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Immunology and Infection

Trans-vivo Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ Assay für Antigen-spezifische Verordnung

Published: May 2, 2013 doi: 10.3791/4454

Summary

Wir beschreiben eine wertvolle diagnostische Assays, die möglicherweise verwendet werden könnten, um den Abzug der Immunsuppression nach der Transplantation ohne erhöhten Risiko einer Abstoßungsreaktion zu entscheiden. Der Test basiert auf den Grundsätzen der Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ und liefert genaue Beurteilung der beiden Spender spezifischen Effektor-und regulatorischen Immunantworten durch Empfänger montiert.

Abstract

Spättypallergie Antwort (DTH) ist ein schneller in vivo Manifestation der T-Zell-abhängige Immunantwort auf ein fremdes Antigen (Ag), dass das Immunsystem des Wirts hat in der jüngsten Vergangenheit erlebt. DTH-Reaktionen werden oft in einer Sensibilisierung Phase unterteilt, die sich auf der ersten Antigen Erfahrung und Herausforderung Phase, die in der Regel folgt einige Tage nach der Sensibilisierung. Das Fehlen einer Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ Reaktion auf einen Rückruf Ag durch Hauttests nachgewiesen wird oft als Beweis für Anergie angesehen. Die traditionelle DTH-Assay wurde effektiv bei der Diagnose vieler mikrobieller Infektionen eingesetzt.

Trotz, die ähnliche Funktionen wie immun Lymphozyteninfiltration, Ödeme und Nekrosen, ist die direkte DTH keine praktikable diagnostische Technik bei transplantierten Patienten, da die Möglichkeit der direkten Einspritzung, was zur Sensibilisierung auf Spender-Antigene und Verlust des Transplantats. Um dieses Problem zu vermeiden, das Brummenein-zu-Maus "trans-vivo" DTH-Assay wurde 1,2 entwickelt. Dieser Test ist im Wesentlichen eine Übertragung DTH Test, wobei in menschlichen peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) und Antigene wurden subkutan in die Ohrmuschel injiziert oder Fußballen naiven Maus und DTH-wie Schwellung nach 18-24 h 3 gemessen. Die Antigen-Präsentation von humanen Antigen-präsentierenden Zellen wie Makrophagen oder T-Zellen, DCs in gefäßreiches Mausgewebe löst die entzündliche Kaskade und zieht Maus Immunzellen, was zu Schwellung Antworten. Die Antwort ist Antigen-spezifischen Antigen und erfordert eine vorherige Sensibilisierung. Ein positiver Spender-reaktiven DTH-Reaktion in der Tv-DTH-Assay spiegelt wider, dass die transplantierten Patienten hat eine pro-inflammatorische Immunantwort Disposition zur Graft Alloantigene entwickelt.

Das wichtigste Merkmal dieses Assays ist, dass es auch verwendet werden, um regulatorische T-Zellen, die Zuschauer Unterdrückung verursachen detektieren. Bystander Unterdrückung einesDTH Rückruf Reaktion in Gegenwart von Donor-Antigen ist charakteristisch für Transplantationspatienten mit anerkannten Allotransplantate 2,4-14. Die Überwachung von Transplantationspatienten für Alloreaktivität und Regulierung durch Tv-DTH kann identifizieren eine Untergruppe von Patienten, die aus der Reduktion der Immunsuppression ohne erhöhtes Risiko einer Abstoßung oder sich verschlechternder Nierenfunktion profitieren könnten.

Ein viel versprechender Bereich ist die Anwendung des Tv-DTH-Assay bei der Überwachung von Autoimmunität 15,16 und auch in Tumorimmunologie 17.

Protocol

1. Herstellung von Lymphozyten

  1. Sammle Blut in ACD (Säure Citrate Dextrose) Röhren.
  2. Isolieren PBMC aus frischem menschlichem peripheren Blut-Lymphozyten mit Separation Medium nach Standardmethoden.
  3. Waschen Sie die PBMC dreimal mit PBS zu verunreinigen Thrombozyten zu entfernen. Thrombozyten wurden gefunden, um mit trans-vivo DTH Assay stören. Maximal zulässige Thrombozyten Kontamination von PBMC Vorbereitung ist ≤ 1x10 7 / Injektion.
  4. Wenn es eine auffallende rote Blutkörperchen Kontamination führen Lyse von roten Blutkörperchen mit ACK-Lysepuffer beim ersten Waschen. Entfernen ACK Puffer und dann Waschen 2-mal mit PBS.

2. Herstellung von Alloantigen

  1. Isolieren PBMC vom Spender peripheren Blut unter Verwendung des Verfahrens oben gezeigt.
  2. Resuspendieren Spender PBMC in PBS in einer Konzentration von 120x10 6 Zellen / ml (4x10 6 Zellen / 30 ul).
  3. 1 uM PMSF zu der Mischung, um Protein zu verhindernAbbau.
  4. Beschallen der Zellsuspension mit sieben 1-Sekunden-Impulse mit einer 2 mm-Ultraschallsonde. (Hinweis: Bewahren Sie das Material kalt und vermeiden Sie Blasen Wenn Schäumen auftritt, lassen Sie die Zellsuspension auf Eis sitzen für 2-3 min.).
  5. Überprüfen Sie die Störung von> 90% der Zellen mit einer Zählkammer.
  6. Zentrifuge die Mischung bei 14.000 rpm bei 4 ° C für 20 min in gekühlten Mikrofuge.
  7. Überstand in ein neues 2,0 ml Safe-Lock-Rohr und Protein-Konzentration bestimmen.

3. Handy Vorbereitung für Injektionen

  1. Für jede Injektion Aliquot 7x10 6 PBMC in 2,0 ml Safe-Lock Tubes.
  2. Zentrifuge bei 6.000 rpm für eine Minute in Mikrofuge und entfernen Sie den Überstand.
  3. Resuspendieren der Zellen in PBS mit oder ohne Antigene. Passen Sie das Injektionsvolumen bis 35 ul mit PBS. Das folgende Schema ist für Injektionen verwendet:
    Negative Kontrolle: PBMC + PBS
    Positive Kontrolle: PBMC + TT / DT (25 & mu; G / Injektion)
    Experimentelle Antigen-spezifische Antwort: PBMC + Test Ag (4-8 g / Injektion)
    Experimentelle Antigenspezifische Verordnung: PBMC + Test Ag + TT / DT

4. Pre-Messung, Injektion, und Post-Messung

  1. Anesthetize CB17 SCID-Maus mit Isofluran. Messen hinteren Fußballen Dicke mit einem gefederten Sattel. Setzen Bremssattel in der Mitte der Fußsohle, mit einer Kante berühren die letzte Walking Pad des Fußes, um eine Benchmark zu halten, der Messstelle konsistent bereitzustellen. Footpad Dicke wird aufgezeichnet, wenn Manometer-Anzeige stabilisiert hat.
  2. Langsam injizieren Zellsuspensionen subkutan in die Fußsohlen der Mäuse mit ½ cc Insulinspritzen mit 28-Gauge-Nadel. Führen Injektion mit der Nadel zeigt in Richtung der Zehen, und die Schräge nach oben. (Hinweis: Stellen Sie sicher, dass keine Leckage).
  3. 18-24 Stunden nach der Injektion betäuben Maus mit Isofluran und wiederholen Messung der Fußballen Schwellung.
  4. Subtrhandeln die Dicke jeder Fußballen vor der Injektion aus der Nacheinspritzung Wert auf die Fußballen Schwellung Wert zu erhalten, drückt die Daten in Einheiten von 10 -4 Zoll. Berechnen Sie die Antigen-spezifische net Schwellung durch Subtraktion Kontrolle Fußballen Schwellung (PBMC + PBS) aus den Fußballen Schwellungen Werte aus den Behandlungen (PBMC + Spender Alloantigen, TT / DT oder Spender Alloantigen + TT / DT) erhalten. Eine positive Kontrolle Reaktion auf Antigen TT / DT von ≥ 25x10 -4 Zentimeter über Hintergrund Reaktion auf PBS erinnern wird, damit der Test als gültig betrachtet werden benötigt.
  5. Bestimmen der Hemmung der Rückruf Reaktionen in Gegenwart von Spender-Antigenen durch Vergleichen der Netto Schwellung jeder Injektion unter Verwendung der folgenden Formel:
    Gleichung 1

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Representative Results

1. Auswertung der Nierentransplantation für Spender Antigen-spezifische Antwort mit Tv-DTH-Assay

Um die Spender-reaktiven zelluläre Immunität in Nierentransplantierten testen wir injiziert PBMC von Patienten mit Spender-Antigenen alleine oder mit einem Recall-Antigen Tetanus Toxoid (TT). Als positive Kontrolle wurden die Zellen mit TT allein injiziert. Wir beobachten drei Muster der Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ in Transplantationspatienten (Abbildung 1). Alle Patienten reagierten stark auf Ag (TT) Recall. Patient # 62 zeigt die regulatorischen Muster, durch eine schwache Antwort auf Donor-Antigen und einem markierten verbunden Unterdrückung (67%) an Antigen Reaktion in Gegenwart von Donor-Antigen erinnern ist. Dies ist das Muster, die gefunden wurde, um mit Orgel Allotransplantat Toleranz zugeordnet werden. Patient # 48 weist eine nicht aufsichtsrechtlichen Muster, das die Funktion einer schwachen Reaktion auf Spender, aber keinen Zusammenhang Unterdrückung (oder damit verbundenen Unterdrückung <50%) hat. DieseMuster wurde häufig bei Patienten, die Immunsuppressiva beobachtet. Jedoch können einige Patienten nach der Transplantation noch erhalten Immunsuppressivum anzuzeigen Spender Antigen-linked Unterdrückung ihrer DTH-Reaktion. Patient Nr. 8 Exponate der Spender-sensibilisierten Muster, durch eine hohe Abhängigkeit von Donor-Antigen und ohne Unterdrückung verbunden ist. Diese Antwort wird mit der Abstoßung in klinischen Fallstudien 8 zugeordnet.

2. Rolle von Donor-Regulierung in klinische Überwachung in Nierentransplantation

PBMC von Probanden in der ITN507ST Beobachtungsstudie eingeschrieben wurden ("Identifikation und mechanistische Untersuchungen Tolerant Nierentransplantationspatienten") für Spender-spezifischen indirekten Weg T Effektor-und regulatorischen T-Antworten mit dem TV-DTH-Assay und Spender (oder Spender getestet HLA- abgestimmt Surrogat-) Antigen. Wie in 2A gezeigt ist, zeigt indirekten Pfad T Effektor antwortet Spender-Antigeneeine deutliche Spektrum über die Einschreibung Gruppen; Fußballen Schwellung zunimmt, wenn die Patienten klinischen Status reicht von denen, die tolerant zu denen, die chronisch werden, sind abzulehnen. PBMCs aus tolerant Empfänger induzierte reduziert oder keine DTH-Reaktionen während PBMCs von Ablehnung Einzelpersonen ausgelöst starke Schwellung Reaktionen.

Die Messung der anti-Donor indirekten Weg T regulatorische Antwort von der gelinkten Unterdrückung Assay zeigte, dass Immunregulation ein wichtiger Mechanismus für Nierentransplantaten Akzeptanz war. 2B zeigt eine Abnahme der regulatorischen Reaktionen über den Bereich der meisten (Tol) bis Mittelstufe (Mono-und SI) zu mindestens tolerant (CR) 14 Patienten.

3. Überwachung von Autoimmunität mit Tv-DTH-Assay

Ein viel versprechender Bereich ist die Anwendung des Tv-DTH-Assay bei der Überwachung von Autoimmunität. BOS, ein Prozess der Fibro-obliterative Verschluss der kleinen Atemwege in dietransplantiert Lunge, ist die häufigste Ursache für Lungen-Transplantation Scheitern.

Durch die Prüfung der Rolle der Zell-vermittelte Immunität gegen Kollagen Typ V in diesem Prozess haben wir festgestellt, dass die höchste relative Risiko der Bronchiolitis obliterans Syndrom (BOS) Entwicklung in Patienten, die eine positive Tv-DTH Reaktion auf Kollagen Typ V in ihren entwickelt wurde beobachtet peripheren Blut.

Abbildung 3 zeigt, dass PBMCs von Lungen-Transplantation Empfänger, aber nicht von gesunden Kontrollen oder Kollagen IV-reaktiven Goodpasture-Syndrom-Patienten nach Nierentransplantation, waren häufig Kollagen V reaktiven 15.

4. Anwendung in der Tumorimmunologie

Trans-vivo DTH eröffnet neue Möglichkeiten in der Krebsforschung zu Prostatakrebs-Patienten für die Impfung Therapie zu priorisieren. Da regulatorische T-Zellen eine wichtige Rolle bei der Krebsentstehung und Progression spielen, haben wir TV-DTH, um die Reaktivität von PBMC testens von Krebspatienten mit einem DNA-Impfstoff Codierung Prostata-Phosphatase (PAP) behandelt. Wir nutzten die Zuschauer Unterdrückung der Reaktion auf Antigen erinnern, um zu bestimmen, ob Antigen-spezifische regulatorische Aktivitäten, die sich in Reaktion auf die Impfung hervorgerufen. Wir fanden, dass PAP-spezifische regulatorische T-Zellen spontan in einigen Patienten mit Prostatakrebs, während der Immunisierung bestehen und verhindern, dass der Nachweis von PAP-spezifischen Effektor Reaktionen nach der Immunisierung. Bei einigen Patienten wir PAP-spezifische geregelt T-Zell-Reaktionen vor der Immunisierung identifiziert. Bereits bestehende regulatorische T-Zellen, die für PAP kann mit der Unfähigkeit, antigenspezifische Th1-Typ-Immunantwort nach der Impfung entwickeln zugeordnet werden. Alternativ bereits bestehenden regulatorischen T-Zell-Antworten auf PAP werden die Patienten wahrscheinlich Effektor Antworten entwickeln sich nach mehrfacher Immunisierung zu identifizieren. So oder so, stellt dieser Test eine wichtige Beobachtung, da sie ein Mittel, um zu priorisieren oder ausschließen indiv. könnte darauf hindeuten,Idual Patienten von Antigen-spezifischen Impfstoff Auswertung 17.

Abbildung 1
Abbildung 1. Beispiele für die drei wichtigsten Muster der Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ (DTH) in Nierentransplantierten gefunden. Patient PBMCs in die Fußballen von CB17 SCID-Mäusen wurden entweder mit Recall-Antigen (TT), Spender-Antigene oder mit Spender + Recall-Antigen injiziert. Show ist die net Schwellung Antwort über Hintergrund.

Abbildung 2
Abbildung 2. . Indirekte Weg T-Zell-Analyse Themen eingeschrieben in fünf Gruppen: eineiige Zwillinge, klinisch tolerant (Tol), Steroid-Monotherapie(Mono), Standard-Immunsuppression (SI) und chronische Abstoßung (CR) für T-Effektor Reaktionen (A) und T regulatorischen Reaktionen (B) von Tv-DTH-Assay untersucht. Alle Panels: Einzelne Ergebnisse aus jedem Fach (individuelle Symbole) und Median (horizontale Linie) mit Quartile dargestellt. Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen sind dargestellt; * p <0,05, ** p <0,01 und *** p <0,001; # p = 0,04, # # p = 0,03, # # # p = 0,008.

Abbildung 3
Abbildung 3. Messung von Kollagen Typ V-spezifischen Autoimmunität durch Tv-DTH-Assay. Tv-DTH-Reaktionen von PBMCs von gesunden Kontrollen, Nierentransplantierten mit GPS-oder Lungentransplantation Empfänger erhalten. Alle 3 Gruppen hatten positive Reaktionen (≥ 25x10 -4 Zoll net Schwellung) an Antigen erinnern, Col (II), ein fibrilar Kollagen spezifischen Gelenkknorpel, nicht entlocken einem TV-DTH-Reaktion bei Patienten oder Kontrollen. Nierentransplantation mit GPS hatten erhöhte bedeuten Schwellungen Antworten auf Col (IV). Lung Transplantation Empfänger nicht zum Col (IV) reagieren, konnte aber zum Col (V) reagieren.

Fig. 4
Abbildung 4. Nutzung von TV-DTH-Test, um den Tumor induzierte Immunregulation zu beurteilen. PBMC von Prostatakrebs-Patienten mit Prostata-Phosphatase (PAP) allein oder mit Recall-Antigen TT / DT und als Kontrolle Prostata-spezifischen Antigens (PSA) injiziert wurde, mit oder ohne injiziert Recall-Antigen TT / DT. Die Injektion von PAP + TT / DT identifiziert PAP Antigen-spezifische regulatorische Zellen, als Co-Verabreichung von PSA war nicht in der Lage, eine Antwort auf die DTH TT / DT Recall-Antigen zu unterdrücken.


Abbildung 5. Reproduzierbarkeit der Tv-DTH-Assay. Kryokonservierte Zellen erhalten durch Leukapherese am 2007.01.15 wurden aufgetaut, mit PBS gewaschen, gemischt mit PBS oder EBV oder p37-TE + EBV (Selbst-Peptid) oder p37-MA + EBV (Donor-Peptid) und Fußballen injiziert. 7/29/2008, 2/23/2010, 9/1/2011, 10/11/2011, 12/15/2011: Die Zellen wurden in folgenden Zeitpunkten getestet.

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Discussion

Die trans-vivo DTH Test ein neuer diagnostischer Test mit einer möglichen klinischen Anwendung bei der Beurteilung zellvermittelte Antworten in der Transplantationsmedizin, Krebs und Autoimmunerkrankungen Patienten. Es ist wertvoll, weil es nicht nur nützlich bei der Überwachung Rückruf T Effektor Antworten ist, aber es kann auch regulatorische T-Antworten erkennen. Eine zuverlässige Möglichkeit, menschliche DTH Regulierung erkennen könnte Sicherheit von Immunsuppression Rückzug in Patienten, die Kandidaten für die Monotherapie oder Toleranztests sind vorherzusagen.

Der Tv-DTH ist sehr empfindlich zur Erfassung der indirekten Weg der allorecognition von MHC. Allerdings TV-DTH können modifiziert werden, um direkte alloresponse gegen intaktes Spender MHC-Moleküle zu detektieren. Um Donor-Antigen-linked Unterdrückung der DTH erkennen kann EBV-LCL Zellen einzigen Spender HLA-Klasse I oder Klasse II mit Patienten-PBMC koinjiziert werden. Wenn EBV-LCL als Quelle von Antigen in der DTH-Test verwendet wurden, wurden die Zellen Gamma-Bestrahlung mit 10.000 rad, und 200.000 Zellen coinjiziert mit PBMC in die Fußballen von SCID-Mäusen.

Im Zuge der Entwicklung des Tv-DTH wir feststellen, dass mehrere Bedingungen können diesen Test beeinflussen. Die wichtigste Anforderung ist für den Nachweis von Zuschauer Unterdrückung. Wir lieferten Beweise, dass im Hinblick auf die Hemmung eines Rückrufs DTH in Reaktion auf co-lokalisierten Donor-Antigen erkennen, sowohl die Herausforderung vor Ort und die Immunkompetenz der Maus Adoptiv-Host sind kritische Faktoren, die die Empfindlichkeit der Tv-DTH-Test. PBMC von tolerant Transplantationspatienten vermittelt Bystander Suppression nur bei PBMC in die Pfoten und Ohren nicht injiziert wurden, und nur in Immunschwäche, nicht immunkompetenten Mäusen 3.

Wie alle Tests die Tv-DTH-Test hat Stärken und Schwächen. Die enormen Vorteile der Tv-DTH-Assay gehören die folgenden: 1) ist sehr empfindlich und zuverlässig erfasst menschliche regulatorische T-Zellen, 2) es erkennt, regulatorische T-Zellen durch ihre Funktion nicht von tErben Phänotyp, 3) es erkennt sowohl Th-1 und Th-Effektor 17 Antworten 4) Rohöl Zelllysaten kann zur Regulierung ohne Sensibilisierung der Patienten für Spender Antigen 5) Dieser Test stellt eine hohe Reproduzierbarkeit / Stabilität (Abbildung 5) zu erkennen. Die Nachteile sind: 1) es erfordert eine relativ große Anzahl von PBMC pro Injektion, 2) die Technik erfordert umfangreiche Ausbildung, insbesondere in den Zuschauer Unterdrückung Assay.

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Disclosures

Die Autoren dieses Manuskripts haben keine Interessenkonflikte offen zu legen.

Acknowledgments

Die Autoren bedanken sich bei den Beiträgen von AM VanBuskirk zur Entwicklung unseres Verständnisses des regulierten DTH-Reaktion in Transplantationspatienten anzuerkennen. Diese Arbeit wurde unterstützt NIH Zuschüsse PO1AI084853 und R01AI066219-06, und von der EU-geförderten einer Studie.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ACD tube for blood collection BD 02-684-26
Lymphocyte Separation Medium Cellgro 25-072-CV
Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline Cellgro 21-031-CM Without calcium & magnesium
ACK Lysis Buffer BioWhittaker 10-548E
TT/DT or EBV Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection
Protease inhibitor PMSF Sigma-Aldrich 78830
Eosine for cell count Sigma-Aldrich E-6003
Alloantigen Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates
50 ml sterile centrifuge tubes Fisher Scientific 06-443-18
10 ml pipettes and pipettor BD Falcon 13-675-20
2 ml safe-lock tubes Costar 3213
1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips
Hemocytometer Fisher 02-671-10
Full size centrifuge and microfuge Beckman Coulter/Eppendorf
1/2cc or 1cc insulin syringes Becton Dickinson 14-826-79 28 gauge
Vibracell sonicator Divtech Equipment Co. Sonocs Materials Inc 2 mm probe
Dial thickness gauge Mitutoyo, Japan
SCID mice Harlan
Isoflurane Piramal Healthcare Inhalant anesthesia

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References

  1. Carrodeguas, L., et al. Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity. Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).
  2. VanBuskirk, A. M., et al. Human allograft acceptance is associated with immune regulation. J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).
  3. Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay. Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).
  4. Burlingham, W. J., et al. Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis. Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).
  5. Geissler, F., et al. Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression. Transplantation. 72, 571-580 (2001).
  6. Jankowska-Gan, E., et al. Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH. Hum. Immunol. 63, 862 (2002).
  7. Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance. J. Exp. Med. Cai, J., et al. 199, 1017-1023 (2004).
  8. Rodriguez, D. S., et al. Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching. Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).
  9. Xu, Q., et al. Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance. J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).
  10. Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1. J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).
  11. Jankowska-Gan, E., et al. Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation. Transplantation. 88, 533-541 (2009).
  12. Jankowska-Gan, E., et al. Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs. Transplantation. 93, 283-290 (2012).
  13. Knechtle, S. J., et al. Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring. Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).
  14. Haynes, L. D., et al. Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients. Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).
  15. Burlingham, W. J., et al. IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants. J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).
  16. Bobadilla, J. L., et al. TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).
  17. Olson, B. M., et al. Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade. J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).

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Jankowska-Gan, E., Hegde, S.,More

Jankowska-Gan, E., Hegde, S., Burlingham, W. J. Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation. J. Vis. Exp. (75), e4454, doi:10.3791/4454 (2013).

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