Summary
Dimostriamo variazioni del extracellulare più unità tecnica di registrazione per la caratterizzazione degli odori-risposte evocate nelle prime tre fasi del percorso olfattivo invertebrati. Queste tecniche possono essere facilmente adattati per esaminare l'attività ensemble in altri sistemi neuronali pure.
Abstract
Rilevazione e l'interpretazione dei segnali olfattivi sono fondamentali per la sopravvivenza di molti organismi. Sorprendentemente, specie in tutto phyla sono sistemi olfattivi sorprendentemente simili suggerisce che l'approccio biologico chimico rilevamento è stato ottimizzato nel tempo evolutivo 1. Nel sistema olfattivo degli insetti, odoranti sono trasdotte dai neuroni recettori olfattivi (ORN) in antenna, che convertono gli stimoli chimici in treni di potenziali d'azione. Input sensoriali dai ORNs viene quindi trasmessa al lobo antennale (AL, una struttura analoga al bulbo olfattivo vertebrati). Nel AL, rappresentazioni neurali per gli odori assumere la forma di modelli spazio-temporali di cottura distribuiti in gruppi di neuroni principali (PN, noto anche come i neuroni di proiezione) 2,3. L'uscita AL viene successivamente elaborato da cellule Kenyon (KC) nel corpo funghi valle (MB), una struttura associata memoria olfattiva e apprendimento 4,5. Suoe, presentiamo tecniche di registrazione elettrofisiologiche di monitorare odori evocate risposte neurali in questi circuiti olfattivi.
Primo, presentiamo un singolo metodo di registrazione sensillum studiare odori risposte evocate a livello di popolazioni di ORNs 6,7. Si discute l'uso di soluzione salina pipette di vetro riempito affilati come elettrodi per monitorare le risposte ORN extracellulare. Successivamente, presentiamo un metodo per monitorare extracellularmente risposte PN utilizzando un commerciale a 16 canali elettrodo 3. Un approccio simile utilizzando una misura tetrodo filo ritorto a 8 canali è dimostrata per cella Kenyon registrazioni 8. Noi forniamo i dettagli del nostro setup sperimentale e presentano tracce rappresentative di registrazione per ciascuna di queste tecniche.
Protocol
1. Odore di preparazione e consegna
- Soluzioni diluite odori in olio minerale in volume per ottenere il livello desiderato di concentrazione. Memorizzare una miscela di 20 ml di olio minerale e l'odorizzante in una bottiglia di vetro 60 ml. Inserire due aghi siringa in un tappo di gomma (calibro 19), una dal basso e l'altra dalla parte superiore, per fornire un ingresso e una linea di uscita. Sigillare la bottiglia di vetro con il tappo di gomma e collegare un progettato carbone attivo filtro in aspirazione (Figura 1A).
- Il filtro a carbone viene realizzata utilizzando due 6 ml siringhe. Tagliare le siringhe a metà ed eliminare la fine stantuffo. Riempite ciascuno dei pezzi restanti con cotone e carbone attivo prima di collegarli insieme usando una guaina termoretraibile.
- Collegare la linea di uscita della bottiglia odore (usando tubi in polietilene, ID 0,86 millimetri), il tubo di plastica (Nalgene tubi FEP, ID 5,8 mm) che fornisce un flusso costante attraverso l'antenna (Figura 1B
- Diretto carbonio filtrata, deumidificata (gas di trasporto; portata, 0,75 L / min) verso la locusta utilizzando un tubo di plastica inserito all'interno di pochi cm dell'antenna locusta.
- Per la stimolazione odore, spostare un volume costante (0,1 L / min), lo spazio di testa sopra la soluzione statica odore nella bottiglia. Questo viene ottenuto iniettando una quantità uguale di aria deumidificata nella bottiglia mediante un Pico-pompa (WPI, PV-820). Vapori dal flacone odore vengono indirizzate verso la linea di uscita del flusso d'aria sul tubo (Figura 1B).
- Rimuovere i vapori odore consegnati mettendo un imbuto sotto vuoto ~ 10 cm dietro l'antenna locusta.
2. Preparazione Antenna Locust per la registrazione Sensillum Singola
- Selezionare un giovane-adulto locusta di ambo i sessi con completamente messo le ali, ma prima della fase di accoppiamento da una colonia affollato. Per contenere la locusta, prima amputare le gambe. Sigillare i siti di amputazione con tessuto adesivo (Vetbond, 3M). Sicuro tha locusta ad una camera progettato con un piccolo pezzo di nastro isolante avvolto intorno al suo torace (Figura 2A).
- Sotto un microscopio di dissezione, una scanalatura poco profonda nella piattaforma cera (Figura 2A) per il posizionamento dell'antenna. Posizionare l'antenna nella scanalatura e stabilizzarlo con cera batik alle due estremità dell'antenna (Figura 2B, un electrowaxer viene utilizzata per fondere la cera).
- Inserire un elettrodo di massa (filo d'argento chlorided) nel torace (~ 1 cm di distanza dalla testa). Utilizzare cera batik per riparare il sito di incisione e tenere il filo di terra in posizione (Figura 2A).
3. Registrazione Sensillum unico per il monitoraggio di odori evocati risposte da neuroni recettori olfattivi (ORNs)
- Posizionare l'antenna locusta stabilizzato allo stereomicroscopio (Leica M205C) su un tavolo di isolamento di vibrazione (TMC) (Figura 3A). Assicurarsi che la base del sensillum registrazione è chiaroly visibile (Figura 3B).
- Utilizzare un estrattore micropipetta (Sutter P-1000) per fabbricare elettrodi di vetro (impedenza 3-10 MW quando è riempita di soluzione salina 9 robinie, micron diametro in punta 1-3) utilizzando un tubo di vetro borosilicato capillare (diametro esterno 1,2 mm, ID 0,69 millimetri).
- Posizionare l'elettrodo di vetro in un supporto micropipetta che è collegato a un micromanipolatore motorizzato (Sutter MP-285). Inserire delicatamente l'elettrodo nella base di un sensillum (Figura 3B). Si noti che ogni sensillum può contenere 3-50 ORNs in locuste 10.
- Amplificare il segnale (10.000 volte) usando un amplificatore AC (Grass P-55). Filtrare il segnale tra 0,3-10,0 kHz e acquisire a una velocità di campionamento 15 kHz (Figura 3D) utilizzando un sistema di acquisizione dati (LabView, PCI-MIO-16E-4 schede DAQ, National Instruments).
4. Locust Procedura dissezione per lobo antennale e Recordings corpo funghi
- Seguire la restrainiprocedure ng come descritto nella sezione 2.1. Posizionare la locusta in una custom-designed camera come mostrato in Figura 4A e B.
- Per perfusione soluzione salina durante e dopo la procedura di dissezione, costruire una tazza di cera intorno alla testa locusta. La tazza cera dovrebbe iniziare appena sopra le parti di bocca, e si estendono oltre gli occhi composti che comprendono la regione tra due antenne come mostrato nella figura 4C.
- Per consentire le antenne di passare attraverso la coppa cera, creare piccoli tunnel su entrambi i lati con plastica (polietilene) tubo (5 mm di lunghezza, ID 0,86 millimetri). Assicurarsi che il tubo di plastica può scorrere attraverso la coppa cera. Quest'ultimo è ottenuto utilizzando una guarnizione in gomma che avvolge strettamente attorno al tubo di plastica, ma è collegato alla cera tazza (Figura 4C).
- Utilizzando resina epossidica, fissare la base delle antenne all'estremità inferiore del tubo di plastica. Questo passaggio garantisce che le antenne sono tenuti in posizione anche dopo il circostantecuticola viene rimosso.
- Tenere la coppa cera riempito con soluzione salina 9 da questo punto in poi. Iniziare rimuovendo una regione centrale rettangolare tra due antenne (lato maggiore del rettangolo allineato con l'asse antero-posteriore). Successivamente, rimuovere le cuticole in regioni vicine senza disturbare gli occhi composti e cuticole alla base dell'antenna (Figura 4D).
- Utilizzando una pinza sottile, rimuovere delicatamente sacche d'aria e gli organismi di grasso che circondano il cervello. Al termine di questa fase, il cervello locusta deve essere chiaramente visto (Figura 4D). Si noti che le regioni del cervello che elaborano le informazioni olfattive (con luce pigmentazione gialla) si trovano tra due antenne.
- In locuste l'intestino passa sotto il cervello e lungo la lunghezza del corpo. Per evitare che il movimento dell'intestino dal potenzialmente destabilizzare la preparazione, tirare delicatamente il foregut e tagliare con le forbici sottili. Fai una piccola incisione nell'addome appenasopra il retto e rimuovere l'intestino tirando il hindgut con una pinza grossolani. Per evitare una perdita di soluzione salina, legare l'addome immediatamente anteriore al sito di incisione con fili di sutura.
- Utilizzare una piccola piattaforma costituito da un filo sottile rivestito con un sottile strato di cera per elevare il cervello e stabilizzarla durante elettrofisiologia 11 come mostrato in figura 4D.
- Il cervello insetto è coperto da una guaina isolante sottile che deve essere rimosso prima di esperimenti. Per desheath il cervello, delicatamente diffondere una piccola quantità di un enzima (0,3-0,4 mg proteasi, Sigma Aldrich) sulla superficie del cervello utilizzando una pinza sottile 9. Dopo s ~ 5-10 applicazione enzima, lavare il cervello a fondo con soluzione salina. Utilizzo di super-sottili pinze molto delicatamente pizzicare e tirare la guaina e il successivo strappo aperto oltre le posizioni di registrazione (AL e MB, mostrato in figura 4E, F).
5. Multi-unit registrazioni dal lobo antennale eil fungo del corpo
- Mettere la preparazione locusta (Figura 5A) allo stereomicroscopio sospeso ad una giraffa posto su un tavolo isolamento dalle vibrazioni.
- Mantenere una velocità costante di perfusione soluzione fisiologica (circa 0,04 L / h) durante l'esperimento. Utilizzare un filo di argento chlorided immerso nella soluzione salina tazza cera come l'elettrodo di massa.
- Per le registrazioni PN, utilizzare un 16 canali di silicio sonda (Tecnologie NeuroNexus, elemento # a2x2-tet-3mm-150-150-121-A16, Figura 5B). Prima di ciascun esperimento, gli elettrodi elettroplaccatura con oro per ottenere impedenze nell'intervallo 200-300 k. Utilizzare il circuito mostrato in Figura 7 per elettrodeposizione.
- Posizionare l'elettrodo vicino alla superficie del lobo antennale e inserirla delicatamente il tessuto utilizzando un micromanipolatore manuale (WPI, M3301R) (Figura 5D).
- Avanzare l'elettrodo in ~ 10 passi micron. Attendere 2-3 min ad ogni passo e valutare l'acquisizioned qualità del segnale. In un sito registrazione ideale, segnali extracellulari sarà raccolto da molteplici canali di registrazione e avrà un alto rapporto segnale-rumore (SNR> 3-5 volte rumore SDS).
- Per le registrazioni KC, utilizzare una misura tetrodo intrecciato fili (figura 5C, passo-passo procedura di fabbricazione presentato nella sezione 6). Placcare questi elettrodi come discusso nel passo 5,3. Posizionare il tetrodo sulla superficie del MB (Figura 5E) come KC somata sono limitati allo strato superficiale della MB 8.
- Sia PN e registrazioni KC può essere fatta simultaneamente dalla preparazione locusta stesso come schematicamente mostrato in figura 5A.
- Attendere almeno 15 minuti dopo l'individuazione della posizione di registrazione per consentire la stabilizzazione degli elettrodi.
- Acquisire tutti i segnali extracellulari a 15 KHz, filtro tra 0,3-6 KHz, e amplificare (10.000 volte) utilizzando un canale di 16 AC amplificatore (Biologia Officina elettronica, Caltech, Pasadena, CA) (Figura 6A, B).
6. Le procedure per rendere Elettrodo ritorto filo per Recordings KC
- Per progettare un sistema multi-unità di elettrodi per le registrazioni KC, utilizzare filo isolato cromo nichel (RO800, 0,0005 "filamento) 8.
- Se otto elettrodi sono desiderata, quindi avvolgere il filo intorno ad un pezzo 10-15 cm lungo di cartone 4 volte. Le estremità del cartone può essere rivestita con tubi di plastica per evitare che i bordi di taglio del filo. Mentre involucro, assicurarsi che ci sia poco gioco, ma in modo che il filo non sia teso. Maneggiare con cura il filo come si rompe facilmente.
- Mazzetto insieme i fili in alto del cartone e usare un pezzo di nastro (Tape Time, T-534-RP) per tenerli insieme. Tagliare i fili all'altra estremità. Rimuovere i trefoli e di gruppo i fili alla fine taglio e con un altro pezzo di nastro.
- Utilizzo di un titolo agitatore (Thermo Scientific, modello 4625Q), vento i fili insieme (~ 72 giri / min per 3min) per formare un filo ritorto. La parte inferiore dei fili registrate può essere agganciato al rotore piatto titolo e la parte superiore può essere agganciato a una giraffa. Durante l'avvolgimento, il cavo deve avere po 'di cavo, ma non essere teso.
- Fondere l'isolamento con una pistola termica (Weller 6966C) per attaccare i singoli fili insieme e formano un unico filo. 3-4 passaggi lenti (3-4 sec ciascuno) oltre la lunghezza del filo dovrebbe essere sufficiente per riscaldare e fondere i filamenti. Quindi rilasciare il filo dal basso e lasciarlo riposare. Tagliare il filo in prossimità delle estremità per rimuovere il nastro.
- Inserire una estremità del filo attraverso un lungo 5-6 cm, tubo capillare di vetro (diametro esterno 1,0 mm, ID 0,58 millimetri). Tease a parte il filo intrecciato ad una estremità con una pinzetta sottili e rimuovere il rivestimento molto brevemente sfiammatura alla fine con una fiamma. Questo passaggio deve essere fatto attentamente, esponendo il filo alla fiamma per troppo tempo farà sì che i fili a sciogliersi e senza grovigli.
- Delicatamente separare gli 8 fili alla fine una fiammatand saldare ogni filo separatamente in una presa a 8 pin IC. Coat parte superiore della presa IC con resina epossidica per tenere i fili e capillare di vetro in posizione. Anche mettere una piccola goccia di resina epossidica all'altra estremità del capillare per tenere il filo in posizione (Figura 5C).
- Infine, tagliare la punta del filo ad un angolo di 45 gradi con forbici carburo di circa 0,5 cm dalla punta del capillare.
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Representative Results
Risposte evocate odori di un singolo ORN a due differenti alcoli sono mostrati in Figura 3D. A seconda della posizione di registrazione (tipo sensilli, posizionamento dell'elettrodo) più unità registrazioni possono essere raggiunti.
Una forma d'onda grezza extracellulare da una registrazione AL è mostrato nella figura 6A. Potenziali di azione o picchi di ampiezze diverse provenienti da diverse PN può essere osservata in questa traccia di tensione. Anche se il lobo antennale locusta ha neuroni di proiezione neuroni eccitatori e inibitori locali, solo PN generare picchi di sodio che possono essere rilevati extracellulare 3. Questa osservazione suggerisce che il multi-unità tecnica di registrazione qui presentata può essere utilizzato per controllare selettivamente l'uscita dei circuiti lobi antennali, rendendo locuste un modello attraente invertebrato per studiare codifica olfattivi.
Un esempio di una registrazione corpo fungo è mostrato nella Per isolare le risposte singole unità da queste registrazioni multi-unit, abbiamo eseguito off-line smistamento spike (con i migliori quattro canali) utilizzando il software pubblicato implementato in IGOR Pro (Wavemetrics) 12. Esempi di smistamento PN e KC picco sono mostrate nella Figura 6C, e D, rispettivamente. 
Figura 1. Odore stimolazione. (A) I componenti necessari per preparare una bottiglia odore vengono visualizzati. (B) Il raccordo di entrata del pico-pompa e il collegamento in uscita dalla bottiglia odore al tubo di erogazione odore vengono visualizzati. Un flusso costante di aria essiccata viene utilizzato come flusso di gas di trasporto ed è diretto alla antenna durante gli esperimenti.
