Summary
Primära vita preadipocyter isolerade från vita fettvävnad hos möss kan differentieras till beige / Brite celler. Presenteras här är en pålitlig cellulärt modellsystem för att studera molekylära regleringen av "bryning" vitt fett.
Abstract
Bruna adipocyter har förmågan att koppla loss den respiratoriska kedjan i mitokondrierna och skingra kemisk energi i form av värme. Utveckling av UCP1-positiva bruna adipocyter i vita fettvävnad (sk beige eller Brite celler) starkt induceras av en mångfald miljömässiga signaler såsom kronisk kall exponering eller genom PPARy agonister har därför denna celltyp potential som ett terapeutiskt mål för fetma behandling. Även om de flesta förevigade fettceller linjer inte kan rekapitulera processen "bryning" vitt fett i kultur, primära adipocyter isolerade från stromal vaskulär fraktion i subkutan vit fettvävnad (WAT) ge en tillförlitlig cellulärt system för att studera molekylära kontrollen av beige / Brite cellutveckling . Här beskriver vi ett protokoll för effektiv isolering av primära preadipocyter och för att framkalla differentiering av beige / Brite celler i kultur. Den Browning effekt kan bedömas av uttrycket av brunt fett-selektiv märkningERS som UCP1.
Introduction
Fetma är dramatiskt ökande globalt och anses nu vara en av de allvarligaste problem för folkhälsan 1. Detta villkor är relaterad till en misbalance i energiintag i förhållande till utgifter och resulterar i överskott av energi lagras som lipid i vit fettvävnad (WAT). Förstorad WAT är associerad med ökad kroppsmassa och vikt, medan brun fettvävnad har förmågan att avleda överskottsenergi att producera värme. Därför BAT kan fungera som skydd mot både kyla och fetma 2,3. Detta uppnås genom frånkoppling av elektrontransport i mitokondrier genom frånkoppling protein 1 (UCP1). Detta protein anses kännetecknande för nonshivering termogenes i BAT 3. Flera studier under senare år visar att vuxna människor har funktionell BAT 4-8 och följaktligen kan manipulation av BAT hos människor vara en potentiell terapeutisk intervention i kampen mot fetma och dess relaterade sjukdomar.
jove_content "> Aktuell uppgifter tyder på att två typer av bruna adipocyter förekommer hos gnagare," klassisk "eller" befintlig "brunt fett utvecklas under fosterstadiet och bildar dedikerade brunt fett depåer i interscapular regionen och andra perifera vävnader Å andra sidan. , en "inducerbar" form av brunt fett (så kallade Brite eller beige celler) utvecklas under postnatal scenen och verkar insprängda i vitt fettvävnad. De två typerna av bruna adipocyter också separeras med olika utvecklingsstadier ursprung. Medan tidigare bruna adipocyter uppstår myoblastsic-liknande Myf5 prekursorer, de inducerbara brite / beige celler uppblandade i WAT härrör från ett icke-Myf5 härstamning 9,10. Dessutom är regulatoriska vägar för denna celltyp sannolikt att skilja sig från den Myf5-härledda brun adipocyter 11. Utvecklingen av beige celler (dvs "bryning" vitt fett) kan aktiveras som svar på kronisk kalla exponering ochβ3-adrenoceptor-agonister eller agonister PPARy hos vuxna 12-14. De beige / Brite celler sannolikt är ett lovande terapeutiskt mål för manipulering av totala energibalansen och kan potentiellt bli en del av behandling av fetma, därför är det viktigt att förstå exakta molekylära mekanismer och signalvägar genom vilka miljömässiga signaler styr utvecklingen av beige celler.För att förstå den molekylära kontrollen av brunfärgning av vitt fett, är in vitro-experiment bäst lämpade som differentiering av preadipocyter sker ganska asynkront och det är svårt att detektera cellerna in situ 15. Även studier på fettceller utveckling har hittills utförts främst på cellinjer som 3T3-L1, 3T3-F442A eller HIB1, dessa cellinjer tycks sakna den molekylära undertecknandet av beige celler. Å andra sidan, primära adipocyter isolerade från subkutana WAT är mest sannolikt att sammanfatta de process av missfärgning av vitt fett i en cell autonoma sätt. Här ger vi ett protokoll för effektiv isolering av den stromala-vaskulära fraktionen från fettvävnad och inducera brunfärgning av vitt fett som svar på PPARy-agonister. Rosiglitazon har visat sig vara ett särskilt effektivt förmedlare av brunfärgning i dessa celler. Som tidigare föreslagits 16, kan denna cellulärt system användas för att tjäna ett tillförlitligt cellulärt system för att studera utvecklingen av beige / Brite celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Förbered Digestion Medium
Gör 5 ml per 5 möss per vävnad (ca 1 ml / 1 g fettvävnad).
- Väg i matsmältningen enzymer:
- Collaginase D: 1,5 U / ml (1108874103, 1 g, Roche, 70.334.223)
- Dispase II: 2,4 U / ml (04942078001, 0.980 mg / lyo, Roche, 11.466.200) - Tillsätt 25 ml PBS och blanda väl för att lösa
- Lägg CaClj 2 strax före digestion av vävnaden vid en slutlig koncentration av 10 mM
2. Dissekera fettvävnad från möss
- Dissektion bör utföras noggrant, och omedelbart efter att mössen (6-8 veckor gamla) avlivades. Arbeta sterilt med etanol sprutas på musen päls innan den öppnas. Placera vävnaden direkt i ren PBS, separat interscapular BAT och subkutan inguinal Wat.
- För interscapular BAT: ha musen placerad med baksidan vänd uppåt, uppskuren längs ryggen och hela vägen till nacken. Den brunafettvävnad finns precis under huden mellan skulderbladen (interscapular). BAT kan ses som två lober, fjäril formad. Ett tunt lager av vitt fett som täcker BAT bör noga bort.
- För subkutan WAT (inguinal WAT): ta bort huden. Inguinal WAT finns direkt under huden på båda sidor, med start nästan på ryggen och gå tillsammans, insidan av låren och ner mot testikeln.
3. Klipp och smälta Adipose Tissue
- Snabbt ta bort alla föroreningar, såsom hår, skelettmuskel och bindväv från vävnadssnitt.
- Torr trasa snabbt på papper för att inte späda dissektion medium med PBS och placera den på en torr plåt.
- Lägg matsmältningen-medium (tillsatt CaClj 2 före digerering) och finhacka vävnaden i små bitar. Blanda väl genom att pipettera upp och ned med en 5 ml pipett. Överför det malda vävnaderna i 50 ml rör med resten av matsmältningen mEDIUM, blanda ännu mer genom pipettering upp och ned.
- Digest i 37 ° C med konstant omrörning vid 150 rpm under 40-50 minuter. Kontrollera varje 10-15 min för att säkerställa att matsmältningen går bra och för att förhindra över-matsmältningen.
Obs: Korrekt matsmältning medium och tid är viktigt. Vävnaden måste väl smälta, men överskottet matsmältning kan skada cellerna.
4. Filtrera cellsuspension
- Stoppa digerering genom att tillsätta 5 ml komplett medium (DMEM/F12 innehållande 10% FPS och P / S). Cellerna bör nästan vara helt homogen. Blanda väl genom pipettering.
- Centrifugera vid 700 x g under 10 minuter.
- SVF kan nu ses som en brunaktig pellet på botten av röret. Aspirera oljiga mogna adipocyt lager ovanpå och det mesta av vätskan skiktet - hålla pelleten och lös den i 10 ml komplett medium. Blanda väl.
- Placera en cellfilter (50-70 | im diameter) över ett nytt 50 ml rör och filtrera cellsuspensionen.
5. Plate celler
- Överför cellsuspensionen till en 15 ml rör och centrifugera vid 700 xg under 10 minuter.
- Aspirera medium och återsuspendera pelleten i 10 ml fullständigt medium. Pipett och blanda väl.
- Uppskatta hur många plattor som behövs. Detta kan variera och beror på storleken pelleten. En allmän regel är 2 av 10 cm plattor från 5 möss för inguinal Wat och en 10 cm platta för BAT.
- Plate celler på rätter kollagenbelagda (FoU) i komplett medium
- 1-2 timmar efter plätering av cellerna, aspirera mediet, tvätta med PBS två gånger och tillsätt färskt medium. Detta steg är viktigt eftersom det kan ta bort röda blodkroppar, immunceller och andra föroreningar.
6. Differentiera celler
- Gör underhåll och medier induktion.
