Summary
In dit protocol laten we zien hoe de conditie van de bijen aangewend om tactiele stimuli en de invoering van een 2D motion capture techniek voor het analyseren van de kinematica van gedetailleerde antennaal sampling patroon.
Abstract
Honingbijen (Apis mellifera L.) zijn eusociale insecten en bekend om hun complexe verdeling van arbeid en associatief leren capaciteit 1, 2. De werkbijen brengen de eerste helft van hun leven in de donkere bijenkorf, waar ze het verzorgen van de larven of de bouw van de reguliere zeshoekige kammen voor voedsel (zoals stuifmeel of nectar) en broed 3. De antennes zijn buitengewone multisensorische voelsprieten en spelen een centrale rol in de verschillende tactiele gemedieerde taken 4, met inbegrip van bijenkorf gebouw 5 en patroonherkenning 6. Later in het leven, elke afzonderlijke bijen laat de korf om te foerageren naar voedsel. Dan een bij moet leren om winstgevend voedselbronnen discrimineren, hun plaats te onthouden, en het communiceren met haar nestgenoten 7. Bijen maken gebruik van verschillende bloemen signalen zoals kleuren of geuren 7, 8, maar ook tactiele signalen van het blaadje oppervlak 9 tot en met multisensorische herinneringen aan de voedselbron vormen. Onder laboratorium conditions, kunnen de bijen worden getraind in een appetitieve leren paradigma om tactiele object functies, zoals randen of groeven met hun antennes 10, 11, 12, 13 discrimineren. Deze leerparadigma hangt nauw samen met de klassieke conditionering van de olfactorische proboscis extensie reactie (PER) in benut bijen 14. Het voordeel van de voelbare leren in het laboratorium mogelijke combinaties gedragsexperimenten op leren met verschillende fysiologische metingen, inclusief analyse van de antennelid bewegingspatroon.
Protocol
1. Voorbereiding van de bijen
- Nectar of Pollen verzamelaars zitten gevangen in het veld hetzij van een sucrose feeder of rechtstreeks van de korf ingang terwijl het terugkeren van een foerageer reis. Elke afzonderlijke bijen wordt opgevangen in een glazen injectieflacon die is afgesloten met een schuim plug en onmiddellijk in het laboratorium voor verdere behandeling.
- In het laboratorium worden de vastgelegde bijen kort gekoeld in de koelkast bij 4 ° C totdat ze tonen eerste tekenen van immobiliteit.
- Elke afzonderlijke geïmmobiliseerd bij wordt gemonteerd in een metalen buis met plakband tussen hoofd en thorax en de buik. Zorg moet worden genomen dat de proboscis en antennes zijn vrij beweegbaar.
- Verf de samengestelde ogen en ocelli van de vaste bijen met witte verf (bijvoorbeeld oplosmiddelvrije Tipp-Ex) de visie af te sluiten.
- Voeg een klein druppeltje gesmolten was achter het hoofd van de bij om het te repareren om de band tussen de kop en de thorax om hoofdbewegingen te voorkomen tijdens opnames.
- Markeer elke afzonderlijke bij met een nummer op de band voor een betere identificatie en plaats de buis met de vaste bijen in een vochtige atmosfeer om uitdroging te voorkomen.
- Voer elk afzonderlijk bij gedurende 5 sec met druppels van een 30% sucrose oplossing gepresenteerd met een spuit en laat alle bijen terug gedurende 30 minuten vóór het begin van de tactiele conditionering protocol.
2. Tactile Conditioning
- Conditioning voor iedere enkele bij moet worden getest op de proboscis verlenging response (PER) van een 30% sucrose stimulus toegepast op de antennes. Daarbij wordt de tip van de proboscis moet oversteken een denkbeeldige lijn tussen de geopende kaken. Gooi alle bijen die niet reageren met een PER van de sucrose stimulus.
- Voor tactiele conditioning gebruik maken van een koperen kubus (bijv. 3 x 5 mm) met een glad of een gegraveerd patroon, bijvoorbeeld horizontaal of verticaal groeven die een rooster met 150 pm golflengte, als de geconditioneerde stimulus (CS). Fof de ongeconditioneerde stimulus (US) gebruik maken van een 30% sucrose-oplossing (huishoudelijke suiker, verdund in water).
- De koperen cube (CS) werd in een houder op een micromanipulator (bijvoorbeeld Märzhäuser MM33) Exacte positionering te verzekeren tijdens de conditionering procedure. De VS aan de bijen met een spuit met een 30% sucrose oplossing.
- De conditionering procedure bestaat uit vijf paringen van de tactiele stimulus (CS) en sucrose-oplossing (VS) met een inter-trial interval (ITI) van 5 minuten. Plaats een bee voor de micromanipulator met gemonteerde tactiele stimulus (CS). Plaats de CS langzaam, zodat het oppervlak van de tactiele stimulus evenwijdig aan het hoofd van de bij (Figuur 1 A en B). De afstand tussen het dier en de tactiele object moet in het bereik van de antennelid werkgebied van de geteste bij, namelijk de bij moeten kunnen de tactiele stimulus scannen in een comfortabele positie wet beide antennes. In het voorbeeld in figuur 1 de afstand was 3 mm. Laat de bijen scannen tactiele stimulus (CS) gedurende 5 sec. Na de eerste 3 sec, presenteren een druppel van 30% sucrose (US) oplossing met een spuit onder proboscis. Gebruik de punt van de spuit voorzichtig verhogen van de proboscis. Sucrose stimulatie onder de proboscis zal uitlokken het onvoorwaardelijke PER 15. Laat de bijen naar de sucrose beloning likken. Gebruik een stopwatch met een alarmsignaal naar de exacte tijdsintervallen te houden tijdens het conditioneren.
- Het geconditioneerde PER wordt gebruikt als maat voor de leersucces van een bij. Na de eerste beloond koppelingen, bijen beginnen te reageren op CS presentatie door uitbreiding van hun slurf, die aangeeft dat zij de komende beloning verwachten. Een volledig uitgebreide proboscis op elk moment waargenomen tijdens de 3 sec tijdvenster van tactiele stimulus presentatie en voordat sucrose presentatie wordt gescoord als een positieve reactie. Geen reactie wordt geteld negatief. De occurrence van de PER moet worden opgemerkt door de experimentator. Het percentage van de bijen die de PER tijdens CS presentatie is uitgezet voor elk proces.
3. Kinematische Recordings
- Antennaal bewegingen van een enkele ingezet bij worden opgenomen met een digitale videocamera met een geschikte macrolens (bijv. Basler A602f-2 uitgerust met TechSpec VZM 200, bediend bij 50 fps via een fire wire aansluiting). De camera is gepositioneerd boven het dier in een top-down view (Figuur 1 A). In figuur 1 is de ruimtelijke resolutie van de opnamen is 0,02 mm / pixel.
- Kalibreer de camera door het opnemen van enkele foto's van een 10 x 10 mm dambord met een rand lengte van 1 mm van verschillende oriëntaties onder de camera doelstelling. De kalibratie kan worden gedaan met de camera calibratie tool box Matlab 16.
- Plaats een enkele vaste bee onder de camera lens. Presenteer de tactiele stimulus, bevestigd aan een micromanipulator, Aan het dier. Ga op dezelfde wijze als beschreven voor tactiele conditionering, en noteer de antennaal beweging, terwijl de bijen is het scannen van het object. Het is belangrijk dat de volledige antennelid werkgebied en de tactiele stimulus zichtbaar zijn. De keuzes van de stimulus patronen getest en proef nummers zijn afhankelijk van de experimentele opzet.
4. Data-analyse
- De berekening van de beeldachtergrond gebeurt in Matlab. Eerst was de mediane waarde in de tijd grijswaarden moet worden berekend voor elke pixel. Statische objecten, zoals de vaste kop van de bij en de tactiele stimulus, vormt de achtergrond. Bewegende objecten, zoals de twee antennes, zal geen deel uitmaken van de achtergrond.
- Elk frame van de opgenomen video heeft opeenvolgend geladen en het verschil tussen het huidige frame en de beeldachtergrond te worden berekend. Het resultaat van deze aftrekking benadrukt die delen van het beeld die beweegt van frame tot frame. Ideally, de antennes van de bij de enige gebieden van niet-nul waarden (Figuur 1C).
- Voor verdere verwerking worden de twee grootste gebieden met nul pixel geacht de antennes zijn. Voor beide antennes een binair masker moet worden gegenereerd die voor elke pixel een waarde 1, indien de pixel behoort tot de antenne en de waarde 0 anders. Dit masker dient als basis voor het lokaliseren van de antennelid tips later. Een eerste masker voor het gehele beeld te krijgen van de grijswaarde van elk beeldpunt van het verschilbeeld wordt vergeleken met een vooraf gedefinieerde drempelwaarde. Aangezien wij zorgen voor geluidsoverlast later deze drempel wordt gekozen om heel laag. De voorlopige masker dan nog draagt twee soorten fouten: Ten eerste, als gevolg van beeldruis kleine regio's zijn nog steeds deel uit van het masker. Anderzijds kan gebieden die behoren tot de antenne niet noodzakelijkerwijs volledig worden aangesloten. Deze komt meestal als de achtergrond ongeveer dezelfde luminescentie als antenne. Om deze artefacten te elimineren, standaardbeeldverwerking morfologische operatie worden toegepast, dat wil zeggen een combinatie van beeld erosie en dilatatie, met een beroep op de standaard Matlab functies imerode en imdilate respectievelijk (zie 17 pp 158 tot 205 voor meer uitleg). Na de denoising proces de antennes hypothesen zijn nog steeds binnen een en dezelfde masker. Vandaar dat, als een volgende stap de binaire masker is geclusterd voor disjuncte gebieden met behulp van de standaard Matlab functie bwlabel (zie 17 pp 40 tot 48 voor meer informatie op de afbeelding segmentatie-algoritme).
- Het aantal pixels per cluster wordt geteld en de twee grootste clusters geselecteerd. Het zwaartepunt wordt berekend onderscheid te maken tussen de linker en rechter antenne (Figuur 1D).
- De antennelid tip voor elke antenne kan worden gedefinieerd als de pixel in een cluster met de hoogste waarde in de proximale naar distale richting (zie figuur 1D).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
In het volgende experiment onderzochten we hoe tactiele leren antennaal bemonstering gedrag in honing bijen beïnvloedt. Hiervoor hebben we bewaakt de beweging van de tip antennelid in naïeve en geconditioneerde bijen voor en tijdens presentatie van een tactiele prikkel.
Eerst werd de spontane antennelid beweging van een groep van pollen voedermachines (N = 42) opgeslagen gedurende 1 minuut. Helft van de bijen (N = 21) werd bepaald door koppelen vijfmaal een tactiele prikkel met 30% sucrose beloning. Dit was de geconditioneerde groep. De tactiele stimulus was 30 x 50 mm oppervlak van een koperen kubus met een gegraveerde horizontale raster (λ = 150 pm). De andere helft van de bijen (N = 21) werd niet geconditioneerd en gebruikt als een naïeve groep. Figuur 2 toont de gemiddelde leercurve van de geconditioneerde groep bijen. Het percentage van geconditioneerde PER na de eerste beloning is significant verschillend van de spontaan gedrag (figuur 2 e beloning.
Daarna wordt de beweging van de tip antennelid in zowel het geconditioneerde en naïeve groep opnieuw opgenomen gedurende 1 min in aanwezigheid van tactiele stimulus Figuur 3 A 1 -. B 2 toont de verdeling van antennelid tip locaties in beide groepen voor en tijdens presentatie van de tactiele object. Zowel de naïeve en de geconditioneerde groep veranderd antennelid bewegingspatroon in aanwezigheid van een tactiele stimulus ten opzichte van het spontane gedrag. De waarschijnlijkheid van de antennaal tip om te zoeken en / of proeven op het gebied van de stimulus wordt aanzienlijk verlengd wanneer de stimulus aanwezig was, waaruit blijkt dat tactiele bemonstering gaat om een duidelijke verandering in de antennaal bewegingspatroon ten opzichte van spontane antennaal beweging. Dit geldt voor beide groepen bijen (figuur 3 C 1 en C
In samenvatting, de resultaten van dit experiment tonen aan dat de bijen kan zeer effectief worden getraind om op een tactiele stimulus, en tactiele leren gepaard met een verhoogde active zoeken en bemonstering gedrag.
. Figuur 1 Video-opname en antennaal volgen procedure A:. Top-down view van een vaste bij en de tactiele stimulus. De tactiele stimulus wordt geplaatst in de voorkant van de kop van de vaste bijen met verstopte ogen. Het is gelegen in het antennaal werk-range. d en p staan distale en proximale locaties opzichte van het dier B:. Zijaanzicht van dezelfde bij en de tactiele stimulus. Het oppervlak van de tactiele stimulus en het hoofd van de bij (blauwe stippellijnen) parallel aan elkaar C:. Onderscheidende bewegende pixels van statische pixels in een videoreeks. Aftrekken elk beeld van een achtergrond model maakt identificatie van de bewegende delen, dat wil zeggen, de eenntennae. De vaste kop van de bij en de tactiele stimulus (hier aangeduid als rode gestippelde lijnen) zijn statisch en niet zichtbaar na het aftrekken D:. Definiëren links en rechts en de antennaal tip. De twee grootste pixelclusters na aftrek geïdentificeerd als antennes. Berekening van het zwaartepunt kan onderscheiden tussen de linker (rood) en rechts (groen) antenne. De antennelid tip voor elke antenne (zwart kruis) kan worden gedefinieerd als de pixel in een cluster met de grootste waarde in de distale richting.
Figuur 2. Leercurve van tactiele PER conditionering. Pollen verzamelaars werden opgeleid met behulp van vijf paringen van de CS (tactiele stimulus) en US (sucrose-oplossing) met een inter-trial interval van 5 minuten. Het percentage positieve antwoorden van 21 dieren wordt uitgezet voor de spontane gedrag (Spont) en during presentatie van de CS na elke conditionering proces. Het percentage PER na de eerste en alle volgende punten is significant verschillend van de spontaan gedrag (Fisher exact kans test, p <0,001).
Figuur 3. Genormaliseerde gemiddelde verdeling van de tip antennelid locatie gedurende 1 min. De tip antennelid distributie van elke bij werd genormaliseerd naar het totale aantal gegevenspunten per dier. De panelen tonen de resultaten van naïef (links, N = 21) en geconditioneerde bijen (rechts, N = 21) voor (A) en tijdens de stimulus presentatie (B) A 1 en A 2:. Spontane antennaal beweging voor stimulus presentatie. De abscis toont de laterale positie van de tip ten opzichte antennelid the midden van het vel (vergelijk met figuur 1C en D). De ordinaat toont de positie van de distale tip antennelid. De kleur schaal geeft het percentage van de tijd dat de antennaal tip doorgebracht op een bepaalde locatie. De opname periode van 1 min was gelijk aan 3.000 videoframes B 1 en B 2:. Hetzelfde als in een 1,2, maar tijdens stimulus presentatie C 1 en C 2:. Gemiddeld aantal frames waarin de antennaal tip werd binnen gevestigd het object gebied, dwz ± 3 bakken distaal of proximaal ten opzichte van het oppervlak stimulus. C1: naïeve groep; C2: airconditioning groep. De box-whisker tonen de mediaan, gemiddelde, kwartielen, en 5-95% percentiel bereik van het aantal frames per minuut. In beide groepen bijen, er een significant verschil tussen 'geen stimulus' (A) en "met stimulus (B, C, Wilcoxon signed-rank test, C 1: P = 5,39 * 10 -4, C 2 -5). Het gemiddelde aantal frames tijdens tactiele stimulus presentatie is significant groter in geconditioneerde bijen dan in naïeve bijen (Mann-Whitney U test, C 1 - C 2: P = 0,007). Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Voorbereiding van de bijen: Het verzamelen en tot vaststelling van de bijen moet snel worden gedaan, om de stress niveau van het dier laag te houden. Stress heeft een effect op de PER-reactiviteit en dus kan een indirect effect op de leerprestaties in bijen 19, 20. Het spanningsniveau kan worden verminderd door het plaatsen van de glazen flacon met de bijen direct op ijs direct na afname snel immobiliseren. Moet worden gehouden dat bijen meer tijd hoe langer de anesthesie herstellen periode voor nodig.
Vision heeft een negatief effect op de tactiele leren in bijen 18. Daarom is het belangrijk om visie occluderen door het schilderen van de ogen van het dier. Om de visuele contrast van de beeldopnames verhogen wordt aanbevolen om witte verf (bijvoorbeeld Tipp-Ex). Zorg ervoor dat u niet aan de antennes in contact te komen met de verf.
Lerening prestaties: Vroegere studies in het laboratorium en in het veld toonde aan dat sucrose gevoeligheid in honingbij verzamelaars hun associatieve leervermogen 21, 22 beïnvloeden. Hoge sucrose gevoeligheid is positief gecorreleerd met een betere tactiele acquisitie en discriminatie optredens. Stuifmeel verzamelaars van een honingbij kolonie zijn gemiddeld beter inspelen op de sucrose dan nectar verzamelaars in de meeste weken van een foeragerende seizoen 23. Ze kunnen gemakkelijk worden geïdentificeerd door het stuifmeel belastingen op hun achterpoten en gevangen op de korf ingang. Nectar verzamelaars met hoge sucrose-gevoeligheid kan worden gevangen op het einde van een foerageer seizoen, tussen september en oktober. Ze kunnen worden geselecteerd op kunstmatige feeders gevuld met een laag-geconcentreerde suiker water geplaatst ongeveer 20 m afstand van de korf 23.
De leerprestaties en geheugenvorming sterk afhankelijk van de status van verzadiging bij tijdens het conditioneren 25. Een langere honger period vóór conditioning, bijvoorbeeld 's nachts, kan het verbeteren van de associatief leren gedrag en de motivatie niveau van een dier.
Tactile conditioning: De PER wordt gebruikt als de ongeconditioneerde respons in een begerend leren protocol 14. Daarom is het van cruciaal belang dat alle geteste bijen zijn een volledig uitgebreid PER aan de ongeconditioneerde stimulus (suiker stimulus) voor conditionering zien. Bijen die niet reageren op de suiker stimulans moet ook worden weggegooid als bijen die met een PER reageren tijdens antennaal contact met de tactiele stimulus vóór conditionering. Anders zal de extreem lage of extreem hoge gevoeligheid van deze dieren verwarren de leercurve.
De tactiele stimulus die in dit protocol (messing kubus met horizontale roosters) werd willekeurig gekozen. Honingbijen kunnen ook worden geconditioneerd op verschillende tactiele stimuli met verschillende vormen en texturen (zie 10).
Om acquisitie te vergelijken in verschillende groepen van bijen (bv. Pollen-versus Nectar verzamelaars), kan een overname score worden berekend 21. Deze score is het totaal aantal van geconditioneerde reacties op het CS en het heeft een bereik tussen 0 (geen voorwaarde PER) en 5 (onder de voorwaarde PER na elke conditionering trial).
Video-analyse: Verschillende video analysemethoden werden in het verleden veranderingen in de antennelid bewegingsgedrag in bijen 26, 27 kwantificeren. Onze methode heeft het voordeel van het analyseren van de antennaal bewegingen zonder dat reflecterende markeringen op de antennes en de voordelen van de verscheidenheid van beeldverwerking tools in Matlab. Zo kan men ook analyseren timing van antennal contacten naar een object, de snelheid van beweging antennelid bepalen, berekenen de hoekposities van de antennes met betrekking tot het lichaam assen niet discrimineert tussen linker en rechter antennelid beweging.
Een PER die optreedt tijdens het opnemen van antennaal reactie op het object in geconditioneerde bijen kon later interfereren met de automatische detectie van de antennes. In dit geval moet de film, bijvoorbeeld in VirtualDub, bewerken en het object dat interfereert met het detectieproces, bijvoorbeeld door voor de sectie waar de proboscis weergegeven met een grijze laag dezelfde vorm maskeren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Acknowledgments
Wij danken Joachim Erber voor de invoering van ons om de tactiele leren in honingbijen. Dit werk werd ondersteund door de Cluster of Excellence 277 CITEC, gefinancierd in het kader van het Duitse Excellence Initiative.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pollen foragers, Apis mellifera L. | Private hives | ||
| Glass vials (22 x 45 mm) | Carl Roth GmbH Co | X655.1 | |
| Brass tubes, 10 x 30 mm | Self-produced | ||
| Brass cube, 3 x 5 mm | Self-produced | ||
| Tipp-Ex (solvent-free) | Tipp-Ex GmbH Co KG | ||
| Sucrose solution (30%) | Household suger diluted in water | ||
| Ethanol (70%) | Carl Roth GmbH Co | 9065.3 | |
| Syringe (1 ml) and needle (0.6 x 25) | Carl Roth GmbH Co | 59.1 | |
| Stop Watch | Carl Roth GmbH Co | L423.1 | |
| Micromanipulator | Märzhäuser MM33 | 00-42-101-0000 | |
| Digital video camera | Basler A602f-2 | ||
| Macro lens for camera | TechSpec VZM 200 | ||
| Matlab R2009b | The MathWorks |
References
- Page, R. E., Scheiner, R., Erber, J., Amdam, G. V. The development and evolution of division of labor and foraging specialization in a social insect (Apis mellifera L.). Curr. Top. Dev. Biol. 74, 253-286 (2006).
- Menzel, R., Müller, U. Learning and memory in honeybees: From behavior to neural substrates. Annu. Rev. Neurosci. 19, 379-404 (1996).
- Seeley, T. D. The wisdom of the hive. , Harvard University Press. Cambridge Mass, London. (1995).
- Staudacher, E., Gebhardt, M. J., Dürr, V. Antennal movements and mechanoreception: neurobiology of active tactile sensors. Adv. Insect Physiol. 32, 49-205 (2005).
- Martin, H., Lindauer, M. Sinnesphysiologische Leistungen beim Wabenbau der Honigbiene. Z. Vergl. Physiol. 53, 372-404 (1966).
- Kevan, P. G. Texture sensitivity in the life of honeybees. Neurobiology and behavior of honeybees. Menzel, R., Mercer, A. , Springer Verlag. Berlin, Heidelberg, New York. 96-101 (1987).
- von Frisch, K. Tanzsprache und Orientierung der Bienen. , Springer Verlag. Berlin, Heidelberg, New York. (1965).
- Waser, N. M. Flower constancy: definition, cause, and ceasurement. Am. Nat. 127, 593-603 (1986).
- Kevan, P. G., Lane, M. A. Flower petal microtexture is a tactile cue for bees. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 4750-4752 (1985).
- Erber, J., Kierzek, S., Sander, E., Grandy, K. Tactile learning in the honeybee. J. Comp. Physiol. A. 183, 737-744 (1998).
- Kisch, J., Erber, J. Operant conditioning of antennal movements in the honey bee. Behav. Brain. Res. 99, 93-102 (1999).
- Scheiner, R., Erber, J., Page, R. E. Tactile learning and the individual evaluation of the reward in honey bees (Apis mellifera L.). J. Comp. Physiol. A. 185, 1-10 (1999).
- Erber, J., Scheiner, R. Honeybee learning. Encyclopedia of Neuroscience. Adelman, G., Smith, B. , Elsevier. (2004).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schäfer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera). J. Comp. Psychol. 97, 107-119 (1983).
- Dacher, M., Gauthier, M. Involvement of NO-synthase and nicotinic receptors in learning in the honey bee. Physiol. Behav. 95, 200-207 (2008).
- Camera Calibration Toolbox for Matlab [Internet]. , Available from: http://www.vision.caltech.edu/bouguetj/calib_doc (2004).
- Haralick, R. M., Shapiro, L. G. Computer and Robot Vision. I, Addison-Wesley. Reading, Mass. (1992).
- Erber, J. Tactile antennal learning in the honey bee. Honeybee Neurobiology and Behavior. Galizia, C. G., et al. , Springer Verlag. 439-455 (2012).
- Pankiw, T., Page, R. E. Effect of pheromones, hormones, and handling on sucrose response thresholds of honey bees (Apis mellifera L.). J. Comp. Physiol. A. 189, 675-684 (2003).
- Harris, J. W., Woodring, J. Effects of stress, age, season and source colony on levels of octopamine, dopamine and serotonine in the honey bee (Apis mellifera L.) brain. J. Insect. Physiol. 38, 29-35 (1992).
- Scheiner, R., Kuritz-Kaiser, A., Menzel, R., Erber, J. Sensory responsiveness and the effects of equal subjective rewards on tactile learning and memory of honeybees. Learn. Mem. 12, 626-635 (2005).
- Mujagic, S., Sarkander, J., Erber, B., Erber, J. Sucrose acceptance and different forms of associative learning of the honey bee (Apis mellifera L.) in the field and laboratory. Front. Behav. Neurosci. 4, 46 (2010).
- Scheiner, R., Barnert, M., Erber, J. Variation in water and sucrose responsiveness during the foraging season affects proboscis extension learning in honey bees. Apidologie. 34, 67-72 (2003).
- Mujagic, S., Erber, J. Sucrose acceptance, discrimination and proboscis responses of honey bees (Apis mellifera L.) in the field and the laboratory. J. Comp. Physiol. A. 195, 325-339 (2009).
- Friedrich, A., Thomas, U., Müller, U. Learning at different satiation levels reveals parallel functions for the cAMP-protein kinase A cascade in formation of long-term memory. J. Neurosci. 24, 4460-4468 (2004).
- Erber, J., Pribbenow, B., Grandy, K., Kierzek, S. Tactile motor learning in the antennal system of the honeybee (Apis mellifera L.). J. Comp. Physiol. A. 181, 355-365 (1997).
- Lambin, M., Déglise, P., Gauthier, M. Antennal movements as indicators of odor detection by worker honeybees. Apidologie. 36, 119-126 (2005).