Figura 2. Preparazione di una antenna locusta per registrazioni sensillum singoli. (A) La locusta è posto in una camera di misura con un elettrodo di terra posizionato nell'intestino. (B) Un metodo per stabilizzare un'antenna utilizzando una piattaforma cera viene mostrato.
Figura 3. Registrazioni sensillum singoli. (A) una registrazione tipico istituito. Una miscela di gas di trasporto e vapori odore viene alimentato attraverso un tubo di erogazione. Potenziali d'azione ORN sono registrati usando un elettrodo di vetro. Odoranti consegnato vengono rimossi utilizzando un imbuto vuoto situato proprio dietro l'antenna. (B) il posizionamento degli elettrodi come si è visto attraverso lo stereomicroscopio. Le frecce indicano la posizione della punta dell'elettrodo di vetro alla base di un sensillum. (C) Uno schematic di un approccio unico di registrazione sensillum. (D) prime tracce di tensione extracellulari che mostrano le risposte di un ORN a due diversi odori (2-ottanolo e 1-esanolo).
Figura 4. Locust procedura di dissezione. (A) Una locusta è trattenuto e posizionato in una custom-designed configurazione dissezione come mostrato. (B) Vista della testa di locusta dall'alto. Entrambi gli occhi composti e antenne può essere visto chiaramente (C) Una tazza di cera è costruita attorno al sito dissezione per consentire la perfusione soluzione salina durante e dopo il processo di dissezione. (D) Un cervello esposto locusta viene mostrato (il giallo-pigmentato tessuto nervoso). Una piattaforma è disposto sotto il cervello come mostrato per stabilizzare il cervello. Un tubo perfusione salina è attaccato alla tazza cera. (E) Uno schema del cervello locusta. (F) Una immagine ingrandita del cervello locusta dopo la dissezione mostra chiaramente le regioni di interesse: unlobi tennal (AL) e gli organismi di funghi (MB). Il nervo antennale (AN) contiene fasci di assoni che trasmettono i potenziali d'azione ORN dall'antenna al lobo antennale.
Figura 5. Multi-unit registrazioni dal lobo antennale e il corpo funghi. (A) A schematica che mostra la configurazione di registrazione e la configurazione di consegna odore. (B) A 16 canali elettrodo di registrazione NeuroNexus utilizzato per le registrazioni PN è indicata. (C) Il pannello di sinistra, una misura a 8 canali elettrodo a filo ritorto è mostrato. Pannello di destra, la punta dell'elettrodo e le connessioni dei fili alla presa IC vengono visualizzati. (D) La posizione del 16 canali elettrodo di registrazione in AL. Solo la parte inferiore quattro elettrodi di ciascuna gambo sono inseriti nel tessuto. (F) posizionamento dell'elettrodo filo intrecciato negli strati superficiali MB per KC registrazioni viene visualizzato.
Figura 6. Risultati rappresentativi di un lobo antennale (AL) ed un corpo di funghi (MB) di registrazione. (A) Una traccia raw extracellulare da più di un apparecchio di registrazione è mostrato AL. Impulso odore A 4 s è stato applicato durante il periodo di tempo indicato dal riquadro grigio. (B) plot simili ma che mostra prime risposte KC ad un odore. (C) Un esempio di ordinamento PN spike. Forme d'onda extracellulare da quattro canali indipendenti di un multi-canale elettrodo vengono visualizzati per tutti gli eventi spiking derivanti da una singola PN. Eventi individuali (nero), media (rosso) e DS (blu) vengono visualizzati per entrambe le celle. Istogrammi ottenuti proiettando alto-dimensionali rappresentazioni di eventi PN (180 vettore dimensionale ottenuto concatenando 3 segnali ms da tutti e quattro elettrodi) sulla linea che collega i loro mezzi. Per essere considerato un bene-isolated unità, come in questo caso, una distribuzione bimodale con centri cluster almeno cinque volte il rumore SD parte è prevista per ogni coppia di celle contemporaneamente registrati 12. (D) Un esempio di ordinamento KC picco è mostrato.
Figura 7 L'elettroplaccatura impostare:. Lo schema circuitale che mostra le connessioni tra i vari componenti sono indicati sopra un'immagine della configurazione effettiva. Brevemente, 3 Hz quadrato impulsi (5V ampiezza) da un generatore di funzione (MCP, SG 1639A) vengono utilizzati per cancello un isolatore stimolo (WPI, A365) che fornisce quindi 5 μA di corrente a un tester impedenza dell'elettrodo (BAK Electronics, IMP- 2). Il tester di impedenza può essere utilizzato per testare sia l'impedenza dell'elettrodo o consentire impulsi di corrente dal isolatore stimolo di essere applicata all'elettrodo per doratura. In entrambi i casi, l'unità multi-elettrodo rimane imimmersi in una soluzione elettrolitica contenente ben oro. Un commutatore permette di selezionare il canale elettrodo di essere placcato in oro.
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Discussion
Stimoli sensoriali più evocano risposte combinatorie che sono distribuiti su insiemi di neuroni. Quindi, il controllo simultaneo di multi-neurone attività è necessario comprendere come stimolo informazioni specifiche è rappresentato ed elaborate da circuiti neurali nel cervello. Qui, abbiamo dimostrato extracellulari più unità tecniche di registrazione per la caratterizzazione degli odori-evocate risposte alle prime tre centri di lavorazione lungo il percorso olfattivo degli insetti. Si noti che le tecniche qui presentate sono state utilizzate in una serie di studi precedenti sulla codifica olfattivi e stanno diventando una pratica standard in questo campo 3,6,13-17. Combinando le tecniche qui presentate si può sviluppare l'approccio di un sistema di indagare i principi di progettazione e di calcolo del sistema olfattivo invertebrati. Qui, dobbiamo riconoscere i contributi seminali effettuati da Gilles Laurent, Mark Stopfer, ei loro colleghi 2,3,8,9,13,16,18-21, pioniere questi avvicinamenChes per rivelare e chiarire alcuni principi fondamentali della codifica olfattive.
Infine, è opportuno notare che le tecniche ottiche sono stati utilizzati con successo per studiare l'attività insieme a insetti circuiti olfattivi 22-27. Mentre queste tecniche ottiche sono vantaggiose quando l'obiettivo è quello di monitorare contemporaneamente l'attività neuronale attraverso un gran numero di neuroni, tecniche elettrofisiologiche sono ancora il 'gold standard' quando il rilevamento di potenziali di azione individuali è desiderato.
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Disclosures
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Acknowledgments
Gli autori desiderano ringraziare per finanziare questo lavoro: generoso avvio fondi del Dipartimento di Ingegneria Biomedica in Washington University, un centro per i sistemi di Neuroscienze McDonnell sovvenzione, un Office of Naval Research di assegnazione (Grant N.: N000141210089) a BR
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Electrophysiology Equipment | |||
| A.C. amplifier | GRASS | Model P55 | for single sensillum recordings |
| Audio monitor (model 3300) | A-M Systems | 940000 | |
| Custom-made 16 channel pre-amplifier and amplifier | Cal. Tech. Biology Electronics Shop | for AL and MB recordings | |
| Data acquisition unit | National Instruments | BNC-2090 | |
| Fiber optic light | WPI | SI-72-8 | |
| Light source 115 V | WPI | NOVA | |
| Manual micromanipulator | WPI | M3301R | for locust brain recordings |
| Stereomicroscope1 on boom stand | Leica | M80 | for locust brain recordings |
| Stereomicroscope2 | Leica | M205C | for single sensillum recordings |
| Vibration-isolation table | TMC | 63-500 series | |
| Motorized micromanipulator | Sutter Instruments | MP285/T | |
| Oscilloscope | Tektronix | TD2014B | |
| Electrodes/Construction Tools | |||
| 16-channel electrode | NeuroNexus | A2x2-tet-3mm-150-121 | for antennal lobe recordings |
| Borosilicate capillary tubes with filament, ID 0.69 mm | Sutter Instruments | BF120-69-10 | for making glass electrodes |
| Micropipette puller | Sutter Instruments | P-1000 | |
| Function generator | Multimeter Warehouse | SG1639A | for gold-plating electrodes |
| Gold plating solution (non cyanide) | SIFCO Industries | NC SPS 5355 | |
| Impedance tester | BAK Electronics Inc. | IMP-2 | for gold-plating electrodes |
| Switch rotary | Electroswitch | C7D0123N | for gold-plating electrodes |
| Pulse isolator | WPI | A365 | for gold-plating electrodes |
| Q series electrode holder | Warner Instruments | 64-1091 | |
| Silver wire 0.010" diameter | A-M Systems | 782500 | ground electrode |
| 8 pin DIP IC socket | Digikey | ED90032-ND | |
| Borosilicate capillary tubes with filament, ID 0.58 mm | Warner Instruments | 64-0787 | |
| Heat gun | Weller | 6966C | |
| Rediohm-800 wire | Kanthal Precision Technologies | PF002005 | |
| Titer plate shaker | Thermo Scientific | 4625Q | twisting wires |
| Carbide scissors, 4.5" | Biomedical Research Instr | 25-1000 | for cutting twisted tetrode wires |
| Fine point tweezers | HECO | 91-EF5-SA | for teasing tetrode wires apart |
| Odor Delivery | |||
| 6 ml syringe | Kendall | 1180600777 | for custom designed activated carbon filter |
| Brown odor bottles | Fisher | 08-912-165 | |
| Charcoal | BuyActivatedCharcoal.com | GAC-48C | |
| Desiccant | Drierite | 23005 | |
| Drierite gas drying jar | Fischer Scientific | 09-204 | |
| Heat shrink tubing | 3M | EPS-200 | odor filter preparation |
| Hypodermic needle aluminum hub, gauge 19 | Kendall | 8881-200136 | for providing inlet and outlet lines for odor bottles |
| Mineral oil | Mallinckrodt Chemicals | 6357-04 | for odor dilution |
| Nalgene plastic tubing, 890 FEP | Thermo Scientific | 8050-0310 | for carrier gas delivery |
| Pneumatic picopump | WPI | sys-pv820 | for odor delivery |
| Polyethylene tubing ID 0.86 mm | Intramedic | 427421 | for odor bottle outlet connections and saline profusion tubing |
| Stoppers | Lab Pure | 97041 | for sealing odor bottles |
| Time tape | PDC | T-534-RP | |
| Tubing luer | Cole-Parmer | 30600-66 | |
| Vacuum tube | McMaster-Carr | 5488K66 | |
| Preparation/Dissection | |||
| 100 x 15 mm petri dish | VWR International | 89000-304 | |
| 18 AWG copper stranded wire | Lapp Kabel | 4510013 | |
| 22 AWG stranded hookup wire | AlphaWire | 1551 | brain platform |
| Batik wax | Jacquard | 7946000 | |
| Dental periphery Wax | Henry-Schein Dental | 6652151 | |
| Electrowaxer | Almore International | 66000 | |
| Epoxy, 5 min | Permatex | 84101 | |
| Hypodermic needle aluminum hub | Kendall | 8881-200136 | |
| Protease from Streptomyces griseus | Sigma-Aldrich | P5147 | for desheathing locust brain |
| Suture thread non-sterile | Fisher | NC9087024 | for tying the abdomen after gut removal |
| Vetbond | 3M | 1469SB | for sealing amputation sites |
| Dumont #1 forceps (coarse) | WPI | 500335 | |
| Dumont #5 titanium forceps (fine) | WPI | 14096 | |
| Dumont #5SF forceps (super-fine) | WPI | 500085 | desheathing locust brain |
| 10 cm dissecting scissors | WPI | 14393 | for removing legs and wings |
| Vannas scissors (fine) | WPI | 500086 | for removing cuticle, cutting the foregut |
| Saline Profusion | |||
| Extension set with rate flow regulator | Moore Medical | 69136 | for regulating saline flow |
| IV administration set with Y injection site | Moore Medical | 73190 | for regulating saline flow |
References
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