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Medicine

मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा intraluminal की चूहा स्ट्रोक मॉडल में प्रमस्तिष्क छिड़काव निगरानी के लिए अनुकूलित प्रणाली

Published: February 17, 2013 doi: 10.3791/50214

Summary

सेरेब्रल छिड़काव निगरानी ischemic स्ट्रोक मॉडल में सटीकता में सुधार करने के लिए प्रदर्शन किया गया. तकनीकी कठिनाइयों अक्सर cerebrovascular अनुसंधान के लिए यह आवश्यक उपकरण के उपयोग की सीमा. इस वीडियो में, एक अनुकूलित प्रणाली के लिए एक एकल या बहु साइट hemodynamic निगरानी intraluminal बीच चूहों में मस्तिष्क धमनी रोड़ा के दौरान प्राप्त करने के लिए दिखाया गया है.

Abstract

पूर्व नैदानिक ​​स्ट्रोक अनुसंधान के translational क्षमता प्रयोगात्मक मॉडलिंग की शुद्धता पर निर्भर करता है. तीव्र ischemic स्ट्रोक के पशु मॉडल में सेरेब्रल छिड़काव निगरानी के लिए सफल धमनी रोड़ा की पुष्टि करने के लिए और subarachnoid नकसीर बाहर करने के लिए अनुमति देता है. सेरेब्रल छिड़काव निगरानी भी intracranial संपार्श्विक संचलन, जो स्ट्रोक परिणाम की एक शक्तिशाली निर्धारक और एक संभव उपचार के लक्ष्य के रूप में उभर रहा है अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. प्रयोगात्मक मस्तिष्क ischemia के लिए मौजूदा दिशानिर्देशों के हिस्से के रूप में एक लेजर डॉपलर छिड़काव निगरानी के एक मान्यता प्राप्त भूमिका के बावजूद, तकनीकी कठिनाइयों का एक संख्या है कि इसके व्यापक उपयोग की सीमा मौजूद हैं. प्रमुख मुद्दों में से एक गहरे पैठ लेजर डॉपलर जांच के लिए एक सुरक्षित और लंबे समय तक पशु खोपड़ी को अनुलग्नक प्राप्त है. इस वीडियो में, हम क्षणिक बीच चूहे में intraluminal रेशा द्वारा मस्तिष्क धमनी रोड़ा के दौरान हमारे मस्तिष्क छिड़काव की निगरानी के लिए अनुकूलित प्रणाली दिखा. हम मैं विकसितn-घर जुड़वां फाइबर लेजर (गहरे पैठ) डॉपलर जांच, जो बहु साइट की निगरानी की अनुमति अगर जरूरत के लिए एक कस्टम बनाया धारक प्राप्त करने के लिए एक सरल विधि. प्रमस्तिष्क छिड़काव की एक सतत और लंबे समय तक निगरानी आसानी बरकरार खोपड़ी पर प्राप्त किया जा सकता है.

Introduction

Hemodynamic स्ट्रोक pathophysiology और चिकित्सा को प्रभावित करने वाले कारकों पर translational अनुसंधान के लिए लागू किया जाना चाहिए, के बाद से इस महत्वपूर्ण मुद्दे अक्सर विडंबना बुनियादी अनुसंधान 1 अध्ययन द्वारा उपेक्षित है.

सेरेब्रल छिड़काव निगरानी सटीक ischemic स्ट्रोक 2 मॉडलिंग के लिए जरूरी है, लेकिन underused, उपकरण है. धमनी पोत और subarachnoid तीन नकसीर का रोड़ा अपवर्जन की पुष्टि के अलावा, लगातार प्रमस्तिष्क छिड़काव निगरानी और छिड़काव घाटा, intracranial संपार्श्विक वाहिकाओं के कार्यात्मक स्थिति और नए चिकित्सकीय दृष्टिकोण से hemodynamic प्रभाव की डिग्री और स्थिरता के बारे में उपयोगी डेटा उपलब्ध करा सकता है.

हमारे समूह से हाल ही में एक अध्ययन से संकेत मिलता है कि बहु साइट निगरानी hemodynamic intracranial संपार्श्विक संचलन का आकलन और infarct आकार और कार्यात्मक घाटा 4 की भविष्यवाणी कर सकते हैं करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इन प्रयोगात्मक निष्कर्ष consiनैदानिक ​​अध्ययन से पता चला है कि मस्तिष्क संपार्श्विक संचलन के कार्य प्रदर्शन ischemic स्ट्रोक 5 रोगियों, 6 में नैदानिक ​​परिणाम के भविष्य कहनेवाला है के साथ स्टेंट. इस कारण से, मस्तिष्क collaterals ischemic स्ट्रोक 7 के तीव्र चरण में एक संभावित चिकित्सा के लक्ष्य के रूप में वकालत की है.

लेजर डॉपलर उपकरणों (एलडी) सबसे आम प्रयोगात्मक ischemic स्ट्रोक और उनके उपयोग के इस 8 विषय पर हाल ही में दिशा निर्देश द्वारा सिफारिश की है में मस्तिष्क छिड़काव को मापने के उपकरण का इस्तेमाल किया हैं. LD उपकरणों उपाय एक छोटे cortical मात्रा में microvascular छिड़काव, फाइबर जुदाई की चौड़ाई पर निर्भर होने के संकेत दर्ज की गहराई जुड़वां फाइबर LD जांच के साथ एक गहरी एकल फाइबर LD 9 जांच की तुलना में प्रवेश की अनुमति है. रक्त प्रवाह मान मनमाना छिड़काव (पु) इकाइयों जो पूर्ण मस्तिष्क में रक्त के प्रवाह के बजाय रिश्तेदार संकेत मिलता है के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. पु के अंशांकन आमतौर पर usin किया जाता हैछ गतिशीलता मानकों, निर्माता के निर्देशों के अनुसार. LD flowmetry एक निरंतर गतिशील है और एक ही सत्र के भीतर मात्रात्मक डेटा पीढ़ी के निगरानी की अनुमति देता है.

तकनीकी समस्या है कि वर्तमान LD के उपयोग को सीमित करने के अलावा, एक प्रमुख मुद्दा एक गहरे पैठ लेजर डॉपलर जांच के लिए एक सुरक्षित और लंबे समय तक पशु खोपड़ी को अनुलग्नक प्राप्त है. यह लंबे समय तक निगरानी के लिए आवश्यक है और अगर कई जांच अलग मस्तिष्क धमनी प्रदेशों के लिए उपयोग किया जाता है, के रूप में हम हमारी प्रयोगशाला में प्रदर्शन कर रहे हैं.

अगर जांच गड़गड़ाहट छेद या कपाल शिकंजा का उपयोग कर खोपड़ी से जुड़े होते हैं विशेष रूप से लंबे समय तक शल्य चिकित्सा के समय की आवश्यकता है, जबकि गरीब संकेत और unsecure लगाव होता है, यदि एकल फाइबर (कम प्रवेश) LD जांच सरल सर्जिकल गोंद से खोपड़ी से जुड़े होते हैं. ट्विन फाइबर (गहरे पैठ) LD जांच एक उच्च और अधिक सुसंगत संकेत प्रदान करते हैं, लेकिन वे फाइबर एकल जांच की तुलना में बड़े होते हैं और पर नहीं हो सकतासर्जिकल गोंद का उपयोग केवल खोपड़ी tached.

इस वीडियो में, हम क्षणिक बीच चूहे में intraluminal रेशा द्वारा मस्तिष्क धमनी रोड़ा के दौरान हमारे मस्तिष्क छिड़काव की निगरानी के लिए अनुकूलित प्रणाली दिखा. हम एक सरल विधि का वर्णन करने के लिए एक कुशल, कस्टम बनाया, एक या कई जुड़वां फाइबर (पैठ गहरी) के लिए कम लागत धारक LD जांच बरकरार खोपड़ी पर प्रमस्तिष्क छिड़काव के लंबे समय तक निगरानी के लिए इस्तेमाल किया जा प्राप्त.

