Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Immunology and Infection

Demir Kaynağı Olarak İnsan Hemoglobin kullanarak Staphylococcus aureus Büyüme

doi: 10.3791/50072 Published: February 7, 2013

Summary

Burada bir büyüme tahlil tarif

Abstract

S. aureus hayati metabolik fonksiyonları ve hastalık yapan yürütmek için demir gerektiren bir patojen bakteridir. Insan konak içindeki demirin en bol rezervuar hemoglobin kofaktörüdür heme vardır. Hemoglobin demir elde etmek için, S. aureus demir-regüle yüzey belirleyicisi (Isd) sistemi 1 olarak bilinen karmaşık bir sistem kullanır. Isd sistem ilk bind konak hemoglobin Bileşenleri, daha sonra ayıklamak ve heme ithalat ve nihayet bakteriyel sitoplazma 2,3 heme demir kurtarmak. Bu yol vitro çalışmalar 4-9 sayısız aracılığıyla diseke edilmiştir. Ayrıca, enfeksiyon için Isd sistemin katkısı art arda 8,10-14 fare modellerinde ortaya konmuştur. Hemoglobin kaynaklı demir edinimi Isd sistemin katkısı kurulması ve büyüme daha zorlu olduğu kanıtlanmıştır. Bir tek demir kaynağı olarak hemoglobin kullanarak Büyüme deneyleri b karmaşıktıry büyüme ortamında serbest demir kirletici ticari olarak temin hemoglobin kararsızlık, ve demir şelatlar ile ilişkili toksisite. İşte biz bu sınırlamalarının üstesinden bir yöntem sunuyoruz. Yüksek kaliteli hemoglobin taze kandan hazırlanmıştır ve sıvı azot içinde saklanır. Arıtılmış hemoglobin içine ilave edilir, orta omurgalı konukçu içerisindeki patojenlerin karşılaştığı demir-fakir ortamda taklit demir tüketmek. S. açlıktan tarafından serbest demir aureus ve biz, hemoglobin bağlamak heme ayıklamak, bakteri hücre zarfı ile heme geçmek ve sitoplazmada heme aşağılamak yeteneğini tamamen bağımlı bir şekilde büyümesine neden hemoglobin minimal manipüle formu ile ilave. Bu tahlil S. hemoglobin-/heme-derived demir iktisap mekanizmaları aydınlatmak isteyen araştırmacılar için yararlı olacaktır aureus ve muhtemelen diğer bakteriyel patojenler.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Taze Kan gelen Hemoglobin saflaştırılması

  1. Bir antikoagülan ile desteklenmiş taze insan kanı edinin. Saflaştırma boyunca buz üzerinde veya 4 de kan ° C tutun.
  2. 1,500 x g'de 20 dakika boyunca kan santrifüjleyin. Kırmızı kan hücrelerinin (eritrositler), tüpün altında olacaktır. Dikkatlice süpernatan aspire ve yavaşça buz gibi soğuk% 0.9 (ağırlık / hacim) NaCl solüsyonu içinde pelet tekrar süspansiyon. Santrifüj tekrarlayın ve 3 kez yıkayın.
  3. Buz gibi soğuk 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) ve 1 hacim içinde pellet yeniden süspanse edin. Bu ozmotik basınç nedeniyle eritrositlerde parçalanma neden olacaktır. ~% 20 son hacim toluen ekleyin.
  4. Gecede bir et lokantası 4 ° C'de inkübe edin.
  5. 1 saat boyunca 20.000 xg'de lizat santrifüjleyin. Toluen (üstünde yüzen) ve pelet dokunulmazken ortasında hemolizat fraksiyonu toplayın. Orta kısmı toplamak için bir uzun saplı pipet kullanın.
  6. 0.44 mikron şırınga filtresi Pass through. Çözelti partikül içeriyorsamadde ve adım 1.5 tekrarlayın, filtreden geçtikten edilemez.
  7. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile hemoglobin (Hb) Purify (HPLC) anyon değişim kolonuna (Varian, PL-SAX 1.000 Å 8 mikron, 150 mm × 4,6 mm). A, mobil faz mM Tris-HCl (pH 8.0) ve mobil faz B, 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) + 0.5 M NaCl, 10. Çözücü B A% 0 -100% eğim 2.0 ml / dk akış oranında 2 dakika boyunca çalışır. (: 410 ve 280 nm λ) elüsyon emilimi esas izlenir. Parlak kırmızı renkli ve önemli bir emme zirve (Şekil 1) ile karakterize sadece fraksiyonu toplayın.
  8. Karşı elüsyon Dialyze fosfat-tamponlu tekrar salin (PBS) bir karışımı, ve daha sonra birkaç saat karıştırıldı. 0.22 um bir şırınga filtresinden geçirerek sterilize edilir.
  9. Hb konsantrasyonu ölçmek için, PBS içinde konsantrasyonu bilinen standart Hb çözümler hazırlamak. (Tr reaktifleri ile tabloya bakınız standart çözeltilerin karışımı ile örnek olarak Hb konsantrasyonunun tespit edilmesied) veya bir 1:1 oranında 2x Drabkin reaktifi (tozundan hazırlanan) ile numune çözeltisi. Örneğin, 96 oyuklu plakalar 100 ul 2x Drabkin reaktifi ile 100 ul Hb çözelti ilave edilir. 540 nm'de 15 dk ve önlem absorbans inkübe. Bir standart eğrisi çizilir ve örnek olarak Hb konsantrasyonu belirlenir. Beş ila on beş mg / ml verimleri tipiktir.
  10. Çoğaltmak% 15 SDS-PAGE üzerine hemoglobin saflaştırılmış 15-20 mikrogram çalıştırın. Jellerin bir Leke; hemoglobin için bir nitroselüloz zar ve immunoblot (Şekil 2) üzerine başka bir jel proteinleri aktarın.
  11. Freeze ve sıvı azot içinde hemoglobin 1 ml alikotları saklayın.

2. Hazırlanması Demir deplete Büyüme Medya

  1. Üreticiler ve% 1 cassamino asit (CA) (w / v) tarafından tavsiye edildiği gibi sodyum bikarbonat eklemek, su içinde eritilerek toz RPMI Roswell Park Memorial Institute (RPMI) et suyu hazırlayın. 0.2 um bir filtreden ve mağaza refrig geçirilerek sterilizeçalıştırılamaz.
  2. % 7 (ağırlık / hacim) Chelex-100 ekleme ve bir karıştırma plakası üzerinde gece boyunca karıştırma ile metal-azalmış RPMI (NRPMI) hazırlayın. 0.2 um bir filtreden ve buzdolabında depo üzerinden geçerek Chelex-100 çıkarın. 25 uM ZnCl 2, 25 uM MnCl 2, 100 mM CaCl2 ve 1 mM steril 1.000 x çözüm olarak önceden hazırlanmış MgCl2: esansiyel demir dışı metaller ile medya tamamlayın. Yeniden kullanılabilir malzemeler demir kontaminasyonu önlemek için bu adımı için tek kullanımlık plastik kaplar kullanın.

Bir Sole Demir Kaynağı Olarak Hemoglobin kullanarak 3. Staphylococcus aureus Büyüme

  1. Streak S. Donmuş bir stoktan triptik soya agar (TSA) üzerinde yalıtım aureus. 20-24 saat süre ile 37 ° C'de inkübe edin.
  2. Yeniden süspanse etilendiamin-N, 100 mM e kadar susuz etanol içinde N'-bis (2-hidroksifenilasetik asit) (EDDHA). EDDHA çözüm içine gitmez ama etanol ile steril edilmiştir.
  3. 0.5 mM nihai konsantrasyon RPMI için EDDHA ekleyin. Izin vermekEDDHA sonraki adıma geçmeden önce, en az 30 dakika eritin. Partiden partiye varyasyon nedeniyle, nihai konsantrasyon EDDHA bakteri oluşumuna izin vermek için 0.25 mM e indirilmesi gerekir.
  4. S. tek koloniler inoküle RPMI 15 ml'lik vida kapaklı konik bir tüp içinde EDDHA ihtiva eden 5 ml içine aureus. 16-20 saat boyunca dakika (rpm) başına 180 devir az sallama ile 37 ° C'de inkübe edin.
  5. 7.500 x g'de 5 dakika boyunca gecede kültürleri santrifüjleyin ve NRPMI 0.5 mM EDDHA içeren yılında pelet tekrar süspansiyon haline getirin. ~ 3 OD 600 Normalize.
  6. NRPMI ml Hb başına 2.5 mikrogram ve 0.1-1.0 mM EDDHA içeren hazırlayın. Gruplar arası varyasyon nedeniyle, NRPMI serbest demir şelatların döküntülerini büyütmek için gerekli olan konsantrasyon EDDHA değişebilir.
  7. 15 ml vidalı kapaklı konik tüp içinde 1 ml NRPMI + EDDHA + Hb içine adım 3,5 bakteriyel süspansiyonun Altkültür 10 ul.
  8. 180 rpm'de veya haddeleme davul sallayarak ile 48 saat için 37 ° C'de kültür inkübe edin.
  9. 600 okuma alabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Biz HPLC (Protokol adım 1.7) ile hemolizat insan hemoglobin Temizlendikleri. Şekil 1 gösterir 280 ve 410 nm dalga boylarında eluat absorbans kaydedildi. Fraksiyon 5 toplandı ve diğer fraksiyonlar atıldı. Eluat mililitrede hemoglobin beş ile on beş miligram Verimleri genellikle elde edilir. Saflaştırılmış hemoglobin kopya halinde SDS-PAGE ile analiz edildi ve jeller ya da proteinler için boyandı ya da nitroselüloz üzerine transfer edildi ve (Protokol adım 1.10, Şekil 2) immunoblotted.

Biz vahşi tip büyümesini desteklemek için hemoglobin saflaştırılmış yeteneği değerlendirdik S. aureus ve S. Isd sistemi (Δ ISDB) arasında ISDB bileşen yoksun aureus. ISDB hemoglobin türevi demir elde etme 12 için gerekli olan bir hemoglobin reseptörüdür. Yabani tip ve Δ ISDB insan hemog ile takviye demir tükenmiş bir ortamda yetiştirilen edildi lobin (NRPMI + EDDHA + Hb) protokolünün 3. bölümünde tanımlanmıştır. NRPMI + EDDHA + Hb, vahşi tip gelişen ancak Δ ISDB zaman (Şekil 3A) üzerindeki kültürlerin optik yoğunluk artışı ile gösterildiği gibi çoğalırlar mümkün olmadığı durumlarda. Buna karşılık, takviye serbest demir (+ FeCl 3) faydalanma olanağı vahşi tip ve Δ ISDB (Şekil 3B) de aynıdır. Vahşi tip veya Δ ISDB Ne bir demir kaynağının (Şekil 3B) yokluğunda çoğalırlar.

Biz S. büyüme karşılaştırıldığında NRPMI + EDDHA yılında aureus taze kan veya liyofilize hemoglobin arınmış hemoglobin ile desteklenebilir. Şekil 4 kan arınmış hemoglobin büyüme için ISDB gerektirir iken, liyofilize hemoglobin Δ ISDB çoğalmasını sağlayan göstermektedir.

s/ftp_upload/50072/50072fig1.jpg "/>
Şekil 1. Hemoglobin saflaştırma sırasında elüsyon kesirler emilimi. 410 nm (heme-bağlayıcı proteinlerin özgü) ve 280 nm (tüm proteinler için karakteristik) de Absorpsiyon Elüsyon boyunca takip edildi. Kesir sayı beş hemoglobin içerdiği ve toplanmıştır.

Şekil 2,
Şekil 2. Hemoglobin saflaştırılmış hemoglobin yirmi mikrogram saflaştırılmış SDS-PAGE kullanılarak% 15 denatüre ayrılmıştır. A. Jel Bio-Rad protein tayini boya reaktifi ile proteinlerin boyandı. B. Nitroselüloz zar hemoglobin immunoblotted. Daha soluk üst bantları tamamen denatüre alamadım hemoglobin dimerleri ve tertramers, ise yoğun alt bant, hemoglobin monomerdir.

/ Ftp_upload/50072/50072fig3.jpg "/>
Şekil 3,. S. tarafından bir demir kaynağı olarak insan hemoglobini kullanarak aureus A. Öğrenci iki uçlu t testi, p <0.05 ile belirlenen demir şelasyon EDDHA ve hemoglobin ile desteklenmiş vahşi tip (wt) veya NRPMI içinde izogenik hemoglobin reseptör ISDB mutant (Δ ISDB) Büyüme istatistiksel farklıdır. NRPMI B. Büyüme 10 uM demir klorür (+ FeCl 3) veya EDDHA ile desteklenmiş (-FeCl 3) wt ve Δ ISDB arasında farklı değildir. Grafikler üç biyolojik çoğaltır dahil bir temsilcisi deney, veri betimliyor. Hata çubukları çoğaltır arasındaki Belirtilen zaman noktalarında optik yoğunluk okumaları standart sapma göstermektedir.

