Summary
Изменения в мышцах конечностей сократительной и пассивные механические свойства имеют важное значение биомаркеров заболевания мышц. Эта рукопись описывает физиологические тесты для измерения этих свойств в мышиной мышцы пальцев разгибателей и передней большеберцовой мышцы.
Protocol
1. Оценка сократительной и пассивные свойства EDL естественных условиях Ex мышц
Сократительной и пассивных свойств EDL мышцы измеряется бывших естественных помощью Aurora Научно в пробирке тест-системы мышц. См. Таблицу 1 для материалов и оборудования.
1.1 Оборудование подготовки
- Соберите ткань органа ванны, обеспечивая oxytube в воде ткань куртки ванны. Прикрепите собранную ванны в мышцах монтажного устройства. Подключите газовой линии, oxytube. Закрепить линии циркуляции воды в воде ткань куртки ванну и поставить игольчатый клапан в ванну дренаж.
- Включите циркулирующей водой ванну и отрегулировать температуру до 30 ° С 7. Разрешить 5 PSI (фунтов на квадратный дюйм) 95% O 2 -5% CO 2 течь через oxytube. Наполните ванну с буфером Рингера. Уравновешивают буфером, по крайней мере10 мин с постоянным потоком газа, регулируя oxytube клапана.
- Включите инструментов (стимулятор, двухрежимный рычажной системы, и сигнал интерфейса). Загрузите динамического мышечного контроля (DMC) программного обеспечения в соответствии с инструкцией завода-изготовителя.
1,2 EDL рассечение мышц
Все исследования на животных должны быть одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета.
- Anesthetize мыши с внутрибрюшинного введения 2,5 мкл / г веса тела коктейль анестетика (см. раздел материалов). На протяжении хирургической процедуры, глубины седации было проверено выполнение ноги шнура. Добавка в размере 10% начальной дозы анестетика управляется при необходимости держать животных под наркозом. Бритье задних конечностей. Поддержание температуры тела на 37 ° C до рассечения процедуру размещения мыши на грелку. Температура тела контролируется постоянно измерения ректальной температЮр использованием теплового зонда.
- Поместите мышь на спине на вскрытие доски (рис. 1). Снимите кожу ног, чтобы открыть задние мышцы конечностей. Закрепите ноги на блоке Sylgard с помощью двух портниха контактами, один в ногу, а другой в мышцах гасШз. Место тепла лампы над корпусе мыши для поддержания температуры тела при температуре 37 ° C. Постоянно переливать все открытые мышцы с буфером Рингера. Слейте избыток буфера через вакуумную линию.
- Expose дистального сухожилия TA и разгибателей связки под стереомикроскопом анализируя кожу на ноге. Аккуратно удалите фасцию покрытие TA мышцы. Вырезать разгибателей связки, чтобы освободить дистального сухожилия TA.
- Вырезать дистального сухожилия TA и использовать его для шелушиться мышцы TA. Осторожно снимите TA мышцы на его проксимального крепления. Поместите тонкий кусок буфера Рингера пропитанной хлопковой рядом с EDL мышцы поглощают кровотечения, вызванные разрывом мышц сосудистой TA. Используйте вакуумную линию, чтобы удалить излишки буфера и крови.
- Галстук двойных квадратных узлов следует цикл узел помощью шовного хлеб шелка на стыке сухожилий мышц (MTJ) дистального EDL мышцы (рис. 2). Сделайте разрез в дистальной части двуглавой мышцы бедра, чтобы разоблачить проксимального EDL мышцы. Повторите тот же набор узлов (рис. 2) на MTJ проксимального отдела EDL сухожилия. Прикрепите крючок рычага, либо проксимальных или дистальных узлы с двойным квадратный узел использованием той же линии шва. Отрежьте оставшиеся линии шва.
- Вырезать проксимального EDL сухожилия выше проксимального узел шва. Поднимите EDL мышцы с крючка и сократить сосудистую под мышцу. Вырезать дистального сухожилия EDL уступает дистальных узел шва, чтобы удалить EDL мышцы задних конечностей. Изолируйте открытый задних конечностей с куском буфер Рингера пропитанной хлопка.
- Прикрепите крючок рычага. Совместите мышцы вертикальномежду двумя электродами. Закрепить дистальной линии шва фиксированной пост. Поднимите ткани ванну, чтобы погрузить мышцы в буфер Рингера. Отрегулируйте покоя напряжение до 1,0 г с использованием двойного грубой / точной стадии перевода и позволит мышцы, чтобы уравновесить течение по крайней мере 10 мин.
1,3 Измерение сократительной и пассивных свойств EDL мышцы
Используйте таблицу 2 для настройки параметров в DMC программное обеспечение для каждого из следующих измерений. Анализ данных с помощью динамического анализа мышцы (DMA) программного обеспечения.
1.3.1 Измерение сократительные свойства мышц EDL
- Стимулировать EDL мышцы в три раза при 150 Гц с 60 секунд друг от друга, чтобы стабилизировать мышц 8.
- Стимулировать EDL мышцы при различных покоя напряжение для определения оптимальной длины (Lo). Оптимальная длина длина, на которой мышца развивает максимальную напряженность дергаться. Разрешить мышцыотдохнуть в течение 2 мин.
- Отрегулируйте отдыха напряженности Ло. Измерение мышечной силы в одном стимуляции дергаться. Определить абсолютную силу подергивания (Pt), время до пика напряжения (ТРТ) и половина времени релаксации (½ RT) из Pt. Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 2 мин.
- Отрегулируйте отдыха напряженности Ло. Измерьте тетаническое мышечной силы генерируются на разных частотах стимуляции (50, 80, 100, 120, 150 и 200 Гц). Определение абсолютных максимальных тетаническое силы мышц (Po), где мышечное усилие достигает максимальной. Измерьте TPT и ½ РТ Po 9.
- Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 5 мин. Отрегулируйте отдыха напряженности Ло. Применить 10 циклов эксцентричного сжатия с 2 минуты отдыха между циклами. Рассчитать относительную потерю силы Po после каждого цикла эксцентричного сжатия.
- Снимите EDL мышцы от аппарата и сократить сухожилия на шов сайта. Определите мышцы сырого веса и рассчитать мышцы площадь поперечного сечения (CSA)6,10.
1.3.2 Измерение пассивных свойств EDL мышцы
- Проанализируйте контралатеральной EDL мышцы и приложите его к аппарату, как описано в разделе 1.2, шаг 2 до 7.
- Тема EDL мышцы шестиступенчатой растяжение протокол, в котором мышца напряжена до 160 Lo% с шагом 10% Ло. Анализ напряженно-деформированного профиля 6.
- Оцените вязкая собственности EDL мышцы, измеряя скорость релаксации напряжений (SRR) в следующие сроки после растяжения и проведение мышц на 10% Lo: от пика до 0,1 с после пика (размах), от 0,1 до 0,2 с ПП, от 0,2 до 0,5 п.п., от 0,5 до 1 с п.п. и от 1 до 1,5 с С.
- В конце исследования, усыпить мышей путем смещения шейных позвонков и / или обезглавливания в то время как мыши все еще под наркозом. Снимите EDL мышцы от аппарата и сократить сухожилия на шов сайта. Определите мышцы сырого веса и рассчитать мышцы крест себеctional области (CSA) 6, 10.
2. Оценка сократительные свойства мышц TA На месте
Сократительные свойства мышц TA измеряется с помощью Aurora Научно на месте тест-системы мышц. См. Таблицу 1 для материалов и оборудования.
2.1 Оборудование подготовки
- Нагрейте термо-контролируемых животной стадии до 37 ° С с использованием циркулирующей водой ванну.
- Включите инструментов (стимулятор, двухрежимный рычажной системы, и сигнал интерфейса). Загрузите DMC программного обеспечения в соответствии с инструкцией завода-изготовителя.
2.2 Подготовка мышц TA на месте для измерения силы
- Anesthetize мыши, бритье задних конечностей и разоблачить TA мышцы, как описано в шагах с 1 по 3 в разделе 1.2.
- Завяжите двойной квадратный узел вокруг коленной чашечки связки УЗИнг шва хлеб шелка. Завяжите двойной квадратный узел следуют петли узел на MTJ дистальных мышц TA (рис. 2), связать еще один двойной квадратный узел, оставляя ~ 10 мм петля из дистального сухожилия узел TA использованием той же линии шва. Поместите второй двойной квадратный узел на стороне петли.
- Снимите штифты из задних конечностей и положение животного лежа. Expose двуглавой мышцы бедра. Сделайте надрез по средней линии, чтобы показать седалищного нерва. Завяжите двойной квадратный узел вокруг проксимального конца седалищного нерва. Обрезать одной стороны шва линии и сократить нерва выше узла. Аккуратно потяните седалищного нерва к коленного сустава с использованием шва и очистить окружающую соединительную ткань, чтобы бесплатно ~ 5 мм его длины. Не растягивайте нерва во время этой процедуры и постоянно переливать нерва с буфером звонка.
- Подготовка противоположной мышцы TA, как описано в шагах с 1 по 3. Обложка одного из открытых задних конечностей с куском RiБуфер nger в пропитанной хлопка. Постоянно переливать обе задние конечности с подогретого (37 ° C) буфера Рингера. Удалите излишки буфера через вакуумную линию.
- Поместите животных ничком на животных платформы. Установите держатель колена зажим для животных платформе и закрепить оба колена на металлический штифт с двойной квадрат узлов использованием коленную чашечку линии шва связки. Pin обеими ногами на блоке Sylgard использованием портниха контакты. Закрепить животных платформы на термо-контролируемом этапе. Установите тепла лампы для поддержания тела животного температура ядра при 37 ° C.
- Закрепите держатель электрода для животных платформы и заложить седалищного нерва на электрод с помощью шва. Держите электрод от задних мышц конечностей. Вырезать дистального сухожилия TA непокрытого задних конечностей на месте шва MTJ. Прикрепить дистального сухожилия TA шов петля на крючок рычага. Изолируйте открытый мышцу задней конечности с буфером теплой Рингера пропитанной хлопка.
- Используйте таблицу 2 для установки параметров в DMC программного обеспечения. Следуйте тем же протоколом, описанным в разделе 1.3.1 для определения сократительные свойства мышц TA. Анализ данных с помощью программного обеспечения DMA.
- После сократительной измерения собственность, отделить дистального сухожилия TA шов петля с крючка руку моста. Снимите TA мышцы. Определите мышцы сырого веса и рассчитать CSA 10.
- Измерьте сократительные свойства мышц контралатеральной ТА в соответствии с шаги с 1 по 3, описанные выше. Усыпить мыши в соответствии с руководящими принципами институциональной в конце исследования.
Representative Results
Следующие результаты являются представления наших предыдущих докладах 6,9. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего. Таблица 3 показывает морфометрических свойств EDL мышцы в нормальном BL10 и дистрофин-дефицитных (MDX) мышей от 4 до 6 месяцев. Рисунке 4 показана представитель сократительной и пассивные свойства EDL мышцы BL10 и MDX мышей. Сократительные свойства мышц EDL описывается следующими условиями, включая конкретные (абсолютная сила, деленная на CSA) дергаться силы (рис. 4а), конкретные максимальной силы тетаническое (рисунок 4B), TPT и ½ RT абсолютных максимальных тетаническое силу (рис. 4С и D). TPT и ½ RT можно также вычислить с абсолютной силы дергаться. Напряженно-деформированного профиля (рис. 4E) и SRR (рис. 4F)повторно используемый для описания свойств пассивных EDL мышцы.
Отсутствие дистрофина оказывает значительное влияние на сократительную и пассивных свойств EDL мышцы 6,9. Конкретные дергаться и тетаническое силы значительно сокращаются в мышцах MDX EDL. TPT значительно быстрее, в то время как ½ RT значительно медленнее в мышцы MDX EDL. Напряженно-деформированного профиля показывает, что жесткость значительно увеличивается в мышцах MDX EDL. Мышцы MDX EDL также дает значительно намного выше сила сопротивления (пассивный стресс) до достижения пика напряжения, в то время как после пика напряжения снижаться гораздо быстрее. Кроме того, SRR был значительно выше в мышцах MDX EDL по сравнению с BL10 EDL мышцы.
Статистический анализ
Статистическая значимость между двумя группами анализируется Стьюдента-тест. Для SТАТИСТИЧЕСКИЕ значение среди нескольких групп, в одну сторону или двусторонней ANOVA анализ следует Bonferroni анализ постфактум рекомендуется использование программного обеспечения SAS (SAS Institute Inc, Cary, NC). Разница считается значимым при р <0,05.
Таблица 1. Материалов и оборудования.
| Эксперимент | Отдыхая напряжения (грамм) | Частота импульса (Гц) | Длительность импульса (мс) | Стимуляция продолжительность (мс) | Stretch длины | Stretch продолжительность (мс) | Stretch скорости | Комментарии |
| 1. Оценка сократительной и пассивных свойств EDL естественных бывших мышц | ||||||||
| 1.3.1 Измерение сократительные свойства мышц EDL | ||||||||
| 1. Разминаться | 1,0 | 150 | 0,2 | 300 | Отдых мышцы в течение 60 секунд между каждым стимулом. Эти предварительные тетаническое сокращений стабилизации мышц для последующего измерения. | |||
| 2. Оптимальная длина мышцы (Lo) | 0,5, 1,0, 1,5 и 2,0 | 1 | 0,2 | 300 | Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 30 секунд между каждым стимулом. Измерьте мышцы оптимальной длины с помощью цифровой суппорта. | |||
| 3. Одноместный TWITCH силы (Pt) | Отрегулируйте отдыха напряженности Lo | 1 | 0,2 | 300 | ||||
| 4. Тетаническое силу мышц | Отрегулируйте отдыха напряженности Lo | 50, 80, 100, 120, 150 и 200 | 0,2 | 300 | Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 1 мин между каждым стимулом. Определить частоты, которые генерируют максимальную абсолютную тетаническое силы (Po). | |||
| 5. Эксцентричный сокращения | Отрегулируйте отдыха напряженности Lo | Использование частот, что создает максимальную силу тетаническое (Po) | 0,2 | 700 | 10% Lo | последние 200 мс стимуляции продолжительности | 0,5 Lo / сек | Повторите эксцентричных сокращений в течение 10 циклов с 2 минуты отдыха между циклами. |
| 6. CSA из EDL мышцы | CSA = (мышечная масса (г) / [1,06 г / см 3 х (Lo х 0,44)]. 1,06 г / см 3, плотность мышц и 0,44 является EDL длины мышечных волокон к Ло отношение. | |||||||
| 1.3.2 Измерение пассивных свойств EDL мышцы | ||||||||
| 1. Шесть шагов растяжения протокола | Отрегулируйте отдыха напряженности Lo | 10% Lo | 2 см / сек | Повторите растяжку протокола с добавлением 10% Lo до 160% Lo будет достигнута. Младший байт регистра АХ общего назначения ЦП 1,5 сек между протяжении цикла. | ||||
| 2. SRR | Отрегулируйте отдыха напряженности Lo | 10% Lo | 2 см / сек | ССР, рассчитывается путем деления разницы в напряжении с тIME прошедшее между двумя временными точками в срок. | ||||
| 2,3 Измерение сократительные свойства мышц TA | ||||||||
| 1. Разминаться | 4,0 | 150 | 0,2 | 300 | Отдых мышцы в течение 60 секунд между каждым стимулом. | |||
| 2. Оптимальная длина мышцы (Lo) | 3,0, 4,0, 5,0, 6,0 и 7,0 | 1 | 0,2 | 300 | Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 30 секунд между каждым стимулом. Измерьте мышцы оптимальной длины с помощью цифровой суппорта. | |||
| 3. CSA мышц TA | CSA = (мышечная масса (г) / [1,06 г / см 3 х (Lo х 0,6)]. 0.6 будет TA длины волокна мышц Lo РАТио. | |||||||
Таблица 2. Параметры для оценки механических свойств EDL и TA мышц.
| Напрягаться | Возраст (месяцев) | Масса тела (г) | EDL веса (мг) | EDL Lo (мм) | EDL CSA (мм 2) |
| BL10 | 6 | 32,03 ± 0,57 | 13,90 ± 0,77 | 14,09 ± 0,04 | 2,12 ± 0,12 |
| MDX | 6 | 35,44 ± 0,42 * | 16,73 ± 0,42 * | 13,93 ± 0,05 * | 2,57 ± 0,07 * |
Таблица 3. Морфометрические свойства EDL мышцы. *, Значение в MDх мышей значительно отличается от соответствующего возраста BL10 мышей.
Рисунок 1. Схема заказные платы рассечение мышь. Рассечение доска изготовлена из ½ дюйма толщиной оргстекла и был изготовлен на институциональном магазин. Нажмите, чтобы увеличить показатель .
/>
Рисунок 2. Серия цифровых фотографий, иллюстрирующая этапы связывания двойной квадратный узел следуют петли узел на MTJ. Asterisk,EDL мышцы; Arrow, дистального сухожилия EDL мышцы.
/>
Рисунок 3. Схема заказные платформы для анализа на месте мышечной функции TA. Платформы оргстекла животных и держатель из нержавеющей стали колена были разработаны для установки на 809B на месте аппаратов мыши. *, Нержавеющей стальной стержень (Cat # MPR-2.0 , Siskiyou, Grants Pass, Орегон); # Универсальный держатель электрода (Cat # MXB, Siskiyou, Grants Pass, Орегон); §, стержень электрода вложения (Cat # MPR-3.0, Siskiyou, Grants Pass, Орегон); ** Sylgard блок. Нажмите, чтобы увеличить показатель .
Рисунок 4. Представитель результаты для сократительной и пассивных свойств EDL мышцы. Сократительные свойства мышц EDL характеризуются удельной силы подергивания (A), удельная сила тетаническое (B), время до пика напряжения (C) и половину времени релаксации (D). Пассивного свойства EDL мышцы оценивали по профилю напряжения деформации (E) и ССР. * MDX мышей значительно отличается от соответствующего возраста BL10 мышей.
Discussion
В этом протоколе, мы проиллюстрировали физиологические тесты для измерения сократительной и пассивных свойств EDL мышцы и сократительные свойства мышц TA. Одной из основных проблем в мышцах исследования физиологии оксигенации целевой мышцы. Для больших мышц (например, мышцы TA), в местах подхода является предпочтительным, поскольку диффузия кислорода из буфера Рингера не может добраться до центра мышцы в анализе пробирке. На месте подход не нарушает нормального кровоснабжения и гипоксии связанного искусственных эффектов можно избежать. EDL мышцы является одним из наиболее часто используемых мышц в исследовании физиологии. Адекватной оксигенации всей мышцы может быть достигнуто в пробирке в системе из-за малого размера мышц. Кроме того, в системе пробирке обеспечивает закрытую среду для управления концентрацией ионов (Ca 2 +, Na + и K +) и химическойКлиентские лицензии (АТФ и глюкозы), которые необходимы для оптимальной генерации силы мышц. Это дает прекрасную возможность для изучения влияния этих переменных на производстве силы.
Точное измерение сократительной и пассивные свойства мышц конечностей имеет решающее значение для изучения функции скелетных мышц. Характерные изменения этих свойств часто рассматриваются как признаки различных заболеваний мышц. Изменения в этих параметрах являются также важными показателями для определения экспериментальная терапия является эффективной или нет.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана грантами от Национального института здоровья (AR-49419, DD), мышечная дистрофия ассоциации (DD) и NIH грант подготовки T90DK70105 (CH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tissue-organ bath | Radnoti LLC, CA, USA | Water-jacket tissue bath (Cat #158351-LL), Oxygen disperser tube (Cat #160192), Luer valve (Cat#120722) | |
| Circulating water bath | Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | ||
| Gas mix | Airgas National, Charlotte, NC, USA | 95% O2 and 5% CO2 | |
| In vitro muscle function assay apparatus |  Aurora Scientific, Aurora, ON, Canada |
The system consists of a stimulator (Model# 701A), a dual-mode lever system (Model#300C or 305C), a signal interface (Model # 604B) and a test apparatus (Model# 800A) to vertically mount tissue organ bath | |
| In vitro muscle function assay software | Aurora Scientific, Aurora, ON, Canada |
Dynamic muscle control (DMC) software and dynamic muscle control data analysis (DMA) software | |
| Mouse anesthesia cocktail mixed in 0.9% NaCl | Refer to the institutional guidelines | Ketamine (25 mg/ml), xylazine (2.5 mg/ml) and acepromazine (0.5 mg/ml). Throughout the surgical procedure, a supplement of 10 % of the initial dose may be needed to keep animal under anesthesia. | |
| Sylgard | World Precision Instrument | Cat#SYLG184 | |
| A custom-made Plexiglas dissection board | In house designed | Refer to Figure 1 | |
| Heating lamp | Tensor Lighting Company, Boston, MA, USA | 15 Watt lamp to keep the mouse warm during dissection | |
| Ringer's Buffer | Chemicals are purchased from Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | Composition in mM: 1.2 NaH2PO4 (Cat#S369) , 1 MgSO4 (Cat# M63), 4.83 KCl (Cat# P217), 137 NaCl (Cat# 217), 24 NaHCO3 (Cat# S233), 2 CaCl2 (Cat #C79) and 10 glucose (Cat# D16). Dissolve chemicals individually and mix in the order listed above. Store at 4 °C. | |
| Stereo dissecting microscope | Nikon, Melville, NY, USA | ||
| Dissection tools | Fine Science Tools, Foster City, CA, USA | Coarse forceps, coarse scissors, fine forceps (Straight and 45 ° angle) | |
| Braided silk suture #4-0 | SofSilk USSC Sutures, Norwalk, CT, USA | Cat # SP116 | |
| A custom-made stainless steel hook | Small Parts, Inc. | 2'' long S/S 304V (0.18'' diameter) for force transducer 305C or 2.5'' long S/S 304V (0.012'' diameter) for transducer 300C (Cat# ASTM A313) | |
| In situ muscle function assay system | Aurora Scientific, Aurora, ON, Canada |
The system (809B, in situ mouse apparatus) consist of a stimulator (Model# 701B), a dual-mode lever system (Model# 305C), a signal interface (Model# 604A) and a thermo controlled footplate apparatus (Model# 809A) | |
| In vitro muscle function assay software | Aurora Scientific, Aurora, ON, Canada |
Dynamic muscle control (DMC) software and dynamic muscle control data analysis (DMA) software | |
| A custom-made TA assay animal platform | In house designed | Refer to Figure 2 | |
| A custom-made stainless steel hook | Small Parts, Inc. | Cat# ASTM A313 | 0.5'' long S/S 304V (0.18'' diameter) |
| Custom-made 25G platinum electrodes | Chalgren Enterprises, Gilroy,CA | Solder two 0.016'' thick platinum wires to two 24G electric wires | |
Table 1. Materials and equipment. |
|||
References
- Huijing, P. A. Muscle as a collagen fiber reinforced composite: a review of force transmission in muscle and whole limb. J. Biomech. 32, 329-345 (1999).
- Moss, R. L., Halpern, W. Elastic and viscous properties of resting frog skeletal muscle. Biophys. J. 17, 213-228 (1977).
- Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus. Cell. 51, 919-928 (1987).
- Petrof, B. J., Shrager, J. B., Stedman, H. H., Kelly, A. M., Sweeney, H. L. Dystrophin protects the sarcolemma from stresses developed during muscle contraction. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 3710-3714 (1993).
- Pastoret, C., Sebille, A. mdx mice show progressive weakness and muscle deterioration with age. J. Neurol. Sci. 129, 97-105 (1995).
- Hakim, C. H., Grange, R. W., Duan, D. The passive mechanical properties of the extensor digitorum longus muscle are compromised in 2- to 20-mo-old mdx mice. J. Appl. Physiol. 110, 1656-1663 (2011).
- Segal, S. S., Faulkner, J. A. Temperature-dependent physiological stability of rat skeletal muscle in vitro. Am. J. Physiol. 248, 265-270 (1985).
- Grange, R. W., Gainer, T. G., Marschner, K. M., Talmadge, R. J., Stull, J. T. Fast-twitch skeletal muscles of dystrophic mouse pups are resistant to injury from acute mechanical stress. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 283, 1090-1101 (2002).
- Hakim, C. H., Duan, D. Gender differences in contractile and passive properties of mdx extensor digitorum longus muscle. Muscle Nerve. 45, 250-256 (2012).
- Hakim, C. H., Li, D., Duan, D. Monitoring murine skeletal muscle function for muscle gene therapy. Methods Mol. Biol. 709, 75-89 (2011).
