Summary
Lungen er perfuseres af både systemiske bronkial arterie og pulmonale arterier. I de fleste lunge patologier, er det mindre systemisk vaskulatur, der viser robust neovaskularisering. Ophør af pulmonal blodgennemstrømning fremmer frisk bronkial angiogenese. Vi giver kirurgiske detaljer inducere venstre pulmonal iskæmi, der fremmer bronkial neovaskularisering.
Abstract
Den voksne lunge perfuseres af både systemiske bronchial arterie og hele venøst tilbageløb strømmer gennem de pulmonale arterier. I de fleste lunge patologier, er det den mindre systemisk vaskulatur der opfylder et behov for øget lunge perfusion og viser robust neovaskularisering. Pulmonal vaskulær iskæmi induceret af pulmonal obstruktion har vist sig at føre til hurtig systemisk arteriel angiogenese hos mennesker såvel som i flere dyremodeller. Selv om den histologiske vurdering af tidsforløbet af bronkial arterie proliferation hos rotter omhyggeligt blev beskrevet af Weibel 1, mekanismer ansvarlige for denne organiserede vækst af nye fartøjer er ikke klare. Vi giver kirurgiske detaljer inducere venstre pulmonal iskæmi i rotten, der fører til bronkial neovaskularisering. Kvantificering af omfanget af angiogenese udgør en yderligere udfordring på grund af tilstedeværelsen af de to kar i lungen. Metoderat bestemme funktionelle angiogenese baseret på mærkede mikrokugle injektioner er tilvejebragt.
Introduction
Systemisk angiogenese i lungen er velkendt. Ved sygdomstilstande, såsom astma 2, interstitiel lungefibrose 3, cancer 4, og kronisk pulmonær thromboembolisme 5, den systemiske vaskulatur i og omgiver lunge proliferates og invaderer pulmonal parenkym. Imidlertid dyremodeller for at studere denne differentielle aktivering af den systemiske og ikke den pulmonale cirkulation er få. Måske den mest reproducerbar model af systemisk neovaskularisering i lungen af den voksne pattedyr er den, der forekommer efter induktion af kronisk pulmonal iskæmi. Reaktionen på venstre pulmonal obstruktion i mennesker 5-7, hunde 8, svin 9, får 10, marsvin 11, rotter 1, 12, 13, og mus 14 er den hurtige udbredelse af de bronchiale arterie samt interkostale arterier. De mekanismer, der er ansvarlige for systemisk neovascularining af lungen efter pulmonær iskæmi er stort set ukendt og er ikke blevet bredt undersøgt. Tidsforløbet for bronkial angiogenese hos rotter efter venstre pulmonal obstruktion er nøje beskrevet i histologisk arbejde Weibel 1. Udvide dette arbejde hos rotter, har vores laboratorium fokuseret på både vækstfaktorer vigtige i denne proces og den fysiologiske resultat af denne neovaskulatur i lungen. Resultaterne påviser CXC-kemokin Cinc-3 hæves tidligt efter iskæmi og behandling af rotter med en neutraliserende antistof mod CXCR2, receptoren for Cinc-3, dæmpes angiogenese 13. Den nyetablerede bronchial vaskulatur 14 dage efter indtræden af pulmonal iskæmi viste sig at være unormal markant forøgede protein permeabilitet 15. Venstre lunge funktion var ikke normal viste reduceret spredende kapacitet og et fald i lungevolumen 15. Selv om neovaskulatur kan have contributed til bevarelse af lungevæv i kronisk pulmonal iskæmi, synes ikke at være normal og kan bidrage til en vedvarende fald i lungefunktion.
Måske en af de mest mærkværdige aspekter af denne model vedrører den rumlige fordeling af prolifererende blodkar. Til trods for frigivelsen af vækstfaktorer i det pulmonale parenkym grund af iskæmi, stammer den neovaskulatur i relativt store opstrøms bronchiale arterier. Den normale bronkial arterie opstår som en lille gren fra aorta og invaderer luftvejene træet ved carina. Således den mekanisme, hvormed vækstfaktorer inducerer den indledende fase af arteriogenese er ikke klar. Vi foreslår, at rotten, med en vaskulær anatomi ligner mennesker, giver en enestående mulighed for at studere de mekanismer, der er ansvarlige for systemisk angiogenese under pulmonal iskæmi. Selvom fuldstændig obstruktion af venstre lungepulsåren er en sjælden forekomst i mennesker,forøget bronchial vaskularisering synes at være tilsvarende induceres hos patienter uanset stedet og størrelsen af lungepulsåren obstruktion 16. Således tilvejebringer vi en detaljeret beskrivelse af den kirurgiske metode til at ligere den venstre lungepulsåren hos rotter og et middel til at bestemme omfanget af angiogenese.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle protokoller udført på rotter er blevet godkendt af Johns Hopkins University Animal Care og brug Udvalg og i overensstemmelse med NIH retningslinjer. Når det er muligt, bør dyret kirurgisk prepped i et område adskilt fra det kirurgiske område for at minimere forurening af det kirurgiske sted.
1. Anæstesi / analgesi
- Sted rotte (Sprague Dawley-hanrotter, 125-150 g, Harlan, Indianapolis, IN) i et induktionskammer infunderes med 3% isofluran.
- Placer bedøvet rotte om kirurgi board knyttet til næse kegle og ventilator med 3% isofluran bedøvelse. Anvend sterilt teknik til alle procedurer. Drapere rotte for at sikre sterile område.
2. Intubation
- Immobilisere vedhæng i rygleje med kirurgisk tape.
- Fjern rotte fra næse kegle, udvide tungen med polstrede pincet.
- Brug 14 gauge intracath med stump metal stilet som guide. Skub bag pångue, ind i trachea.
- Fjerne metal stilet forlader hvid plast intracath i trachea. Sikre rotten trækker vejret og luft strømmer gennem røret.
- Erstat næsekonus med direkte adapter til kateteret, forbinde rotte til ventilatoren (90 åndedrag / minut, 8 ml / kg tidal volumen Rodent Ventilator Model 683, Harvard Apparatus, Holliston, Massachusetts).
- Påfør Puralube (Butler Schein, Dublin, OH) veterinær salve på øjne.
3. Thorakotomi
- Placer rotte højre side nedad, immobilisere vedhæng med kirurgisk tape.
- Barbering venstre brystkassen område.
- Fjern overskydende pels med lille vakuum.
- Gøre sterile område ved at tørre ned med alkohol efterfulgt af povidon-iod vatpind (Dynarex Corporation, Orangebur, NY). Gentag denne fremgangsmåde to gange mere (for i alt tre scrubs).
- Gør tværgående incision med sterile dissekere saks eller steril skalpel i midten af feltet.
- Blunt dissekere gennem layers af væv og fedt ned til ribben (sidste lag er tynd membran der dækker ribben).
- Tæl ribber for at bestemme 3. interkostale rum.
- Brug sterile 45 ° Graefe pincet, gøre stump snit mellem 3 rd og 4 th ribben.
- Indsæt ribben separatorer, træk forsigtigt skabe åben tomrum med fuld visualisering af lunge, sted tape på suturer at holde åbent.
4. Venstre lungepulsåren Ligation
- Med 90 ° Graefe pincet, gå til venstre lunge tilbage med højre hånd.
- Brug Dumont mønster # 5 lige pincet, grab venstre lungepulsåren og luftveje med venstre hånd. Venstre lungepulsåren vil lægge på toppen af luftveje. Sørg for, at tang er direkte vinkelret på bordet. Desuden er det mest effektivt at opfange den venstre lungepulsåren / venstre mainstem bronkier på det mest distale stilling (tættest på parenchym). Skub ventilerende venstre lunge til side med denne venstre hånd manøvre.