Şekil 4,
Şekil 4. Vahşi tip (wt) veya izogenik hemoglobin reseptör m BüyümeTaze kan veya liyofilize hemoglobin arınmış hemoglobin ile takviye medya utant (Δ ISDB). grafiği üç biyolojik çoğaltır dahil bir temsilcisi deney verileri gösteriyor. Hata çubukları çoğaltır arasındaki Belirtilen zaman noktalarında optik yoğunluk okumaları standart sapmayı temsil etmektedir. Asteriskler Öğrenci iki uçlu t testi, p <0.05 ile belirlenen istatistiksel farklı değerleri gösterir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Demir yaşamın 15 tüm krallıklardan organizmalar tarafından gerekli olan temel bir besindir. Omurgalılar, demir bu öğe tarafından kaynaklanan zehirlenme önlemek için tecrit edilir. Bu haciz de beslenme bağışıklık 16 olarak bilinen bir süreçte mikroplar istila demir gizler. Buna karşılık, patojenler beslenme bağışıklık engelleyecek stratejiler geliştirmişlerdir. Böyle bir mekanizma hemoglobin dayanır, hangi ana 17 içindeki demirin en bol kaynağıdır. Hemoglobin kırmızı kan hücrelerinin içinde bulunur. Hasarlı kırmızı kan hücrelerinden salınan Hemoglobin makrofajlar 18 tarafından haptoglobin-hemoglobin komplekslerinin hızlı kaldırma sinyalleri ana haptoglobin, tarafından bağlanır. Hemoglobin erişmek için, S. aureus, kırmızı kan hücreleri 19 lyse hemolysins ifade eder. Haptoglobin indüklenen hemoglobin çıkarılması ile ifade edilen hücre yüzeyi reseptörleri ile hemoglobin, yüksek afiniteli ile giderilir 20 bozulmamış kullanılmaktadır.

Çeşitli çalışmalar enfeksiyon 8,10-14 için Isd sistemin katkısı olduğunu göstermiştir. Ayrıca, biyokimyasal çalışma, hemoglobin kaynaklı demir edinimi 4-9 bireysel bileşenlerinin işlevlerini atadınız. Burada S. büyümesini izleyen bir deneyi tarif Mevcut demir tek kaynağı olarak hemoglobin ile aureus. Bu bağlamda, bu deney başarısı için temel öneme sahip olduğunu belli koşullar işaret etmek gerekir.

Hemoglobin türevi demir edinimi büyüme tayinlerde kullanılan reaktiflerin kalitesi ve türü dramatik sonuçlar obtai etkileyebilirBu yöntemlerde ned. Iyofilleştirilmiş formda bakteriyel büyüme Isd sistem (Şekil 4) 21 bileşenleri bağımsız olanak depolanır taze kan, hemoglobin elde edilen hemoglobin aksine. Bu, büyük ihtimalle lyophylization tarafından indüklenen hemoglobin yapısında değişikliklere bağlıdır. Spesifik olarak, liyofilize edilmiş hemoglobin tetramerleri, dimerler ve hemoglobin monomerler, yanı sıra serbest formdaki 22 heme içerir. Sıvı azot içinde taze kan ve onun korunması hemoglobin saflaştırılması Protein 22 bütünlüğünü sağlamak. Hemoglobin üzerinde kapsamlı araştırmalar taze kandan veya tahlil 23-25 ​​kullanılabilir rekombinant formda, yüksek-kaliteli hemoglobin saflaştırılması için protokoller gelişme sağlamıştır.

Demir şelasyon seçimi büyüme tahlil etkileyebilir. Örneğin, sık sık, bir demir şelasyon olarak kullanılan 2,2-dipiridil, toksik26 bakteri hücreleri. Bu iki etkileri 2,2-dipiridil bakteriyel büyüme inhibisyonu demir şelasyon veya toksisite nedeniyle olup olmadığını ayırt etmek zor yapmak. Buna ek olarak, 2,2-dipiridil geçirgen zar olması muhtemeldir ve dolayısıyla, bakteriyel hücre nüfuz eder ve demir hücre içinde 27 şelatları. Biz EDDHA tarafından büyüme inhibisyonu EDDHA bakteriyel büyüme deneyleri için daha uygun bir demir şelasyon yaparak, bir demir kaynağı takviyesi ile ters olduğunu bulduk. Bununla birlikte, büyüme ortamına ilave edilmesi gerekmektedir EDDHA konsantrasyonu değişebilir. Bu EDDHA potens ve partiden partiye büyüme ortamı demir içeriği her iki varyasyon nedeniyle. Demir şelat aktivitesi kimyasal kalıntı demir 28 sökerek EDDHA toplu arasındaki normalize edilebilir. Bununla birlikte, RPMI gruplarını arasında varyasyon nedeniyle, nihai konsantrasyon EDDHA yine bir demir kaynağının varlığında büyümesine izin vermek için ayarlanır gerekebilir bulundu. Biz inci bulunduvahşi tip büyüme için serbest olduğu EDDHA en yüksek konsantrasyonda S. hemoglobin varlığında aureus Bu deney için en uygunudur.

Değişiklikler daha yakından enfeksiyon sırasında bakteriler tarafından karşılaşılan çevre benzemeye geçerli protokol yapılabilir. Örneğin, ev sahibi içinde, hemoglobin serbest, heme hızla hemopexin tarafından bağlanır. Hemopexin S., bir demir kaynağı olarak kullanılamaz aureus, bu nedenle ek S. inkübasyon sırasında hemoglobin serbest heme edinimi önleyecek aureus 12.

Bu tahlil bakteriyel patojenler çeşitli metal edinimi araştırma için kullanılabilir hissediyorum. Dahası, bu yöntem, ana içinde mevcut olan demir olmayan hemoglobin kaynaklardan demir elde etme ölçmek için kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Biz ifşa etmek başka bir şey var.

Acknowledgments

Bu araştırma, Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Ulusal Enstitüsü ABD Kamu Sağlığı Servisi hibe AI69233 ve AI073843 tarafından desteklenmiştir. EPS Bulaşıcı Hastalıklar Patogenez bir Burroughs Wellcome Üyesidir. KPH Hücresel ve Moleküler Mikrobiyoloji Eğitimi Hibe Programı 5 T32 A107611-10 tarafından finanse edildi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
HPLC anion exchange column Varian PL1551-3802
Drabkin's reagent Sigma D5941-6VL
Hemoglobin standard Pointe Scientific H7506-STD
RPMI HyClone SH30011.02
Chelex 100 sodium form Sigma C7901
EDDHA LGC Standards GmbH ANC 001
Hemoglobin a antibody Santa Cruz Biotechnology, Inc SC-21005
Tryptic soy agar BD 236920

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mazmanian, S., et al. Passage of heme-iron across the envelope of Staphylococcus aureus. Science. 299, 906-909 (2003).
  2. Pishchany, G., Skaar, E. P. Taste for blood: hemoglobin as a nutrient source for pathogens. PLOS Pathogens. 8, e1002535 (2012).
  3. Haley, K. P., Skaar, E. P. A battle for iron: host sequestration and Staphylococcus aureus acquisition. Microbes and infection. Institut Pasteur. 14, 217-227 (2012).
  4. Krishna Kumar, K., et al. Structural basis for hemoglobin capture by Staphylococcus aureus cell-surface protein. IsdH. The Journal of biological chemistry. 286, 38439-38447 (2011).
  5. Grigg, J. C., Mao, C. X., Murphy, M. E. Iron-coordinating tyrosine is a key determinant of NEAT domain heme transfer. Journal of Molecular Biology. 413, 684-698 (2011).
  6. Villareal, V. A., et al. Transient weak protein-protein complexes transfer heme across the cell wall of Staphylococcus aureus. Journal of the American Chemical Society. 133, 14176-14179 (2011).
  7. Muryoi, N., et al. Demonstration of the iron-regulated surface determinant (Isd) heme transfer pathway in Staphylococcus aureus. J. Biol. Chem. 283, 28125-28136 (2008).
  8. Reniere, M. L., Skaar, E. P. Staphylococcus aureus haem oxygenases are differentially regulated by iron and haem. Mol. Microbiol. 69, 1304-1315 (2008).
  9. Liu, M., et al. Direct hemin transfer from IsdA to IsdC in the iron-regulated surface determinant (Isd) heme acquisition system of Staphylococcus aureus. J. Biol. Chem. 283, 6668-6676 (2008).
  10. Pishchany, G., et al. Specificity for human hemoglobin enhances Staphylococcus aureus infection. Cell Host Microbe. 8, 544-550 (2010).
  11. Pishchany, G., Dickey, S. E., Skaar, E. P. Subcellular localization of the Staphylococcus aureus heme iron transport components IsdA and IsdB. Infect. Immun. 77, 2624-2634 (2009).
  12. Torres, V. J., Pishchany, G., Humayun, M., Schneewind, O., Skaar, E. P. Staphylococcus aureus IsdB is a hemoglobin receptor required for heme iron utilization. J. Bacteriol. 188, 8421-8429 (2006).
  13. Kim, H. K., et al. IsdA and IsdB antibodies protect mice against Staphylococcus aureus abscess formation and lethal challenge. Vaccine. 28, 6382-6392 (2010).
  14. Cheng, A. G., et al. Genetic requirements for Staphylococcus aureus abscess formation and persistence in host tissues. Faseb J. 23, 3393-3404 (2009).
  15. Andreini, C., Bertini, I., Cavallaro, G., Holliday, G. L., Thornton, J. M. Metal ions in biological catalysis: from enzyme databases to general principles. J. Biol. Inorg. Chem. 13, 1205-1218 (2008).
  16. Weinberg, E. D. Iron availability and infection. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1790, 600-605 (2009).
  17. Drabkin, D. Metabolism of the Hemin Chromoproteins. Physiological Reviews. 31, 345-431 (1951).
  18. Graversen, J. H., Madsen, M., Moestrup, S. K. CD163: a signal receptor scavenging haptoglobin-hemoglobin complexes from plasma. The international journal of biochemistry & cell biology. 34, 309-314 (2002).
  19. Torres, V. J., et al. Staphylococcus aureus Fur regulates the expression of virulence factors that contribute to the pathogenesis of pneumonia. Infect. Immun. 78, 1618-1628 (2010).
  20. Hammer, N. D., Skaar, E. P. Molecular Mechanisms of Staphylococcus aureus Iron Acquisition. Annu. Rev. Microbiol. (2011).
  21. Hurd, A. F., et al. The iron-regulated surface proteins IsdA, IsdB, and IsdH are not required for heme iron utilization in Staphylococcus aureus. Fems. Microbiology Letters. 329, 93-100 (2012).
  22. Boys, B. L., Kuprowski, M. C., Konermann, L. Symmetric behavior of hemoglobin alpha- and beta- subunits during acid-induced denaturation observed by electrospray mass spectrometry. Biochemistry. 46, 10675-10684 (2007).
  23. Williams, R. C. Jr, Tsay, K. Y. A convenient chromatographic method for the preparation of human hemoglobin. Analytical Biochemistry. 54, 137-145 (1973).
  24. Shen, T. J., et al. Production of unmodified human adult hemoglobin in Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 8108-8112 (1993).
  25. Manjula, B. N., Acharya, S. A. Purification and molecular analysis of hemoglobin by high-performance liquid chromatography. Methods Mol. Med. 82, 31-47 (2003).
  26. Neilands, J. B. Microbial envelope proteins related to iron. Annual review of microbiology. 36, 285-309 (1982).
  27. Chart, H., Buck, M., Stevenson, P., Griffiths, E. Iron regulated outer membrane proteins of Escherichia coli: variations in expression due to the chelator used to restrict the availability of iron. Journal of General Microbiology. 132, 1373-1378 (1986).
  28. Rogers, H. J. Iron-Binding Catechols and Virulence in Escherichia coli. Infection and Immunity. 7, 445-456 (1973).
Demir Kaynağı Olarak İnsan Hemoglobin kullanarak <em>Staphylococcus aureus</em> Büyüme
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Pishchany, G., Haley, K. P., Skaar, E. P. Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source. J. Vis. Exp. (72), e50072, doi:10.3791/50072 (2013).More

Pishchany, G., Haley, K. P., Skaar, E. P. Staphylococcus aureus Growth using Human Hemoglobin as an Iron Source. J. Vis. Exp. (72), e50072, doi:10.3791/50072 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter