Summary
Farelerde beyaz adipoz dokulardan izole İlköğretim beyaz preadipositlerden bej / brite hücrelerine ayırt edilebilir. Burada sunulan beyaz yağ "esmerleşme" moleküler düzenlenmesi okumak için güvenilir hücresel modeli sistemidir.
Abstract
Kahverengi adipositler mitokondrilerde solunum zinciri ayırınız ve ısı gibi kimyasal enerjiyi için yeteneği var. Beyaz adipoz doku (yani bej veya brite hücreler olarak adlandırılır) UCP1 pozitif kahverengi adipositlerin Kalkınma yüksek kronik soğuğa maruz kalma ya da PPARy agonistleri tarafından çevresel işaretlerin çeşitli neden, bu nedenle, bu hücre tipi için bir terapötik hedef olarak potansiyele sahip obezite tedavisinde. Çoğu ölümsüzleştirdi adiposit hatları kültüründe beyaz yağ "esmerleşme" süreci özetleyen edemesek de, birincil adipositler brite / bej hücre gelişiminin moleküler kontrolü çalışmak için güvenilir hücresel sistem sağlamak subkütan beyaz adipoz dokuda stromal vasküler fraksiyon (WAT) izole . Burada primer preadipositlerden etkin izolasyonu ve kültür bej / brite hücrelerine farklılaşma inducing için bir protokol açıklar. Esmerleşme efekti kahverengi yağ seçici işareti ifade tarafından tespit edilebilirBöyle UCP1 gibi ers.
Introduction
Obezite ölçüde dünya çapında artan ve şu anda halk sağlığı 1 için en ciddi kaygılarından biri olarak kabul edilir. Bu durum bir harcama enerji alımı göreli misbalance ve beyaz yağ dokusu (WAT) lipid olarak depolanan fazla enerji sonuçları ile ilgilidir. Kahverengi adipoz dokuda ısı üretmek için fazla enerjiyi dağıtmak için yeteneğine sahipken Büyümüş WAT, artan vücut kütlesi ve ağırlığı ile ilişkilidir. Bu nedenle BAT soğuk ve obezite 2,3 hem de karşı koruma olarak işlev görebilir. Bu protein 1 (UCP1) ile ayrılmasının mitokondri içinde elektron nakil bölgesinin ayrılmasının elde edilir. Bu protein, BAT 3 termojenez nonshivering için ayırt edici bir özelliği olarak kabul edilir. Son yıllarda çeşitli çalışmalar erişkin insanlarda fonksiyonel BAT 4-8 var ve dolayısıyla insanlarda BAT manipülasyon obezite ve ilgili hastalıklara karşı savaşta potansiyel bir terapötik girişim olabileceğini ortaya koymuştur.
jove_content "> Mevcut kanıtlar kahverengi adiposit iki tip kemirgenlerde bulunduğunu gösterir," klasik "ya da" önceden mevcut olan "kahverengi yağ doğum öncesi aşama sırasında ortaya çıkar ve interskapular ve diğer periferik dokularda adanmış kahverengi yağ deposu oluşturan diğer taraftan. , kahverengi yağ (yani brite veya bej hücreler denir) bir "indüklenebilir" şeklinde doğum sonrası aşamasında gelişir ve beyaz adipoz dokularında serpiştirilmiş görünür. kahverengi adipositlerin iki tip de farklı gelişimsel kökenleri ile ayrılır. önceden mevcut iken kahverengi adipositler Myf5 öncüleri myoblastsic gibi ortaya çıkar, WAT olarak serpiştirilmiş indüklenebilir bej / brite hücre dışı bir Myf5 soy 9,10 ortaya çıkar. Buna ek olarak, bu tip hücre düzenleyici yollar Myf5 türevi kahverengi farklı olması muhtemeldir adipositler 11. bej hücreleri (beyaz yağ yani "esmerleşme") gelişimi kronik soğuk maruziyeti ve yanıt olarak aktive edilebilirβ3-adrenoseptör agonistler veya yetişkin 12-14 yılında PPARy agonistleri. Bej / brite hücreler genel enerji dengesi manipülasyonu için umut verici bir terapötik hedef olması muhtemel ve potansiyel obezite tedavisinin bir parçası haline gelebilir, bu nedenle, çevresel ipuçları bej gelişimini kontrol hangi hassas moleküler mekanizmaları ve sinyal yolları anlamak önemlidir hücreler.Beyaz yağ esmerleşme moleküler kontrolünü anlamak için, in vitro deneylerde iyi preadipositlerden oldukça uyumsuz gerçekleşir farklılaşması olarak uygun ve yerinde 15 hücreleri tespit etmek zordur. Adiposit geliştirme çalışmaları, şimdiye kadar bu tür 3T3-L1, 3T3-F442A veya HIB1 gibi hücre soyları üzerine esas olarak gösterilmiş olsa da, bu hücre hatları bej hücre moleküler imza eksikliği görülmektedir. Diğer taraftan, derialtı WAT izole birincil adipositler süreç yeniden özetlemek için büyük olasılıklaBir hücre özerk moda beyaz yağ esmerleşme s. Burada yağ dokularından stromal-vasküler fraksiyonun etkili izolasyonu için ve PPARy agonistleri yanıt olarak beyaz yağ kahverengileşme indüklenmesi için bir protokol sağlar. Rosiglitazon, bu hücrelerde esmerleşmenin özellikle etkili bir aracı olduğu gösterilmiştir. 16. Daha önce de belirtildiği gibi, bu hücresel sistem bej / brite hücrelerinin gelişimini incelemek için güvenilir bir hücresel sistem hizmet etmek için de kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Sindirim Orta hazırlayın
Doku başına 5 fare (yaklaşık 1 ml / 1 g yağ dokusu) başına 5 ml olun.
- Sindirim enzimleri tartılır:
- Collaginase D: 1.5 u / ml (1108874103, 1 g, Roche, 70334223)
- Dispase II: 2.4 u / ml (04942078001, 0,980 mg / lyo, Roche, 11466200) - 25 ml PBS ekleyin ve çözünmesi için iyice karıştırın
- 10 mM nihai bir konsantrasyonda doku sindirim hemen önce CaCI2 eklemek
2. Fare dan Yağ Dokusu teşrih
- Diseksiyon çok dikkatli yapılmalıdır, ve hemen fareler sonra (6-8 haftalık) kurban edilir. Açmadan önce fare kürk üzerine püskürtülür etanol ile steril çalışın. Temiz PBS, ayrı interskapular BAT ve subkutan kasık WAT doğrudan doku yerleştirin.
- Interskapular BAT için: kadar karşı karşıya arka yerleştirilen fare sırt ve boyun için tüm yol boyunca açık kesti. Kahverengiadipoz doku doğru omuzlar (interskapular) arasındaki deri altında bulunabilir. BAT iki lobu, şeklindeki kelebek olarak görülebilir. BAT kapsayan beyaz yağ ince bir tabaka dikkatlice çıkarılması gerekmektedir.
- Subkutan WAT (inguinal WAT) için: cilt kaldırmak. Kasık WAT içinde testis karşı uyluk ve aşağı, hemen hemen arkasında ve yanında başlangıç olacak, her iki tarafta da deri altına direkt olarak bulunur.
3. Yağ Dokusu Kes ve Digest
- Çabuk saç, iskelet kası ve doku kesitlerinde gelen bağ dokusu gibi, tüm kontaminasyonu temizlemek.
- PBS ile diseksiyon orta sulandırmak ve kuru bir tabağa yerleştirin değil kağıt üzerinde hızla doku kurulayın.
- Sindirim orta (ön sindirime CaCI2 eklenir) ve küçük parçalar halinde doku kıyma ekleyin. 5 ml'lik pipet ve aşağı yukarı pipetleme tarafından çok iyi karıştırın. Sindirim m geri kalanı ile 50 ml tüp içinde kıyılmış doku aktarınedium, aşağı yukarı pipetleme ve daha da karıştırın.
- Digest 37 ° C 40-50 dakika için 150 rpm'de sabit ajitasyon. Sindirim iyi gidiyor ve aşırı-sindirim önlemek için emin olmak için her 10-15 dakika kontrol edin.
Not: Doğru sindirim, orta ve zaman önemlidir. Doku de sindirilmesi gerekir, ama aşırı sindirim hücrelerine zarar verebilir.
4. Filtre Hücre Süspansiyon
- 5 ml tam orta (DMEM/F12 içeren% 10 FPS ve P / S) ekleyerek sindirim durdurun. Hücreler hemen hemen tamamen homojen olması gerekir. Pipetleme ile iyice karıştırın.
- 10 dakika boyunca 700 xg'de santrifüjleyin.
- SVF şu anda, tüpün altına bir kahverengimsi bir pelet olarak görülebilir. Üst ve sıvı tabaka çoğu üzerinde yağlı olgun adiposit tabaka aspire - pelet tutmak ve 10 ml tam bir ortam içinde çözülür. İyice karıştırın.
- Yeni bir 50 üzerinde bir hücre süzgeç (50-70 mikron çaplı) yerleştirin ml tüp ve hücre süspansiyonu filtre.
5. Plaka Hücreler
- 10 dakika boyunca 700 xg'de 15 ml tüp ve santrifüj hücre süspansiyonu aktarın.
- 10 ml tam bir ortam içinde ortam aspire ve yeniden askıya pelet. Pipet ve iyi karıştırın.
- Ihtiyaç kaç tabak tahmin. Bu değişiklik ve topak boyutuna bağlı olarak değişebilir. Genel bir kural inguinal WAT için 5 fareler ve BAT için bir 10 cm plaka 10 cm tabak 2'dir.
- Tam orta kollajen kaplı yemekleri Tabak hücreleri (Ar-Ge)
- 1-2 saat hücreleri, aspirat orta kaplama sonra, iki kez PBS ile yıkayın ve taze orta ekleyin. Bu kırmızı kan hücreleri, bağışıklık hücreleri ve diğer kirleticiler kaldırmak bu adım önemlidir.
6. Hücreler farklılaştırın
- Bakım ve indüksiyon ortamlar olun.
Bakım orta
Eklenen orta tamamlayın:
ent "> İnsülin, nihai kons. 5 ug / ml (5 mg / ml stok, pH 2.5 asitlendirilmiş su hazırlamak için 10 ml H2O içindeki asetik asit *** 100 ul. asitlendirilmiş su içinde insülin çözülür. deposu stok itibariyle -20 ° C)3,3 ',5 triiodo-L-thyronine (T3), son kons. 1 nM (10 uM stok, *** 1N NaOH T3 çözülür ve 10 uM stok yapmak için orta ekleyin. Sigma kedi # T-2877)
4 ° C arasında, bir hafta için iyi
İndüksiyon orta
Aşağıdaki bileşikler ihtiva eden bakım ortamı:
İndometazin, son kons. 125 uM (etanol 0.125 M stok, Sigma kedi # I-7378). Indometasin 60 ısıtılması gerekir ° C'de eritildi gerekir.
Deksametazon, son kons. 2 ug / ml (etanol içinde 2 mg / ml çorap, Sigma cat # D-1756)
3-izobütil-1-metilksantin (IBMX), nihai kons. 0.5 mM (DMSO 0.25 M stok, Sigma kedi # I-5879)
Rosiglitazon, son kons. 0.5 uM(DMSO içinde 10 mM stok, Sigma kedi # R-2408)
Not: Her zaman orta taze indüksiyon olun.
- Tam orta 95-97% izdiham (konfluent ama çok dolu değil) birincil adipositler büyümek
- Indüksiyon orta (gün 0) düzenli komple orta değiştirme
- 48 saat (2 gün) sonra, rosiglitazon (0.5 uM) ile bakım ve orta orta değiştirin
- Ek 48 saat (günde 4) sonra ek 2-3 gün rosiglitazon ile taze bakım ortamı (1 uM) değiştirebilirsiniz. 6-7 gün indüksiyon orta ekledikten sonra, hücreler tamamen yağ hücrelerinin olgunlaşması için farklılaştığı ve yağ damlacıkları ile dolu. Damlacıklar indüksiyon 3-4 gün sonra etrafında görünecektir.
Not: Değişim orta hücreleri tamamen farklılaşmış olan 2-3 gün kadar.
