Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion modell för ischemisk stroke med laser Doppler Flowmetry Vägledning i råtta

Published: February 16, 2013 doi: 10.3791/50014
Automatic Translation
1, 2, 1, 3, 4, 4, 1, 3
1Department of Neurosurgery, University of Florida, 2Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran, 3Department of Physiology and Functional Genomics, University of Florida, 4Department of Neurology, University of Florida

Summary

Flera djurmodeller av cerebral ischemi har utvecklats för att simulera det mänskliga tillståndet av stroke. Detta protokoll beskriver endotelin-1 (ET-1) inducerad mellersta cerebral artärocklusion (MCAO)-modell för ischemisk stroke hos råttor. Dessutom, är viktiga överväganden, fördelar och brister i denna modell diskuteras.

Abstract

Stroke är den främsta orsaken till funktionshinder och tredje vanligaste dödsorsaken i världen, kostar uppskattningsvis $ 70 miljarder USA under 2009 1, 2. Flera modeller av cerebral ischemi har utvecklats för att efterlikna det mänskliga tillståndet av stroke. Det har föreslagits att upp till 80% av alla slag beror på ischemisk skada i den mellersta cerebrala artären (MCA) område 3. I början av 1990-talet, 4 endotelin-1 (ET-1) användes för att inducera ischemi genom att tillämpa det direkt intill ytan av MCA efter kraniotomi. Senare blev denna modell modifierades 5 genom användning av en stereotaxisk injektion av ET-1 intill MCA att producera fokal cerebral ischemi. De främsta fördelarna med denna modell är förmågan att utföra proceduren snabbt, förmågan att kontrollera artär sammandragning genom att ändra dosen av ET-1 levereras, utan att behöva manipulera extra-fartyg som levererar blod till hjärnan och gradvis reperfusipå räntor som närmare efterliknar reperfusion hos människor 5-7. Å andra sidan, har ET-1-modellen nackdelar som inkluderar behovet av en kraniotomi, liksom högre variabilitet i slagvolymen 8. Denna variation kan reduceras med användning av laser-Doppler flowmetry (LDF) kontrollera cerebral ischemi under ET-1-infusion. Faktorer som påverkar stroke variabilitet inkluderar precision infusion och satsen av ET-1 som används 6. En annan viktig faktor är att även om reperfusion är vanligt förekommande i människans stroke kan varaktigheten av ocklusion för ET-1-inducerad MCAO inte nära efterliknar det mänskliga slag där många patienter har delvis reperfusion under en period av timmar till dagar efter ocklusion 9, 10. Detta protokoll kommer att i detalj beskriva ET-1-inducerad MCAO modell för ischemisk stroke hos råttor. Det kommer också att uppmärksamma särskilda överväganden och eventuella nackdelar under hela förfarandet.

Protocol

Detta protokoll godkändes av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) vid University of Florida och är i överensstämmelse med "Guide för vård och användning av försöksdjur" (åttonde upplagan, National Academy of Sciences, 2011).

Material

  1. Djur: Åtta veckor gamla, manlig, Sprague Dawley-råttor (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) vägande 250-300 g vid tidpunkten för operation.
  2. Anestesi
    1. Inhalationsanestesi system (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA)
    2. Isofluran anestesi (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA)
  3. Stereotaxiska systemet (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA)
    1. Små djur stereotaxiska systemet
    2. Icke-ruptur örat barer för råttor
    3. Gasanestesi huvudet innehavaren för råttor
  4. Temperaturreglering
    1. BAT-12 mikrosondanalys termometer (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. T / PUMP, TP600 värmefilt (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA)
  5. Kirurgiska instrument
    1. Skalpell handtag och # 11 blad, iris pincett, Graefe pincett, bulldog klämma upprullningsdon, skruvmejsel, 10 pl spruta med 26 gauge avfasade nål (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. Mikromotorer borr och stereotaktisk hållare, Quintessential stereotaxisk Injector (Stoelting, Wood Dale, IL, USA)
    3. 1,0 mm rund borr bur, 1,0 mm inverterad kon borr bur (Roboz Kirurgiska Instrument Co, Inc., Gaithersburg, MD, USA)
  6. Kirurgiska Supplies
    1. Fästskruvar 0-80 X 3/32 med 2,4 mm skaft längd 21-gauge guide kanyl [4mm lång under sockeln] och kanyl dummy (Plast en, Roanoke, VA, USA)
    2. Jet protes akryl och vätska (Lang Dental Manufacturing Co, Inc., Wheeling, IL, USA)
    3. 3,0 nylon sutur (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Bomullstoppar, Puralube ögonsalva (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA)
    5. Elektriska hårklippningsmaskiner (Oster, Providence, RI, USA)
  7. Kemikalier
    1. Endotelin-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA)
    2. Klorhexidin 2% (Agrilabs, St Joseph, MO, USA)
    3. Buprenorfin HCl (Hospira Inc, Lake Forest, IL, USA)
  8. Visualisering Utrustning
    1. Operationsmikroskop (Seiler Instrument och tillverkning, St Louis, MO, USA)
    2. Fiber Optic Illuminator (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA)
  9. Laser Doppler flowmetry system (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA)
    1. Standard Pencil Probe
    2. Sondhållare
    3. Blod Flödesmätare
    4. PowerLab 4/30 med LabChart 7
  10. Mätning av infarktvolymen
    1. Råtthjärna matris (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA)
    2. 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, USA) utspädd till 0,05% i PBS
    3. Flatbäddsskanner (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, Kalifornien, USA)
    4. Bild J programvara (ImageJ 1.42q programvara, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA)

1. Pre-kirurgiska steg

  1. Före operation, är råttorna inrymda under en 12:12 ljus / mörker-cykel med fri tillgång till vatten och gnagare.
  2. Anestesi induceras med 4% isofluran i 100% O 2 gasblandning i en induktionskammare tills råttan inte längre uttag till baktassen nypa.
  3. ENseptisk teknik bör bibehållas under denna procedur inklusive användning av sterila handskar, sterila kirurgiska instrument och en steril operationsduk 11.
  4. Kronan på huvudet är rakat med elektriska hårklippningsmaskiner.
  5. Råttan placeras i liggande läge på en absorberande dyna som ligger på en temperatur-kontrollerad drift yta (värmefilt).
  6. Huvudet placeras i den stereotaktiska anordningen börjar med placering av gasen anestetikum ansiktsmasken.
  7. Därefter örat barer in och dras åt.
  8. Under förfarandet anestesi upprätthålls med 2% isofluran i 100% O 2 gasblandning.
  9. Smörjmedel oftalmisk salva appliceras på båda ögonen, och ögonlocken är stängda för att förhindra uttorkning öga under den kirurgiska proceduren.
  10. En rektal temperatursond införs för att upprätthålla en konstant temperatur djur kärna av 37 ± 0,5 ° C.
  11. Med huvudet hålls stadigt på det stereotaxiskaenhet, är det kirurgiska området rengöras med omväxlande 2% klorhexidin och saltlösning tre gånger.

2. Kirurgiska steg

  1. Med hjälp av en skalpell görs en mittlinjen snitt på huden överliggande Calvarium från de mest caudal aspekterna av ögonen (nasion) till mellan öronen (överlägsen NACK linje).
  2. Huden är sedan tillbaka i sidled med 3 bulldog klämmor.
  3. Bindväv avlägsnas från skallen med torra bomullspinnar, så att flera strukturer kan ses tydligt. Dessa inkluderar bregma, den koronala sutur, och den högra laterala skalle ås. Bomullstoppar används för att avlägsna blod från det kirurgiska området.
  4. Med hjälp av operationsmikroskop, är beläget bregma, och de stereotaktiska manipulatorerna regleras tills 1,0 mm rund borr bur nollställs vid bregma.
  5. Borren borren flyttas sedan till 1,6 mm anterior och 5,2 mm lateralt i förhållande till bregma.
  6. En bur hål som penetrerar skallen borras för Cannula placering (figur 1). Överskott skräp och blod kontinuerligt rensas med hjälp bomullstoppar.

Vid denna punkt, kan en styrning kanylen sättas in (steg 7) eller en direkt ET-1 injektion genom borren hålet kan utföras (gå direkt till steg 16).