चूहे में क्षणिक MCAO के लिए शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया Uluç और 10 सहकर्मियों द्वारा वीडियो लेख में देखा जा सकता है और इस वीडियो में दिखाया गया है नहीं.

Protocol

1. कैसे जांच धारक (एकल साइट या बहु साइट)

  1. आवश्यक सामग्री प्राकृतिक रबर, छोटे प्लास्टिक की नलियों और एक धातु ख़ंजर हैं. जांच धारक जानवर के आकार, और लेजर डॉपलर जांच की संख्या और आकार, और मस्तिष्क संवहनी क्षेत्र है जो निगरानी करने की आवश्यकता के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.
  2. जरूरत आकार (लगभग 10 मिमी x एक 300 छ चूहे के लिए 10 मिमी) के प्राकृतिक रबर कट.
  3. (ओं) जांच और प्राकृतिक रबर पर शीर्षस्थान पदों को चिह्नित करने के लिए, वांछित stereotaxic निर्देशांक के अनुसार, मध्यम प्रमस्तिष्क धमनी रोड़ा के लिए, ischemic कोर के लिए ठेठ निर्देशांक शीर्षस्थान -1 मिमी, 5 मिमी पार्श्व में की उम्मीद कर रहे हैं midline, एक परिधीय इस्कीमिक borderzone क्षेत्र के लिए, उम्मीद निर्देशांक शीर्षस्थान 2 मिमी, 2 मिमी midline पार्श्व में किया जा सकता है.
  4. बहुत स्पष्ट रूप से एक एक्स के साथ शीर्षस्थान की स्थिति के निशान, इस खोपड़ी से जांच धारक संलग्न करने के लिए मील का पत्थर है. </ Li>
  5. एक छोटे से प्लास्टिक ट्यूब (इसके आकार के लिए जांच के आकार के मैच की जरूरत है) में ख़ंजर डालें.
  6. प्राकृतिक रबर में एक बिंदु है जहां जांच करने के लिए तैनात किया जाना है पर ख़ंजर डालें, रबर में ख़ंजर धक्का जब तक रबर प्लास्टिक ट्यूब में भी किया गया है डाला.
  7. ख़ंजर वापस ले लें.
  8. यदि एक से अधिक जांच की जरूरत है, दोहराने अन्य पदों के लिए जांच 1.5-1.7 कदम.
  9. कई जांच के लिए वैकल्पिक: प्लास्टिक की नलियों के चारों ओर एक टेप लपेट जांच की बेहतर स्थिरीकरण सुनिश्चित.
  10. वैकल्पिक: रासायनिक बंध्याकरण कई जांच धारकों के भविष्य के उपयोग के लिए करते हैं.

2. Presurgical तैयारी

  1. MCAO स्ट्रोक मॉडल आम तौर पर एक अस्तित्व सर्जरी के रूप में किया जाता है. इस मामले में, के रूप में हमारे वीडियो में दिखाया गया है (अस्तित्व समय के 24 घंटे के बाद सर्जरी), सर्जन निष्फल उपकरणों और आपूर्ति के साथ एक सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग करता है.
  2. Anesthetize isoflurane के साथ चूहे (3% induction चरण, 1.5% रखरखाव).
  3. ऑपरेटिंग मेज पर प्रवण स्थिति में चूहे रखें.
  4. धीरे से चूहे के सिर दाढ़ी.
  5. एक धुंध पैड के लिए एक एंटीसेप्टिक समाधान लागू करते हैं और त्वचा को कीटाणुरहित.
  6. 2% प्रशासन lidocaine subcutaneously कपाल क्षेत्र में 5 / किलो मिलीग्राम.

3. जांच पोजिशनिंग और ओवर बरकरार खोपड़ी सुरक्षित

  1. एक सही paramedian चीरा त्वचा (सही MCAO के लिए) और कपाल प्रावरणी (आकृति अधिकरोटितंतुप्रसार) तक पहुँचने के लिए चमड़े के नीचे ऊतक काटना.
  2. कपाल प्रावरणी में एक सही paramedian चीरा और कुंद विच्छेदन प्रदर्शन खोपड़ी की हड्डी तक पहुँचने, एक खोपड़ी की हड्डी क्षेत्र है जो जांच धारक के आवेदन के लिए काफी बड़ी है तैयार.
  3. कृपया ध्यान दें: ड्रिलिंग या thinning हड्डी के लिए कोई जरूरत नहीं है.
  4. Merbromin को शुद्ध और खोपड़ी की सतह सूखी समाधान को लागू करें.
  5. एक बाल ठंडी हवा के लिए निर्धारित ड्रायर खोपड़ी सुखाने सतह में तेजी लाने का प्रयोग करें. इस बिंदु पर, कपाल sutures और शीर्षस्थान स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं.
  6. बाँझ कैंची से काटने के किनारों से जांच धारक अनुकूलित.
  7. जांच धारक नीचे सतह सर्जिकल गोंद (Cyanoacrylate, पशु चिकित्सा मंजूरी दे दी है) की एक छोटी मात्रा लागू, ध्यान से प्लास्टिक की नलियों के अवर खोलने से परहेज (कृपया ध्यान दें: अगर गोंद का एक महत्वपूर्ण राशि जांच के ऑप्टिकल सतह और के बीच रहता है खोपड़ी, यह एक संकेत कम उत्पादन और कई का उपयोग करता है के बाद जांच को नुकसान हो सकता है हो सकता है).
  8. जांच खोपड़ी सतह धारक लागू, ध्यान एक्स मील का पत्थर के साथ शीर्षस्थान मिलान. जांच धारक पर कोमल दबाव लागू.
  9. एक बाल ठंडी हवा के लिए निर्धारित ड्रायर सर्जिकल गोंद सुखाने में तेजी लाने का प्रयोग करें.
  10. जांच धारक और पशु के सिर के चारों ओर एक शल्य धागा बांधने के द्वारा जांच धारक सुरक्षित, शल्य धागा mandibula से अधिक की स्थिति के लिए सावधान हो सकता है, अवअधोहनुज क्षेत्र और वें से परहेजई गर्दन.
  11. वैकल्पिक: एक ऑप्टिकल जेल (उदाहरण के लिए एक आम अल्ट्रासाउंड या electrocardiography जेल) के साथ जांच धारक के प्लास्टिक ट्यूब (ओं) भरने, यह LD संकेत की गुणवत्ता में वृद्धि होगी.
  12. जगह जांच धारक (ओं) में जांच और LD flowmeter के वास्तविक पढ़ने सत्यापित. निर्माता के निर्देशों के अनुसार LD flowmeter का प्रयोग करें.
  13. सुरक्षित (ओं) जांच जानवर के सिर के चारों ओर उन्हें बांधने के लिए mandibula पर शल्य धागा स्थिति, अवअधोहनुज क्षेत्र और गर्दन से परहेज करने के लिए सावधान रहना.

4. MCAO प्रमस्तिष्क छिड़काव के दौरान निगरानी

  1. लापरवाह स्थिति में चूहे प्लेस, ध्यान (ओं) को जांच या जांच धारक पर खिचाई का बलों से बचने के लिए.
  2. प्रमस्तिष्क छिड़काव निगरानी शुरू MCAO दौरान.

5. जांच से हटाना (एस) और जांच धारक

  1. जांच (ओं), जांच धारक और पशु के सिर के चारों ओर sutures कट.
  2. धीरे जांच धारक के प्राकृतिक रबर आधार पर चारों ओर कपाल मुलायम ऊतकों और त्वचा के टुकड़े करना कुंद.
  3. जांच धारक निकालें.
  4. खोपड़ी की सतह के लिए एक एंटीसेप्टिक समाधान लागू.
  5. कपाल त्वचा सीवन.

6. पोस्ट ऑपरेटिव केयर

  1. खारा subcutaneously निर्जलीकरण को रोकने के लिए और गैसीय संज्ञाहरण रोकने के बाद एक हीटिंग पैड का उपयोग पशु को गर्म रखने के लिए समाधान के 2.5 मिलीलीटर प्रशासन.
  2. अस्तित्व सर्जरी के लिए: ketoprofen 4 मिलीग्राम / किग्रा subcutaneously के साथ रिक्तिपूर्व analgesia प्रदान और 12 घंटे बाद operatively पर एक ही खुराक दोहराना
  3. हमारे प्रयोगात्मक शर्तों के तहत, इच्छामृत्यु के 24 घंटे के बाद सर्जरी में सीओ 2 साँस लेना द्वारा प्रदर्शन किया गया था.

Representative Results

क्षणिक MCAO (60 मिनट) बाह्य मन्या धमनी में एक रेशा सिलिकॉन लेपित डालने के द्वारा प्रेरित किया गया था. रेशा तो आंतरिक मन्या धमनी के टर्मिनल अंत के माध्यम से धक्का दिया गया था LD निगरानी के तहत एमसीए के मूल. आम मन्या धमनी और pterygopalatin धमनी transiently रेशा के सर्जिकल प्रविष्टि के दौरान occluded थे. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया का एक योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व चित्रा 1A में दिखाया गया है.

दो LD जांच स्थिति के लिए कपाल निर्देशांक अंतर्निहित धमनी क्षेत्र के अनुसार चुने गए हैं. जिलेटिन स्याही छिड़काव (चित्रा 1 बी) के साथ प्रारंभिक प्रयोगों से पता चला है कि इस्कीमिक कोर केंद्रीय एमसीए क्षेत्र (शीर्षस्थान -1 मिमी, midline से 5 मिमी, जांच 1) में होने की उम्मीद है, जबकि जमानत के प्रवाह के बीच borderzone क्षेत्र में होने की उम्मीद है मध्यम और पूर्वकाल मस्तिष्क धमनियों के cortical शाखाओं (शीर्षस्थान 2 मिमी, midline से 2 मिमी, 2 जांच).

सेरेब्रल hemodynamics शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया की पूरी अवधि के दौरान बहु साइट लेजर डॉपलर जांच के दौरान और बाद MCAO (2 चित्रा) यानी पहले, का अध्ययन किया गया था. MCAO दौरान मस्तिष्क छिड़काव घाटा छोटी थी और 2 जांच में परिवर्तनशीलता के एक उच्च डिग्री की तुलना में 1 जांच से पता चला है, इस्कीमिक शर्तों के तहत अंतर - व्यक्तिगत intracranial collaterals के कार्य प्रदर्शन में अंतर का सुझाव दे. साइट - बहु लेजर डॉपलर निगरानी भी समीपस्थ अतिरिक्त कपाल मस्तिष्क धमनियों (आम मन्या धमनी, आंतरिक मन्या धमनी, pterygopalatin धमनी) के रोड़ा के दौरान मस्तिष्क hemodynamic परिवर्तनों का अध्ययन करने की अनुमति देता है.

स्ट्रोक परिणाम reperfusion के बाद 24 घंटे में मूल्यांकन किया गया था रोधगलितांश मात्रा द्वारा, में 19 लगातार Cresyl (चित्रा 3), बैंगनी और गार्सिया कार्यात्मक neuroscore 11 के साथ दाग वर्गों पर गणना की है. विशिष्ट मार्करों asso के लिए immunohistochemistryischemic मस्तिष्क की चोट के साथ ciated प्रदर्शन किया गया था, क्रम में बहु साइट intracranial परिसंचरण से hemodynamic निगरानी neuronal (2 प्रोटीन, MAP2 जुड़े microtubule) के संबंध में और इस्कीमिक penumbra नुकसान (गर्मी झटका प्रोटीन-70, Hsp70) के एक स्थलाकृतिक वितरण प्राप्त करने के लिए (4 चित्रा).

चित्रा 1
चित्रा 1. चूहे में intraluminal MCAO के दौरान सेरेब्रल छिड़काव निगरानी. क्षणिक MCAO के लिए शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व. एक रेशा सिलिकॉन लेपित बाह्य मन्या धमनी में पेश किया जा रहा है के बाद एमसीए की मूल, रोक देना करने के लिए इस्तेमाल किया गया था और आंतरिक मन्या धमनी के माध्यम से धक्का दिया. समीपस्थ गर्भाशय ग्रीवा धमनियों या तो (बाह्य मन्या धमनी) ligated थे या transiently संस के दौरान occluded (pterygopalatin धमनी और आम मन्या धमनी)dure बी एक प्रतिनिधि मस्तिष्क बाद जिलेटिन स्याही धुंधला हो जाना दिखाया गया है. जिलेटिन स्याही समाधान की Transcardiac छिड़काव ischemia की शुरुआत के बाद 60 मिनट का प्रदर्शन किया गया, reperfusion बिना. सामान्य रूप से मस्तिष्क perfused जिलेटिन स्याही से सना हुआ था और काले दाग वाहिकाओं के साथ भूरे रंग के रूप में दिखाई दिया, जबकि को इस्कीमिक (perfused नहीं) क्षेत्र बेदाग रहे (गुलाबी रंग). दो LD जांच स्थिति के लिए कपाल निर्देशांक दिखाए जाते हैं. 1 जांच = पर्वबिन्दु से -1 मिमी, midline से 5 मिमी, 2 जांच = शीर्षस्थान, midline से 2 मिमी से 2 मिमी.

चित्रा 2
चित्रा 2. सेरेब्रल hemodynamic बहु साइट लेजर डॉपलर जांच का उपयोग रिकॉर्डिंग. एक ठेठ hemodynamic पैटर्न जो इस्कीमिक शर्तों के तहत कार्यात्मक सक्रिय intracranial collaterals पता चलता है दिखाया गया है. इस जानवर में, LD tracings एक छोटे से पता चलाएर जांच 2 चैनल में छिड़काव घाटा, दोनों सीसीए रोड़ा और एमसीए रोड़ा के दौरान 1 चैनल, जांच करने के लिए की तुलना में. एमसीए हे = मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा. सीसीए - हे = आम मन्या धमनी रोड़ा. पु = छिड़काव इकाइयों.

चित्रा 3
चित्रा 3. रोधगलितांश मात्रा की गणना के लिए प्रतिनिधि मस्तिष्क वर्गों histological राज्याभिषेक वर्गों (50 सुक्ष्ममापी, n = 250 सुक्ष्ममापी अंतराल के साथ 19, मिमी शीर्षस्थान 2.5 मिमी -3.0) 4% और 0.1% Cresyl बैंगनी साथ दाग paraformaldehyde में तय कर रहे हैं. Infarct ImageJ इमेज प्रोसेसिंग सॉफ्टवेयर, अंतर - hemispheric मस्तिष्क edema कारण विषमताओं के लिए सही मात्रा का उपयोग कर की गणना है, और 3 मिमी में व्यक्त बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहाँ क्लिक करें

"चित्रा चित्रा 4. Neuronal नुकसान और penumbra आणविक मार्कर के प्रतिनिधि लगातार मस्तिष्क वर्गों immunostaining दिखाया गया है, जो Cresyl बैंगनी 0.1% (A) के साथ दाग थे या neuronal नुकसान के मार्कर (2 प्रोटीन, MAP2 जुड़े microtubule, बी) के साथ immunostained और इस्कीमिक penumbra (गर्मी सी), प्रोटीन-70, Hsp70 झटका.

Discussion

हम घर में एक या कई जुड़वां फाइबर (गहरी पैठ) MCAO प्रक्रिया के दौरान चूहों के बरकरार खोपड़ी LD जांच के एक सुरक्षित लगाव के लिए एक सरल और कम लागत वाली प्रणाली विकसित की है. हालांकि जाहिरा तौर पर एक छोटी सी समस्या, खोपड़ी LD जांच की एक विश्वसनीय लगाव प्राप्त करने वास्तव में इस प्रयोगात्मक सेटिंग में एक प्रमुख मुद्दा है, क्योंकि यह एक चिकनी संकेत का पता लगाने और प्रमस्तिष्क छिड़काव की एक सफल निगरानी के लिए शर्त है.

गड़गड़ाहट छेद और हड्डी शिकंजा जैसे आक्रामक प्रक्रियाओं, आमतौर पर शल्य समय लम्बा और अधिक प्रयोगात्मक craniotomy से संबंधित चर परिचय, और इस शोधकर्ताओं को हतोत्साहित और उन्हें LD निगरानी का उपयोग करने से बचना. दूसरी ओर, एकल फाइबर का उपयोग (कम पैठ) जांच, जो पतले और अपेक्षाकृत आसान करने के लिए सीधे खोपड़ी की सतह से चिपके हो, कम गुणवत्ता संकेत देता है और नहीं किया जा सकता मज़बूती से ड्रिलिंग या thinning खोपड़ी के बिना वयस्क चूहों के साथ.

हम सरल और कम लागत वाली सामग्री, प्राकृतिक रबर, प्लास्टिक की नलियों और एक धातु ख़ंजर के रूप में इस्तेमाल किया. कुछ ही मिनटों में एक कस्टम निर्मित जांच धारक का उत्पादन किया जा सकता है और प्रयोगात्मक परिस्थितियों के अनुकूल है. ये जांच धारकों एक या एक से अधिक गहरे पैठ LD जांच इस्कीमिक कोर पर ही गोलार्द्ध में या दो गोलार्द्धों भर में विभिन्न प्रदेशों में धमनी की निगरानी के लिए कई साइट या शास्त्रीय एकल साइट की निगरानी के लिए समायोजित कर सकते हैं. कई जांच धारकों रासायनिक निष्फल, उत्पादन किया जा सकता है और भविष्य में उपयोग के लिए भंडारित किया. पशु चिकित्सा मंजूरी दे दी शल्य गोंद (cyanoacrilate), ठंडी हवा द्वारा त्वरित, चूहा खोपड़ी के बरकरार सतह जांच धारक संलग्न करने के लिए प्रयोग किया जाता है वांछित कपाल निर्देशांक के अनुसार,. अंत में, जांच सेट अप आगे आम sutures द्वारा जगह में सुरक्षित है.

इस LD जांच के समग्र समय सेट अप है, इस तकनीक mastering के बाद 10 मिनट के बारे में है.

जैसा कि मैंने दिखायाऔर परिधीय एमसीए क्षेत्र (एलडी जांच 2: मुख्य रूप से एक खंडच्छायायुक्त क्षेत्र) में: n इस वीडियो में, हम नियमित रूप से केंद्रीय एमसीए क्षेत्र (इस्कीमिक कोर LD 1 जांच) में मस्तिष्क छिड़काव की निगरानी. हम हमारे हाल के एक अध्ययन में पता चला है कि LD 2 जांच (52 ±% 16% एसडी आधारभूत की तुलना में, मतलब) में रक्त प्रवाह परिवर्तन की परिवर्तनशीलता LD 1 जांच (31 ±% 6% एसडी मतलब है, की तुलना में अधिक की तुलना में है ) आधारभूत और स्ट्रोक परिणाम 4 की भविष्यवाणी करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

हम शोधकर्ताओं जो हमारे घर में विकसित प्रणाली का उपयोग करना चाहते हैं के लिए कुछ मुसीबत शूटिंग सलाह प्रदान कर सकता है. प्रयोग की शुरुआत में, बहुत अच्छी तरह से जांच धारक संलग्न करने के लिए समय से पहले सेना की टुकड़ी को रोकने से पहले खोपड़ी की सतह (Merbromin और ठंडी हवा के साथ) सूखी सावधान रहना. इसके अलावा, प्राकृतिक रबर पर गोंद लागू करने के लिए, प्लास्टिक ट्यूब के खुले अंत और LD जांच के ऑप्टिकल सतह के साथ संपर्क से बचने के लिए गरीब संकेत और जांच करने के लिए संभावित नुकसान को रोकने के लिए सुनिश्चित हो. जब जानवर के सिर के चारों ओर सीवन बांधने, सावधान रहना airway बाधा से बचने के क्रम में (इस जबड़े की हड्डी पर सीवन स्थिति से रोका जाता है). स्थिति और सुरक्षा जांच के बाद, नहीं कर्षण जांच केबलों के लिए सावधान रहना जब ग्रीवा सर्जरी के लिए लापरवाह स्थिति में पशु मोड़, यह कदम आम तौर पर दो लोगों, एक जानवर धारण करने वाला व्यक्ति और एक दूसरे जांच केबलों धारण करने वाला व्यक्ति की आवश्यकता होती है और धीरे से उन्हें स्थिति इच्छित स्थान पर. अंत में, जुड़वां फाइबर LD जांच के अंतिम रक्त संदूषण आसानी से सफाई निर्माता द्वारा प्रदान निर्देशों का पालन है.

हमारे मस्तिष्क छिड़काव की निगरानी के लिए अनुकूलित प्रणाली, के रूप में इस वीडियो में दिखाया गया है, एक आसान, और अधिक तेजी से और अधिक विश्वसनीय जांच सेट अप सिस्टम है जो वर्तमान में इस क्षेत्र में व्यावसायिक कंपनियों द्वारा बेचा विकल्प प्रदान कर सकता है. इसके अलावा, हमें विश्वास है कि अन्य शोधकर्ताओं द्वारा इस प्रणाली के उपयोग के संवर्धन में वृद्धि कर सकते हैंप्रयोगात्मक स्ट्रोक क्षेत्र में मस्तिष्क hemodynamics, मस्तिष्क संपार्श्विक चिकित्सा विज्ञान की एक नई पीढ़ी के विकास के लिए अग्रणी के y.

Disclosures

इस वीडियो लेख के उत्पादन के लिए धन लंगर इंस्ट्रूमेंट्स (Axminster, डेवोन, यूके) लिमिटेड, है जो लेजर डॉपलर हमारे प्रयोगात्मक अध्ययन में दिखाया उपकरणों द्वारा प्रदान किया गया.

प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल मिलानो Bicocca विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल पर समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था, प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग (डीएल 116/1992) पर राष्ट्रीय दिशा निर्देशों के अनुसार और पशु प्रयोगों के लिए यूरोपीय संघ के निर्देशक में (2010/63/EU ), इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय से इस परियोजना को लाइसेंस (एन 219/2011-B) के तहत.

Acknowledgments

हम आवाज पर और श्रीमती ऐलेना Pirovano के लिए वीडियो उत्पादन में उसकी सहायता के लिए श्रीमती कैरोलीन Robertson धन्यवाद. इस अध्ययन मिलानो Bicocca विश्वविद्यालय, "Fondo di Ateneo 2011" द्वारा समर्थित किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Equipment
MoorVMS-LDF 2-channel Laser Doppler Monitor Moor Instruments
VP12 probe Moor Instruments
Reagent/Material
Doccol silicon-coated filament size 4-0, diameter with coating 0.39mm Doccol Corporation 403956PK10
Natural rubber, e.g. common pacifiers for newborns Multiple suppliers
Metal stylet, e.g. from spinal needle 18 GA x 90 mm Multiple suppliers
Plastic tubes, e.g. from vein set for infusion 25 GA x 20 mm Multiple suppliers
Nonabsorbable suture, coated, braided silk Multiple suppliers
Cyanoacrylate surgical glue Multiple suppliers
Isoflurane (100% v/v) for veterinary use Multiple suppliers

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा intraluminal की चूहा स्ट्रोक मॉडल में प्रमस्तिष्क छिड़काव निगरानी के लिए अनुकूलित प्रणाली
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Beretta, S., Riva, M., Carone, D., Cuccione, E., Padovano, G., Rodriguez Menendez, V., Pappadá, G. B., Versace, A., Giussani, C., Sganzerla, E. P., Ferrarese, C. Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion. J. Vis. Exp. (72), e50214, doi:10.3791/50214 (2013).More

Beretta, S., Riva, M., Carone, D., Cuccione, E., Padovano, G., Rodriguez Menendez, V., Pappadá, G. B., Versace, A., Giussani, C., Sganzerla, E. P., Ferrarese, C. Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion. J. Vis. Exp. (72), e50214, doi:10.3791/50214 (2013).

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