Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

2 الأوعية الدموية الانسداد / انخفاض ضغط الدم: نموذج الفئران من نقص التروية الدماغية العالمية

Published: June 22, 2013 doi: 10.3791/50173

Summary

انسداد الشريان السباتي الثنائية إلى جانب انخفاض ضغط الدم النظامية ينتج نقص التروية الدماغية العالمية في الفئران، مما يؤدي إلى تلف الحصين مع شدة استنساخه. يتم تخفيض قيمة المواد الحيوانية مع أنماط يمكن التنبؤ بها من تلف في الدماغ، وسرعة في استرداد، ومعدلات وفيات منخفضة نسبيا.

Abstract

السكتة القلبية تليها الإنعاش في كثير من الأحيان يؤدي إلى تلف في الدماغ الناجم عن نقص التروية درامية وضخه لاحقة من الدماغ. نقص تروية الدماغ العالمية تنتج الأضرار التي لحقت مناطق محددة في الدماغ أظهرت أن تكون حساسة للغاية لنقص التروية 1. الخلايا العصبية قرن آمون لديهم حساسية أعلى للإهانات الدماغية مقارنة مع السكان الخلية الأخرى، وعلى وجه التحديد، المنطقة CA1 من الحصين هو عرضة بشكل خاص لنقص التروية / ضخه 2.

تصميم التدخلات العلاجية، أو دراسة الآليات التي تشارك في الضرر الدماغي، يتطلب نموذج الذي ينتج الضرر مماثلة لحالة سريرية وبطريقة استنساخه. الثنائية انسداد الأوعية السباتية مع انخفاض ضغط الدم (2VOH) هو النموذج الذي ينتج عكسها نقص تروية الدماغ الأمامي، ليحاكي الأحداث الدماغية التي يمكن أن تحدث أثناء توقف القلب والإنعاش. وصفنا نموذجا معدلة من سميث وآخرون. (1984) 2، كما قدم لأول مرة في شكله الحالي في ساندرسون وآخرون (2008) التي تنتج اصابة استنساخه إلى انتقائي مناطق الدماغ عرضة 3-6. موثوقية هذا النموذج تمليه مراقبة دقيقة من النظامية ضغط الدم انخفاض ضغط الدم أثناء تطبيقها، ومدة نقص التروية، على مقربة التحكم في درجة الحرارة، وهو نظام التخدير محددة، والاجتهاد الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية. إهانة الدماغية 8 دقائق تنتج من موت الخلايا CA1 الخلايا العصبية الحصين أن تقدم على مدى 6-24 ساعة من ضخه، بينما تعف عن مناطق الدماغ أقل عرضة للخطر. وكميا هذا موت الخلايا التدريجي بسهولة بعد 7-14 أيام من ضخه، باعتبارها خسارة كاملة بالقرب من CA1 الخلايا العصبية هو واضح في هذا الوقت.

وبالإضافة إلى هذا النموذج إصابات الدماغ، ونحن نقدم وسيلة لCA1 الضرر الكمي باستخدام بسيطة، ولكنها وافية، ومنهجية. الأهم من ذلك، الكمي ويمكن تحقيق ذلك باستخدام مجهر بسيط كاميرا محمولة، وهودا مجانا يماغيج (NIH) المساعد البرمجيات، مما يغني عن الحاجة إلى باهظة التكلفة البرامج التجسيم ومرحلة المجهرية الآلية لتقييم الأضرار.

Introduction

تلف في الدماغ نتيجة لسكتة قلبية والسكتة الدماغية هي السبب الرئيسي للوفاة والعجز على المدى الطويل. بينما إنعاش القلب والرئة لضحايا السكتة القلبية ينجح في استعادة الدورة الدموية عفوية في حوالي 70،000 مريض سنويا في الولايات 7،8 على الأقل 60٪ من هؤلاء المرضى يموتون في وقت لاحق في المستشفى نتيجة لتلف في الدماغ واسعة و٪ فقط 3-10 من المرضى أحيا يمكن استئناف أنماط حياتهم السابقة 9،10. بوضوح، وفهم الآليات التي تؤدي إلى تلف في الدماغ بعد نقص التروية الدماغية العالمية وتصميم التدخلات العلاجية لتقليل الصدمة العصبية له أهمية حاسمة.

نقص تروية الدماغ يمكن أن تكون على غرار استخدام أساليب متعددة. الأكثر شيوعا، وينتج نقص التروية الدماغية في القوارض التي تسد أحد الأوعية الدموية الرئيسية في المخ، الشريان الدماغي الأوسط، وبالتالي إنتاج السكتة الدماغية التنسيق 11،12. بينما هامة سريريا،التنسيق نقص تروية الدماغ ليست طريقة دقيقة لدراسة تلف في الدماغ التي تنتجها السكتة القلبية / الإنعاش. لوضع نموذج لهذا النموذج السريري يجب أن يتم الدماغ بأكمله الدماغية تليها إعادة تدفق الدم. لتقليد عن كثب هذا السريرية والمحققين لحث تجريبيا السكتة القلبية تليها الانعاش CPR وصدمات الكهربائية مع 13،14. هذا النموذج هو ذات الصلة سريريا، يمكن مرات الانعاش لكن لا يمكن التنبؤ بها زيادة التباين وربما جعل تحليل البيانات من الصعب تفسيرها. بالإضافة إلى ذلك، يرتبط هذا النموذج مع معدل وفيات مرتفع، مما يزيد من عدد الحيوانات اللازمة لاختبار الفرضية. التحقيق في استجابة لنقص التروية الدماغية العالمية و / أو ضخه في إهانة أكثر استنساخه، متسقة، والنجاة قد يكون من المفضل.

يمكن أن يتسبب نقص التروية في الدماغ العالمية مع الحفاظ على تدفق الدم بشكل منتظم بعض. هذا يقلل من الوفيات، في حين يسمح investigatioن من آليات تلف الأنسجة في الدماغ 2. لإنتاج نقص تروية الدماغ العالمي، فمن الضروري أن يقطع أو إلى حد كبير الحد من تدفق في جميع السفن الأربعة التي تغذي الدماغ، والشرايين السباتية الداخلية والشرايين الفقري. هذه السفن تغذي الدماغ مع تدفق الدم من خلال هيكل الأوعية الدموية تسمى دائرة ويليس، الذي يشكل حلقة تفاغري. هذه العمارة الأوعية الدموية يسمح الدماغ على الاحتفاظ نضح في حال انسداد الأوعية الدموية القريبة. لذلك، للحث على نقص التروية كاملة من الدماغ، وتدفق الدم من خلال جميع السفن الاشتراكات يجب أن يحدث. انسداد الشريان السباتي يمكن إنجازه باستخدام العنق مينيملي بطني قطع أسفل وتطبيق مقاطع تمدد الأوعية الدموية لمدة المرجوة. انقطاع تدفق الدم عبر الشرايين الفقري يمكن أن يكون صعبا، كما أنها incased في الثقب عرضية من العمود الفقري. وقد تناولت محققين بذلك عن طريق electrocauterizing الشرايين الفقري 24-48 ساعة قبل السباتيانسداد ونقص تروية الدماغ (4VO نموذج) 15. وعلى النقيض من هذا النهج، سميث وآخرون. المتقدمة وسيلة لإحداث نقص تروية الدماغ العالمي عن طريق خفض ضغط الدم الشرياني يعني (MAP) بشكل منتظم إلى 40 ملم زئبقي للحد من نضح من خلال الشرايين الفقري إلى نقطة حيث يتم فقدان تدفق الدم أو تقلص إلى حد كبير 2 . عندما يقترن مع انسداد الشريان السباتي، وهذه الطريقة تنتج نقص التروية في جميع أنحاء الدماغ الأمامي، مما أدى إلى وجود نمط من تلف في الدماغ الذي يحاكي بشكل وثيق أن الناجين من السكتة القلبية. في آخر لهذا الأسلوب الصقل، ونموذج نحن الحاضرين هنا يتطلب تنظيم MAP ضيق في 30 ملم زئبقي ± 1mHg خلال 8 دقائق كاملة من نقص التروية. وجدنا هذا التغيير يحسن من استنساخ تلف في الدماغ الناجم عن هذا النموذج مع الحفاظ على معدل وفيات منخفض للتقنية الأصلي الذي صممه سميث وآخرون.

النمط الظاهري الدقيق لموت الخلايا ومدى الشاملة من تلف الأنسجة التي تسببهاالنموذج المقدم هنا تعتمد اعتمادا مباشرا على مدة 16 الدماغية. بعد 8 دقائق من نقص التروية، CA1 الخلايا العصبية معرضا تأخير موت الخلايا، مما يوحي بأن هناك نافذة الزمنية للتدخل العلاجي أثناء مرحلة ضخه 15،17. في بداية ضخه، الخلايا العصبية بسرعة استعادة وظيفة وليس موت الخلايا فوري قابلا للاكتشاف 18. لكن هذه الاهانة يسبب تحريض شلالات موت الخلايا (موت الخلايا المبرمج) التي تبلغ ذروتها في الافراج عن البروتينات apoptogenic من الميتوكوندريا، بما في ذلك السيتوكروم ج، بين 4-6 ساعة من ضخه 3،19. بين 6 و 24 ساعة من ضخه، ارتكبوا الخلايا العصبية في قرن آمون CA1 إلى زوال الخلية، ويتم تنفيذ برنامج موت الخلية أفكارك 19. وتجدر الإشارة إلى أن الخلية النمط الظاهري الموت المسؤولة عن الإصابة الدماغية هي مثيرة للجدل. وقد اقترحت الدراسات في وقت مبكر نخر هي الخلية النمط الظاهري الموت الابتدائي 20،21، في حين يقدم آخرون الأخرى apoptعمليات التفتيش الموقعي بوصفه الآلية الرئيسية 22،23. في المجموع، والأدلة الحالية تشير إلى أن الخلايا تموت من طائفة من الظواهر موت الخلايا تتراوح من موت الخلايا المبرمج الكلاسيكية إلى النخر. وضع معين من موت الخلايا يعتمد على العديد من العوامل، مع درجة مساهمة كل النمط الظاهري اعتمادا على شدة الإهانة، من بين عوامل أخرى 24،25. بحلول 24 ساعة من ضخه، الخلايا الميتة تمتلك نواة تغلظية، العصارة الخلوية مكثف مع أدلة واضحة من محتويات الخلوية المجمعة، وفقدان مورفولوجيا الميتوكوندريا وظيفية. يتم تقسيم الخلايا الميتة إلى مزيد من الانخفاض، اجتاحت من قبل خلايا المناعة مثل الضامة و / أو الخلايا الدبقية الصغيرة، وتطهيرها من منطقة الحصين CA1. من قبل 4-7 أيام من ضخه، تتم إزالة الخلايا الميتة، وكل ما تبقى هي الخلايا الالتهابية والمفعلين يمكنهم الخلايا الدبقية 17،26. لذا، 7 أيام من ضخه يمثل الوقت الأمثل حيث يمكن قياسها كميا CA1 الحصين وفاة الخلايا العصبية باستخدام بسيطة والبقع الخلايا غير محددة فيبغرض اختتامها البنفسجي الكريزيل أو hemotoxylin-يوزين وتحسب على أساس معايير إدراج المورفولوجي. الخلايا المتبقية في هذا الفاصل الزمني أواخر ضخه يمكن اعتبار الخلايا على قيد الحياة، وبالتالي توفير فهرس من تلف في الدماغ.

إذا كان هذا النموذج هو لاستخدامها لاختبار التدخلات العلاجية، فيقترح أن التصميم التجريبي اتباع معايير سلالم (السكتة الدماغية الصناعة الأكاديمي العلاج المائدة المستديرة) 27. وينبغي اتباع هذه المبادئ التوجيهية عند تصميم وإجراء دراسة، ومع ذلك لا يتم مناقشتها هنا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. إعداد

يجب على جميع التجارب على الحيوانات تتفق مع المبادئ التوجيهية المؤسسية والحصول على الموافقة من قبل لجنة رعاية الحيوان المعنية قبل البدء. وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات المعروضة هنا من قبل جامعة واين ستيت المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام اللجنة واتباع المبادئ التوجيهية بشأن معاملة الأخلاقية للحيوانات كما طرح في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وإلى مبادئ حكومة الولايات المتحدة لل استخدام ورعاية الحيوانات الفقارية المستخدمة في اختبار والبحث والتدريب. قبل البدء في عملية جراحية، وإعداد المواد الجراحية الضرورية وانتعاش قفص الجراحة. هذا الإجراء هو عملية جراحية بقاء، وبالتالي فمن الضروري لممارسة تقنية معقمة.

  1. لإجراء القسطرة الوعائية، وقطع على طول 8 بوصة من البولي ايثلين 50 (PE50) أنابيب وإدراج اضعافها 23 إبرة قياس في نهاية واحدة. القسطرة يمكن شراؤها بشكل فردي مسبقا تعقيمها أو تم شراؤها في بULK ثم تعقيمها مع جلايكول الإثيلين حسب الحاجة.
  2. تأمين هذه الإبرة على منفذ واحد من وسيلة محبس ثلاثة ووضع محبس ثلاثي آخر على المنفذ المعاكس. يعالج بالهيبارين والصمامات والقسطرة عن طريق تشغيل محلول ملحي الهيبارين من خلال. ربط حقنة 10 مل المالحة على عمودي محبس والبعيدة إلى القسطرة. ربط محبس البعيدة إلى القسطرة إلى أنبوب محول الضغط، وملء مع نظام المالحة وإزالة أي فقاعات الهواء.
  3. إعداد القفص الانتعاش وفقا للوائح استخدام الحيواني. يجب أن تكون غرفة الإنعاش هادئة ويكون انخفاض حركة المرور. بدوره هام على الطاولة اسفل أو نظام الكسح الغاز مماثلة قبل الجراحة بداية لتصفية تبخيرها isoflurane و.

2. إعداد الجراحية

وتستخدم سبراغ داولي الفئران (300-350 ز) في نموذج 2VOH من نقص تروية الدماغ الأمامي العالمية. وبفعل التخدير وصيانتها مع isoflurane ووسوبplemented مع جرعة شبه فصامي من الكيتامين. وقد لاحظنا أن التخدير التي تحتفظ بها isoflurane وحده يسبب زيادة حدوث استيلاء خلال الانتعاش بعد العملية. يمكن أن المضبوطات تسهم في الضرر العصبي والوفيات، والتي سوف تؤثر على استنساخ هذا النموذج. المكمل مع التخدير الكيتامين يسمح بجرعة أقل بكثير من isoflurane وللوصول إلى درجة من التخدير الجراحي. باستخدام بطانية الحرارية التماثل الساكن يسمح التنظيم الدقيق لدرجة الحرارة الأساسية. العملية الجراحية ينطوي على الشريان السباتي قطع أسفل والعزلة، وقطع شريان الفخذ إلى أسفل والقسطرة.

ملاحظة من المهم للحفاظ على سجلات مفصلة أثناء إجراء العمليات الجراحية كل فرد. التغيرات في درجة الحرارة الأساسية، وضغط الدم، أو المتغيرات الفسيولوجية الأخرى التي تحدث قبل أو أثناء الجراحة قد يغير بشكل جذري النتائج، ويمكن تحليل السجلات لضمان وجود اتساق الإجرائية بين الأفراد والجماعات. اتساقفي المعلمات الفسيولوجية للحيوان يمكن تحسينها بواسطة صيام الحيوانات قبل الجراحة. ويتم تشجيع المجربون لتحديد الأسلوب الذي ينتج في ديناميكا الدم قبل تديرها أكثر اتساقا وتركيز الجلوكوز في مصل الدم لدراستهم.

  1. لحث التخدير عن طريق وضع الفئران الى غرفة الاستقراء وملء مع 30٪ oxygen/70٪ خليط أكسيد النيتروز بنسبة 5٪ isoflurane و. التنبيب مع القسطرة قياس 12، وذلك باستخدام المنظار القوارض وتهوية مع 30٪ oxygen/70٪ النيتروز أكسيد خليط مع 2.5٪ isoflurane و. وينبغي أن يكون معدل التهوية 80 نفسا في الدقيقة عند 2.5 مل لكل التنفس.
  2. إعطاء حقنة داخل الصفاق الكيتامين (20 ملغ / كلغ) في المياه المالحة وتقليل isoflurane وإلى 1.5٪. هام ومن الضروري مراقبة مستوى التخدير في جميع أنحاء الداخلي لضمان طائرة الجراحية كافية من التخدير. للتحقق من عمق التخدير، قرصة بين أرقام القائمة الخلفية، في حين رصد منعكس دواسة. إذا كان رد الفعل هوغائبة، والتخدير كافية. بعد القسطرة من الشريان الفخذي، وضغط الدم يمكن أن تستخدم كمؤشر على مستوى التخدير. الحفاظ على جرعة من isoflurane وعند أدنى مستوى ممكن مع الحفاظ على الطائرة من التخدير الجراحي لتقليل احتمال من المضبوطات آخر الدماغية.
  3. سيتم إجراء شقوق على الرقبة ومنطقة الحوض. حلاقة الرقبة والحوض حق، حيث يلتقي الفخذ البطن. توجيه الفئران في موقف ضعيف على التماثل الساكن الحرارية بطانية وإدراج مقياس الحرارة المستقيم باستخدام مواد التشحيم الجراحية. تطبيق مواد التشحيم واقية العين. لمبة ضوء 60 واط يمكن أن يساعد على تنظيم درجة الحرارة. لمبة ينبغي أبدا أن يكون أقرب من 8 بوصة من الحيوان. يمكن أن درجات الحرارة هام فوق أو تحت درجة الحرارة العادية فيزيولوجي (37 ° C) تؤثر بشكل كبير حدوث تلف عصبي النهائي. الحفاظ على درجة الحرارة الأساسية عند 37 درجة مئوية ± 0.5 درجة مئوية.
  4. فرك المناطق شق مع بتدين وشطف مع الايثانول 70٪. كرر هذه TWس أكثر من مرة. وضع حقل الجراحية على الفئران، وقطع ثقوب لفضح المناطق شق. الشرايين السباتية والفخذ هامة يمكن أن تكون معزولة دون أن تسبب أي صدمة للعضلات المحيطة بها، والتي من شأنها تحسين الانتعاش والتقليل من الحاجة لاحقة لتسكين بعد العملية.
  5. ريثما التخدير الكافي، واستخدام مشرط رقم 10 لجعل شق خط الوسط على طول العنق، ثم، وذلك باستخدام المرقأة تشريح بصراحة بين الغدد اللعابية حتى تصل إلى عضلة القصية اللامية، مجموعة العضلات خط الوسط البارز الذي يغطي القصبة الهوائية. مرة أخرى باستخدام تقنية تشريح دقيق حادة، فصل مجموعات العضلات الرئيسية للالقصية اللامية من القصي الخشائي، ثنائيا. هذه المجموعات العضلية اثنين تشكيل تسنن الثلاثي الذي يمكن استخدامه كمعلم لتحديد موقع حزمة وعائية عصبية الذي يحتوي على الشريان السباتي. فروع الشريان السباتي المشترك في الشرايين السباتية الداخلية والخارجية. عزل الشريان السباتي المشترك الأقرب إلى ثنائيةمنفرق.
  6. فصل بلطف هذه العضلات اثنين وتحديد موقع الشريان السباتي. للمساعدة في تحديد هذه النظرة السفينة لنبض. عزل الشرايين السباتية على كلا الجانبين عن طريق تمرير ~ 5 بوصة طول 3-0 خياطة الحرير تحت السفينة. واضح بعيدا اللفافة من السفن. تنبيه يتم تضمين العصب المبهم وسلاسل متعاطفة في حزمة وعائية عصبية عنق الرحم وينبغي توخي الحذر لتجنب التسبب في ضرر لأنه عندما عزل الشريان السباتي.
  7. استخدام المقص لإجراء شق الثانية في الفخذ، وعلى طول المسافة البادئة حيث يلتقي عضلات الفخذ القائمة الخلفية البطن. تشريح تحت عضلات البطن، وعلى طول عضلات الفخذ حتى تصل إلى الرباط الإربي. هذا وسوف تعرض حزمة وعائية عصبية الفخذ. عزل بعناية الشريان الفخذي عن طريق تمرير ~ 5 بوصة طول 3-0 خياطة الحرير تحت السفينة. واضح بعيدا اللفافة ترك 5-7 ملم من السفينة عرضة للخطر.
  8. ربط عقدة دائمة في نهاية البعيدة من الشريان عرضة للخطر.
  9. تطبيق الجر على خياطة في نهاية القريبة من الشريان إلى انسداد تدفق الدم، عن طريق سحب الغرز تدريسها. إجراء شق صغير في الجزء العلوي من السفينة مع مقص العيون. سوف الجر غير كافية على متن السفينة يؤدي إلى النزيف، الذي يمكن وقفها من خلال تطبيق أثقل الجر. إغلاق القسطرة في محبس.
  10. باستخدام التعريف الأوعية الدموية، وإدراج أنابيب القسطرة في الإناء، 7-9 مم الماضي شق سفينة ونحو خط الوسط. مرة واحدة يتم وضع القسطرة في المسافة المطلوبة، يعقدا قرانهما فضفاضة حول السفينة والقسطرة لضمان الحصول عليها في المكان. إزالة الجر من السفينة والسماح لها على الاستلقاء بشكل طبيعي.
  11. إدارة 0.3 مل الهيبارين (100U/ml في المياه المالحة)، عن طريق الوريد. طرد أيالدم من القسطرة مع كمية صغيرة من المياه المالحة لمنع تخثر الدم. بدوره على مراقبة ضغط ومعايرة المعدات. فتح الصمامات للسماح للمحول للكشف عن ضغط الدم. للحصول على قياسات دقيقة لضغط الدم، وتحديد المواقع النظام لا ينبغي أن تتغير بعد المعايرة.
  12. ينبغي تعديل الجرعة isoflurane والاستسلام يعني ضغط الدم الشرياني (MAP) من 110 الى 130 مم زئبق مم زئبق. وينبغي أن تكون هذه الخريطة الإرشادية للطائرة الجراحية كافية من التخدير.

3. البروتوكول نقص التروية

وكما ذكر سابقا، أربع سفن الإمداد التروية إلى الدماغ. سوف انسداد القريبة من اثنين من الشرايين السباتية لا يؤدي إلى نقص تروية الدماغ لأن الشرايين الفقري سوف تعوض من خلال دائرة ويليس. وقد تبين أن السباتي انسداد، إلى جانب انخفاض ضغط الدم النظامية التي يسببها، سوف تحد من نضح من خلال الشرايين الفقري مما يؤدي إلى نقص تروية الدماغ. نحن هنا أن descrمتد بروتوكول لسحب الدم لإنتاج انخفاض ضغط الدم وتحامل على الشرايين السباتية لإنتاج رقابة، نقص التروية عكسها. انظر الشكل 1.

الأكسجين في الدم وثاني أكسيد الكربون، وتركيز الجلوكوز ودرجة الحموضة يمكن أن تختلف بين الأفراد في المجموعة عينة وتسبب التباين في وقوع الضرر. ويمكن رصد هذه المتغيرات الفسيولوجية لحد من التباين من احتشاء. كما ذكر، ودرجة الحرارة هو مقياس آخر وهو أمر مهم لتنظيم، ولكن درجة الحرارة في الدماغ قد لا تتوافق مع درجة الحرارة الأساسية، كما نضح يقتصر إلى حد كبير أثناء نقص التروية التجريبية 28. نتائجنا الإعداد الجراحية محددة في التغيرات في درجات الحرارة في الدماغ التي التغييرات مرآة في درجة الحرارة الأساسية خلال نقص التروية. ومع ذلك، فمن المهم بالنسبة المجرب لتحديد هذا تجريبيا من خلال مراقبة درجة حرارة الدماغ مع المزدوجات الحرارية أو عن طريق وسائل أخرى لتوحيد الإجراء. إذا درجة الحرارة الأساسية لا تعكس TEM الدماغاحلرارة، فمن المهم للحفاظ على درجة حرارة المخ سوي الحرارة خلال الإجراء بأكمله، بغض النظر عن درجة الحرارة الأساسية.

التوزيع العشوائي يملي الجراح يعشوئ الحيوان إلى نقص التروية أو الشام التي تديرها المجموعة الضابطة في هذه المرحلة. سوف جراحة الشام اتباع جميع الإجراءات بالضبط نفس الحيوانات الدماغية استبعاد أي انخفاض في ضغط الدم وانسداد الشريان السباتي. فمن المهم أن الضوابط الشام التي تديرها تكون تحت نفس جرعة التخدير لمدة يطابق ذلك من الحيوانات الدماغية. إذا كان هناك مجموعة المعالجة وشملت، وهو ما يتطلب التخدير قبل او بعد نقص التروية، وينبغي الشام والمجموعات نقص التروية دون علاج تتناسب مع جرعة التخدير ومدة العلاج المجموعة.

  1. مقاطع مرقئ جاهز ومقطع قضيب. ينبغي مقاطع تسد تماما السفينة دون أن تسبب أي صدمة. يمكن أن يتسبب نقص التروية عندما أصبحت ديناميكا الدم متسقة. توصيل 10 مل heparinized syriنجى على محبس، عمودي والأقرب إلى القسطرة. ينبغي أن يكون هناك 0.3 مل (30 وحدة) من المياه المالحة heparinized داخل حقنة لمنع تخثر الدم سحبها.
  2. تحديد توقيت لمدة 1 دقيقة ثم فتح محبس إلى حقنة heparinized، بحيث يمكن سحب الدم.
  3. سحب الدم عن طريق سحب على المكبس المحاقن. إذا تم تطبيق الكثير من الشفط، وسوف السفينة تنهار أو ختم ضد فتح القسطرة وسيتم استخلاص أي الدم. وينبغي أن يكون من الممكن إزالة 7-9 مل من الدم في 1 دقيقة. إذا لم تكن هذه هي الحالة، تقدم القسطرة الى مزيد من الشريان وإعادة المحاولة. نجد أن 7-9 مل من الدم ويجب أن تلغى للحد من الخارطة بالقرب من 30 ملم زئبقي، الهدف ضغط الدم لتحقيق نقص التروية. هام تأكد من إبقاء الدم سحب عند 37 درجة مئوية لتجنب التبريد خلال إعادة التسريب الدم.
  4. بعد تعادل واحد في الدم دقيقة (7-9 مل من الدم ينبغي سحب) تنطبق مقاطع مرقئ إلى الشرايين السباتية وبدءالموقت لمدة 8 دقائق. تحقق فورا ضغط الدم. إذا كانت خريطة ليس في 30 ملم زئبقي، لبث أو سحب الدم ببطء لتحقيق 30 ملم زئبقي ± 1 مم زئبق. مواصلة هذه الممارسة في جميع أنحاء نقص التروية للحفاظ على خريطة 30 مم زئبق. هام سجل ضغط الدم في جميع أنحاء بروتوكول نقص التروية كامل. قد يؤدي الفشل في خفض ضغط الدم إلى 30 مم زئبق لحد من نقص التروية. مراقب الأساسية و / أو درجة حرارة الدماغ بشكل وثيق خلال إعادة التسريب مع زيادة أو نقصان في درجة الحرارة قد تؤثر على تلف في الدماغ.
  5. في نهاية 8 دقائق، والبدء ضخه عن طريق إزالة مقاطع مرقئ وreinfusing الدم ببطء، 2 مل في الدقيقة الواحدة.
  6. عندما تم reinfused الدم قنية يمكن إزالتها من الشريان الفخذي. لتجنب أي نزيف أثناء بعد العملية، آمنة وهما عقدة منفصلة الأقرب إلى شق على الشريان.
  7. خياطة الجروح مع نمط متقطع باستخدام إبرة القطع معكوس، مع خياطة 5-0 VICRYL. وهذا الدرز حل، لذلك سوف لا Require إزالة. ملاحظة أثناء الإجراء، إذا لا يمكن الوصول التخدير كافية مع انخفاض مستويات isoflurane و، إدارة جرعة إضافية من الكيتامين.

4. تسكين والاسترداد

الرفق بالحيوان هي الأولوية خلال الانتعاش فضلا عن إجراء العمليات الجراحية. الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية يجب أن يتبعوا مبادئ توجيهية محددة للمؤسسة. الحيوانات التي تخضع لنقص تروية الدماغ العالمي عرضة للنوبات. للتقليل من وقوع الاستيلاء فمن المهم أن يكون الحد الأدنى من غرفة الإنعاش التحفيز، أي ضوضاء واضطرابات بصرية. تحت بروتوكول لدينا استخدام الحيوانات، ونحن منزل الحيوانات بعد العمليات الجراحية لمدة 72 ساعة في غرفة منعزلة لهذا الغرض.

  1. بعد أن تم خياطة الجروح الفئران يمكن أن يكون مفطوم قبالة التنفس الصناعي. إيقاف isoflurane والتهوية وتستمر حتى 30٪ أكسيد النيتروز oxygen/70٪ حتى تبدأ الفئران للتنفس ضد جهاز التنفس الصناعي.
  2. إدارة 0.5 ملغ / كز بوتورفانول في 5 مل المالحة، تحت الجلد بين لوحي الكتف.
  3. reinfusing بسرعة في الدم قد يزيد الحق التحميل المسبق البطين. وهذا يزيد الضغط الدموية الرئوية ويمكن أن يسبب وذمة رئوية. علامات على ذلك تشمل جاهد التنفس وطقطقة الأصوات أثناء التنفس. وسوف تطبق نهاية ايجابية الضغط زفيري تساعد على تحسين وذمة رئوية.
  4. عندما استعادت السيطرة الطوعية للتنفس، ينزع الأنبوب، وإزالة الحرارة وإيقاف بطانية التدفئة. عند هذه النقطة الحيوان يمكن وضعها في قفص الانتعاش. وينبغي وضع القفص الانتعاش حتى نصف القفص هو على رأس تعميم بطانية المياه (34 ° C) للساعة 24 الأولى من ضخه. وضع الحيوان على جزء من أرضية القفص على بطانية التدفئة للمساعدة في صيانة درجة الحرارة. بمجرد أن يبدأ الحيوان للتعافي من التخدير وتسكين الألم، وسوف تتحرك حول القفص إلى التنظيم الحراري نفسها. سيتم إيواء الحيوانات بشكل منفصل خلال بعد العملية.
  5. وينبغي أن يكون هذا الحيوان الوصول غير المحدود إلى المياه. لمدة يومين بعد العملية، يجب أن تحتوي هذه المياه 4 ملغم / كغم حل تايلينول السائل. بالإضافة إلى طعام القوارض، يتم توفير حبوب الإفطار المحلاة في القفص لتحفيز الأكل ومنع فقدان الوزن.
  6. تغطي نصف القفص مع ثنى ويرصد عن كثب التعافي بعد الجراحة.
  7. مع تعافي من التخدير الحيوان فمن المهم لمراقبة علامات الضائقة. جاهد أو التنفس غير متناسقة يمكن أن يكون علامة الشدة التي قد تسبب وذمة رئوية أو تهيج مجرى الهواء أثناء التنبيب. سوف رزين الحيوان، والحد من النشاط، ولكن يجب أن تتم استعادة Butorphenol النشاط المعتدل في حدود 1 ساعة. نجد ستبدأ الحيوانات والأكل والشرب يعامل في غضون 4 ساعة من نزع الأنبوب. وبحلول 12 ساعة، ينبغي استئناف السلوك العادي ونشاط التغذية. علامة أخرى على الضيق وفقدان الوزن، ويجب أن تفقد حيوان لا يزيد عن 20٪ من وزن الجسم الأصلي في أي فترة 48 ساعة، إذا كان فقدان الوزن المفرط أناو لاحظ يجب أن يتم التخلص الحيوان.
  8. تدخل إنساني ضروري في حالة حدوث النوبات. هذا النوع من النشاط الاستيلاء وينظر عموما 24 إلى 48 ساعة بعد ضخه. النوبات يمكن أن يسبب زيادة تلف في الدماغ التي هي مستقلة عن إهانة الدماغية في حد ذاته، ينبغي النظر وبالتالي فإن النشاط الاستيلاء على معايير الاستبعاد المنصوص عليها في المكان قبل بدء الدراسة 29. يمكن أن تحدث النوبات عندما لا احد هو الحاضر، ولذلك فمن المهم التعرف على علامات. وسوف تكون منزعجة الفراش وربما طردوا من القفص. وهناك الفئران تال للنشبة لها التصرف ضعيف مع السريعة، صعوبة في التنفس و / أو لديهم كدمات أو نزيف الأنف.

ملاحظة أي علامات الألم أو الضيق والتخفيف فورا مع المسكنات. إذا لم يتم التخفيف sympotoms مع جرعة واحدة من المسكنات أو تستمر بعد الجرعة الرابعة على التوالي للوعي، وسوف يتم التخلص الحيوان واستبعدت من الدراسة. التعليم الجامعي الجراحيةيجب أن يتم فحص جهاز الأمم المتحدة الإنمائي للشفاء السليم لمدة ثمانية أيام بعد العملية.

5. مجموعة الأنسجة ومعالجة

يتم إصلاح الدماغ عن طريق التسريب transcardial من امتصاص العرق. بعد باجتزاء الإجمالي وcryoprotection، ونحن المفاجئة تجميد الدماغ وقسم على ناظم البرد. هي ملطخة هذه المقاطع الدماغ مع البنفسجي الكريزيل وتصويرها على ضوء المجهر.

  1. لحث التخدير عن طريق وضع الحيوانات في غرفة تحريض وملء مع 30٪ أكسجين / أكسيد النيتروز بنسبة 70٪ مع 5٪ isoflurane و. ينبب الحيوان وتهوية على 30٪ أكسجين / أكسيد النيتروز بنسبة 70٪ مع 5٪ isoflurane و.
  2. إعداد المواد اللازمة لإجراء نضح. ملء كوب واحد مع 100 مل من 1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في 4 درجات مئوية ودورق واحد مع 100 مل من 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) في 4 درجات مئوية. يتم مسح الدماغ مع PBS تليها PFA، من خلال مضخة نضح. سيتم وضع الأنابيب في كل كوب ومتصلة بواسطة محبس ثلاثي إلىllow الانتقال السلس من برنامج تلفزيوني لPFA نضح. وضع اضعافها 18 إبرة قياس على الأنبوب وملء خط مع برنامج تلفزيوني. ضمان عدم وجود فقاعات في الإبرة وأنابيب الهواء كما قد تشكل الانسداد، التي يمكن أن تمنع نضح. أيضا، وعلى استعداد وعاء صغير مع PFA لتثبيت الغمر من الدماغ.
  3. استخدام علبة جمع السائل، مع القدرة بما يكفي لعقد 200 مل على الأقل من السوائل. عند هذه النقطة كان ينبغي التهوية الحيوان مع isoflurane ولفترة طويلة بما فيه الكفاية (3 دقيقة على الأقل) للوصول إلى تخدير عميق.
  4. هام تأكد من وصلت الطائرة من التخدير الجراحي.
  5. المضي قدما من خلال إجراء شق للوصول إلى تجويف الصدر عن طريق البطن. المشبك الشريان الأورطي النازل. عندما يتعرض القلب، وإدراج اضعافها 18 إبرة قياس من خلال قمة من القلب في الشريان الأورطي. جعل قطع صغيرة في الأذن اليمنى للسماح سائل الإرواء للخروج من الحيوان.
  6. بدوره على مضخة في 50 مل / دقيقة، تبدأ مع برنامج تلفزيوني. بعد pumpiنانوغرام 100 مل من برنامج تلفزيوني، وتبديل محبس ليروي 100 مل من PFA.
  7. إزالة الدماغ، مع الحرص على ألا تضر الأنسجة.
  8. وضع الدماغ في مصفوفة الأنسجة وقطع ما بين المخيخ والمخ. قسم الدماغ الأمامي؛ ~ 3 مليمترات من الأمامي والخلفي من القشرة المخية. هذا وسوف تنتج ثلاثة أقسام، سوف تحتوي على الجزء الأوسط الحصين.
  9. ضع أقسام الدماغ في وعاء مع ما يكفي من PFA لغمر كامل. الغمر إصلاح الدماغ لبالضبط 2 ساعة.
  10. لحماية الأنسجة من التلف الناجم عن تجميد، وcryoproteced الدماغ عن طريق استبدال PFA مع السكروز 30٪ في برنامج تلفزيوني. Cryoprotection كاملة مع عينات الأنسجة تغرق في محلول السكروز (~ 24-48 ساعة).
  11. لالتقاط تجميد أقسام الدماغ، ضع الدورق في الثلج الجاف وملء مع 2 methylbutanol لمدة عشر دقائق. وضع شرائح الدماغ في methylbutanol لمدة 5 دقائق، ثم نقل إلى وعاء قابل للغلق وتخزينها في -80 درجة مئوية حتى cryostفي باجتزاء.
  12. القسم ناظم البرد الدماغ في 20 ميكرون، وجمع ما لا يقل عن 3 أقسام في 3 المخ أطلس إحداثيات (الدماغ الفئران في الإحداثيات التجسيمي. Paxinos واتسون، أقسام لوحة 29، 31، 33 أو Bregma -2.8 مم، -3.3 مم، و-3.8 مم). يتم وضع الأقسام في الشرائح المجهر واتهم سمح لتجف قبل تخزينها في -80 درجة مئوية.
  13. البنفسجي الكريزيل (0.1٪ عند pH 3.5) وصمة عار 9 أقسام الدماغ، 3 في كل أطلس الدماغ تنسيق.
  14. صورة المنطقة CA1 من الحصين في 40X مع مجهر كاميرا محمولة وإدراج مقياس ميكرومتر 300 شريط مواز مع الطائرة العصبية CA1. حفظ الصور على هيئة ملفات TIFF.

6. الدماغ الكمي الأضرار

يماغيج، برنامج مجاني التي يقدمها المعهد الوطني للصحة، ويمكن استخدامها لحساب وتحديد الخلايا العصبية قابلة للحياة، والتي سوف تمثل مدى تلف في الدماغ.

  1. فتح المجهر TIFF الصور مع 'خلية مكافحة' البرنامج المساعد من يماغيج. حددبمناسبة اللون والخلايا العصبية العد داخل حدود شريط مقياس. يتم عد الخلايا العصبية على أساس معايير الاشتمال بسيط يعتمد على مورفولوجيا الخلايا العصبية (كبيرة، شكل هرمي) أو معايير الاستبعاد لدبقية / نجمية مورفولوجيا (جولة صغيرة أو شكل أنبوبي طويل).
    هام أن تكون متسقة مع معايير الإدراج / الاستبعاد بين الشرائح، والأفراد عند عد الخلايا العصبية.
  2. التهم الخلايا العصبية تسجيل وحفظ نافذة العداد الخلية.
  3. ينبغي أن يستكمل التهم الخلايا العصبية من قبل شخصين منفصلين لتحقيق متسقة، وتعول الخلايا العصبية دقيقة.
  4. فإن متوسط ​​جميع الصور 9 من كل حيوان توفير وسيلة واحدة "الخلايا العصبية العد"، والذي هو مقياس كمي من الضرر CA1 الحصين لاستخدامها في التحليل الإحصائي. ويمكن مقارنة مجموعات بشكل ثابت باستخدام ANOVA في اتجاه واحد يليه الاختبار توكي HSD لآخر مخصص تحليل، أو، حيث فشل اختبار الحياة الطبيعية، وكروسكال واليس ANOVA في اتجاه واحد على صفوف تليها بو دانسانت المخصصة تحليل لتقييم فروق بين المجموعات. ينبغي أن تمليها تحليل إحصائية محددة من خلال تصميم الدراسة الفردية، قد لا تكون واحدة المعروضة هنا المناسبة لفرضيات محددة يجري اختبارها.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

نموذج 2VOH من نقص تروية الدماغ العالمية / ضخه يؤدي إلى وفاة الخلايا العصبية في المنطقة CA1 من الحصين. يمثل الشكل 2 من الاصابة التي تنتجها 8 دقائق من نقص تروية الدماغ العالمي، وتجهيزها بعد 14 يوما ضخه. أرقام 2A و 2B مقارنة الحصين من الشام و أدمغة آخر الدماغية، ملطخة البنفسجي الكريزيل. الشكل 2A يظهر الحصين من الفئران الشام التي تديرها الذي يسلك مورفولوجيا العادي، بما في ذلك CA1 سليمة. يوضح الشكل 2B الحصين الموضوع إلى نقص التروية / ضخه، حيث التلفيف المسنن، CA2 وCA3 وقد أثرت الحد الأدنى من التشكل. الخلايا العصبية الضعيفة بشكل انتقائي من الحصين CA1 لا البقاء على قيد الحياة نقص التروية / ضخه إصابة وتبقى الخلايا العصبية متناثرة فقط. غير أن الزيادة الكبيرة في التسلل الضامة و / أو الخلايا الدبقية الصغيرة (خلايا إيبا-1-إيجابي)، والخلايا النجمية رد الفعل (GFAP إيجابية الخلايا) واضحة في ح CA1مجال ippocampal. وضع العلامات مناعي محدد من الخلايا العصبية مع NeuN، البلاعم / الخلايا الدبقية الصغيرة وضع العلامات مع IBA-1، ووضع العلامات نجمية مع GFAP تأكيد هذه النتائج.

الشكل 2C يعرض عينة الخلايا العصبية العد ويندوز للصور المجهر من CA1 في التكبير 40X. تظهر لوحة أعلى CA1 من عنصر تحكم الشام التي تديرها ويظهر اللوحة السفلى نقص التروية / ضخه CA1 التالية. الجرحى CA1 يعرض تلطيخ يتضمن الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية، والتي تظهر صغيرة وأنبوبي أو على شكل دمعة. ويمكن تمييز هذه الخلايا العصبية من قبل شكلها. الخلايا العصبية قرن آمون سليمة، سواء في التلفيف المسنن، CA2 أو CA1، كبيرة مع شكل دائري أو هرمي.

الشكل 2D هو تحليل رسومي للإصابة بفعل 2VOH كميا بواسطة CA1 التهم العصبية. يمكن أن نخلص إلى أن 8 دقائق من نقص التروية التي تنتجها نموذج 2VOH يمكن أن يسبب متسقة وreproduciblإصابة الإلكترونية التي يتم عزل في المقام الأول إلى الحصين CA1.

الشكل 1
الشكل 1. الجدول الزمني التجريبية. الجدول الزمني التجريبي هو تمثيل من الخطوات الجراحية ومعالجة الأنسجة.

الشكل 2
الشكل 2. ممثل النتائج. الضرر الحصين في الفئران غير المعالجة تخضع لI / R (B) مقارنة مع الفئران السيطرة الشام التي تديرها (A). الكريزيل البنفسجي الحصين الملون (10X) [المحيطي] تكبير 40X من CA1، CA2، CA3، نقير، وDG (الأعلى لفتة في اتجاه عقارب الساعة). (B) يتم ترجمة الأضرار التي لحقت CA1 hippocampus. (C) ويندوز عد الممثل تستخدم لالخلايا العصبية العد والضرر الكمي في مراقبة الحيوانات الشام التي تديرها (أعلى، السيطرة) وحيوان تتعرض لنقص تروية الدماغ العالمية (القاع، I / R). (D) الكميات ممثل CA1 التهم الخلايا العصبية الحصين من دراسة غير منشورة (متوسط ​​+ الانحراف المعياري، ن = 8، ف <0.05).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

نموذج الموصوفة هنا تنتج إهانة الدماغية الى الدماغ التي يمكن أن تحدث نتيجة لتوقف القلب والإنعاش، وتوفير اصابة مماثلة لتلك الموجودة في البشر. هذه الطريقة لإنتاج نقص تروية الدماغ العالمية هي واحدة من بروتوكولات متعددة. علينا الاستفادة من هذا البروتوكول قبل كل شيء لسعره المنخفض نسبيا وفيات، والانتعاش السريع، ونتائج قابلة للتكرار. اعتقال / الإنعاش القلبي نموذج يمكن القول إن النموذج الأكثر ذات الصلة سريريا، ولكن من الناحية الفنية الأكثر صعوبة في إعادة إنتاج باستمرار. نموذج 4VO من نقص تروية الدماغ العالمي هو بروتوكول آخر يشيع استخدامها، قيمة في حقيقة أن يتم المغطي جميع السفن المساهمة أربعة خلال نقص التروية. هذا النموذج أيضا سلبياتها، والتي تشمل جراحات متعددة وإمكانية اعصاب شروط مسبقة. وقد تم تكييف نموذج 4VO، مما يسمح انسداد عابر لجميع السفن الأربع خلال إجراء واحد لإنتاج نقص التروية، ولكن الجراحة لا تزال التقنيةلاي تطالب 30.

وقد ثبت أن الاختلافات على 2VOH لإنتاج مجموعة من النتائج 31،32. المدة من نقص تروية ودرجة انخفاض ضغط الدم هي أهم المتغيرات التي يمكن أن تؤثر على النتيجة. وقد أظهرت التقارير أنه إذا لم يتم خفض ضغط الدم بما فيه الكفاية على إصابة المنتجة يمكن أن تكون غير متناسقة أو من جانب واحد في 30 جرذان. لقد تم العثور على 30 مم زئبق أن تكون درجة مثلى من انخفاض ضغط الدم لأنها تنتج نقص التروية موثوق بها من دون التسبب في الإصابة الطرفية ملحوظ. هذا النموذج ينتج نقص التروية وصفها بأنها قاسية، ولكن بعد أن لدينا بروتوكول الحد من زيادة وإلا فرصة حدوث مضاعفات. طبيعة الشديد للإهانة قد يكون سبب اختلاف طفيف في القياسات الفسيولوجية بين الحيوانات لا يؤثر عادة الاتساق الاصابة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم الصراعات المالية من الفائدة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Material Name
5-0 VICRYL suture, reverse cutting Ethicon J391H
Scalpel, No.10 Swann-Morton 6601
Gauze Sponges Fisher 22-362-178
18G x 1 ½ in needle BD 305201
23G x 1 in needle BD 305145
26 G x 3/8 in needle BD 305110
18 G x 1 ¼ catheter EXEL 26735
1 ml syringe BD 309659
10 ml syringe BD 309604
60 ml syringe BD 309653
Surgilube Henry Schein 1152666
.9% Saline, plastic IV bag Henry Schein 1537468
Suture 3-0 Silk Henry Schein 1007842
Puralube Ophthalmic Ointment Henry Schein 3390017
Betadine Henry Schein 6903564
Sterile Towel Drape Moore Medical 14170
Polyethylene Tubing, 50 Intramedic 427411
Stopcock, 3 way Smiths medical MX9311L
Drug Name
AERRANE (isoflurane) Henry Schein 2091966
Mapap Liquid (Tylenol) Major Pharmaceuticals 1556
Kedavet (ketamine) Ketathesia Butney NDC 50989-996-06
Butorphic (butorphanol) Lloyd Labs 4881
Heparin APP Pharmaceuticals 504011
Chemical Name
Paraformaldehyde prills Elecron Microscopy Sci. 19202
2-methylbutane Sigma 270342
Cresyl Violet Acetate Sigma C5042
Sucrose Sigma S9378
Software
ImageJ NIH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kirino, T., Sano, K. Selective vulnerability in the gerbil hippocampus following transient ischemia. Acta Neuropathologica. 62, 201-208 (1984).
  2. Smith, M. L., Auer, R. N., Siesjo, B. K. The density and distribution of ischemic brain injury in the rat following 2-10 min of forebrain ischemia. Acta Neuropathologica. 64, 319-332 (1984).
  3. Sanderson, T. H., Kumar, R., Sullivan, J. M., Krause, G. S. Insulin blocks cytochrome c release in the reperfused brain through PI3-K signaling and by promoting Bax/Bcl-XL binding. Journal of Neurochemistry. 106, 1248-1258 (2008).
  4. Sanderson, T. H., et al. Insulin activates the PI3K-Akt survival pathway in vulnerable neurons following global brain ischemia. Neurological Research. 31, 947-958 (2009).
  5. Sanderson, T. H., et al. PKR-like endoplasmic reticulum kinase (PERK) activation following brain ischemia is independent of unfolded nascent proteins. Neuroscience. 169, 1307-1314 (2010).
  6. Hazelton, J. L., et al. Hyperoxic reperfusion after global cerebral ischemia promotes inflammation and long-term hippocampal neuronal death. Journal of Neurotrauma. 27, 753-762 (2010).
  7. Lloyd-Jones, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2010 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 121, e46-e215 (2010).
  8. Krause, G. S., Kumar, K., White, B. C., Aust, S. D., Wiegenstein, J. G. Ischemia, resuscitation, and reperfusion: mechanisms of tissue injury and prospects for protection. American Heart Journal. 111, 768-780 (1986).
  9. Krause, G. S., White, B. C., Aust, S. D., Nayini, N. R., Kumar, K. Brain cell death following ischemia and reperfusion: a proposed biochemical sequence. Critical Care Medicine. 16, 714-726 (1988).
  10. Bloom, H. L., et al. Long-term survival after successful inhospital cardiac arrest resuscitation. American Heart Journal. 153, 831-836 (2007).
  11. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke; a Journal of Cerebral Circulation. 20, 84-91 (1989).
  12. Uluc, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Akture, E., Baskaya, M. K. Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat. J. Vis. Exp. (48), e1978 (2011).
  13. Neumar, R. W., et al. Calpain mediates eukaryotic initiation factor 4G degradation during global brain ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab. 18, 876-881 (1998).
  14. Paine, M. G., Che, D., Li, L., Neumar, R. W. Cerebellar Purkinje Cell Neurodegeneration After Cardiac Arrest: Effect of Therapeutic Hypothermia. Resuscitation. , (2012).
  15. Pulsinelli, W. A., Brierley, J. B., Plum, F. Temporal profile of neuronal damage in a model of transient forebrain ischemia. Annals of Neurology. 11, 491-498 (1982).
  16. Edinger, A. L., Thompson, C. B. Death by design: apoptosis, necrosis and autophagy. Current Opinion in Cell Biology. 16, 663-669 (2004).
  17. Kirino, T. Delayed neuronal death in the gerbil hippocampus following ischemia. Brain Research. 239, 57-69 (1982).
  18. Yager, J. Y., Brucklacher, R. M., Vannucci, R. C. Cerebral energy metabolism during hypoxia-ischemia and early recovery in immature rats. The American Journal of Physiology. 262, 672-677 (1992).
  19. Sugawara, T., Fujimura, M., Morita-Fujimura, Y., Kawase, M., Chan, P. H. Mitochondrial release of cytochrome c corresponds to the selective vulnerability of hippocampal CA1 neurons in rats after transient global cerebral ischemia. J. Neurosci. 19, RC39 (1999).
  20. Nishino, H., et al. Pathophysiological process after transient ischemia of the middle cerebral artery in the rat. Brain Research Bulletin. 35, 51-56 (1994).
  21. Ross, D. T., Ebner, F. F. Thalamic retrograde degeneration following cortical injury: an excitotoxic process. Neuroscience. 35, 525-550 (1990).
  22. Soriano, M. A., Ferrer, I., Rodriguez-Farre, E., Planas, A. M. Apoptosis and c-Jun in the thalamus of the rat following cortical infarction. Neuroreport. 7, 425-428 (1996).
  23. Watanabe, H., et al. Protein synthesis inhibitor transiently reduces neuronal death in the thalamus of spontaneously hypertensive rats following cortical infarction. Neuroscience Letters. 233, 25-28 (1997).
  24. Wei, L., Ying, D. J., Cui, L., Langsdorf, J., Yu, S. P. Necrosis, apoptosis and hybrid death in the cortex and thalamus after barrel cortex ischemia in rats. Brain Research. 1022, 54-61 (2004).
  25. Zong, W. X., Thompson, C. B. Necrotic death as a cell fate. Genes & Development. 20, 1-15 (2006).
  26. Ito, U., Spatz, M., Walker, J. T., Klatzo, I. Experimental cerebral ischemia in mongolian gerbils. I. Light microscopic observations. Acta Neuropathologica. 32, 209-223 (1975).
  27. Saver, J. L., Albers, G. W., Dunn, B., Johnston, K. C., Fisher, M. Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) recommendations for extended window acute stroke therapy trials. Stroke; a Journal of Cerebral Circulation. 40, 2594-2600 (2009).
  28. Busto, R., Dietrich, W. D., Globus, M. Y., Ginsberg, M. D. The importance of brain temperature in cerebral ischemic injury. Stroke; a Journal of Cerebral Circulation. 20, 1113-1114 (1989).
  29. Voll, C. L., Auer, R. N. Postischemic seizures and necrotizing ischemic brain damage: neuroprotective effect of postischemic diazepam and insulin. Neurology. 41, 423-428 (1991).
  30. Yamaguchi, M., Calvert, J. W., Kusaka, G., Zhang, J. H. One-stage anterior approach for four-vessel occlusion in rat. Stroke; a Journal of Cerebral Circulation. 36, 2212-2214 (2005).
  31. Gionet, T. X., Warner, D. S., Verhaegen, M., Thomas, J. D., Todd, M. M. Effects of intra-ischemic blood pressure on outcome from 2-vessel occlusion forebrain ischemia in the rat. Brain Research. 586, 188-194 (1992).
  32. Sugawara, T., et al. Effect of hypotension severity on hippocampal CA1 neurons in a rat global ischemia model. Brain Research. 877, 281-287 (2000).

Tags

الطب، العدد 76، الهندسة الطبية الحيوية، بيولوجيا الأعصاب وعلم الأعصاب، علم المناعة، علم التشريح، علم وظائف الأعضاء، القلب والأوعية الدموية، نقص التروية الدماغية، نقص التروية، ضخه، السكتة القلبية، الإنعاش، 2VOH، نموذج إصابات الدماغ، CA1 الخلايا العصبية الحصين والدماغ والخلايا العصبية، الأوعية الدموية، انسداد ، انخفاض ضغط الدم، نموذج حيواني
2 الأوعية الدموية الانسداد / انخفاض ضغط الدم: نموذج الفئران من نقص التروية الدماغية العالمية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sanderson, T. H., Wider, J. M.More

Sanderson, T. H., Wider, J. M. 2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia. J. Vis. Exp. (76), e50173, doi:10.3791/50173 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter