Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

الكشف عن سرطان الجلد باستخدام المعدلات اسماك الزرد الموديل ورم الأصليين

Published: November 13, 2012 doi: 10.3791/50086
Automatic Translation
1, 2,3, 1
1Program in Molecular Medicine and Department of Cancer Biology, University of Massachusetts Medical School, 2Departments of Surgery and Medicine, Weill Cornell Medical College, 3Departments of Surgery and Medicine, New York Presbyterian Hospital

Summary

ويقدم وسيلة سريعة للكشف عن سرطان الجلد باستخدام معدلات الزرد نموذج الورم الأصليين. فإنه يستفيد من ناقلات miniCoopR الذي يسمح للتعبير عن الجينات المرشحة سرطان الجلد في الخلايا الصباغية. يتم وصف طريقة للحصول على منحنيات البقاء على قيد الحياة خالية من سرطان الجلد، ومقايسة الغزو، بروتوكول للتلوين الأجسام المضادة الخلايا الصباغية نطاق وفحص زرع سرطان الجلد.

Abstract

وقد أسفرت دراسات الجينية من السرطانات البشرية ثروة من المعلومات حول الجينات التي تتغير في الأورام 1،2،3. وثمة تحد الناشئة عن هذه الدراسات هو أن يتم تغيير العديد من الجينات، وأنه يمكن أن يكون من الصعب التمييز تغيرات جينية تكون الأورام التي دفعت من تلك التي نشأت بالمناسبة خلال التحول. لرسم هذا التمييز فإنه من المفيد أن يكون هناك مقايسة التي يمكن قياس كميا تأثير جين متغير على بدء الورم وغيرها من العمليات التي تمكن الأورام أن تستمر ونشر. هنا نقدم وسيلة سريعة لفحص أعداد كبيرة من معدلات سرطان الجلد مرشح في الزرد باستخدام نموذج الورم الأصليين 4 أن يشمل الخطوات المطلوبة لبدء سرطان الجلد والصيانة. A كاشف رئيسي في هذا الاختبار هو متجه miniCoopR، الذي أزواج نسخة من النوع البري من مواصفات mitfa عامل الخلايا الصباغية إلى عبارة كاسيت إعادة التركيب في أي من المرشحين ميلويمكن إعادة تجميع الجينات أنوما 5. الناقل miniCoopR لديه minigene الإنقاذ mitfa الذي يحتوي على المروج، فتح الإطار القراءة و3'-غير مترجمة المنطقة من الجين mitfa من النوع البري. لأنها تتيح لنا لجعل البنى باستخدام كامل طول إطارات القراءة المفتوحة للمعدلات سرطان الجلد مرشح. ويمكن بعد هذه الحيوانات المستنسخة الفردية يتم حقنها في تيراغرام خلية واحدة (mitfa: BRAF V600E)؛ P53 (LF)؛ الأجنة الزرد mitfa (LF). يحصل دمج ناقلات miniCoopR من Tol2 بوساطة transgenesis 6 و ينقذ الخلايا الصباغية. لأن تقترن ماديا إلى minigene الإنقاذ mitfa، يتم التعبير عن الجينات المرشحة في الخلايا الصباغية انقاذ، والبعض منها سوف تتطور الى تحويل والأورام. ويمكن قياس تأثير الجين مرشح على بدء سرطان الجلد القتامي الخلية وخصائص منحنيات البقاء على قيد الحياة سرطان الجلد باستخدام خالية من المقايسات غزو، وتلطيخ الأجسام المضادة وفحوصات الزرع.

Protocol

1. الكشف عن المعدلات بداية ظهور سرطان الجلد

  1. إنشاء بوابة دخول الحيوانات المستنسخة الأوسط من خلال تضخيم PCR كامل طول الإطار القراءة مفتوحة من الجينات ذات الاهتمام (GOI) وإعادة توحيد pDONR إلى 221 باستخدام BP clonase II (إينفيتروجن). استخدام التكنولوجيا متعددة المواقع بوابة (إينفيتروجن) لp5E_mitfa أعد تجميع، pME_GOI، Tol2kit # 302 p3E_SV40polyA 6 و miniCoopR 5 إلى وضع الجينات ذات الاهتمام تحت المروج mitfa في ناقلات miniCoopR (الشكل 1A).
  2. حقن 25 بيكوغرام كل استنساخ مع 25 بيكوغرام Tol2 مرنا transposase في واحدة خلية تيراغرام (mitfa: BRAF V600E)؛ P53 (LF)؛ mitfa (LF) الأجنة الزرد متماثلة اللواقح ثلاثة أسباب كما هو موضح سابقا 7. احتضان الأجنة حقن 28.5 ° C. في إزالة أي أجنة ميتة في 24 HPF.
  3. حدد الخلايا الصباغية الحيوانات المعدلة وراثيا مع انقاذ في 72 HPF عن طريق وضع طبق بتري تحتوي على أجنة حقن على تشريح microscopه تحت الضوء الساقط على خلفية بيضاء (الشكل 1A).
  4. نقل الحيوانات إلى L 3 دبابات في الحضانة لمرفق الزرد في 4 DPF كما هو موضح سابقا 8.
  5. في 2 أشهر، حدد الحيوانات مع واحد على الأقل من منطقة الصباغية الإنقاذ أكبر من 4 مم 2 (الشكل 1A). هناك علاقة قوية بين درجة الانقاذ الخلايا الصباغية في 72 HPF ودرجة الانقاذ الخلايا الصباغية في 2 أشهر. عندما يتم اختيار الأجنة مع الانقاذ الخلايا الصباغية في 72 HPF، فإن الغالبية منهم (~ 80٪) على الأقل منطقة واحدة من الخلايا الصباغية الإنقاذ أكبر من 4 مم 2 في 2 أشهر.
  6. شاشة الحيوانات المحددة الأسبوعية عن وجود أورام (1B الشكل). هناك ارتباط قوي بين التغيرات النسيجية والشكلية. ومن المسلم به أن الانتقال من حميدة الخبيثة على أنه تغيير مورفولوجية الآفات عندما تصبح مرتفعة من السطح للحيوان. عزل الورم الحاملة أنيماLS للدراسة.
  7. رسم منحنيات البقاء على قيد الحياة خالية من سرطان الجلد مع التقدم في السن في الاسابيع على الإحداثي السيني وسرطان الجلد خالية في المئة على البقاء على قيد الحياة المنسقة. تتم مقارنة مع الحيوانات الخلايا الصباغية التي تعبر عن الجين من الفائدة للسيطرة على الحيوانات التي تعبر عن EGFP (تعزيز الأخضر بروتين فلوري) في الخلايا الصباغية (الشكل 1C). بداية الورم وسيطة لحقن الحيوانات مع miniCoopR-EGFP ما يقرب من 18 أسبوعا. تحديد ما إذا كانت منحنيات مختلفان إحصائيا باستخدام اختبار رتبة السجل.

2. ورم الغزو الفحص

  1. حدد الزرد المعزولة التي تنمي الأورام ظهريا، في المنطقة الواقعة بين الحدود الخلفي من الدماغ المؤخر والحدود الأمامي من الزعنفة الظهرية (الشكل 2A).
  2. بعد أسبوعين من بداية سرطان الجلد الموت ببطء الأسماك فقا للمبادئ التوجيهية التي حددها الأمريكية البيطرية لوحة الجمعية الطبية حول القتل الرحيم والتي وافقت عليها الجامعة من الوظائف ماساتشوستس كلية الطبتلك الجلسة رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC). على وجه التحديد، يتم وضع الأسماك في طبق مع 0.6 ملغ / مل tricaine حتى جيل الحركة تتوقف.
  3. إجراء شق في التجويف البريتوني من الاسماك مع مشرط ثم ضع السمك في بارافورمالدهيد 4٪ (PFA) بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية لتثبيت.
  4. علاج مع EDTA M 0.5 بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية ليزيل الكلس.
  5. إصلاح مع الفورمالين في الكاسيت بين عشية وضحاها، ليذوى 1 ساعة، 3 مرات اضحة مع الزيلين لمدة 1 ساعة ثم علاج مع البارافين 2 مرات لمدة 2 ساعة كل في 60 ° C.
  6. تضمين الأنسجة في البارافين في قالب والسماح لها لترسيخ لمدة 30 دقيقة إلى 1 ساعة.
  7. جعل 5 أقسام ميكرومتر، ميكرومتر واحدة كل 50. يجب أن تكون المقاطع العرضية وخلال الآفة كامل بحيث يمكن التعرف على وجهة أعمق الغزو. متابعة من قبل hematoxylin و تلطيخ يوزين.
  8. تقييم غزو الورم عن طريق قياس ما إذا كانت الخلايا السرطانية تبقى خارج الطبقة المكتنزة كولاجيني، غزو في ظهريالجهاز العضلي أو غزو الى مزيد من العمود الفقري (الشكل 2B، C). تحديد الفرق إحصائية بين المجموعتين من العينات.

3. تلوين الأجسام المضادة الخلايا الصباغية مقياس

  1. تشكل PO4 العازلة مع 80 مل 0.1 M 2 HPO نا 4 و 20 مل 0.1M ناه 2 PO 4. تأكد من أن الرقم الهيدروجيني هو 7.3. تشكل 2X العازلة التي تحتوي على الإصلاح 8،0 ز السكروز، 0.15 مل 0.2M CaCl 2 و 90 مل 0.2M PO 4 العازلة، ودرجة الحموضة 7.3. إذا لزم الأمر ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع هيدروكسيد الصوديوم أو حمض الهيدروكلوريك ثم جعل ما يصل الى 100 ​​مل مع العازلة 4 PO.
  2. يصل وزنه إلى 300 ملغ و PFA الصلبة إضافة إلى أنبوب microcentrifuge. إضافة 5 ملي هيدروكسيد الصوديوم إلى وحدة تخزين تساوي الكتلة × 4.5، في ملغ، من PFA (على سبيل المثال 450 UL 5 ملم هيدروكسيد الصوديوم إلى PFA ملغ 100). الحرارة ب 60-70 درجة مئوية مع الهز في بعض الأحيان حتى يتم حل PFA. تدور باستمرار الجسيمات المتبقية واستعادة 20٪ PFA طاف. جعل جديدة في كل مرة.
  3. إعداد الحل تثبيت تحتوي على 1X فايX العازلة و 4٪ PFA.
  4. تخدير السمك في 0،17 ملغ / مل tricaine.
  5. باستخدام الضوء الساقط تحت المجهر تشريح نتف جداول الظهرية باستخدام غرامة ذات الرؤوس الحادة ملقط، مع الحرص على عدم الاضرار النصف الخلايا الصباغية التي تحتوي على مقياس من (الشكل 3A). جداول مباشرة من مكان إلى 1 مل ملقط حل التثبيت واحتضان في درجة حرارة الغرفة، في حين تحول، لساعة 2 ≥. نقل الأسماك إلى أسماك المياه ورصد الأسماك لتأكيد الانتعاش ناجحة.
  6. لغسل الخلايا الصباغية المصطبغة التبييض جداول ثابتة في PBST (1X PBS درجة الحموضة 7.4، 0.1٪ تريتون X-100) 2 مرات لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. إضافة 1 مل حل التبييض التي تحتوي على 0،4 الطازجة KOH مل 10٪ و 0.15 مل 30٪ H 2 O 2 في 5 مل مع DH 2 O. وضع أقفال على parafilm أو غطاء لمنع الغاز من الانفجار الأنابيب مفتوحة. تواصل تبيض حتى ذهب الصباغ (10 دقيقة هي الحال) (الشكل 3B، C). يغسل في أوقات PBST أربعة ل5 دقائق في درجة حرارة الغرفةerature.
  7. كتلة ل30 دقيقة على الأقل في محلول مكون من كتلة 1X PBS درجة الحموضة 7.4، 0.2٪ تريتون X-100، 2 ملغ / مل BSA، DMSO 1٪، نان 0.02٪ 3 و 2٪ مصل الضأن. يستبعد نان 3 إذا النامية مع رد فعل HRP.
  8. احتضان مع الأجسام المضادة الأولية في حل كتلة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة. تحتاج إلى أن يكون لا يقل عن 400 ميكرولتر من حل على عينات للحفاظ على المغمورة.
  9. غسل جداول 3 مرات لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في PBST.
  10. احتضان الضد الثانوية مع من 2 ساعة إلى ليلة وضحاها في حل كتلة في درجة حرارة الغرفة.
  11. وصمة عار لمدة 10 دقيقة مع دابي PBST + ميكرومتر 0.1.
  12. يغسل 3 مرات لمدة 5 دقائق مع PBST.
  13. تحميل جداول على شريحة زجاجية في قطرة من vectashield ذلك أن الجانب المقعر من أسفل نحو جداول تواجه الشريحة ووضع غطاء زجاجي الانزلاق عليها. ختم حواف الشريحة مع طلاء الأظافر واضحة ومراقبة الشرائح تحت المجهر مضان (الشكل 3D، E، F، G

4. زرع الفحص

  1. إعداد المتلقي 2-3 الشهر القديمة كاسبر 9 الأسماك تشعيع مع 25 جراى من أشعة جاما في يوم من الأيام قبل زرع 10. السماح للأسماك في المياه لاسترداد الأسماك.
  2. الموت ببطء سمكة الحاملة للورم كما هو موضح سابقا (القسم 2.2).
  3. قطع الورم ووضعها في طبق بتري مع فلتر تعقيم حوالي 5 مل PBS مع 0.9x 5٪ FBS. الزهر الورم بشفرة الحلاقة بينما في الحل.
  4. يعمل في درجة حرارة الغرفة، يسحن مع ماصة P1000 للحصول على خلايا واحد. تشكل وحدة التخزين إلى 25 مل PBS مع فلتر تعقيم 0.9x مع 5٪ FBS.
  5. تصفية خلال 40 ميكرومتر تصفية شبكة.
  6. تدور في أجهزة الطرد المركزي إيبندورف الطاولة 5810R في 1،500 دورة في الدقيقة (453 إطار التعاون الإقليمي) لمدة 10 دقيقة.
  7. إزالة طاف وجعل التعليق الخلية إلى التركيز المطلوب تقريبا (تحمل 10 7 خلايا الورم عن 100 3 مم).
  8. حساب رانه بالضبط عدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات ويخفف من التعليق الخلية بحيث حجم حقن النهائي هو ما يقرب من 5 ميكرولتر. على سبيل المثال، إذا الخلايا هي 50000 ليتم حقنه، ينبغي أن تضعف تعليق خلية إلى تركيز النهائي من 10،000 خلية / ميكرولتر. نفض الغبار الأنبوب الذي يحتوي على التعليق الخلية كل دقيقة لمنع تراكمها قليل من الخلايا.
  9. غسل مقياس 26S (نصيحة شطبة) 701 N 10 حقنة هاميلتون ميكرولتر 2-3 مرات مع الإيثانول بنسبة 100٪ وPBS 0.9x. تحميل المحقنة مع 5 ميكرولتر من التعليق الخلية.
  10. تخدير الأسماك المستفيدة المشع في 0،17 ملغ / مل tricaine. الأسماك مكان على جانبها على Kimwipe رطبة (الشكل 4A).
  11. استقرار الأسماك بيد واحدة وإدراج إبرة مع شطبة مواجهة بزاوية ° 45 إلى الجناح من الاسماك فوق التجويف البريتوني في منتصف المسافة تقريبا بين الحدود الخلفي من الدماغ المؤخر والحدود الأمامي من الزعنفة الظهرية. خفض بلطف الغواص (الشكل 4B). </ لى>
  12. السماح للأسماك في المياه لاسترداد الأسماك الطازجة ومراقبة الأسماك يوميا لمدة engraftment ورم (الشكل 4C). إذا حدث engraftment، ويمكن أيضا استمرار نمو وتطور المرض يمكن ملاحظة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تم حقن الأجنة الزرد mitfa (LF) مع الناقل الذي يحتوي على الجين الورمي miniCoopR سرطان الجلد SETDB1 5 أو EGFP، كل منها تحت سيطرة المروج mitfa؛ P53 (LF)؛: واحد خلايا تيراغرام (BRAF V600E mitfa). وقد تم اختيار الأجنة مع الانقاذ الخلايا الصباغية وسمح لتنضج. في 2 أشهر من العمر مع الحيوانات الانقاذ تم تحديد الخلايا الصباغية أكبر من 4 مم 2. تم فحص الحيوانات أسبوعيا لالميلانينية. وأظهرت منحنيات حدوث الأورام للبالغين أن الجين الورمي SETDB1 تسارعت بشكل كبير سرطان الجلد onsetas مقارنة بالكنترول EGFP (الشكل 1). تم عزل الحيوانات التي وضعت بين الأورام الحدود الخلفي من الدماغ المؤخر والحدود الأمامي من الزعنفة الظهرية (الشكل 2A). بعد أسبوعين من بداية سرطان الجلد وثبتت أنهم في بارافورمالدهيد 4٪، ومقطوع ملطخة hematoxylin و eosin لتقييم الغزو سرطان الجلد في الأمم المتحدةderlying الأنسجة. كانت الميلانينية معربا عن SETDB1 أكثر الغازية محليا من EGFP تحكم الميلانينية (الشكل 2C). ولكي تبدو للتعبير عن الجين مرشح، التقطه جداول الظهرية من الزرد البرية من نوع والملون باستخدام التخفيف 1:100 من الأجسام المضادة الأولية التي تعترف عامل النسخ Mitfa تليها التخفيف 1:1،000 المضادة الماعز FITC للأرنب مفتش الأضداد (الشكل 3). لتقييم transplantability الورم، تم عزل خلايا سرطان الجلد من تيراغرام (mitfa: BRAF V600E)؛ P53 (LF)؛ mitfa الأسماك (LF) مع حقن miniCoopR-EGFP. تم حقن تحت الجلد 50000 متحولة الخلايا في كاسبر المستلم التي تم المشع في اليوم السابق مع 25 غراي. بنسبة 2 أسابيع من العمر، كان من السهل التعرف المصطبغة المانحة المستمدة من الخلايا (الشكل 4).

الشكل 1 س: SRC = "/ files/ftp_upload/50086/50086fig1highres.jpg" SRC = "/ files/ftp_upload/50086/50086fig1.jpg" />
الشكل 1. فحوص للكشف عن سرطان الجلد باستخدام معدلات بداية الفحص miniCoopR. A) تخطيطي للمقايسة miniCoopR. الجنين مع الخلايا الصباغية انقاذ (رأس السهم) التي تحتوي على ناقل miniCoopR والجينات في المصالح. شريط النطاق = 250 ميكرومتر. الكبار مع أكبر من 4 الانقاذ 2 مم الخلايا الصباغية (رأس السهم). شريط النطاق = 500 ميكرومتر B) انقاذ MiniCoopR-EGFP الزرد مع عديم الميلانين والورم المصطبغة (النصال). C) منحنى الممثل بقاء سرطان الجلد خالية من الأورام مقارنة التعبير عن الجين الورمي SETDB1 وEGFP الجينات التحكم (P = 9،4 × 10 -7، logrank χ 2). اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .

2.JPG "/>
الشكل 2. ورم مقايسة الغزو. A) MiniCoopR-انقاذهم الزرد مع ورم الظهرية (رأس السهم) بين الحدود الخلفي من الدماغ المؤخر والحدود الأمامي من الزعنفة الظهرية. B) المقطع العرضي يظهر الطبقة المكتنزة (SC)، والمقاييس، وجدول المرتبطة الخلايا الصباغية (SAM) (أقحم، بار النطاق = 50 ميكرومتر) والعضلات (M) والعمود الفقري (SPC). شريط النطاق = 200 ميكرومتر. C) أقسام عرضية تظهر غير الغازية miniCoopR-EGFP الورم (T) (اليسار) و A-SETDB1 miniCoopR الورم (يمين) التي غزت من خلال العضلات compactuminto الطبقة (M) والعمود الفقري. شريط النطاق = 200 ميكرومتر.

الشكل 3
تلطيخ الرقم جسم 3. الخلايا الصباغية النطاق. A) يجري التقطه الموازين من الزرد miniCoopR-EGFP تخدير. B) مع نطاق الخلايا الصباغية غير مقصورة المصطبغة وC) ق ابيضكال من miniCoopR-EGFP الزرد. شريط النطاق = 100 ميكرومتر. نطاق غير مقصورة ملطخة مع الأجسام المضادة D Mitfa) وE) دابي. نطاق ابيض ملطخة مع F) Mitfa الأجسام المضادة وG) دابي. شريط النطاق = 40 ميكرومتر.