Hücreler artık hasat ve Ucp1 ve Othe mRNA edilebilirr kahverengi adiposit-özgü genler qRT-PCR yöntemi ile ölçülebilir. Western blot proteinleri tespit etmek için kullanılacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Birincil adipositlerin Browning mRNA Ucp1 ifade ve qRT-PCR ile diğer kahverengi yağ-spesifik veya seçici genler ölçerek erişilebilir. Şekil 1'de Sunan inguinal WAT-kökenli birincil adipositlerde gen ekspresyonu veridir. Hücreler, sırasıyla 50 nM ve 500 nM de rosiglitazon iki farklı dozda varlığında ayırt etmek için oluşturuldu. Hücrelerinin bir alt kümesi, hasattan önce 4 saat boyunca 10 uM forskolin ile de muamele edilmiştir. Bu hücrelerde siklik-AMP (cAMP) teşvik ve Ucp1 ekspresyonunu içeren termojenik gen programını aktive edecek.
Şekil 1A'da gösterildiği gibi, rosiglitazon sağlam Ucp1 mRNA ekspresyonu indüklenen. Forskolin tedavisi (cAMP) daha rosiglitazon indüklenen UCP1 ekspresyonu artar. Başka kahverengi yağ seçici gen, Cidea ifade de sağlam bir doza bağımlı (Şekil 1B) rosiglitazon ile oluşturuldu. <em> Fabp4 PPARy ve kahverengi yağ ve beyaz yağ hem bir adipojenik marker doğrudan bir hedeftir. Şekil 1C 'de gösterildiği gibi, rosiglitazon ile tedavi edildiklerinde, Fabp4 ifade da artmıştır. Ucp1 ve Cidea ifadesinin indüksiyonu hala Ucp1 ve Cidea ve mRNA düzeyleri Fabp4 (Şekil 1D ve E) olanlara normalize edildi bile önemli olduğu için bu esmerleşme efekti, per se adipogenesis bir donanıma sadece nedeniyle değildi.
UCP1 artan protein seviyede olduğunu teyit etmek için, Western blot yapılmalıdır. Şekil 2'de, rosiglitazon gibi yüksek bir dozda (500 nM), sağlam hücrelerdeki protein UCP1 artmıştır. Önemli olarak, daha önceden olduğu gibi, 16 yaşında. Ohno ve diğ gösterildiği rosiglitazon-indüklenebilir bej hücreler cAMP uyarımı, bir importa yanıt olarak yüksek toplam ve bağlantısız oksijen tüketimi gösterdikahverengi adipositler / bej hücrelerin nt fonksiyonel özellikleri.
Şekil 1. Ucp1 (A) ve Cidea (B) dahil olmak üzere, kahverengi yağ-seçici genlerin indüksiyon gösteren kantitatif gerçek-zamanlı PCR (qRT-PCR). Bir adipojenik işaretleyici Fabp4 İfade aynı zamanda (C) gösterilir. Belirtildiği yerlerde, hücreleri hasattan önce dört saat boyunca cAMP (10 mcM az forskolin) ile tedavi edildi. Toplam RNA, TRIzol (Invitrogen) kullanılarak farklılaşmış hücreler elde edildi. Ters transkripsiyon, bir cDNA ters kopyalama kiti (iScript, Applied Biosystems) kullanılarak ve qRT-PCR, bir ABI ViiA7 makinesi kullanılarak SYBR yeşil floresan boya ile çiftleri olarak yapılmıştır yapıldı. Bir referans gen ve primer dizileri Tablo 1'de verilmiştir gibi TATA-bağlayıcı protein (TBP) görev. Rosiglitazon kahverengi-select indüklenenive genler Ucp1 (D) ve bir adipojenik işaretleyici gen Fabp4 ile normalleştirme sonra Cidea (E).
Şekil 2. 50 nM ve 500 nM arasında dozlarda, rosiglitazon ile tedavi edilen kasık primer hücrelerde UCP1 protein seviyeleri, Western blot. Toplam hücre lizatları izole edilir ve Western blottings uygulanmıştır. UCP1 antikor (Abcam) Western blot için kullanılmıştır.
| Gen | Tür | İleri astar | Astar Ters |
| Fabp4 | fare | ACACCGAGATTTCCTTCAAACTG | CCATCTAGGGTTATGATGCTCTTCA |
| Cidea | fare | ATCACAACTGGCCTGGTTACG | TACTACCCGGTGTCCATTTCT |
| Tbp | fare | ACCCTTCACCAATGACTCCTATG | TGACTGCAGCAAATCGCTTGG |
| Ucp1 | fare | CACCTTCCCGCTGGACACT | CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG |
Tablo 1. Gerçek zamanlı qPCR analiz için primer dizileri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada farelerde primer kültürlerinde adipositlerde bej / brite hücrelerinin gelişimini incelemek için güvenilir bir hücresel sistem sunuyoruz. Gibi çeşitli mevcut ölümsüzleştirilmiş hücre soyları ile karşılaştırıldığında, bu sistem, in vivo beyaz yağ kahverengileşme ile geliştirilmiş İlgiye sunmak için olasıdır.
Bu birincil adipositlerin çalışmanın bazı avantajlar sunuyor olsa da, orada da düşünülmesi gereken önemli bazı sınırlamalar ve endişeleri var. İlk olarak, bu sistem, hücre farklılaşması üzerinde etki son derece bağımlıdır. Bu tür Ucp1 ve Cidea gibi kahverengi yağ-seçici genlerin ekspresyonu, özellikle farklılaşma bağlıdır. Örneğin, PPARy agonistleri ve BMP7 da bu nedenle, adipogenesis artırmak, "esmerleşme" etkileri oldukça benzer farklılaşma derecesine sahip hücreler erişilebilir olması gerekmektedir. Alternatif olarak, yağ-seçici kahverengi ifade normalize, Şekiller 1B ve E de gösterilenBu tür Fabp4 gibi adipogenesis işaretleyici gen o sahip genler yararlı olabilir. İkinci olarak, fareler yaşına önemlidir. Bu, belki de mümkün olduğu kadar çok hücre elde etmek için büyük fareler kullanmak için cazip olabilir, ancak yaşla birlikte farklılaşma düşüşler gibi. Olabilir Böyle soğuğa maruz kalma, obezite, insülin direnci veya yaşlanması gibi iç ve dış yardımlar bu kültür sistemi kullanarak bu hücre tipi yayılması, kendini yenileme ve farklılaşma kapasitesi nasıl etkilediğini incelemek ilginç olurdu. Bizim durumumuzda, tipi C57BL/6J ve farelerin uygun yaş 6-8 hafta arasındadır. Üçüncü olarak, primer hücrelerde genel olarak daha duyarlı ve ölümsüzleştirdi adiposit hatları daha kırılgandır. BAT veya subkutan WAT gelen preadipositlerden viseral WAT gelenler daha çoğalmasını ve farklılaşmasını daha iyi kapasiteye sahip olmalarına rağmen, bazı pasajlar sonra farklılaşma kapasitesi kaybetmek eğilimindedir. Biz normalde 3 pasajlar aşmaması diferansiyasyonunu indükler.
Başka impordikkate tant boy stromal-vasküler fraksiyon heterojen bir hücre popülasyonu olmasıdır. Bu protokolü biz preadipositlerden ve PPARy agonisti rosiglitazon varlığında bir kahverengi yağ-seçici genetik programı açmak için yeteneklerini odaklanmak. Yakın tarihli bir çalışmada karın WAT içinde PDGFRA-pozitif bi-güçlü ataları vivo 17 beta-adrenerjik uyarımın kahverengi adipositler yol verdiğini göstermiştir. Bununla birlikte, kronik PPARy agonistinin tedaviye yanıt olarak ortaya çıkan bej / brite hücre kökenli gerçek belirsiz kalmaktadır. Tartışma aktif olmuştur ve araştırmacılar bu temel soru ile meşgul olan; ilişkide kahverengi preadipositlerden yayılması yoluyla veya olgun beyaz adipositler 18,19 dan transdiferansiasyon sayesinde gelişmiş beyaz-kahverengi yağ dönüşüm yoluyla beyaz yağ esmerleşme vardır.
Rosiglitazon in vitro beyaz yağ kahverengileşme indüklediği bilinmektedir vivo 20-26 yılında. İlginç bir şekilde, sentetik agonistleri tarafından PPARy aktivasyonu, beyaz yağ kahverengileşme neden olabilir ancak, beyaz adipositlerde PPARy ekspresyonu 27 yeterli değildir. Daha önce PPARy agonist kaynaklı esmerleşme etki PRDM16 16 protein stabilizasyonu ile kısmen aracılık ettiğini göstermiştir. Bundan dolayı, küçük bir bileşik veya PRDM16 protein stabilize etmek endojen moleküller, özellikle beyaz yağ kahverengileşme teşvik etmek mümkün olabilir. Mevcut yöntem, obesite ve diyabet tedavisi için yeni bir terapötik müdahale neden olabilir bu tür faktörlerin tanımlanması için sağlam ve güvenilir bir deneysel sistem sağlamaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.
Acknowledgments
Biz tartışma, teknik yardım ve el yazması üzerinde editoryal yardım için Haruya Ohno, Kosaku Shinoda, Louis Sharp, Emi Tomoda ve Lauren Ruiz ederim. Bu çalışma Atılım Biyomedikal Araştırma ve Asubio Ecz Inc için Programı SKULA için NIH (DK087853), hibe Kopenhag ve AB 7.ÇP Proje Diabat (SAĞLIK-F2 Üniversitesi'nden HİSSE doktora bursları ile desteklenmiştir tarafından desteklenmiştir Lise Madsen ve Karsten Kristiansen için -2.011-278373). Biz de DERC merkezi hibe (NIH P30 DK063720) kabul etmektesiniz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
- Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects. American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).
- Rothwell, N. J., Stock, M. J. Combined effects of cafeteria and tube-feeding on energy balance in the rat. The Proceedings of the Nutrition Society. 38, 5A (1979).
- Cannon, B., Nedergaard, J. Brown adipose tissue: function and physiological significance. Physiological Reviews. 84, 277-359 (2004).
- Cypess, A. M., et al. Identification and importance of brown adipose tissue in adult humans. The New England Journal of Medicine. 360, 1509-1517 (2009).
- van Marken Lichtenbelt, W. D., et al. Cold-activated brown adipose tissue in healthy men. The New England Journal of Medicine. 360, 1500-1508 (2009).
- Virtanen, K. A., et al. Functional brown adipose tissue in healthy adults. The New England Journal of Medicine. 360, 1518-1525 (2009).
- Zingaretti, M. C., et al. The presence of UCP1 demonstrates that metabolically active adipose tissue in the neck of adult humans truly represents brown adipose tissue. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 23, 3113-3120 (2009).
- Saito, M., et al. High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans: effects of cold exposure and adiposity. Diabetes. 58, 1526-1531 (2009).
- Seale, P., et al. PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch. Nature. 454, 961-967 (2008).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2010).
- Coulter, A. A., Bearden, C. M., Liu, X., Koza, R. A., Kozak, L. P. Dietary fat interacts with QTLs controlling induction of Pgc-1 alpha and Ucp1 during conversion of white to brown fat. Physiological Genomics. 14, 139-147 (2003).
- Klingenspor, M. Cold-induced recruitment of brown adipose tissue thermogenesis. Experimental Physiology. 88, 141-148 (2003).
- Cinti, S. The adipose organ. Prostaglandins, leukotrienes, and essential fatty acids. 73, 9-15 (1016).
- Ghorbani, M., Himms-Hagen, J. Appearance of brown adipocytes in white adipose tissue during CL 316,243-induced reversal of obesity and diabetes in Zucker fa/fa rats. International Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders: Journal of the International Association for the Study of Obesity. 21, 465-475 (1997).
- Hansen, J. B., Kristiansen, K. Regulatory circuits controlling white versus brown adipocyte differentiation. The Biochemical Journal. 398, 153-168 (2006).
- Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. PPARy agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein. Cell metabolism. 15, 395-404 (2012).
- Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding. Cell Metabolism. 15, 480-491 (2012).
- Cinti, S. Transdifferentiation properties of adipocytes in the adipose organ. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 297, E977-E986 (2009).
- Barbatelli, G., et al. The emergence of cold-induced brown adipocytes in mouse white fat depots is determined predominantly by white to brown adipocyte transdifferentiation. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 298, E1244-E1253 (2010).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2009).
- Rong, J. X., et al. Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone. Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).
- Wilson-Fritch, L., et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone. The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).
- Sell, H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice. Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).
- Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice. Diabetes. 49, 759-767 (2000).
- Vernochet, C., et al. C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists. Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).
- Tai, T. A., et al. Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).
- Sugii, S., et al. PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).
