Summary
हम एक के लिए है कि प्राकृतिक जल के लिए लागू किया जा सकता है magnetotactic बैक्टीरिया (एमटीबी) इकट्ठा विधि प्रदर्शित करता है. एमटीबी और अलग किया जा सकता है तलछट एक अपेक्षाकृत सरल सेटअप है कि बैक्टीरिया प्राकृतिक चुंबकत्व का लाभ लेता है का उपयोग कर नमूने से समृद्ध है. पृथक एमटीबी फिर दोनों प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग विस्तार से जांच की जा सकता है.
Abstract
Magnetotactic बैक्टीरिया (एमटीबी) जलीय सूक्ष्मजीवों कि 1 विशेषकर तलछट मैसाचुसेट्स (यूएसए) के नमक दलदल में एकत्र नमूनों में से एक 1975 में वर्णित हैं. तब से एमटीबी सभी 2 दुनिया भर से किया गया है स्तरीकृत पानी और तलछट स्तंभों में खोज की है. सभी एमटीबी एक आम सुविधा है कि वे magnetosomes, जो मैग्नेटाइट के intracellular, झिल्ली ही सीमित चुंबकीय nanocrystals (3 Fe हे 4) और / या greigite (Fe 3 4 एस) या दोनों 3, 4 होते. उत्तरी गोलार्द्ध में, एमटीबी आम तौर पर एक चुंबक के दक्षिण छोर पर आकर्षित कर रहे हैं, जबकि दक्षिणी गोलार्द्ध में वे आम तौर पर एक 3,5 चुंबक के उत्तरी छोर के लिए आकर्षित कर रहे हैं. इस संपत्ति जब पर्यावरणीय नमूनों से एमटीबी को अलग करने की कोशिश कर रहा शोषण किया जा सकता है.
एमटीबी को समृद्ध करने के लिए सबसे आम तरीकों में से एक के लिए एक स्पष्ट प्लास्टिक के कंटेनर का उपयोग करने के लिए एक प्राकृतिक स्रोत से तलछट और पानी इकट्ठा करने के लिए है,एक मीठे पानी तालाब के रूप में इस तरह के. उत्तरी गोलार्द्ध में, एक चुंबक के दक्षिण छोर तलछट पानी इंटरफ़ेस में तलछट ऊपर सिर्फ कंटेनर के बाहर के खिलाफ रखा गया है. कुछ समय के बाद, जीवाणु एक विंदुक के साथ चुंबक के पास कंटेनर के अंदर से हटाया जा सकता है और फिर एक केशिका 6 दौड़ का मैदान और एक चुंबक का उपयोग करके आगे समृद्ध. एक बार समृद्ध, बैक्टीरिया फांसी बूंद पद्धति का उपयोग करके एक खुर्दबीन स्लाइड पर रखा जा सकता है और एक खुर्दबीन प्रकाश में मनाया या एक तांबे ग्रिड पर जमा और संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (मंदिर) का उपयोग कर देखा.
इस पद्धति का उपयोग करके, पृथक एमटीबी microscopically तैराकी जैसे विशेषताओं का निर्धारण करने के लिए अध्ययन किया जा सकता है, व्यवहार और flagella, कोशिकाओं, चुंबकीय क्रिस्टल के आकार, की संख्या magnetosomes, प्रत्येक कोशिका में magnetosome श्रृंखला की संख्या, की रचना की सेल आकारिकी के प्रकार संख्या nanomineral क्रिस्टल और intracellular vacuoles की उपस्थिति.
Protocol
1. एमटीबी संग्रह
- जब एक मीठे पानी magnetotactic बैक्टीरिया एकत्र साइट (एमटीबी) पर निर्णय लेने, यह अक्सर एक तालाब या धीमी गति से चलती है कि धारा एक नरम मैला तलछट परत है के साथ शुरू करने के लिए सबसे अच्छा है. इस प्रदर्शन में हम कोलंबस में ओहियो राज्य विश्वविद्यालय (OSU) ओहियो (यूएसए) के परिसर पर Olentangy नदी के किनारे पर एक नमूना एकत्र किया. हालांकि यह हमारे प्रदर्शन के लिए एक सुविधाजनक स्थान था, यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल किसी भी जलीय स्थान पर लागू है. इस प्रोटोकॉल में प्रयुक्त सामग्री तालिका 1 में पाया जा सकता है. एक स्थान है जहां पानी की गहराई के बीच 10 और 100 सेमी है. ऐसे स्थान पर, आप तलछट एक स्पष्ट, पेंच शीर्ष कंटेनर का उपयोग करने का सबसे ऊपरी परत एकत्र करना चाहिए. स्कूप तलछट और कंटेनर में पानी जब तक यह एक तिहाई एक आधा तलछट और पानी के साथ शेष मात्रा से भर जाता है. जलमग्न जब तक यह पानी से भरा है कंटेनर रखें और फिर कसकर कंटेनर w टोपीith अपने पेंच टॉप ढक्कन. तलछट मिश्रण करने के लिए आवश्यक नहीं है. एक तौलिया के साथ सूखी कंटेनर के बाहर साफ कर लें और फिर अपनी प्रयोगशाला के लिए नमूना लेने. अपनी प्रयोगशाला के लिए नमूना दौड़ान यह आवश्यक नहीं है. हम क्षेत्र में प्लास्टिक के कंटेनर में एमटीबी नमूने उन्हें वापस लाने के लिए हमारी प्रयोगशाला से पहले कई दिनों के लिए छोड़ दिया है. एमटीबी कई हफ्तों के लिए लंबे समय के रूप में महीने के लिए व्यवहार्य हो सकता है के रूप में क्षेत्र में एक शांत, छायांकित जगह में नमूने दुकान चाहिए.
- एक बार अपने प्रयोगशाला में नमूना है, टोपी ढीला और वाष्पीकरण की मात्रा को कम करने के लिए कंटेनर को कवर छोड़. एक अंधेरे कमरे, दराज, कंटेनर या कमरे के तापमान पर स्टोर पूरी तरह से एल्यूमीनियम पन्नी के साथ कंटेनर को कवर. तलछट और ठीक कणों को पूरी तरह से नमूना छोड़ने के कई दिनों के लिए कई घंटे के लिए undisturbed कंटेनर के नीचे करने के लिए व्यवस्थित करने की अनुमति दें. यह तलछट मिश्रण करने के लिए आवश्यक नहीं है, एमटीबी एक undisturbed वातावरण पसंद करते हैं. प्लास्टिक के कंटेनर के स्पष्ट दीवारोंकण नीचे करने के लिए तय हो चुका है कि आप इस बात की पुष्टि करने के लिए अनुमति देगा. अपने नमूने के आधार पर, एमटीबी नमूना में कई महीनों के लिए जीवित रह सकते हैं.
2. एमटीबी अलगाव
- जब आप के लिए प्लास्टिक के कंटेनर इंटरफ़ेस तलछट पानी (चित्रा 1 ए) के ऊपर लगभग 1 सेमी के पक्षों पर एमटीबी, जगह मैग्नेट को अलग करने के लिए तैयार कर रहे हैं. कंटेनर के नीचे में तलछट को परेशान नहीं करने के लिए सावधान रहो. एक चुंबक के दक्षिण ध्रुव और विपरीत पक्ष (चित्रा 1 ए) पर एक और चुंबक के उत्तर की ओर कंटेनर के एक तरफ रखें. लगभग किसी भी चुंबक एक चुंबकीय हलचल बार या बड़े फ्रिज चुंबक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. कुछ भी करने के लिए इंटरफ़ेस तलछट पानी के ऊपर सही ऊंचाई पर मैग्नेट का समर्थन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हमने पाया है कि एक गत्ता या प्लास्टिक बॉक्स के शीर्ष पर आराम कर मैग्नेट सबसे अच्छा है, तथापि, मैग्नेट भी प्लास्टिक के कंटेनर के बाहर करने के लिए टेप किया जा सकता है. कई के लिए 30 मिनट रुकोबैक्टीरिया के लिए घंटे चुंबक के लिए तैरने के लिए.
- एक बाँझ विंदुक का प्रयोग बार दक्षिण ध्रुव चुंबक (उत्तरी गोलार्द्ध में एकत्र नमूनों के लिए) की स्थिति के पास कंटेनर (चित्रा 1 ए) के अंदर ध्यान से पानी इकट्ठा करने के लिए. यह पानी एमटीबी कि बार दक्षिण ध्रुव चुंबक आकर्षित किया गया है को शामिल करना चाहिए. अगले एक केशिका दौड़ का मैदान के लिए आगे एमटीबी को समृद्ध करने के लिए किया जाना चाहिए.