  1. Nästa, bur hål för 3 fästskruvar borras genom partiell tjocklek av skallen med en 1,0 mm inverterad borr kon borr (figur 1). Ett hål borras i varje pannbenet ca 1-2 mm framför den koronala suturen och 1-2 mm lateralt om sagittala suturen. Ett hål borras i parietala benet ca 2-3 mm posteriort om koronala suturen och 2-3 mm lateralt till den sagittala suturen ipsilateralt till styrningen kanylen borret hål. Tre 0-80 x 3/32 fästskruvar är placerade i dessa bur hål och kommer att ge stöd för cement som håller i kanylen. Skruvarna bör endast avancerade 2 eller 3 varv för att inte skada dura frågan. Styrningen kanyl placeras i den stereotaxiska kanylhållaren och bregma ligger.
  2. De stereotaktiska manipulatorer justeras tills guiden kanylen nollställs vid bregma. Kanylen flyttas till borren hål placerat 1,6 mm anterior och 5,2 mm lateralt i förhållande till bregma.
  3. Slutligen är styrningen kanylen sänks in borren hålet med den slutliga spets positionen av 4,5 mm ventralt till bregma.
  4. Laser Doppler flödesprob placering (tillval)
    1. För att övervaka cerebralt blodflöde med LDF, kan en sondhållare placeras i läge före påförande guiden kanylen med tandcement.
    2. Sondhållaren bas trimmas jämnhöjd med piedestalen förutom små kilformade fliken.
    3. Sondhållaren därefter placeras posteriort styr kanylen och bara medialt den laterala skalle åsen med fliken orienterad medialt (figur 1).
    4. Sondhållaren och guide kanyl fästes ihop med tandcement.
  5. Dentalcement används sedan för att fästa kanylen på plats. Cementet är i kontakt med alla tre skruvar och omger hela basen av kanylen.
  6. Cementen bör vara helt torr före avlägsnande av kanylhållaren. Det tar cirka 5 minuter.

Efter dessa steg kan det kirurgiska snittet stängas och kanylen dummy kan skruvas in i guiden kanylen. Alternativt, kan ET-1-inducerad MCAO utföras på råtta efter en period av återhämtning från kanylen implantationskirurgi. För denna metod bör steg 19 utföras nästa och stegen 14-18 kan utföras vid en senare tidpunkt. För att utföra guide kanyl implantation och ET-1 injektion under samma operation, bör steg 14 utföras härnäst.

  1. Infusionen Sprutan laddas med ET-1 (utspädd till 80 | iM i PBS) och därefter monteras i stereotaxiska injektorn.
  2. Denstereotaktiska manipulatorer justeras tills nålspetsen nollställs vid kanten av guiden kanylen.
  3. Nålspetsen sänks genom guiden kanylen till en position av 17,2 mm ventralt till kanten av styrningen kanylen. Om en styrning kanyl inte används, är nålspetsen nollställs vid bregma och sänks genom borren hålet till ett läge 8,7 mm ventralt till bregma.
  4. 3 pl 80 pM ET1 infunderas vid en hastighet av 1 fil per minut.
  5. Sprutan lämnas på plats under 3 min efter infusionen är klar och sedan långsamt bort.
  6. Snittet tillsluts med 3,0 nylonsutur och kanylen dockan skruvas in i kanylen.
  7. En dos av lämplig analgetika (dvs buprenorfin vid 0,05-0,1 mg / kg) bör användas efter operationen för att minimera smärta och obehag under återhämtningsperioden.
  8. Råttan avlägsnas från den kirurgiska svit och placerades i en varm, torr återhämtning området för att förhindra hypotermi, med fri och enkel tillgång till mjuk mat och vatten.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

1. Post-op neurologisk utvärdering

Efter djuret återfår medvetandet, kan en mängd olika tester för att utvärdera neurologiska underskott, inklusive balans, greppstyrka, tass placering, postural asymmetri och trappa klättring. Den solrosfrön uppgift är en grov bedömning av motoriska och sensoriska funktioner som har signifikant korrelation med infarktvolymen 7, 12. Under denna uppgift är råttor tidsinställda när du öppnar och konsumera 5 solrosfrön. De fem frön placeras i ett hörn av en tom, torr, plastbur och tiden manipulera fröna registreras. Dessutom, är antalet bitar skal i buren efter att alla frön har öppnats och konsumeras registrerades. Råttor med större neurologisk underskott tar längre tid att öppna och konsumera frön och bryta skalen i fler bitar. Även om inte en formell del av denna uppgift är det lätt att observera täta misskötsel och släppa av solrosfröns av råttor efter experimentell stroke. Detta innefattar användning av främst en framtass, och ineffektiva bita av skalet under försök att öppna.

2. Färgning och kvantitativ mätning av hjärninfarkt volym

Efter ocklusion och reperfusion av MCA för att upprätta övergående cerebral ischemi, djuren avlivades och deras koronalt sektionerade hjärnor färgas med 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) för att utvärdera infarktvolymen (figur 2) som diskuterats i våra tidigare publikationer 7, 13.

Figur 1
Figur 1. Dorsal syn på råtta skallen visar hårdvara placering. Denna rygg syn på råtta skalle med främre orienterad till vänster visar var bregma och lambda med avseende på suturer som kan visualiseras efter röjning bindvävvävnad från skallytan. Den laterala skalle åsen, guide kanyl, LDF sondhållare och förankring skruvar visas också i diagrammet med relativa relationer till varumärken skalle mark och varandra.

Figur 2
Figur 2. TTC-färgade seriella koronala hjämsektioner (2 mm) från råtta utsattes för ET-1-inducerad MCAO. En representativ hjärna från en råtta efter ET-1-inducerad MCAO visas. Denna hjärna avlägsnades och sköljdes i iskall PBS innan de sektionerad koronalt i 2 mm tjocka sektioner börjar bara kaudalt till de olfaktoriska lökar. Skivorna inkuberades sedan i 0,05% TTC utspädd i PBS vid 37 ° C innan den släcktes i PBS och fixerades sedan kortvarigt i formalin. Vävnad färgas röd efter exponering för TTC representerar livskraftig grå substans. Den livskraftiga grå substans i halvklotet ipsilateralt ET-1 injektion kan jämföras med den grå mAtter av den kontralaterala hemisfären att beräkna området av cerebral infarkt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ET-1-inducerad MCAO är en etablerad modell för experimentell ischemisk stroke som regelbundet används i flera råtta stammar. Många variabler, såsom råtta stam, djur ålder, kroppstemperatur, anestesi metod och operatör expertis kan leda till ökad variation i infarkt volymer vid användning av denna modell 5, 14. Men flera forskare visat att fördelarna med denna modell inkluderar relativt icke-invasiv metod, dos-respons av cerebralt blodflöde till ET-1, och förmåga att undvika anestesi helt genom infusion av ET-1 i medvetna råttor 14, 15. Det är anmärkningsvärt att det finns många skillnader i råtta stam och ålder används i hela litteraturen och det är inte förvånande att olika stereotaktiska koordinater redovisas beroende på dessa variabler. Koordinaterna som används i vårt protokoll är optimerade för 8 veckor gamla Sprague Dawley-råttor. Varje avvikelse från denna stam, kön eller ålder kommer sannolikt att kräva intracerebral injicerajon av färgämne följt av obduktion att identifiera giltiga koordinater för detta förfarande. Dessutom är ET-1-inducerad reduktion av cerebralt blodflöde dosberoende. Dosen användning i detta förfarande orsakar en infarkt av ca 30-40% av den gråa substansen i halvklotet ipsilateralt injektionen med ett standardfel av medelvärde på ca 4-5% inom ett experiment 7, 16. Direkt visualisering av proximala delarna av MCA avslöjar en luminal diameter som går till 0% av baslinjen inom 3 minuter och återgår till baslinjen vid ungefär 30 minuter 7. Med hjälp av LDF, var maximalt flöde visat sig minska till cirka 10% av utgångsvärdet flöde i 5-7 min med gradvis återgång till 60% av utgångsvärdet efter 1 timme som övervakningen avbröts 16.

Andra specifika tekniska detaljer som motiverar nämna listas nedan:

  1. Korrekt placering och nollställning av stereotaktisk utrustning vid bregma (under mikroskopisk ledning) är avgörande för inducing en lyckad slag. Den stereotaktiska koordinaterna för ET-1-infusion bör verifieras för den specifika experimentell utrustning och råtta stam före experiment. Det är troligt att ingen skada uppstår om infusionen är inte inom 0,5 mm av MCA 6.
  2. Se till att inte orsaka skador på hjärnan vid borrning det första bur hålet för guiden kanylen. Det rekommenderas att en långsam borrhastighet användas för att starta borren hålet och åter mot slutet för att minimera risken för att tränga in i hjärnan.
  3. Vid borrning bur hål för monteringsskruvar, använd den inverterade bur kon övning för att skapa en borr hål som bara delvis tränger skallen. Endast borra tillräckligt djupt så att skruvarna är stabila.
  4. När befästa kanylen på plats se till att hålla cement klar i huden samt stereotaktisk armen. Cementen kan manipuleras före torkning med hjälp av en bomullspinne.
  5. Var noga med cement är helt dry och kanylen är stabil före avlägsnande av kanylhållaren. Det är viktigt att kanylen inte röra före ET-1 injektion.
  6. I vår erfarenhet har ET-1 slag modell ungefär 20% dödlighet på grund av det kirurgiska ingreppet. Det är viktigt att jämföra dödligheten mellan behandlingsgrupperna och även experiment plan så att tillräckligt provstorlekar används för neurologiska och histologiska slutpunkter.
  7. Riktlinjer för prekliniska studier för akut stroke behandling rekommenderar cerebral övervakning blodflöde och fysiologisk övervakning av blodtryck, temperatur, glukos och gaser blod för att minska variabiliteten vid försöken 17. LDF är en metod som kan användas för realtidsövervakning av blodflödet i olika anatomiska regioner för att kontrollera en förutbestämd tröskel för minskning av flöde har uppnåtts.
  8. Var noga med att rengöra infusionen sprutan och nålen med etanol och saltlösning mellan injektionerna, och etanol förelagring. Detta förfarande ger konsekvent tillbakadragande och injektion av ET-1without luftbubblor eller blockeringar under drift.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Acknowledgments

Detta arbete har finansierats med bidrag från American Heart Association Greater Southeast Affiliate (09GRNT2060421), American Medical Association, och från University of Florida klinisk och translationell Science Institute. Adam Mecka är en NIH / NINDS, NRSA predoctoral karl (F30 NS-060.335). Robert Regenhardt fick predoctoral gemenskap stöd från University of Florida Multidisciplinary utbildningsprogram i Hypertension (T32 HL-083.810).

Materials

  1. Animals: Eight-week-old, male, Sprague Dawley rats (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) weighing 250-300 g at the time of surgery.
  2. Anesthesia:
    1. Inhalation anesthesia system (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane anesthetic (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA)
  3. Stereotaxic system (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA):
    1. Small animal stereotaxic system
    2. Non-rupture ear bars for rats
    3. Gas anesthesia head holder for rats
  4. Temperature regulation:
    1. BAT-12 microprobe thermometer (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. T/PUMP, TP600 Thermal blanket (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA)
  5. Surgical instruments
    1. Scalpel handle and #11 blade, iris forceps, Graefe forceps, bulldog clamp retractors, screwdriver, 10 μl syringe with 26 gauge beveled needle (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. Micromotor drill and stereotaxic holder, Quintessential Stereotaxic Injector (St–lting, Wood Dale, IL, USA)
    3. 1.0 mm round drill bur, 1.0 mm inverted cone drill bur (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA)
  6. Surgical Supplies
    1. Mounting screws 0-80 X 3/32 with 2.4 mm shaft length, 21-gauge guide cannula [4mm long below the pedestal] and cannula dummy (Plastics one, Roanoke, VA, USA)
    2. Jet denture acrylic and liquid (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Wheeling, IL, USA)
    3. 3.0 nylon suture (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Cotton swabs, Puralube eye ointment (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA)
    5. Electric hair clippers (Oster, Providence, RI, USA)
  7. Chemicals:
    1. Endothelin-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA)
    2. Chlorhexidine 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA)
    3. Buprenorphine HCl (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA)
  8. Visualization Equipment
    1. Surgical microscope (Seiler Instrument and Manufacturing; St. Louis, MO, USA)
    2. Fiber Optic illuminator (TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA)
  9. Laser Doppler flowmetry system (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA)
    1. Standard Pencil Probe
    2. Probe holder
    3. Blood FlowMeter
    4. Powerlab 4/30 with LabChart 7
  10. Measurement of infarct volume:
    1. Rat brain matrix (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA)
    2. 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA) diluted to 0.05% in PBS
    3. Flatbed scanner (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, CA, USA)
    4. Image J software (ImageJ 1.42q software, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Stroke--1989. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, 480-486 (2009).
  3. Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W. Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management. Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. , Churchill Livingstone. New York. 377-450 (1986).
  4. Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat. Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).
  5. Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. A. Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 865-871 (1993).
  6. O'Neill, M. J., Clemens, J. A. Rodent models of focal cerebral ischemia. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9 (Unit 9), (2001).
  7. Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion. Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).
  8. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8 (2009).
  9. Tomsick, T. A. Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke. J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).
  10. Olsen, T. S., Lassen, N. A. A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration. Stroke. 15, 458-468 (1984).
  11. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).
  12. Gonzalez, C. L., Kolb, B. A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology. Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).
  13. Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice. J. Vis. Exp. (51), e2879 (2011).
  14. Sharkey, J., Butcher, S. P. Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery. J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).
  15. Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).
  16. Mecca, A. P., et al. Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke. Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).
  17. Fisher, M., et al. Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations. Stroke. 40, 2244-2250 (2009).

Tags

Medicin 72 neurovetenskap Neurobiologi Medicinsk teknik kirurgi anatomi fysiologi nervsjukdomar System ischemisk stroke endotelin-1 Cerebrovaskulär hjärna pulsåder stroke ocklusion laser doppley flowmetry råtta djurmodell
Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion modell för ischemisk stroke med laser Doppler Flowmetry Vägledning i råtta
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K.… More

Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K. J., Regenhardt, R. W., Hedna, V. S., Waters, M. F., Hoh, B. L., Mecca, A. P. Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat. J. Vis. Exp. (72), e50014, doi:10.3791/50014 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter