Summary
מחקר זה מתאר את ההליכים של הקמת אקסון עצבי רומן ופלטפורמה (אסטרו) גליה שיתוף תרבות. במערכת זו שיתוף התרבות, מניפולציה של אינטראקציה ישירה בין האקסון יחיד (ותאי גלייה יחידים) הופכת להיות ריאלית, המאפשרת ניתוח מכניסטית של נוירון ההדדי לאיתות גליה.
Abstract
נוירון הנכון לאינטראקצית גליה הוא קריטי לתפקוד פיסיולוגי של מערכת העצבים המרכזית (CNS). תקשורת דו כיוונית זו מתווכת על ידי מתוחכמת מסלולי איתות ספציפיים בין תא העצב ו1,2 גליה. זיהוי ואפיון של מסלולי האיתות הללו חיוניים להבנה של איך נוירון לפיזיולוגית CNS צורות אינטראקצית גליה. בעבר, תרבויות נוירון וגליה המעורבות כבר נוצל באופן נרחב לבדיקה ואפיון מסלולי איתות בין תא העצב וגליה. מה למד מהכנות ואחרות אלה בכלי vivo, לעומת זאת, הציע כי איתות הדדית בין תא עצב וגליה שאירעה לעתים קרובות בתאים ספציפיים בתוך הנוירונים (כלומר, אקסון, דנדריט, או סומא) 3. זה עושה את זה חשוב לפתח מערכת תרבות חדשה המאפשרת פרדה של תאים עצביים ובמיוחד בוחן את האינטראקציה בין גליה ונוירואקסונים / דנדריטים nal. בנוסף, מערכת התרבות המעורבת הקונבנציונלית אינה מסוגלת להבדיל את הגורמים המסיסים ואותות קשר ישירים בין קרום תא העצב וגליה. יתר על כן, הכמות הגדולה של תאי עצב ותאי גליה במערכת הקונבנציונלית שיתוף התרבות חסרת רזולוצית הצורך לקיים אינטראקציה בין האקסון אחת ותא גליה.
במחקר זה, אנו מתארים מערכת גליה שיתוף תרבות האקסון רומן ועם השימוש בפלטפורמת תרבות microfluidic (MCP). במערכת זו שיתוף התרבות, נוירונים ותאי גלייה מתורבתים בשני חדרים נפרדים המחוברים באמצעות ערוצים מרכזיים מרובים. במצע תרבות microfluidic זה, רק תהליכים עצביים (בעיקר אקסונים) יכולים להיכנס לצד גליה בערוצים המרכזיים. בשילוב עם תיוג חלבון פלואורסצנטי חזק, מערכת זו מאפשרת חקירה ישירה של מסלולי איתות בין אינטראקציות axonal / הדנדריטים וגליה, כגוןרגולציה של האקסון בתיווך בתעתיק גליה סחר, גליה בתיווך הקולטן במסופים עצביים, וצמיחת האקסון גליה בתיווך. הקוטר הצר של החדר גם אוסר באופן משמעותי את הזרימה הבינונית נוירון המועשר לתא גלייה, בהנחיית חיטוט אינטראקצית קרום החלבון הישיר בין האקסונים / דנדריטים ומשטחי גליה.
Protocol
1. אסיפה של לשכת תרבות Microfluidic (MCP)
- MCP (1 איור) הם תאים פתוחים המיועדים לתרבויות מחולקות לסוגים שונים של תאים 4. זה בדרך כלל יש שני תאים המחוברים באמצעות הערוצים המרכזיים (3 מיקרומטר בקוטר). הרכבה של MCP עם מנות עם רצפת זכוכית היא הכרחית להכנת תרבויות וניתוח הדמיה שלאחר מכן.
- ראשית, מנות סטריליים מעייל עם רצפת זכוכית עם Polyornithine (סיגמה אולדריץ, 1 מ"ג / מ"ל) מומסות tetraborate נתרן (סיגמה אולדריץ, 10 המ"מ pH 8.5) והודגרו למשך הלילה ב 37 ° C.
- ביום למחרת, את הכלים המצופים רצפת זכוכית נשטפו שלוש פעמים עם DDH 2 O והתייבשו תחת מנדף סטרילי. המנות עם רצפת הזכוכית היו אז עוד יותר מצופות עם laminin (סיגמה אולדריץ, 1 מ"ג / מ"ל) והתייבש תחת אור UV במשך שעה 1. מנות מצופות מוכנות לשימוש או שניתן לאחסן ב -20 ° C עד לשימוש. אלה ציפוימחדש נחוץ לנוירונים ציפוי והאסטרוציטים בשיתוף התרבות.
- כדי להרכיב את פלטפורמת התרבות, פלטפורמות תרבות microfluidic הונחו על גבי הכלים המצופים רצפת הזכוכית עם ערוצי חיבור מרכזיים בצד התחתון שלו כדי ליצור חותם חזק. נוירון הרגיל או מדיומי התרבות astrocyte נוספו (מאזורי הציפוי הסלולריים) משני הצדדים (איור 1) לMCP התאסף ודגר 2-4 שעות על 37 מעלות צלזיוס, על מנת להבטיח שאין דליפה בין MCP והזכוכית צלחת תחתית. בדקנו עם מדיום לפני תאי ציפוי על מנת להבטיח שאין דליפה. ההרכבה של MCP על צלחת זכוכית בעל תחתית צריכה להיות מוכנה טרי לפני השימוש.
2. הכנה של תרבות ואינדוקציה העצביות של האקסונים עצביים בMCP Assembled
- תרביות תאים עצביות בקליפת המוח היו מוכנות טריה 14-16 מוח עכבר בני יום עוברי. מדיום תרבות נוירון מורכב מבינוני neurobasal, 2% B27 neurobasaתוסף הליטר, 2 מ"מ גלוטמין ידי הוספת 1% מ100x GlutaMAX, ו1% פניצילין-streptomysin. בעקבות נתיחה של מוח העכבר, קרומי המוח הוסרו מהקליפה תחת מיקרוסקופ לנתח. הרקמה הייתה אז קצוצות בסכין גילוח כדי להפוך בלוקים קטנים של רקמה על מנת להגדיל את שטח הפנים החשופים לטריפסין. לוקי רקמות היו trypsinized (סיגמא אולדריץ, טריפסין 0.05%) למשך 10 דקות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן ניתק בעדינות על ידי טחינה דקה עם פיפטה פסטר אש מלוטשת. תאים ניתקו סוננו דרך מסננת מיקרומטר 70 לאסוף השעית תא עצבית ברורה.
- הנוירונים (2-3 x 10 6 / מ"ל, 150 μl) היו מצופים על אזורי הציפוי הסלולריים בצד ימין (איור 1) של MCP הורכב כך שנוירונים יכולים לצרף באזור החזקת התא (איור 1). הנוירונים טריים מוכנים היו מצופים בינוני ציפוי תא עצב אשר היא השלים עם 5% בסרום שור עוברי (Hyclone) להתקנותמדיום תרבות נוירון r. מפני שרק הנוירונים המחברים את האזור בהחזקת התא מסוגלים לגדול אקסונים לצד השני של MCP התאסף בערוצים מרכזיים, חשוב לצפיפות גבוהה צלחת של נוירונים באזור ציפוי התא על מנת להבטיח מספיק נוירונים מחוברים תא שטח שייר. תמונה מייצגת של צפיפות גבוהה של האקסונים עצביים מוצגת באיור 2 א.
- ביום למחרת, בינוני ציפוי נוירון הוחלף על ידי התרבות הבינונית נוירון הרגיל. בינוני שינוי בוצע על ידי aspirating הבינוני בזהירות מאזור תא הציפוי של החדר, אבל לא מאזור החזקת התא של MCP התאסף, כדי למנוע בועות אוויר באזור החזקת התא ומחברים את הערוצים המרכזיים. בועות אוויר תהיינה קשות לדכא את תולדת האקסון והכניסה הבאה לערוצים המרכזיים בMCP. גורם גליה תאים נגזר neurotrophic (GDNF, 10-20 ng / ml) הוסיף גם בצד השני (משמאל)של החדר באותו היום כדי להקל על הגיוס של תולדת האקסון 5 מהצד והצלב העצבי בערוצים מרכזיים של MCP כנס (איור 2 א). כמות נכבדה של תולדת neurite ספונטנית ללא GDNF הוא ציין גם מהצד הנגדי והעצבי בערוצים מרכזיים של MCP כנס. אקסונים הנכנסים לתוך הערוץ המרכזי לעתים קרובות נצפו 2-3 ימים לאחר ציפוי. ברגע שייכנסו לאקסונים הערוץ המרכזי, שהם בדרך כלל להיכנס לצד השני בתוך יום אחד. האקסונים הם בדרך כלל ללא פגע במשך שבוע אחד לפחות לאחר הכניסה לצד השני.
3. תוספת של האסטרוציטים מתורבתים לMCP להקים מערכת ממודרת שיתוף תרבות
תרבויות astrocyte העיקריות הוכנו ממוח גור P1-3 עכבר. הליך ניתוק המוח דומה להליך בידוד התא העצבי שתואר לעיל. האסטרוציטים היו מצופים הראשון לתוך צלחת 10 סנטימטרים שהיו מראשמצופים עם Polyornithine (סיגמה אולדריץ, 1 מ"ג / מ"ל). מדיום תרבות astrocyte (DMEM, 10% בסרום שור עוברי, 1% פניצילין-streptomysin) שונה בכל יום במשך הימים הבאים כדי להסיר את הפסולת. אחרי זה, המדיום היה שונה כל שלושה ימים.
- האסטרוציטים הופכים confluent 90% ויוצרים monolayer לאחר 7 ימים. האסטרוציטים confluent היו trypsinized ו150 μl של האסטרוציטים מחדש מושעים-(1x10 6 / מ"ל) היו מצופים מחדש, לאזור ציפוי התא של הצד השמאלי של MCP התאסף כאשר האקסונים עומדים להיכנס, או סתם נכנסו בצד השמאל של התאסף MCP. האסטרוציטים בדרך כלל מצופים 4-5 ימים לאחר את הנוירונים היו מצופים. GDNF הוסר ראשון לפני הציפוי מחדש של האסטרוציטים לצד השמאל של MCP. האסטרוציטים העניין מצופים היו צמודים באזור החזקת התא, כפי שמוצגים על ידי immunostaining GFAP (איור 1). רק זרימה מינימאלית של מדיום בין שני הצדדים של התאים (הנקבע על ידי הקרינה דכן) נמצא בMCP, כפי שמוצג 4,6 בעבר.
- האסטרוציטים הופכים confluent 90% ויוצרים monolayer לאחר 7 ימים. האסטרוציטים confluent היו trypsinized ו150 μl של האסטרוציטים מחדש מושעים (1-x 10 6 / מ"ל) היו מצופים מחדש, לאזור ציפוי התא של הצד השמאלי של MCP התאסף כאשר האקסונים עומדים להיכנס, או פשוט נכנס מהשמאל צד של MCP כנס. האסטרוציטים בדרך כלל מצופים 4-5 ימים לאחר את הנוירונים היו מצופים. GDNF הוסר ראשון לפני הציפוי מחדש של האסטרוציטים לצד השמאל של MCP. האסטרוציטים העניין מצופים היו צמודים באזור החזקת התא, כפי שמוצגים על ידי immunostaining GFAP (איור 1). רק זרימה מינימאלית של מדיום בין שני הצדדים של התאים (הנקבע על ידי צבעי קרינה) נמצאה בMCP, כפי שמוצג 4,6 בעבר.
- לאחר הציפוי מחדש של האסטרוציטים, האקסונים שנכנסו לצד השמאל של MCP התאסף ישירות אינטראקציה עם astrocytes ידי או מגע ישיר אקסונלית או שחרור של גורמים מסיסים. Immunostaining של GLT1 astroglial פלזמת הקרום גלוטמט טרנספורטר וβIII-טובולין העצבי בוצע כדי להמחיש את האינטראקציה בין אקסונים ואת האסטרוציטים, כפי שמוצג באיור 2D-F.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ניתוח זמן לשגות הדמיה של הפעלת אמרגן האקסון המושרה GLT1 בהאסטרוציטים
מערכת astrocyte שיתוף תרבות נוירון והמחולק מאפשר רק את התהליכים העצביים, בעיקר אקסונים, באופן סלקטיבי אינטראקציה עם האסטרוציטים. בעקבות ההקמה המוצלחת של האקסון ו( או תאי גליה אחרים) שיתוף תרבות astrocyte בMCP התאסף, סוגים שונים של אינטראקציות האקסון-גליה ניתן ללמוד כגון; הפעלת האקסון מושרה של הפעלת astroglial גן האמרגן, הדרכת האקסון astrocyte המושרה , האקסון המושרה astroglial Ca 2 + תגובה, וסינתזת האקסון המושרה במיאלין oligodendrocytes. כל היישומים הללו לנצל את הזמינות של כתבי ניאון חזקים הזמינה לתאים או צבע הטעון לתאים אלה גליה.
כאן אנו מתארים הפעלת תעתיק האקסון מושרה של טרנספורטר 1 (GLT1) אמרגן גלוטמט astroglial באמצעות כרום מלאכותי חיידקים(BAC) כמה עכברים הטרנסגניים GLT1 eGFP ומערכת ממודרת זה שיתוף תרבות. בעכברים המהונדסים eGFP GLT1 BAC, כתב פלואורסצנטי eGFP היה overexpressed תחת השליטה של אמרגן GLT1 הגנומי 7. הביטוי של עיתונאי eGFP קורלציה עם ביטוי אנדוגני GLT1 אמרגן הפעלת חלבון ופעילות פונקציונלית 7 בכך מאפשר הערכה של פעילות GLT1 האמרגן בהאסטרוציטים בודדים באתרו. ביטוי GLT1 Astroglial תלוי מאוד על גירוי עצבי 6,8. האסטרוציטים עיקריים להביע רמות מינימום של GLT1, אולם GLT1 רמות ביטוי (הן mRNA וחלבון) מושרות בחריפות בהאסטרוציטים ששיתוף תרבותיים עם 9 תאי עצב. הראיות מוצגות כאן על ידי GLT1 immunoreactivity גדל באופן משמעותי במערכת ממודרת שיתוף התרבות (איור 3). בנוירון קונבנציונלי וastrocyte שיתוף תרבויות, צפיפות גבוהה של תאי המוח לעשות את זה פחות אידיאלי לצפותהשפעה של האקסונים עצביים על הפעלת התעתיק של GLT1 אמרגן.
כדי לפקח על הפעלת האקסון התלויה GLT1 האמרגן, נוירונים מסוג בר היו בתרבית בצד ימין של MCP התאסף והאקסונים היו מושרה בעקבות היישום של GDNF בצד השמאל של MCP כנס. האסטרוציטים נגזרים מעכברי BAC GLT1 eGFP היו בתרבית בצד השמאל של MCP התאסף אחרי האקסונים כבר מושרים ופשוט נכנסו לצד השמאל של MCP כנס. סך של 6 ימים (24 שעות עד 140 שעות) תמונות זמן לשגות נאסף כדי לפקח על שינוי eGFP פלואורסצנטי עצמה בזמן אמת וצמיחת האקסון בMCP. כפי שניתן לראות באיור 4A, ביטוי פלואורסצנטי eGFP מאוד מינימאלי בהאסטרוציטים נצפה 24 שעות לאחר הציפוי של האסטרוציטים. גידול משמעותי של עוצמת eGFP נצפה 48 שעות לאחר שיתוף התרבות (מ 24 שעות ל 68 שעות) כאשר האקסונים גם לתוך צד astrocyte והאינטראקציהלא פנייה ישירה עם האסטרוציטים (איור 4 לפנה"ס). מצד השני, עוצמת קרינת eGFP הופחתה בהדרגה פעם אקסונים מכווצים ומידרדים על ידי מוות של תאים עצביים הנגרם בצד העצבי (מימין) של MCP כנס (איור 4D-F) kainite (200 מיקרומטר). השינוי הדינמי של עוצמת קרינת eGFP בתגובה לאקסונים בבירור כי פעילות האמרגן astroglial GLT1 היא מווסתת על ידי אינטראקצית האקסון.
איור 1. תרשים סכמטי של נוירון microfluidic ופלטפורמת astrocyte שיתוף תרבות. פלטפורמת התרבות Microfluidic (MCP) יש שני תאים המחוברים באמצעות הערוצים המרכזיים. תאים יכולים להיות מצופים מאזור ציפוי התא בכל צד והאקסונים עצביים הנגרמים מהאזור ועובר החזקת התא באמצעות ערוצים המרכזיים אל ent אה הצד השני (להוסיף 50 מיקרומטר סרגל קנה המידה).
איור 2. אינדוקציה של אקסונים ואינטראקציה של אקסונים עם astrocyte בMCP MCP העצביים. () בצפיפות גבוהה של תאי עצב באזור החזקת התא של MCP התאסף, נחשפה על ידי immunostaining βIII-טובולין. סרגל קנה מידה: 50 מיקרומטר (B) המוגדל מבט של אקסונים העוברים בערוצים המרכזיים ונכנס לצד השני של MCP. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר (C) חרוט צמיחת האקסון מתגלה על ידי צביעת bIII-טובולין כאשר האקסונים להיכנס לצד השני של MCP. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר (ד) אגדי האקסון שגדלים דרך הערוץ המרכזי ולהיכנס לצד השני של MCP. (E) נחשפו על ידי האסטרוציטים GLT1 immunostaining בצד של גליה MCP. (F) תמונה ממוזגת מציגה קשר בין אקסונים וGLT1 האסטרוציטים חיוביים. סרגל קנה מידה: 50 מיקרומטר.
together.within עמודים = "תמיד"> 
איור 3. אינדוקצית Neuron התלוי של GLT1 ביטוי בהאסטרוציטים עיקריים GLT1 immunoreactivity ב() תרבויות עיקריות astrocyte, סרגל קנה מידה:. 50 מיקרומטר (B) תרבויות העיקריות עצביות, ו (ג) ונוירון astrocyte העיקרי שיתוף תרבויות. סרגל קנה מידה: הנוירונים שמוצגים על ידי immunostaining של βIII-טובולין. גידול משמעותי של GLT1 immunoreactivity נצפה בנוירון וastrocyte שיתוף תרבויות.
איור 4. תמונות זמן לשגות של הפעלת האקסון מושרה GLT1 אמרגן בMCP עם GLT1 האסטרוציטים BAC eGFP ונוירונים מסוג בר. שינויים דינמיים של עוצמת eGFP והצמיחה של אקסונים נאספו באמצעות הקלטת 6d זמן לשגות בעקבות ציפוי astrocyte. (א) (ב) (ג) (ד) (ה) 140h 24h יחלוף 48 שעתי 68h 92h 112h (F). כניסתו שלxons (מודגש על ידי החצים הצהובים) אל צד astrocyte נצפה מיחלוף 48 שעות ל92h שמתאם עם עוצמת קרינה מוגברת eGFP. ירידה של עוצמת קרינת eGFP התרחשה מ112h ל140h לאחר kainite (200 מיקרומטר) יושם בצד העצבי ב92h כדי לגרום למוות של תאים עצביים וניוון האקסון. סרגל קנה מידה: 50 מיקרומטר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
האסטרוציטים מערכת שיתוף תרבות נוירון מבוסס MCP ומאפשר נתיחה של נוירון המפורט למסלולי astroglia איתות שהיא מאפשרת רק את האקסונים עוברים בערוצים המרכזיים ואינטראקציה עם תאי astroglial. מערכת זו שיתוף התרבות ניתן להגדיר בנוחות עם נוירון הקונבנציונלי ונהלי התרבות astrocyte. אנחנו גם תארנו יישום מעשי של מערכת זו שיתוף התרבות על ידי העסקת כתב מבוסס eGFP עבור הוכחת הפעלת אמרגן GLT1 האקסון תלויה בהאסטרוציטים.
מערכת זו מבוססת MCP נוירון וastroglia שיתוף התרבות מציעה מספר יתרונות בהשוואה לשיטות קונבנציונליות שיתוף תרבות: 1) היכולת לחזות ולזהות את האינטראקציה המורפולוגי המפורשת בין אקסונים בודדים והאסטרוציטים בזמן האמת תחת מיקרוסקופ ברזולוציה גבוהה 2) גם microenvironment בשליטה העצמאית להחלת מניפולציה תרופתית להשפעת התא ספציפי 3) ניתוח של הפעלת אמרגןוביטוי חלבון מושרה באופן בלעדי / עד מוסדר ב- האסטרוציטים שמווסתים על ידי מגע אקסונים. כנהלי התרבות למיקרוגליאה עיקרית 10 ו oligodendrocytes 11 כבר מבוססים היטב, מערכת MCP זה שיתוף התרבות יכולה להיות מיושמת גם לנוירון ונוירון המיקרוגליאה לoligodendrocyte שיתוף תרבויות. בינתיים, אנחנו גם מכירים בכך שמערכת זו שיתוף התרבות מיועדת לניתוח התמונה הרגיש ברמת התא הבודדה, שהוא משלים לגישות המקובלות של ניתוח כמות גדולה של תאים, כגון RNA או ניתוח חלבונים. בנוסף, המערכת שלנו מפשטת את האינטראקציה העצומה בין הנוירונים ותאי גלייה in vivo על ידי אינטראקציה בין תא הממחיש ואקסון הבודד. כל אלה צריכים להילקח בחשבון כאשר לפרש את התוצאות ממערכת זו שיתוף התרבות. במערכת העצבים מרכזיים, יחסי גומלין בין אקסונים ותאי גלייה שונים באופן נרחב בהווה והם חשובים ביותר עבור שניהם ונוירוןפונקציות גליה 12,13. פיתוח של מערכת זו שיתוף התרבות יאפשר נתיחת הדמיה מבוססת של אינטראקציות אלה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
Acknowledgments
ברצוננו להודות לד"ר ג'פרי רוטשטיין למתן עכברי BAC GLT1 eGFP וGLT1 נוגדנים; טאפטס מרכז למדעי מוח מחקר (NIH P30 NS047243; PI, רוב ג'קסון) לאספקת מתקני גרעין יקרים; סגל גיוס מענק חדש (NIH P30 5P30NS069254-02 , PI, פיל היידון) בטאפטס Neuroscience מחלקה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fetal bovine serum | Hyclone | SH30070.03 | for plating neuron for neuron cutlure medium |
| Fetal bovine serum | Sigma-Aldrich | F4135 | for astrocyte culture medium |
| Glial derived nerve factor | R&D Systems | 212-GD | Apply 10-20 ng/ml to neuron side of chamber |
| Dulbecco modified eagle medium high glucose | Sigma-Aldrich | 11995 | |
| 70 mm cell strainer | BD Falcon | 352350 | |
| Sterile glass bottom dish | MatTek Corporation | ||
| Microfluidic culture platforms | Xona Microfluidics LLC | SND150 | |
| 6 wells of the culture plate | Cellstar | 657 160 | |
Neuron culture medium
|
|||
| Neuron culture medium for plating cell
|
|||
| Astrocyte culture medium
|
|||
| Table 1. Materials used in the microfluidic culture platform-based neuronal axon and glia co-culture system. |
|||
References
- Stevens, B. Neuron-astrocyte signaling in the development and plasticity of neural circuits. Neuro-Signals. 16, 278-288 (2008).
- Paixao, S., Klein, R. Neuron-astrocyte communication and synaptic plasticity. Current opinion in neurobiology. 20, 466-473 (2010).
- Fields, R. D., Stevens-Graham, B. New insights into neuron-glia communication. Science. 298, 556-562 (2002).
- Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nature. 1, 2128-2136 (2006).
- Wang, C. Y. Regulation of neuromuscular synapse development by glial cell line-derived neurotrophic factor and neurturin. The Journal of biological chemistry. 277, 10614-10625 (2002).
- Yang, Y. Presynaptic regulation of astroglial excitatory neurotransmitter transporter GLT1. Neuron. 61, 880-894 (2009).
- Regan, M. R. Variations in promoter activity reveal a differential expression and physiology of glutamate transporters by glia in the developing and mature CNS. The Journal of neuroscience. 27, 6607-6619 (2007).
- Swanson, R. A. Neuronal regulation of glutamate transporter subtype expression in astrocytes. The Journal of neuroscience. 17, 932-940 (1997).
- Schlag, B. D. Regulation of the glial Na+-dependent glutamate transporters by cyclic AMP analogs and neurons. Molecular pharmacology. 53, 355-369 (1998).
- Ponomarev, E. D., Novikova, M., Maresz, K., Shriver, L. P., Dittel, B. N. Development of a culture system that supports adult microglial cell proliferation and maintenance in the resting state. Journal of immunological. 300, 32-46 (2005).
- Espinosa-Jeffrey, A., Wakeman, D. R., Kim, S. U., Snyder, E. Y., de Vellis, J. Culture system for rodent and human oligodendrocyte specification, lineage progression, and maturation. Current protocols in stem cell biology. Chapter 2, (2009).
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60, 430-440 (2008).
- Debanne, D., Rama, S. Astrocytes shape axonal signaling. Science signaling. 4, pe11 (2011).