3. एमटीबी रेसट्रैक
- Magnetotactic बैक्टीरिया के साथ आदेश में अपने नमूने को समृद्ध करने के लिए, एक केशिका दौड़ का मैदान (आंकड़े 1B और 1C) आवश्यक है. ये स्पष्ट प्लास्टिक के कंटेनर से कोशिकाओं को अलग करने के लिए पहले किए जाने की जरूरत है.
- एक 5.75 इंच (146 मिमी) गिलास पाश्चर विंदुक का प्रयोग करने के लिए एक दौड़ का मैदान बनाने के लिए. एक हीरे की कलम या फ़ाइल का उपयोग बंद विंदुक के शीर्ष में कटौती, विंदुक की लंबाई महत्वपूर्ण है, नहीं है, लेकिन यह पानी के लगभग 1-2 मिलीलीटर को नियंत्रित करने में सक्षम होना चाहिए. इतना है कि अगले एक लैम्प बर्नर का उपयोग करने के लिए टिप पिघलयह सील हो जाता है (चित्रा 1C). परिणामस्वरूप विंदुक एक खुले अंत और एक मोहरबंद अंत होना चाहिए.
- इन racetracks के कई और फिर आटोक्लेव. इसके अलावा, आप कपास और कई लंबी धातु सुई आटोक्लेव की आवश्यकता होगी.
- एक autoclaved दौड़ का मैदान का उपयोग कर एक लंबे समय धातु फ़िल्टर सिरिंज के लिए संलग्न सुई फ़िल्टर नमूना पानी, तलछट पानी चित्रा 1A में दिखाया इंटरफेस के पास से एकत्र जोड़ें. फिल्टर के ध्यान में लीन होना आकार 0.22 मिमी पानी से मलबे और contaminants को समाप्त किया जाना चाहिए. यह महत्वपूर्ण है के लिए पूरी तरह से यकीन है कि वहाँ गिलास में केशिका कोई हवाई बुलबुले हैं.
- बाँझ कपास (चित्रा 1 बी) के साथ दौड़ का मैदान के नीचे प्लग. धातु सुई का प्रयोग करने के लिए दौड़ का मैदान की सील अंत की ओर कपास धक्का तो यह 0.5 है 1 सील टिप (चित्रा 1C) से दूर सेमी.
- एक बाँझ विंदुक का प्रयोग, नमूना एमटीबी युक्त पानी (2.2 अनुभाग से) जोड़ने rएक तैयार एमटीबी दौड़ का मैदान (चित्रा 1B) eservoir (खुले अंत).
4. एमटीबी संवर्धन
- दौड़ का मैदान एक बार नमूना तरल पदार्थ से भरा है, और यह अपने पक्ष पर एक समतल सतह पर (जैसे, एक benchtop) रखना और एक चुंबक के दक्षिण ध्रुव की जगह (उत्तरी गोलार्द्ध में) दौड़ का मैदान की सील टिप (आंकड़े 1B और 1C).
- कपास के माध्यम से विस्थापित एमटीबी के लिए 5 से 30 मिनट रुको. तो फिर तुम दौड़ का मैदान की नोक के पास तरल पदार्थ लेने चाहिए. भी लंबे समय से प्रतीक्षा की जा रही अन्य गतिशील बैक्टीरिया जैसे contaminants, केशिका की नोक पर लागू कर सकते हैं. वैकल्पिक रूप से, आप एक प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग करने के लिए दौड़ का मैदान की नोक देखने और देखो एमटीबी दौड़ का मैदान टिप पर इकट्ठा सकता है. यह निर्धारित करने में कितनी देर तक यह कपास प्लग के माध्यम से विस्थापित एमटीबी लेता है की अनुमति देगा.
- धीरे हीरे की चाकू का उपयोग करने के लिए कपास प्लग के पास एक छोटी सी खरोंच और दौड़ का मैदान के अंत तस्वीर. <li> एक संकीर्ण सुई (25 या 27 गेज) के साथ एक 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करने के लिए दौड़ का मैदान की नोक से तरल पदार्थ को हटाने के. अब इस तरल नमूना समृद्ध एमटीबी शामिल करना चाहिए.
5. प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा एमटीबी अवलोकन
- समृद्ध एमटीबी नमूना के एक (10-20 μl) एक coverslip पर ड्रॉप रखें.
- जल्दी तो ड्रॉप अब नीचे का सामना करना पड़ रहा है और coverslip से फांसी पर coverslip फ्लिप.
- एक रिंग ओ कि एक गिलास स्लाइड पर आराम कर रहा है पर coverslip रखें. O-अंगूठी एक थोड़ा छोटे तो व्यास coverslip (चित्रा 2) के बारे में 1 सेमी होना चाहिए.
- एक प्रकाश माइक्रोस्कोप मंच पर इस हैंगिंग ड्रॉप प्लेस और ड्रॉप के एक किनारे पर ध्यान केंद्रित किया है. एक 60x शुष्क उद्देश्य बहुत अच्छी तरह से काम करता है क्योंकि ज्यादातर एक उच्च संख्यात्मक एपर्चर (एनए, उदाहरण के लिए, 0.93) है, लेकिन तेल, जो फांसी ड्रॉप विधि (2 चित्रा) के लिए उपयोग करने के लिए मुश्किल है की आवश्यकता नहीं है.
- फांसी घ एक बार चुंबक करीब के दक्षिण छोर प्लेसrop और एमटीबी चुंबक (3 चित्रा) निकटतम बूंद के किनारे की ओर पलायन शुरू हो जाएगा. कुछ ही मिनटों के भीतर कई एमटीबी ड्रॉप (3 चित्रा) के किनारे पर होना चाहिए. अपने आप को साबित करना है कि बैक्टीरिया चुंबक की पोल reversing द्वारा चुंबकीय हैं और फिर निरीक्षण बैक्टीरिया के विपरीत दिशा में तैरने.
6. ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (मंदिर) एमटीबी अवलोकन
- समृद्ध एमटीबी के (~ 20 μl) एक तांबे ग्रिड पर छोड़ प्लेस और बैक्टीरिया को 10 मिनट के लिए व्यवस्थित करने के लिए अनुमति देते हैं.
- से साफ फिल्टर पेपर के एक टुकड़े के साथ अतिरिक्त पानी बाती.
- वैकल्पिक रूप से, ग्रिड नकारात्मक 2% uranyl एसीटेट, 2% phosphotungstic एसिड 7.2 पीएच, या 2.5% सोडियम molybdate 7, 8, 9 के साथ कलंकित किया जा सकता है. यह दाग की एक बूंद पर समृद्ध एमटीबी साथ ग्रिड incubating के तुरंत बाद तांबे ग्रिड रखने के द्वारा किया जाता है. नकारात्मक दाग के साथ ग्रिड सेते हैं, बार सेंट के आधार पर अलग अलग होंगेऐन प्रयोग किया जाता है, और फिर से साफ फिल्टर पेपर के एक टुकड़े के साथ तरल पदार्थ बाती.
- संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (मंदिर, चित्रा 4) का उपयोग एमटीबी को देखें. यहाँ काम वर्णित एमटीबी Formvar स्थिर और कार्बन लेपित 200 जाल तांबा ग्रिड (टेड पेला 01,800) adsorbed थे. ग्रिड कार्बन पक्ष के साथ रखा गया नीचे सेल निलंबन की एक बूंद पर 10 मिनट तक के लिए है, तो तुरंत पानी की एक बूंद पर 30 सेकंड के लिए ग्रिड को रखने के द्वारा एक बार धोया. धुंधला के लिए, ग्रिड 30 के लिए 2% uranyl एसीटेट (टेड पेला 19,481) की एक बूंद पर रखा गया सेकंड 5 मिनट के लिए और फिर पूरी तरह से फिल्टर पेपर के एक टुकड़े का उपयोग कर सूखे. ग्रिड मंदिर 80kV या एक फी Tecnai F20 में या तो एक फी Tecnai आत्मा का उपयोग 200kV उच्च कोण कुंडलाकार क्षेत्र अंधेरे स्टेम का उपयोग कर विश्लेषण किया गया.
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Representative Results
एक चुंबक एक प्रभावी उपकरण है कि पर्यावरण के नमूने (चित्रा 1 ए) में निहित magnetotactic बैक्टीरिया (एमटीबी) को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एक केशिका दौड़ का मैदान (चित्रा 1B) एमटीबी के चुंबकीय गुण का उपयोग करता है के लिए उन्हें जहां वे गैर magnetotactic भी पर्यावरण नमूना के भीतर निहित सूक्ष्मजीवों से अलग किया जा सकता है एक कपास प्लग के माध्यम से आकर्षित.
चित्रा 1 एक स्पष्ट प्लास्टिक तलछट और पानी के नमूने युक्त बोतल कोलंबस, ओहियो (यूएसए) में Olentangy नदी से एकत्र की. लगभग एक से डेढ़ तलछट और एक आधा पानी की बोतल शामिल हैं. एक चुंबक के दक्षिण छोर तलछट ऊपर लगभग 1 सेमी रखा गया है कई घंटे तक (एक). चुंबक के पास से कंटेनर के अंदर तरल पदार्थ की कुछ को हटाने के बाद, यह एक केशिका आर के अंदर रखा गया हैacetrack जहां एक कपास प्लग (तीर) के माध्यम से एक बार चुंबक (बी) के दक्षिणी छोर की ओर एमटीबी तैरना. केशिका नमूना दिखा, कपास दौड़ का मैदान के दृश्य एक करीबी, फ़िल्टर तरल पदार्थ, केशिका ट्यूब और एक बार चुंबक (सी) के दक्षिणी छोर की सील अंत.
चित्रा 2 एमटीबी दौड़ का मैदान एक बार से समृद्ध किया गया है, एक छोटी सी बूंद एक coverslip है, जो तब उल्टा रूप से फ़्लिप किया है और एक O-अंगूठी कि स्लाइड पर आराम कर रहा है पर रखा पर रखा जा सकता है. यह स्लाइड O-अंगूठी coverslip सैंडविच एक प्रकाश माइक्रोस्कोप मंच पर रखा जा सकता और एक 60x शुष्क उद्देश्य (तेल लेंस एक हैंगिंग ड्रॉप के साथ उपयोग करने के लिए असुविधाजनक हैं) का उपयोग करते हुए देखा.
चित्रा 3 उज्ज्वल एमटीबी तैराकी के क्षेत्र माइक्रोस्कोप छवि (पतली.लंबे) तीर और फांसी ड्रॉप (कम तीर) जो एक चुंबक के दक्षिण ध्रुव के किनारे पर सभा.
चित्रा 4 ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप छवि एक एकल magnetotactic एक पर्यावरण तलछट नमूना से समृद्ध जीवाणु की. (कुंडलित कीटाणु) सेल और magnetosomes की आकारिकी एक एकल कशाभिका साथ साथ स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं.
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Discussion
Magnetotactic बैक्टीरिया जरूरी हर जलीय पर्यावरण 8 में नहीं पाए जाते हैं, लेकिन जब वे होते हैं, वे 100 के आदेश पर पाया जा सकता है - 2 मिली लीटर प्रति 1,000 कोशिकाओं. आदेश में ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग एमटीबी निरीक्षण करने के लिए, आप लगभग 50 अपने 8 नमूने में बैक्टीरिया / मिलीलीटर की आवश्यकता होगी. अगर वहाँ अपने नमूने में कोई या कुछ एमटीबी कर रहे हैं, तो आप या तो अपने नमूनों को इकट्ठा करने के लिए एक नए पर्यावरण साइट का चयन करने के लिए या आप एक या अगले भाग में चर्चा तकनीकों का अधिक कोशिश की आवश्यकता होगी की आवश्यकता होगी.
सबसे पहले, आप एक बड़े प्लास्टिक टब 8 का उपयोग पर्यावरण से अधिक तलछट इकट्ठा करने की कोशिश करनी चाहिए. यह विशेष रूप से उपयोगी है अगर unculturable एमटीबी की बड़ी संख्या की जरूरत है. पर्यावरण नमूने पर निर्भर करता है, तो यह संभव नहीं हो एमटीबी नमूना एकत्रित करने के बाद तुरंत 50 बैक्टीरिया / एमएल के एक एकाग्रता होने के नमूनों को अलग कर सकते हैं. इसलिए, जब आप अपने पर्यावरण नमूना वापस लाने के लिए ला करने के लिएboratory, यह नमूना के लिए प्रतीक्षा करने के लिए एक बार चुंबक का उपयोग एमटीबी को अलग करने की कोशिश कर रहा से पहले प्रयोगशाला परिस्थितियों acclimate करने के लिए फायदेमंद हो सकता है. इस दशानुकूलन अवधि जीवाणु समुदाय को परिपक्व और एमटीबी के उच्च सांद्रता के लिए अग्रणी संस्कृति फिर से आबाद करने के लिए अनुमति देगा. एक और सरल तकनीक है कि अक्सर अधिक ध्यान केंद्रित एमटीबी नमूनों का उत्पादन करने के लिए समय की एक लंबी अवधि (उदाहरण के लिए, कई दिन) के लिए नमूना कंटेनर (चित्रा 1 ए) के पक्ष पर चुंबक बार छोड़ रहा है. यह अधिक एमटीबी चुंबक विस्थापित करने के लिए समय की अनुमति चाहिए. एक अंतिम तकनीक है कि उपयोगी हो सकता है, एक बार में कई racetracks (चित्रा 1 बी) का उपयोग करें और फिर एक नमूने में प्रत्येक दौड़ का मैदान से एमटीबी गठबंधन है. यदि आप मानते हैं कि वहाँ एक दौड़ का मैदान के साथ या अगर वहाँ भी कई अपने समृद्ध नमूना में contaminating सूक्ष्मजीवों (यानी, गैर एमटीबी) कर रहे हैं, तो आप एक प्रकाश एमटीबी निरीक्षण के रूप में वे कपास plu के माध्यम से तैरना खुर्दबीन के नीचे दौड़ का मैदान जगह कर सकते हैं एक समस्या हैजी और टिप में. यह आपको अगर contaminating सूक्ष्मजीवों भी कपास प्लग के माध्यम से आ रहे हैं और जब संवर्धन की प्रक्रिया को रोकने के लिए निर्धारित करने के लिए अनुमति देगा.
हम जानते हैं कि वहाँ एमटीबी को अलग करने के लिए और अधिक परिष्कृत तरीके हैं उल्लेख करना चाहिए, लेकिन इन तरीकों अधिक विशेष उपकरणों के उपयोग की आवश्यकता है. एक उदाहरण के लिए में एक चुंबकीय तार का उपयोग करते हैं, के बजाय एक बार चुंबक, और अनुकूलित गिलास वाहिकाओं में मीठे पानी 10 अवसादों, 11 से एमटीबी अलग शामिल है. यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल निर्धारित करने के लिए कि क्या एक पर्यावरण साइट एमटीबी होता करने के लिए एक सस्ता और कारगर तरीका का प्रतिनिधित्व करता है. इस अलगाव और संवर्धन प्रोटोकॉल काफी सीधा है कि सूक्ष्म जीव विज्ञान के छात्रों गुरु और आसानी से कर सकते हैं तो "ठीक धुन" है कि एमटीबी की अधिक पैदावार हासिल किया जा सकता है है. एक बार एमटीबी पृथक किया गया है, प्रतिदीप्ति संकरण में सीटू के रूप में अन्य विश्लेषण 16S समुदाय विश्लेषण, ऊर्जा फैलानेवाला (EDS) स्पेक्ट्रोस्कोपी, मंदिर, ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी के लिए अनुक्रमण rRNAऔर चुंबकीय माप एमटीबी 12, 13, 14 पर आयोजित किया जा सकता है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
अमेरिका के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन पूर्व एशियाई और प्रशांत ग्रीष्मकालीन संस्थानों, अमेरिका अनुसंधान अनुदान कार्यक्रम के जियोलाजिकल सोसाइटी और स्नातकोत्तर अनुसंधान और छात्रवृत्ति के लिए पूर्व छात्रों अनुदान यह काम अमेरिका के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (कान 0,920,299 और कान 0,745,808) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी से. हम अपने insightful टिप्पणियों के लिए संपादक और दो अनाम समीक्षक धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass slides | Fisher Scientific | S95933 | |
| Glass Pasteur pipets | Fisher Scientific | 13-678-6A | |
| O-ring | Hardware store | ||
| Cover slips | Fisher Scientific | 12-542B | |
| Bar magnet | Fisher Scientific | S95957 | |
| Container | Any | Any plastic or glass container that can hold at least 0.5 L and can be sealed | |
| Cotton | Any | ||
| Microscope with 60X dry lens | Zeiss | A 60X dry lens is not absolutely necessary, but this gives a high NA without using oil | |
| Diamond pen | Fisher Scientific | 08-675 | |
| 0.22 mm filter | Fisher Scientific | 09-719C | |
| 1 ml syringe | Fisher Scientific | NC9788564 | |
| Microcentrifuge tubes | Fisher Scientific | 02-681-320 | |
| Formvar/Carbon 200 mesh, copper grids | Ted Pella Inc. | 01800 | |
| Uranyl acetate | Ted Pella Inc. | 19481 | |
| Tecnai Spirit TEM | FEI | ||
| Tecnai F20 S/TEM | FEI |
References
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