الشكل 4
الشكل 4. زرع خلايا سرطان الجلد. A) Uninjected كاسبر الزرد. شريط النطاق = 500 ميكرومتر. B) تحت الجلد زرع موقع (رأس السهم) على مستلم كاسبر المشع مباشرة بعد حقن خلايا سرطان الجلد مع 50،000. شريط النطاق = 200 ميكرومتر. C) الإشعاعي المتلقي كاسبر تظهر engraftment الورم (رأس السهم) بعد أسبوعين من حقن خلايا سرطان الجلد مع 50،000.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

طريقة miniCoopR تمكن التعبير عن الجينات ذات الأهمية في الخلايا الصباغية الزرد. هذا النهج يستفيد من حقيقة أن هذا الجين يعمل الزرد mitfa الخلايا بشكل مستقل. لهذا السبب، الخلايا الصباغية انقاذهم من قبل الناقل miniCoopR من المؤكد أن تحتوي على الجينات أي minigene والاهتمام الذي يقترن جسديا. الخلايا الصباغية انقاذ واضحة للعيان ويمكن الحصول عليها في الحيوانات التي تم حقن وحيدة الخلية الأجنة. يتم تحديد درجة محددة من الخيمرية، ويمكن تجاوز هذه الحيوانات وسجل لقطع الورم أو ظهور الخصائص الأخرى. وهناك فائدة كبرى للأسلوب miniCoopR هو أنه يمكن مع الحيوانات الخيمرية كافية التعرف بسهولة وسجل دون الحاجة إلى الحصول على خطوط المعدلة وراثيا مستقرة الموافق كل الجينات ذات الاهتمام اختبارها. يتم حفظ الوقت والجهد والنفقات بما يتناسب مع عدد من الجينات التي تهم يتم مسحها.

كما ذكرت سابقا 5

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

نشكر الدكتور ليونارد I. زون في المختبر الذي تم تطوير هذه التقنيات في البداية؛ كوان كريستين والراحل تشي شين بن لهدايا من البلازميدات المستخدمة في هذا العمل؛ جيمس معلن Raible ديفيد للمساعدة في تلوين الأجسام المضادة، وجيمس لNeiswender وحقن مكروي الفيديو. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R00AR056899-03 لCJC

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Gateway recombination reagents Invitrogen
miniCoopR Reference5
Mitfa antibody Reference5
FITC goat anti-rabbit IgG antibody Invitrogen
Vectashield Vector Labs H-1000
casper Zebrafish Reference9
701N 10 μl Syringe Hamilton/Fisher 14-824
40 μM filter BD Falcon/Fisher 352340
FBS Invitrogen 26140079

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Beroukhim, R., et al. The landscape of somatic copy-number alteration across human cancers. Nature. 463, 899-905 (2010).
  2. Curtin, J. A., et al. Distinct sets of genetic alterations in melanoma. N. Engl. J. Med. 353, 2135-2147 (2005).
  3. Lin, W. M., et al. Modeling genomic diversity and tumor dependency in malignant melanoma. Cancer Res. 68, 664-673 (2008).
  4. Patton, E. E., et al. BRAF mutations are sufficient to promote nevi formation and cooperate with p53 in the genesis of melanoma. Curr. Biol. 15, 249-254 (2005).
  5. Ceol, C. J., et al. The histone methyltransferase SETDB1 is recurrently amplified in melanoma and accelerates its onset. Nature. 471, 513-517 (2011).
  6. Kwan, K. M., et al. The Tol2kit: a multisite gateway-based construction kit for Tol2 transposon transgenesis constructs. Dev. Dyn. 236, 3088-3099 (2007).
  7. Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
  8. Westerfield, M. The zebrafish book. A guide of the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , 4, University of Oregon Press. (2000).
  9. White, R. M., et al. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
  10. Traver, D., et al. Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants. Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).

Tags

سرطان علم الأحياء، العدد 69، الطب، علم الوراثة، علم الأحياء الجزيئي، سرطان الجلد، الزرد،
الكشف عن سرطان الجلد باستخدام المعدلات اسماك الزرد الموديل ورم الأصليين
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Iyengar, S., Houvras, Y., Ceol, C.… More

Iyengar, S., Houvras, Y., Ceol, C. J. Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model. J. Vis. Exp. (69), e50086, doi:10.3791/50086 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter