Sigma-Aldrich B1334-100G AWC odor
Butanone, ACS Grade Sigma-Aldrich 360473-500ML AWC odor
Microcentrifuge Tubes - 1.5 ml Colored Denville LS8147
Pasteur Pipet Disposable Glass 5-3/4" Fisher Scientific 13-678-20B
Stratalinker Stratagene Stratalinker 2400 UV integration
Filter Vacuum Bottle - 500 ml Nalgene 09-740-25B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans. Neuron. 14, (4), 803 (1995).
  2. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans. Learning and Memory. 4, (2), 179 (1997).
  3. Bargmann, C. I., et al. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Neuron. 74, (3), 515 (1993).
  4. L'Etoile, N. D., et al. The cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 regulates olfactory adaptation in C. elegans. Neuron. 36, 1079-10 (2002).
  5. Lee, J. I., et al. Nuclear entry of a cGMP-dependent kinase converts transient into long-lasting olfactory adaptation. PNAS. 107, (13), 6016 (2010).
  6. O'Halloran, D. M., et al. Regulators of AWC-mediated olfactory plasticity in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5, (12), e1000761 (2009).
  7. O'Halloran, D. M., et al. Changes in cGMP levels affect the localization of EGL-4 in AWC in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7, (2), e31614 (2012).
  8. Mello, C. C., et al. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO Journal. 10, 3959-39 (1991).
  9. Miyabayashi, T., et al. Expression and function of members of a divergent nuclear receptor family in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 215, 314 (1999).
  10. L'Etoile, N. D., Bargmann, C. I. Olfaction and odor discrimination are mediated by the C. elegans guanylyl cyclase ODR-1. Neuron. 25, (3), 575 (2000).
  11. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451 (1995).
  12. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. (2006).
  13. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, (1), 71 (1974).
  14. Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays. J. Vis. Exp. (49), e2490 (2011).
  15. Berkowitz, L. A., Hamamichi, S., Knight, A. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes. J. Vis. Exp. (17), e835 (2008).
  16. Pittenger, C., Kandel, E. R. In search of general mechanisms for long-lasting plasticity: Aplysia and the hippocampus. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 358, (1432), 757 (2003).
En molekylär Avläsning av långsiktigt Olfactory anpassning i<em&gt; C. elegans</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).More

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter