Summary
마우스의 흰색 지방 조직으로부터 격리 기본 흰색 preadipocytes는 베이지 색 / brite 세포로 구분 할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 백색 지방의 "브라우닝"의 분자 규정을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 모델 시스템입니다.
Abstract
브라운 adipocytes는 미토콘드리아의 호흡 사슬을 풀다 및 열 등의 화학 에너지를 발산 할 수있는 능력을 갖추고 있습니다. 흰 지방 조직 (그래서 베이지 색 또는 brite 세포라고도 함)의 UCP1 - 긍정적 인 갈색 adipocytes의 개발은 매우 같은 만성 감기에 노출 또는 PPARγ의 agonists의 환경 단서의 다양한 의해 유도되며, 따라서,이 세포 유형에 대한 치료 대상으로 잠재력이있다 비만 치료. 대부분의 불후의 지방 세포 라인 문화에 흰색 지방의 "브라우닝"의 과정을 요점을 되풀이 할 수는 없지만, 기본 adipocytes는 brite / 베이지 색 세포 개발의 분자 제어를 연구하기위한 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공 피하 화이트 지방 조직에서 stromal 혈관 분율 (와트)에서 분리 . 여기 주요 preadipocytes을 효과적으로 격리와 문화에 베이지 / brite 셀에 차별화를 유도를위한 프로토콜을 설명합니다. 브라우닝 효과는 갈색 지방 선택 마르크의 표현에 의해 평가 될 수있다같은 UCP1과 같은 ERS.
Introduction
비만은 크게 증가하고 세계이며, 지금은 공중 보건 1 가장 심각한 문제 중 하나를 간주됩니다. 이 조건은 지출에 대한 에너지 흡입 상대의 misbalance과 흰색 지방 조직 (와트)의 지질로 저장 초과하는 에너지의 결과에 관련되어 있습니다. 갈색 지방 조직은 열을 생산하기 위해 과도한 에너지를 발산 할 수있는 능력을 가지고있는 동안 확대 와트는 증가 몸 질량 및 무게와 연결되어 있습니다. 따라서 BAT은 춥고 비만 2,3 모두에 대한 보호 역할 할 수 있습니다. 이것은 단백질 1 (UCP1)를 uncoupling에 의해 미토콘드리아의 전자 교통 uncoupling에 의해 달성된다. 이 단백질은 BAT 3 thermogenesis를 nonshivering의 상징으로 간주됩니다. 최근 몇몇 연구는 성인 인간이 기능 BAT 4-8이 있으며, 따라서 인간의 BAT의 조작은 비만과 관련 질병과의 전투에서 잠재적 인 치료 개입 할 수 있다는 밝혔다.
jove_content는 "> 현재 증거가 갈색 adipocytes의 두 종류가 동물에 존재임을 나타냅니다;"고전 "또는"기존의 '갈색 지방은 태아 단계에서 개발 및 interscapular 지역과 다른 주변 조직에 헌신 갈색 지방 창고를 형성 반면. , 갈색 지방 (그래서 brite 또는 베이지 색 세포라고도 함)의 "inducible"형태는 사후 산후 단계에서 개발과 흰색 지방 조직에 사이 사이에 나타납니다. 갈색 adipocytes의 두 종류도 다른 발달 기원으로 구분되어 있습니다. 기존의 동안 갈색 adipocytes가 Myf5 전구체 myoblastsic 같은으로부터 발생, 와트 사이 사이 inducible 베이지 / brite 전지는 비 Myf5 계보 (Lineage) 9,10에서 발생. 또한,이 세포 유형의 규제 경로는 Myf5 파생 갈색과 다를 수 가능성이 adipocytes 11. 베이지 색 세포 (흰색 지방의 예 "브라우닝")의 개발은 만성 감기에 노출과에 대한 응답으로 활성화 할 수 있습니다β3-adrenoceptor-agonists 또는 성인 12-14에서 PPARγ의 agonists. 베이지 / brite 전지는 전체 에너지 균형의 조작을위한 유망 치료 표적이 될 가능성이 잠재적으로 비만 치료의 일부가 될 수 있습니다, 따라서, 환경 단서는 베이지 색의 개발을 제어하는하여 정확한 분자 메커니즘 및 신호 전달 경로를 이해하는 것이 중요합니다 세포.흰색 지방의 갈변의 분자 제어를 이해하려면, 체외 실험에서 가장 preadipocytes 아니라 비동기 적으로 이루어집니다의 차별화로 적합하며 원위치 15 세포를 감지하기가 어렵습니다 수 있습니다. 지방 세포 개발에 연구가 지금까지 이러한 3T3-L1, 3T3-F442A 또는 HIB1와 같은 세포 라인에 주로 수행 된 있지만, 이러한 세포 라인은 베이지 색 세포의 분자 서명을 부족 나타납니다. 한편, 피하 와트로부터 격리 기본 adipocytes는 proces을 요점을 되풀이 할 가능성이 가장 높은셀 자치 패션의 흰색 지방의 갈변의 s입니다. 여기 지방 조직에서 stromal-혈관 분수의 효과적인 격리와 PPARγ의 agonists에 대한 응답으로 흰 지방의 갈변을 유도를위한 프로토콜을 제공합니다. Rosiglitazone은 이러한 세포의 갈변의 특히 효과적인 중재자로 표시되었습니다. 이전 16 제안으로 휴대폰이 시스템은 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공하는 데 사용할 수 있습니다.
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Protocol
1. 소화 매체를 준비
조직 당 5 마우스 (약 1 ML / 1g의 지방 조직) 당 5 ML하십시오.
- 소화 효소에 무게 :
- Collaginase D : 1.5 U / ML (1108874103, 1 G, 로슈, 70334223)
- Dispase II : 2.4 U / ML (04,942,078,001, 0980 MG / lyo, 로슈, 11466200) - 25 ML PBS를 추가하고 분해하기 위해 잘 섞는다
- 10 mm의 최종 농도에서 조직의 소화 직전에 CaCl 2를 추가
2. 마우스에서 지방 조직을 해부
- 절개는 신중하게 수행해야하고, 즉시 생쥐 후 (6~8주 세) 희생되어 있습니다. 을 열기 전에 마우스 모피에 뿌려 에탄올로 살균 작업 할 수 있습니다. 깨끗한 PBS, 별도의 interscapular BAT와 피하 사타구니 와트에 직접 조직을 놓으십시오.
- interscapular BAT의 경우 : 최대 직면 뒷쪽으로 배치 마우스를 뒷면과 목의 모든 길을 따라 자르면. 갈색지방 조직이 바로 어깨 (interscapular) 사이의 피부에서 볼 수 있습니다. BAT는 두 엽, 모양의 나비로 볼 수 있습니다. BAT를 덮고 흰 지방의 얇은 층은 신중하게 제거 할 것입니다.
- 피하 와트 (사타구니 와트)의 경우 : 피부를 제거합니다. 사타구니 와트는 내부의 고환을 향해 허벅지 아래로 거의 뒷면에 시작과 함께 가고, 양쪽의 피부 바로 아래에 자리 잡고 있습니다.
3. 지방 조직을 잘라 소화
- 빠르게 머리, 골격 근육 및 조직 섹션에서 결합 조직처럼 모든 오염을 제거합니다.
- PBS로 분해 매체를 희석하고 건조 판에 배치하지 않는 종이에 신속하게 조직을 말린다.
- 소화 매체 (사전 소화에 CaCl 2 추가) 및 작은 조각으로 조직을 잘게 썬 고기를 추가합니다. 5 ML의 피펫과 등을 아래로 pipetting하여 잘 섞는다. 소화 m의 나머지 50 ML 튜브에 다진 조직을 전송edium은 아래로 pipetting과가 더 섞는다.
- 다이제스트 37 ° C 40-50 분 150 rpm으로 일정하게 교반을 갖추고 있습니다. 소화가 잘되어 가고 이상 - 소화을 방지하기 위해 있는지 확인하기 위해 최선을 10-15 분을 확인합니다.
참고 : 올바른 소화 매체와 시간이 중요합니다. 조직이 잘 소화해야하지만, 초과 소화는 세포를 손상시킬 수 있습니다.
4. 필터 세포 현탁액
- 5 ML 전체 매체 (DMEM/F12가 포함 된 10 %의 FPS와 P / S)를 추가하여 소화를 중지합니다. 세포는 거의 동질해야합니다. pipetting으로 잘 섞는다.
- 10 분 700 XG에 원심 분리기.
- SVF는 이제 튜브의 바닥에 갈색 펠렛으로 볼 수 있습니다. 상단과 액체 층의 대부분에있는 기름 성숙한 지방 세포 층을 대기음 - 펠렛을 유지하고 10 ML 완전한 중간에 용해. 잘 섞는다.
- 새로운 50 셀 스트레이너 (50-70 μm의 직경을) 장소 ML 튜브와 세포 현탁액을 필터링합니다.
5. 판 셀
- 10 분 700 XG에서 15 ML 튜브와 원심 분리기에 세포 현탁액을 전송합니다.
- 10 ML 완전한 매체에 매체를 대기음하고 다시 일시 중지 펠릿. 피펫 잘 섞는다.
- 필요한 얼마나 많은 접시 견적. 이 다양하고 펠렛의 크기에 따라 달라집니다 수 있습니다. 일반적인 규칙은 사타구니 와트 5 마우스와 BAT 한 10cm 판에서 10cm 플레이트 2입니다.
- 완전한 중간에 콜라겐 코팅 요리에 플레이트 세포 (R & D)
- 1-2 시간 전지, 대기음 매체를 도금 후, 두 번 PBS로 씻어와 신선한 매체를 추가 할 수 있습니다. 이 적혈구, 면역 세포 및 기타 오염 물질을 제거 할 수 있습니다으로이 단계는 중요합니다.
6. 셀을 차별화
- 유지 보수 및 유도 매체를합니다.
유지 보수 매체
추가 된 미디어를 작성하십시오
다닐 "> 인슐린, 최종 conc 5. μg / ML (5 MG / ML 주식, 산성화 물 산도에게 2.5를 준비하는 10 ML H 2 O의 아세트산의 *** 100 μl. 산성화 물에 인슐린을 분해. 스토어 재고에서 -20 ° C)3,3 ',5-Triiodo-L-thyronine (T3), 최종 conc. 1 나노 미터 (10 μM 재고, ***는 1N NaOH에 T3 분해 및 10 μM 주식을하기 위해 매체를 추가 할 수 있습니다. 시그마 고양이 # T-2877)
4 번 스토어 ° C, 일주일 동안 좋은
유도 매체
다음 화합물을 포함하는 유지 보수 매체 :
인도 메타 신, 최종 conc. 125 μM (에탄올 0.125 M 주식, 시그마 고양이 # I-7378). 인도 메타 신은 60로 가열해야 ° C 용해되어 있어야합니다.
Dexamethasone, 최종 conc. 2 μg / ML (에탄올의 2 밀리그램 / ML 양말, 시그마 고양이 # D-1756)
3 - 이소 부틸-1-methylxanthine (IBMX), 최종 conc. 0.5 ㎜ (DMSO의 0.25 M 재고, 시그마 고양이 # I-5879)
Rosiglitazone, 최종 conc. 0.5 μM(DMSO 10 MM 주식, 시그마 고양이 # R-2408)
참고 : 때마다 중간 신선한 유도하십시오.
- 전체 미디어에서 95~97%의 합류 (합류하지만 너무 포장되지 않음)에 기본 adipocytes 성장
- 유도 매체 (일 0)와 함께 정기적으로 전체 매체를 변경
- 48 시간 (2 일) 후, rosiglitazone (0.5 μM)와 유지 보수 매체로 매체를 변경
- 추가 48 시간 (4 일) 후, 추가 2-3 일 동안은 rosiglitazone과 신선한 유지 보수 매체 (1 μM)로 변경합니다. 6-7일 유도 매체를 추가 한 후, 세포가 완전히 지방 세포를 성숙하고 차별화되어 있으며 기름 방울로 가득합니다. 작은 물방울이 유도 한 후 3-4일 주위에 나타납니다.
참고 : 변경 매체는 세포가 완전히 구별 모든 2~3일 때까지.
전지는 지금 수확하고 Ucp1와 인접의 mRNA 표현 될 수있다R 갈색 지방 세포에 특정한 유전자가 qRT-PCR로 측정 할 수 있습니다. 서양 얼룩은 단백질을 감지하는 데 사용됩니다.
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Representative Results
주요 adipocytes의 브라우닝은 mRNA의 Ucp1의 표현과 qRT-PCR로 다른 갈색 지방의 특정 또는 선택적으로 유전자를 측정하여 액세스 할 수 있습니다. 그림 1에 제시하는 것은 사타구니 와트 - 파생 주요 adipocytes에서 유전자 발현 데이터입니다. 세포는 각각 50 nm의 500 nm의에서 rosiglitazone 두 가지 복용의 면전에서 차별화 유도했다. 셀의 하위 집합을 수확하기 전에 4 시간 10 μM에서 forskolin로 치료했다. 이것은 세포의 주기적-AMP (CAMP)를 유도하고 Ucp1 표현을 포함 thermogenic 유전자 프로그램을 활성화합니다.
그림 1A에 도시 된 바와 같이, rosiglitazone은 견고 Ucp1 mRNA의 표현을 유도. Forskolin 처리 (캠프) 추가 rosiglitazone 유발 UCP1 식을 증대. 또 다른 갈색 지방 선택성 유전자는 Cidea 표현도 견고 복용에 의존 방식 (그림 1B)에 rosiglitazone에 의해 유도되었다. <em>에 Fabp4은 PPARγ과 갈색 지방과 백색 지방 모두 adipogenic 마커의 직접 대상입니다. 그림 1C와 같이 rosiglitazone로 치료하면 Fabp4 표현도 증가했습니다. Ucp1 및 Cidea 식의 유도가 여전히 Ucp1과 Cidea의 mRNA 수준은 Fabp4 (인물 1D 및 E)의 사람들에게 표준화 된 경우에도 중요한 때부터이 갈변 효과는 본질적으로 adipogenesis의 향상으로 단순히 인해 아니 었습니다.
UCP1의 증가 단백질 수준을 확인하려면 서양 얼룩을 수행해야합니다. 그림 2에 제시, rosiglitazone의 높은 복용량 (500 NM)은 견고 셀에 UCP1 단백질을 증가했다. 중요한 것은 같은 이전 16. 오노 외에 표시된 rosiglitazone은-inducible 베이지 색 셀은 캠프 자극, importa에 대한 응답으로 상승 총과 uncoupled 산소 소비량을 보여 주었다갈색 adipocytes / 베이지 세포 NT 기능적 특징.
1 그림. Ucp1 (A)와 Cidea (B)를 포함 갈색 지방 선택적 유전자의 유도를 보여주는 정량 실시간 PCR (qRT-PCR). adipogenic 마커 Fabp4의 표현도 (C) 표시됩니다. 표시 할 경우, 세포는 이전에 수확 내지 네 시간 동안 캠프 (10 μM에서 forskolin)로 처리되었습니다. 총 RNA는 TRIzol (Invitrogen)를 사용하여 차별화 된 세포로부터 추출되었다. 역 스크립트는 cDNA 역방향 전사 키트를 (iScript, 응용 Biosystems)를 사용하고 qRT-PCR은 ABI ViiA7 기계를 사용하여 SYBR 녹색 형광 염료와 중복 수행 된 수행되었다. 참조 유전자와 프라이머 시퀀스는 표 1에서 제공하는대로 TATA 결합 단백질 (TBP)가 작용. Rosiglitazone은 갈색 선택을 유도필자의 유전자 Ucp1 (D)와 adipogenic 마커 유전자 Fabp4의 정상화 후 Cidea (E).
그림 2. 50 나노 미터 또는 500 nm의 복용에 rosiglitazone로 치료 사타구니 기본 셀의 UCP1 단백질 수준의 서양 되리. 총 세포 lysates는 절연과 서양 blottings 적용되었습니다. UCP1 항체 (Abcam)는 서양이 blotting 사용되었다.
| 유전자 | 종 | 앞으로 입문서 | 프라이머를 반대로 |
| Fabp4 | 마우스 | ACACCGAGATTTCCTTCAAACTG | CCATCTAGGGTTATGATGCTCTTCA |
| Cidea | 마우스 | ATCACAACTGGCCTGGTTACG | TACTACCCGGTGTCCATTTCT |
| Tbp | 마우스 | ACCCTTCACCAATGACTCCTATG | TGACTGCAGCAAATCGCTTGG |
| Ucp1 | 마우스 | CACCTTCCCGCTGGACACT | CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG |
표 1. 실시간 qPCR 분석을위한 프라이머 시퀀스.
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Discussion
여기 마우스의 기본 양식 adipocytes에 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제시한다. 같은 몇 가지 가능한 불후의 세포 라인에 비해,이 시스템은 생체의 흰색 지방의 갈변으로 향상된 관련성을 제공 할 것으로 예상됩니다.
이러한 기본 adipocytes의 연구는 몇 가지 장점을 제공하더라도,이 또한 고려하는 것이 중요 일부 제한 사항 및 문제를 존재합니다. 첫째,이 시스템은 세포의 분화의 효력에 크게 의존합니다. 이러한 Ucp1 및 Cidea과 같은 갈색 지방 선택적 유전자의 표현은 특히 차별화에 따라 달라집니다. 예를 들어, PPARγ의 agonists와 BMP7도 따라서 adipogenesis을 강화, "브라우닝"효과는 상당히 차별화의 유사한 정도와 셀에 액세스해야합니다. 또한, 같은 지방 선택적 갈색의 표현을 정규화, 인물 1D와 E에 표시같은 Fabp4 등 adipogenesis 마커 유전자의과 유전자에 유용 할 수 있습니다. 둘째, 생쥐의 연령은 중요합니다. 이것은 아마 가능한 한 많은 세포를 얻을 수 있도록 큰 마우스를 사용하는 유혹 수 있지만, 나이가 차별화 실패 있습니다. 수 이 같은 추위 노출, 비만, 인슐린 저항이나 노화 등의 내부와 외부 신호가 문화 시스템을 사용하여이 세포 유형의 확산, 자기 갱신 또는 차별화 능력에 영향을 미치는 방법을 검토 흥미로울 것입니다. 우리의 경우, 유형 C57BL/6J의 마우스의 적절한 연령은 6~8주 사이에있다. 셋째, 주요 전지는 일반적으로 더 민감하고 불후의 지방 세포 라인보다 더 연약합니다. BAT 또는 피하 와트에서 preadipocytes가 내장 와트에서보다 증식과 분화의 더 나은 능력을 가지고 있지만, 그들은 몇 구절 한 후 자신의 차별화 능력을 잃게하는 경향이 있습니다. 우리는 일반적으로 세 구절의 최대 내에서 차별화를 유도.
또 다른 impor고려해야 할 tant 점은 stromal - 혈관 일부가 이기종 셀 인구이라는 것입니다. 이 프로토콜에서 우리는 preadipocytes와 PPARγ의 작용제의 rosiglitazone의 존재에 갈색 지방 선택 유전 프로그램을 설정하는 능력에 중점을두고 있습니다. 최근 연구는 복부 와트 PDGFRa - 긍정적 이중 강력한 progenitors은 생체 17 베타 아드레날린 자극에 대한 응답으로 갈색 adipocytes에 상승을 제공 것으로 나타났습니다. 그러나, 만성 PPARγ 작용제의 치료에 대한 응답으로 등장 베이지 / brite 세포의 실제 기원은 불분명 남아 있습니다. 토론이 활성화되어 왔으며 연구원이 근본적인 질문에 신경을 더 쓰고되며, 커밋 갈색 preadipocytes의 확산을 통해 나 성인용 흰색 adipocytes 18,19에서 transdifferentiation을 통해 강화 된 흰색에 갈색 지방 변환을 통해 흰색 지방의 갈변입니다.
Rosiglitazone은 체외에서 흰색 지방의 갈변을 유발하는 것으로 알려졌습니다 생체 20~26인치 흥미롭게도, 합성 agonists에 의한 PPARγ의 활성화, 흰색 지방의 갈변을 일으킬 수 있지만, 흰색 adipocytes에서 PPARγ의 overexpression 27 충분하지 않습니다. 우리는 이전에 PPARγ 작용제 유발 갈변 효과가 PRDM16 16 단백질 안정화를 통해 부분적으로 중재 수 있습니다 것으로 나타났습니다. 따라서, 작은 화합물 또는 PRDM16 단백질을 안정화 endogeneous 분자를 식별하는 것은 구체적으로 흰 지방의 갈변을 유도 할 수 있습니다. 현재 방법은 비만과 당뇨병의 치료를위한 새로운 치료 개입으로 이어질 수있는 요인을 식별 할 수있는 강력하고 신뢰할 수있는 실험 시스템을 제공합니다.
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Disclosures
제작자들은 더 경쟁 금융 이익이 없다는 점 선언합니다.
Acknowledgments
우리는 토론, 기술 지원 및 원고에 대한 편집 지원 Haruya 오노, Kosaku 시노다, 루이스 샤프, 에미 Tomoda, 로렌 루이즈 감사드립니다. 이 작품은 돌파구 바이오 메디컬 연구 및 Asubio 알약 주식회사에서의 프로그램에서 SKULA에 NIH (DK087853)에서 보조금 코펜하겐과 EU FP7 프로젝트 DIABAT (건강-F2의 대학에서 SHARE 박사 장학금이 지원 한에 의해 지원되었다 리자 매드슨와 Karsten Kristiansen에 -2011-278373). 우리는 또한 DERC 센터 보조금 (NIH P30 DK063720)을 인정합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
- Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects. American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).
- Rothwell, N. J., Stock, M. J. Combined effects of cafeteria and tube-feeding on energy balance in the rat. The Proceedings of the Nutrition Society. 38, 5A (1979).
- Cannon, B., Nedergaard, J. Brown adipose tissue: function and physiological significance. Physiological Reviews. 84, 277-359 (2004).
- Cypess, A. M., et al. Identification and importance of brown adipose tissue in adult humans. The New England Journal of Medicine. 360, 1509-1517 (2009).
- van Marken Lichtenbelt, W. D., et al. Cold-activated brown adipose tissue in healthy men. The New England Journal of Medicine. 360, 1500-1508 (2009).
- Virtanen, K. A., et al. Functional brown adipose tissue in healthy adults. The New England Journal of Medicine. 360, 1518-1525 (2009).
- Zingaretti, M. C., et al. The presence of UCP1 demonstrates that metabolically active adipose tissue in the neck of adult humans truly represents brown adipose tissue. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 23, 3113-3120 (2009).
- Saito, M., et al. High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans: effects of cold exposure and adiposity. Diabetes. 58, 1526-1531 (2009).
- Seale, P., et al. PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch. Nature. 454, 961-967 (2008).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2010).
- Coulter, A. A., Bearden, C. M., Liu, X., Koza, R. A., Kozak, L. P. Dietary fat interacts with QTLs controlling induction of Pgc-1 alpha and Ucp1 during conversion of white to brown fat. Physiological Genomics. 14, 139-147 (2003).
- Klingenspor, M. Cold-induced recruitment of brown adipose tissue thermogenesis. Experimental Physiology. 88, 141-148 (2003).
- Cinti, S. The adipose organ. Prostaglandins, leukotrienes, and essential fatty acids. 73, 9-15 (1016).
- Ghorbani, M., Himms-Hagen, J. Appearance of brown adipocytes in white adipose tissue during CL 316,243-induced reversal of obesity and diabetes in Zucker fa/fa rats. International Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders: Journal of the International Association for the Study of Obesity. 21, 465-475 (1997).
- Hansen, J. B., Kristiansen, K. Regulatory circuits controlling white versus brown adipocyte differentiation. The Biochemical Journal. 398, 153-168 (2006).
- Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. PPARy agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein. Cell metabolism. 15, 395-404 (2012).
- Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding. Cell Metabolism. 15, 480-491 (2012).
- Cinti, S. Transdifferentiation properties of adipocytes in the adipose organ. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 297, E977-E986 (2009).
- Barbatelli, G., et al. The emergence of cold-induced brown adipocytes in mouse white fat depots is determined predominantly by white to brown adipocyte transdifferentiation. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 298, E1244-E1253 (2010).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2009).
- Rong, J. X., et al. Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone. Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).
- Wilson-Fritch, L., et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone. The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).
- Sell, H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice. Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).
- Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice. Diabetes. 49, 759-767 (2000).
- Vernochet, C., et al. C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists. Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).
- Tai, T. A., et al. Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).
- Sugii, S., et al. PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).