Underhållsmedium
Komplett medium med tillsatt:
ENT "> Insulin, slutlig konc. 5 pg / ml (5 mg / ml förrådslösning, *** 100 pl ättiksyra i 10 ml vatten 2 O för att framställa surgjord vatten pH 2,5. upplösa insulinet i det surgjorda vattnet. Förvara lager i -20 ° C)3,3 ',5-trijod-L-tyronin (T3), slutlig konc. 1 nM (10 M lager, *** lösa T3 i 1N NaOH och lägga medel för att göra 10 M lager. Sigma cat # T-2877)
Lagra vid 4 ° C, bra för en vecka
Induktionsmedium
Upprätthållande medium innehållande följande föreningar:
Indometacin, sista konc. 125 M (0,125 M lager i etanol, Sigma cat # I-7378). Indometacin måste upphettas till 60 ° C för att lösas.
Dexametason, sista konc. 2 pg / ml (2 mg / ml strumpa i etanol, Sigma cat # D-1756)
3-isobutyl-1-metylxantin (IBMX), slutlig konc. 0,5 mM (0,25 M stamlösning i DMSO, Sigma cat # I-5879)
Rosiglitazon, slutlig koncentration. 0,5 pM(10 mM förrådslösning i DMSO, Sigma cat # R-2408)
Obs: Kontrollera nytt induktionsmedium varje gång.
- Grow primära adipocyter till 95-97% konfluens i komplett medium (sammanflytande men inte alltför packade)
- Ändra regelbundet komplett medium med induktion-medium (dag 0)
- Efter 48 timmar (dag 2), ändra medium till underhåll medium med rosiglitazon (0,5 M)
- Efter ytterligare 48 timmar (dag 4), byt till nytt underhållsmedium med rosiglitazon (1 M) för ytterligare 2-3 dagar. 6-7 dagar efter tillsats av mediet induktion, celler fullt differentierade till mogna fettceller och är fyllda med oljedroppar. Droppar visas runt 3-4 dagar efter induktion.
Obs: Ändra medium var 2-3 dagar tills cellerna är helt differentierade.
Celler kan nu skördas och mRNA uttryck av UCP1 och Other brun adipocyt-specifika gener kan mätas genom QRT-PCR. Western blöt kommer att användas för att detektera proteiner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Browning primära adipocyter kan nås genom att mäta mRNA-uttryck av UCP1 och andra bruna fett-specifika eller selektiva gener med QRT-PCR. Presenteras i figur 1 är genuttryck data i inguinal WAT-härledda primära adipocyter. Cellerna inducerades att differentiera i närvaro av två olika doser av rosiglitazon vid 50 nM och 500 nM, respektive. En undergrupp av celler behandlades med forskolin vid 10 pM för 4 timmar före skörd. Detta kommer att inducera cykliskt AMP (cAMP) i cellerna och aktivera termogen gen programmet inklusive UCP1 uttryck.
Såsom visas i figur 1A, inducerade rosiglitazon kraftfullt UCP1 mRNA-expression. Forskolin behandling (cAMP) utökas ytterligare rosiglitazon-inducerad UCP1 uttryck. En annan brunt fett-selektiv genen, Cidea uttryck också kraftigt inducerad av rosiglitazon i en dosberoende sätt (Figur 1B). <em> Fabp4 är ett direkt mål för PPARy och en adipogena markör för både brunt fett och vitt fett. Såsom visas i figur 1C, var Fabp4 uttryck ökade också vid behandling med rosiglitazon. Denna Browning effekt var inte bara på grund av en ökning av adipogenes sig, eftersom induktion av UCP1 och Cidea uttryck var fortfarande betydande, även om mRNA nivåerna av UCP1 och Cidea normaliserades till de Fabp4 (figurerna 1D och E).
För att bekräfta ökad proteinnivå av UCP1 bör Western blot utföras. Såsom visas i Figur 2, ökade en hög dos av rosiglitazon (500 nM) kraftigt UCP1-protein i cellerna. Viktigt är såsom tidigare visats i Ohno et al. 16, rosiglitazon-inducerbar beige celler uppvisade förhöjt total och okopplad syreförbrukning som svar på cAMP-stimulering, en important funktionella egenskaper bruna adipocyter / beige celler.
Figur 1. Kvantitativ realtids-PCR (QRT-PCR) visar induktionen av bruna fett-selektiva gener inklusive UCP1 (A) och Cidea (B). Uttryck av en adipogena markör Fabp4 visas också (C). Där så anges, behandlades celler med cAMP (forskolin vid 10 pM) under fyra timmar före skörd. Totalt RNA extraherades från differentierade celler med användning TRIzol (Invitrogen). Omvänd transkription utfördes med användning av en cDNA-sats omvänd transkription (iScript, Applied Biosystems) och QRT-PCR utfördes i dubbletter med SYBR grön fluorescerande färgämne med en ABI ViiA7 maskin. TATA-bindande protein (TBP) fungerade som en referens gen och primersekvenser ges i Tabell 1. Rosiglitazon inducerade brun-selective gener UCP1 (D) och Cidea (E) efter normalisering av en adipogena markörgen Fabp4.
Figur 2. Western blöt av UCP1 proteinnivåer i ljumsk primära celler som behandlats med rosiglitazon i doser om 50 nM eller 500 nM. Totalt cellysat isolerades och ansökte om västerländska blottings. UCP1 antikropp (Abcam) användes för Western blotting.
| Gen | Arter | Framåtriktad primer | Omvänd primer |
| Fabp4 | mus | ACACCGAGATTTCCTTCAAACTG | CCATCTAGGGTTATGATGCTCTTCA |
| Cidea | mus | ATCACAACTGGCCTGGTTACG | TACTACCCGGTGTCCATTTCT |
| Tbp | mus | ACCCTTCACCAATGACTCCTATG | TGACTGCAGCAAATCGCTTGG |
| UCP1 | mus | CACCTTCCCGCTGGACACT | CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG |
Tabell 1. Primersekvenser för realtid qPCR analys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Här presenterar vi en pålitlig cellulärt system för att studera utvecklingen av beige / Brite celler i primära odlade adipocyter hos möss. Jämfört med flera tillgängliga odödliggjorda cellinjer, är detta system sannolikt att erbjuda förbättrad relevans för brunfärgning av vitt fett in vivo.
Även om studien av dessa primära adipocyter erbjuder vissa fördelar, finns det även vissa begränsningar och problem som är viktiga att beakta. Först, är detta system mycket beroende på differentiering potens av cellerna. Uttryck av brunt fett-selektiva gener såsom UCP1 och Cidea är särskilt differentiering beroende. Till exempel PPARy agonister och BMP7 också öka adipogenes därför de "Browning" effekter måste rättvist nås i celler med liknande grad av differentiering. Alternativt, såsom visas i figurerna 1D och E, normalisera uttrycket av brunt fett-selektivagener med den för adipogenes markörgener såsom Fabp4 kan vara användbara. Andra är ålder mössen viktig. Det kan kanske vara frestande att använda stora möss för att få så många celler som möjligt, men som differentiering avtar med åldern. Det skulle vara intressant att undersöka hur interna och externa signaler såsom kyla exponering, fetma, insulinresistens eller åldrande påverkar spridningen, självförnyelse eller differentiering kapacitet av denna celltyp med detta odlingssystem. I vårt fall är den lämpliga åldern hos möss av typ C57BL/6J mellan 6-8 veckor. Tredje, primära celler är i allmänhet känsligare och mer sårbart än odödliggjorda adipocyt linjer. Även preadipocyter från BAT eller subkutan WAT har bättre kapacitet av proliferation och differentiering än de från visceral Wat, tenderar de att förlora sin differentiering kapacitet efter flera passager. Vi inducerar normalt differentiering inom högst 3 passager.
En annan viktigviktig aspekt att beakta är att den stromala-vaskulära fraktion är en heterogen cellpopulation. I detta protokoll fokuserar vi på preadipocyter och deras förmåga att slå på en brun fett-selektiv genetisk program i närvaro av en PPARy agonist rosiglitazon. En färsk studie har visat att PDGFRa-positiva bi-potenta stamceller i buken WAT ger upphov till bruna adipocyter som svar på beta-adrenerg stimulering in vivo 17. Dock fortfarande verkliga ursprung beige / Brite celler som framkommer till följd av kronisk PPARy agonist behandling oklar. Debatten har varit aktiv och forskare är upptagna med denna grundläggande fråga, är stekning av vitt fett genom ökat vita till brunt fett konvertering, genom spridning av engagerade bruna preadipocyter eller genom transdifferentiering från mogna vita adipocyter 18,19.
Rosiglitazon har varit känt att inducera brunfärgning av vitt fett in vitro in vivo 20-26. Intressant, kan aktivering av PPARy av syntetiska agonister inducerar brunfärgning av vitt fett, emellertid, är överuttryck av PPARy i adipocyter vita inte tillräckligt 27. Vi har tidigare visat att PPARy agonist-inducerad bryning effekt medieras delvis genom protein stabilisering av PRDM16 16. Följaktligen, kan identifiering av små föreningar eller endogena molekyler som stabiliserar PRDM16 proteinet kunna specifikt inducera brunfärgning av vitt fett. Aktuella metoden ger en robust och pålitligt experimentellt system för att identifiera sådana faktorer, som kan leda till en ny terapeutisk intervention för behandling av fetma och diabetes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Vi tackar Haruya Ohno, Kosaku Shinoda, Louis Sharp, Emi Tomoda, och Lauren Ruiz för diskussion, teknisk hjälp och redaktionellt stöd på manuskriptet. Detta arbete har finansierats med bidrag från NIH (DK087853), från Programmet för Genombrott biomedicinsk forskning och från Asubio Pharm Inc. till SKULA stöddes av en aktie PhD stipendier från Köpenhamns universitet och EU-FP7-projektet Diabat (HEALTH-F2 -2.011-278.373) till Lise Madsen och Karsten Kristiansen. Vi erkänner också DERC centrum bidraget (NIH P30 DK063720).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
- Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects. American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).
- Rothwell, N. J., Stock, M. J. Combined effects of cafeteria and tube-feeding on energy balance in the rat. The Proceedings of the Nutrition Society. 38, 5A (1979).
- Cannon, B., Nedergaard, J. Brown adipose tissue: function and physiological significance. Physiological Reviews. 84, 277-359 (2004).
- Cypess, A. M., et al. Identification and importance of brown adipose tissue in adult humans. The New England Journal of Medicine. 360, 1509-1517 (2009).
- van Marken Lichtenbelt, W. D., et al. Cold-activated brown adipose tissue in healthy men. The New England Journal of Medicine. 360, 1500-1508 (2009).
- Virtanen, K. A., et al. Functional brown adipose tissue in healthy adults. The New England Journal of Medicine. 360, 1518-1525 (2009).
- Zingaretti, M. C., et al. The presence of UCP1 demonstrates that metabolically active adipose tissue in the neck of adult humans truly represents brown adipose tissue. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 23, 3113-3120 (2009).
- Saito, M., et al. High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans: effects of cold exposure and adiposity. Diabetes. 58, 1526-1531 (2009).
- Seale, P., et al. PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch. Nature. 454, 961-967 (2008).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2010).
- Coulter, A. A., Bearden, C. M., Liu, X., Koza, R. A., Kozak, L. P. Dietary fat interacts with QTLs controlling induction of Pgc-1 alpha and Ucp1 during conversion of white to brown fat. Physiological Genomics. 14, 139-147 (2003).
- Klingenspor, M. Cold-induced recruitment of brown adipose tissue thermogenesis. Experimental Physiology. 88, 141-148 (2003).
- Cinti, S. The adipose organ. Prostaglandins, leukotrienes, and essential fatty acids. 73, 9-15 (1016).
- Ghorbani, M., Himms-Hagen, J. Appearance of brown adipocytes in white adipose tissue during CL 316,243-induced reversal of obesity and diabetes in Zucker fa/fa rats. International Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders: Journal of the International Association for the Study of Obesity. 21, 465-475 (1997).
- Hansen, J. B., Kristiansen, K. Regulatory circuits controlling white versus brown adipocyte differentiation. The Biochemical Journal. 398, 153-168 (2006).
- Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. PPARy agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein. Cell metabolism. 15, 395-404 (2012).
- Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding. Cell Metabolism. 15, 480-491 (2012).
- Cinti, S. Transdifferentiation properties of adipocytes in the adipose organ. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 297, E977-E986 (2009).
- Barbatelli, G., et al. The emergence of cold-induced brown adipocytes in mouse white fat depots is determined predominantly by white to brown adipocyte transdifferentiation. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 298, E1244-E1253 (2010).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2009).
- Rong, J. X., et al. Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone. Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).
- Wilson-Fritch, L., et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone. The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).
- Sell, H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice. Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).
- Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice. Diabetes. 49, 759-767 (2000).
- Vernochet, C., et al. C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists. Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).
- Tai, T. A., et al. Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).
- Sugii, S., et al. PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).