- Brug Dumontmønster # 5 45 ° buede pincet til at adskille venstre lungepulsåren fra venstre mainstem bronchus ved deres naturlige grænser. Denne adskillelse linje vises tynd og hvid mellem de to individuelle strukturer.
- Adskille direkte under arterie uden at gå gennem beholderen, glat skubbe pincet tip holdt sammen langs adskillelsen.
- Fortsæt indtil spidsen af tang synligt har adskilt venstre lungepulsåren og venstre mainstem bronchus. Kun et lille punkt spids skal være helt igennem. Hvis blod kan visualiseres på spidsen af tangen, er det ikke helt igennem og ligering bør ikke forsøges. Når først gennem mellemrummet, vil den venstre pulmonal lå på kurven af tangen. Hold i denne stilling.
- Forsigtigt frigive lige sløv pincet greb (venstre hånd) og få fat stykke af en pre-cut sutur (~ 2-3 inches, polypropylen sutur str. 6-0, Myco Medicinsk, Cary, NC).
- Åbn buede pincet cradling venstre lungepulsåren og grab sutur. Forsigtigt trække suturen gennem rummet mellem venstre pulmonale arterie og venstre mainstem bronkier i en opadgående bevægelse i forhold til kurven for tangen.
- Bind ned okkludere den venstre lunge med en knude, omhyggeligt klip resten af sutur.
- Luk ribben bruger stumpe pincet til at holde ribben og sutur to gange med polypropylen (blå monofilamenter) størrelse 4-0 fastgjort til en 19 mm, 3/8 cirkel reverse skære nål (Myco Medical, Cary, NC) i en hæmostat, pas på ikke at sutur hud (kun ribben).
- Gennemfør en løs knude, oppuste lunge, sted på positivt sluteksspiratorisk tryk (PEEP, 2-5 CMH 2 O), hyperinflate lunge så sikker knude stramt, og gøre en anden fuld knude før snipping resten af sutur. Fjern fra PEEP og visualisere i 30 sekunder for at sikre, at lungerne ikke klapper sammen. Påfør 5 dråber bupivicain (APP Pharmaceuticals, Schaumbur, IL).
- Tæt hud ved at placere vævslim på såret og tryk huden sammen med tilbagekrydsning end af vatpind. Opnåelse bupivicain (2,0 mg / kg subkutant) på stedet for snittet derefter hver 8. time i 24 timer eller indtil dyret vender tilbage til normal aktivitet. Som det subkutane lag i dette område er meget tyndt, er det ikke let at suturere alene. Når vævet lim påføres, og huden skubbet sammen lukkes også det subkutane lag.
- Sluk isofluran gas, men fortsætter med at ventilere rotten i 1-2 min på rumluft indtil frivillig bevægelse tilbagevenden. Tag trachealtube fra ventilatoren og sikre, at rotten trækker vejret spontant, før du fjerner den.
- Tør Puralube fra øjnene med vatpind og overvåge bevægelse og helbredelse. Injicere buprenorphin-hydrochlorid (0,05 mg / kg intraperitoneal, Butler Schein, Dublin OH). Fortsat levering af analgetisk hver 12. time i 48 timer efter kirurgi.
5. Venstre carotidarterie kanylering
At vurdere omfanget af bronkiale perfusion af den iskæmiske venstre lunge på ønskede tidspunkter efter venstre pulmonal ligering, injicere mærkede mikrosfærer gennem den venstre carotidarterie til aortabuen. Forbered rotter som ovenfor 1-2.
- Skær midterlinjen langs halsen, stumpt dissekere at afsløre trachea og venstre halspulsåre (mikrosfære injektionsstedet).
- Indsæt kateter fyldt med hepariniseret saltvand, stump spids af PE20 rør (Becton Dickinson, Sparks MD) i beholderen forbundet med 25 g nål, 4-vejs stophane, 1 ml sprøjte.
- Sted flaske mikrosfærer (15 um crimson polystyren fluorescerende mikrosfærer, 1 x 10 6 kugler / ml, Invitrogen, Eugene, OR) i vand sonikator i 30 sek.
- Fjern flasken, vortex og udarbejde 0,5 ml (500.000 mikrokugler) i en 1 ml Hamilton sprøjte (Hamilton Company, Reno, NV) gennem en 20 g nål.
- Vedhæft Hamilton sprøjte til 4-vejs stophane og indgyde mikrosfærer med sprøjtepumpe (rate: 500 ul / min; Genie Plus, Kent Scientific, Torringtden, CT).
- Fjern Hamilton-sprøjte og flugter apparat med 1 ml heparized saltvand ved 500 pi / min.
- Udføre fuld brystet torakotomi og exsanguinate rotten ved overskæring af vena cava inferior.
- Fjern den venstre lunge og andet væv af interesse.
- At ekstrahere mikrosfærer fra væv, tage hele venstre lunge af rotten efter afblødning og anbringes i 2 M KOH (4-6 ml). Sted i et 55 ° C vandbad og lad natten over for væv fordøjelse. Tilføj Tween 80 (0,25%) at vaske perlerne, vortex (10 sek) og centrifugeres (2000 opm, 20 ° C i 10 minutter). Supernatanten fjernes, der tilsættes 2-ethoxyethylacetat (1 ml), vortex, og lad stå i 1 time. Vortex suspensionen og centrifugeres (2000 opm, (20 ° C i 10 minutter) Fjern 2-ethoxyethylacetat vandige lag indeholdende fluorescens, sted i en kuvette og måler ved hjælp af et Hitachi F-2500 fluorescens-spektrofotometer (excitation 612/emission 618. , Digilab, Holliston, MA).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vaskulær stemmer: Resultater af virkningerne af venstre pulmonal iskæmi i rotten er vist i figur 1.. Vist er en methacrylat støbt af de bronchiale vaskulatur og den omfattende vaskularisering af venstre luftvejs træet 28 dage efter LPAL. At opnå dette stemmer, blev den systemiske vaskulatur injiceret med en methacrylat blanding (rød), retrograd i nedadgående aorta og luftrøret blev kanyleret og injiceret med en hvid silikonebaseret materiale. Denne vaskulære støbt tilvejebringer en bemærkelsesværdig visualisering af bronkial angiogenese i lungen. Særligt bemærkelsesværdig er de store, snoede opstrøms bronchiale fartøjer af venstre lunge. Selv om det ikke er vist på billedet, den højre bronchus i det væsentlige fri for store skibe bortset fra normale, lone, højre bronkial arterie.
Histologi: Ændringer i luftvejene vaskularisering visualiseret i venstre lunge histologiske snit er vist i figur 2. Bronchial fartøjer iagttaget 3 dage og 14 dage efter LPAL er vist. Figur 2A viser en luftvej afsnit fra den venstre lunge 3 dage efter LPAL. Bemærk prominente bronchiale fartøjer beliggende inden for luftvejene væg. Det indsatte er fra en seriel sektion 2A farvet for PCNA (prolifererende cellekerneantigen). Bemærk de PCNA positive endotelceller, der beklæder bronchiale fartøj. Figur 2B viser et venstre lunge sektion fra en rotte 14 dage efter LPAL. Bemærk den forøgede størrelse af de bronchiale fartøjer på dette tidspunkt og visne lungepulsåren.
Funktionel angiogenese: For at vurdere omfanget af systemisk perfusion af den venstre lunge via de bronchiale arterier blev fluorescerende mikrosfærer infunderes i den okkluderede venstre halspulsåre, således at alle mikrokuglerne blandes i aortabuen som en del af hjertets minutvolumen. Fluorescens fra denne størrelse mikrokugler (15 pm) var praktisk opdages i den venstre lunge af naiverotter. Men der var en betydelig, stor og konsekvent niveau målt i venstre lunge fra rotter undersøgt 14 dage efter LPAL.
Fig. 1. Red methacrylat cast af den snoede neovaskulatur forbundet med venstre bronchier (hvid) 28 dage efter venstre pulmonal ligering (LPAL).
Figur 2A. Airway sektion fra venstre rottelunge 3 dage efter venstre lungepulsåren (PA) ligering viser bronchiale fartøjer støder op til et større lungepulsåren. Inset viser en seriel afsnit farvet med PCNA at identificere prolifererende endotelceller fra bronkial arterie (BA). Afstand bjælke angiver 200 um.
<img src = "/ files/ftp_upload/50217/50217fig2B.jpg" alt = "Figur 2B" />
Figur 2B. Venstre lunge snit fra rotte 14 dage efter LPAL. Bemærk den betydelige stigning i størrelsen af de bronchiale arterier. Afstand bjælke angiver 500 um.
Figur 3 Analyse af fluorescerende mikrosfærer indgivet i den venstre lunge på naive rotter (n = 2 rotter) og 14 dage efter venstre pulmonal ligering. (LPAL, n = 3 rotter).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Venstre lungepulsåren ligering i alle testede arter fører til robust systemisk neovaskularisering af den iskæmiske lunge. Vi har præsenteret detaljerne i den kirurgiske metode i en rottemodel. Vores resultater produceret af vaskulær støbning, histopatologi og in vivo mærkning viser, at bronchiale arterier proliferere og perfundere det pulmonale parenkym. Således kan mekanismer bronkial angiogenese undersøges i en dyremodel, der svarer til den humane tilstand af kronisk pulmonal tromboembolisme. Desuden er denne klinisk relevant lille dyremodel giver en mulighed for at studere form og funktion af neovaskularisering hvor den menneskelige eksperimenter er ikke holdbar.
De kirurgiske anførte procedurer giver tilstrækkeligt detaljerede oplysninger, således at et dyr tekniker med kirurgisk erfaring bør være i stand til hurtigt at mestre disse teknikker. Selvom vores observationer har været overvejende i Sprague Dawleyrotter (75-100 g), andre stammer er også egnet til undersøgelse. Vi har ikke systematisk undersøgt en alder afhængighed af omfanget af bronkial angiogenese. Vi har også detaljerede oplysninger om kanylering af den venstre carotidarterie. Vi har anvendt måling af fluorescerende mikrosfærer tilført retrograd i den venstre carotidarterie, der blandes i aorta og efterfølgende lodge i venstre lunge som markør for systemisk perfusion af iskæmisk lunge og dermed funktionel angiogenese. Vi anerkender, at denne måling kan være variabel grund af ændringer i hjerteydelse på tidspunktet for infusionen. Men samtidig måling af det systemiske blodtryk kontinuerligt i rotter før og under denne måleproceduren viste ingen ændringer i kardiovaskulær status. Endvidere Resultaterne præsenteret i figur 3 viser en lille acceptabelt område af variabilitet i en gruppe rotter. Interessant de naive dyr har minimally påviseligt niveau af fluorescens tyder på et meget lavt bronkial perfusion i normale rotter. Anvendelse af mikrosfærer med en mindre størrelse kan give mulighed for detektion af et andet basisniveau af perfusion.
Vores resultater viser en veludviklet vaskulatur ved 28 dage efter LPAL. Den methacrylat støbt af de bronchiale fartøjer, der er forbundet med den venstre bronchus tilvejebringer en bemærkelsesværdig lyset af den omfattende og indviklede neovaskulatur, der dannes som reaktion på pulmonal iskæmi. Måske mindre dramatisk, men i overensstemmelse med det vaskulære stemmer er de billeder opnået fra histologiske snit af den venstre lunge 14 dage efter LPAL (figur 2B). Rotter blev forblødt før væv høst for det viste kortudsnit. Væksten af de bronchiale fartøjer er især tydeligt, når man sammenligner størrelsen af bronchiale fartøjer til histologiske snit af venstre lunge opnået 3 dage efter LPAL (figur 2A). Bronkial endotel viser klare tegn påspredning som vurderes ved hjælp af PCNA farvning. Således processen med angiogenese begynder tidligt efter udbrud pulmonal iskæmi.
Vores metoder til at bestemme omfanget af neovaskulatur har varieret fra tidlig histologisk vurdering af prolifererende bronchial endotel til mikrokugle måling af fuldt fungerende, perfusion bronchiale fartøjer og vaskulære støbning. Vores hensigt er at tilvejebringe et perspektiv for fremgangsmåden ifølge bronkial angiogenese over tid. Prolifererende fartøj optælling kræver præcision fra evaluatoren, passende stikprøve, og en antagelse om, at fartøjer, der er forbundet med luftvejene er den primære locus af tidlig angiogenese. Vurdering af mikrosfærer hoteller i lungen kræver en fuldt udviklet angiogen vaskulatur dermed en sen fænomen. Derudover metode forudsætter passende blanding af kugler under infusion, ingen ændringer i minutvolumen under proceduren, og at ændringer i antallet af indgivet spheres afspejler ændringer i antallet af perfusion fartøjer og ikke ændringer i vasoreactivity. Vi anerkender den fortsatte udfordring for bedre at definere processen med systemisk angiogenese i et organ, som normalt har to forskellige kar og pulmonale netværk synes at forblive patent under iskæmi. Endotheliale etiketter på rotter har ikke påvist en unik angiogen fænotype adskiller de to vasculatures histokemisk. In vivo imaging hæmmes af både åndedræts-og hjerte-bevægelse. Vi fortsætter med at søge efter yderligere metoder til at kvantificere omfanget af neovaskularisering med større præcision. Udfordringen er fortsat at identificere en lille, men voksende systemiske vaskulære seng blandt andre ikke-perfusion pulmonale kapillære netværk.
De mekanismer, der er ansvarlige for iskæmi-induceret angiogenese er ikke fuldstændig forstået. Past arbejde implicerer CXC-kemokinerne som at spille en rolle på et tidspunkt i den samlede proces 13. BecABrug venstre lunge i denne model er iskæmisk, men fuldt ventileret, hypoxi-inducerende faktorer er usandsynligt, at spille en rolle i den systemiske neovaskularisering, der finder sted. Det skal understreges, at denne situation er i modsætning til andre organer, hvor iskæmi er ledsaget af vævshypoxi. Således vækstfaktorer, der er ansvarlige for komplet bronkial fartøj vækst i lungen skal være helt defineret. Selvom væksten af nye fartøjer synes at være essentiel for bevarelsen af iskæmisk væv, har angiogene bronchiale fartøjer vist sig at være dilateret, pro-inflammatoriske og hyperpermeable 15, 17. De kroniske virkninger af disse unormale fartøjer inkluderer vedvarende luftvejs indsnævring som følge af vasodilatation og luftvejs ødem 18.
Ekstra spørgsmål relateret til denne model vedrører stedet for vækstfaktor frigivelse og de responderende skibe. Trods pulmonal iskæmi, er det de systemiske bronchiale fartøjer, ansvard til den iskæmiske stimulus og ikke andre pulmonale kar i lungen. Det er ikke klart, hvordan den iskæmiske stimulus føres til opstrøms bronchiale fartøjer. På trods af et væld af vækstfaktorer kan frigives af iskæmisk parenchymale væv, hvor fartøjer med oprindelse i aorta induceres til at proliferere entydigt i venstre lunge er ikke klar. Future eksperimenter er forpligtet til at behandle disse spørgsmål.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
Vi anerkender det arbejde, som Dr. Adlah Sukkar, MD i at hjælpe med støbning af lungen. Dette arbejde er blevet finansieret af NHLBI, HL088005.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| buprenorphine hydrochloride, Puralube | Butler Schein | ||
| bupivicaine | APP Pharmaceuticals | ||
| Povidone-Iodine swabstick | Dynarex Corporation | ||
| polypropylene suture size 6-0, 3/8 circle reverse cutting needle | Myco Medical | ||
| PE20 tubing | Becton Dickinson | ||
| 15 μm crimson polystyrene fluorospheres | Invitrogen | ||
| 1 ml Hamilton glass syringe | Hamilton Company | ||
| Equipment: | |||
| Genie Plus syringe pump | Kent Scientific | ||
| Fluorescence Spectrophotometer | Digilab | ||
| Rodent Ventilator Model 683 | Harvard Apparatus | ||
| Table 1. Table of specific reagents and equipment. | |||
References
- Weibel, E. R. Early stages in the development of collateral circulation to the lung in the rat. Circulation Research. 8, 353-376 (1960).
- Li, X., Wilson, J. W. Increased vascularity of the bronchial mucosa in mild asthma. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 229-233 (1997).
- Turner-Warwick, M. Precapillary systemic-pulmonary anastomoses. Thorax. 18, 225-237 (1963).
- Muller, K. M., Meyer-Schwickerath, M. Bronchial arteries in various stages of bronchogenic carcinoma. Pathol. Res. Pract. 163, 34-46 (1978).
- Remy-Jardin, M., Duhamel, A., et al. Systemic Collateral Supply in Patients with Chronic Thromboembolic and Primary Pulmonary Hypertension: Assessment with Multi-Detector Row Helical CT Angiography. Radiology. , 274-281 (2005).
- Karsner, H., Ghoreyeb, A. Studies in infarction: The circulation in experimental pulmonary embolism. J. Exp. Med. 18, 507-522 (1913).
- Endrys, J., Hayat, N., et al. Comparison of bronchopulmonary collaterals and collateral blood flow in patients with chronic thromboembolic and primary pulmonary hypertension. Heart. 78, 171-176 (1997).
- Virchow, V. Uber die Standpunkte in den Wissenschaftlichen Medizin. Virchow Archiv. 1, 1-19 Forthcoming.
- Fadel, E., Mazmanian, G. M., et al. Lung reperfusion injury after chronic or acute unilateral pulmonary artery occlusion. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157, 1294-1230 (1998).
- Charan, N. B., Carvalho, P. Angiogenesis in bronchial circulatory system after unilateral pulmonary artery obstruction. J. Appl. Physiol. 82, 284-291 (1997).
- Shi, W., Hu, F., et al. Altered reactivity of pulmonary vessels in postobstructive pulmonary vasculopathy. J. Appl. Physiol. 88, 17-25 (2000).
- Shi, W., Giaid, A., et al. Increased reactivity to endothelin of pulmonary arteries in long-term post-obstructive pulmonary vasculopathy in rats. Pulm. Pharmacol. Ther. 11, 189-196 (1998).
- Sukkar, A., Jenkins, J., et al. Inhibition of CXCR2 Attenuates Bronchial Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung. J. Appl. Physiol. 104, 1470-1475 (2008).
- Mitzner, W., Lee, W., et al. Angiogenesis in the mouse lung. Am. J. Pathol. 157, 93-101 (2000).
- Wagner, E. M., Jenkins, J., et al. Lung and vascular function during chronic severe pulmonary ischemia. J. Appl. Physiol. 110, 538-544 (2011).
- Remy-Jardin, M., Bouaziz, N., et al. Bronchial and nonbronchial systemic arteries at multi-detector row CT angiography: comparison with conventional angiography. Radiology. 233, 741-749 (2004).
- Baluk, P., Tammela, T., et al. Pathogenesis of persistent lymphatic vessel hyperplasia in chronic airway inflammation. J. Clin. Invest. 115, 247-257 (2005).
- Bailey, S. R., Boustany, S., et al. Airway vascular reactivity and vascularisation in human chronic airway disease. Pulm. Pharmacol. Ther. 22, 417-425 (2009).
