Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Bioengineering

Analys av riktad virala protein Nanopartiklar levereras till HER2 + tumörer

doi: 10.3791/50396 Published: June 18, 2013

Summary

Den här artikeln beskrivs de förfaranden för optisk avbildning analys av tumören riktade nanopartiklar, HerDox. I synnerhet är detaljerad användning av multimode avbildningsanordning för detektering tumörmålsökning och bedöma tumör penetration beskrivs här.

Abstract

HER2 + tumör-riktade nanopartiklar, HerDox uppvisar tumör-förmånliga ackumulering och tumör-tillväxt ablation i en djurmodell av HER2 + cancer. HerDox bildas genom icke-kovalent självorganisering av en riktad tumör cellpenetration protein med det kemoterapeutiska medlet, doxorubicin, via en liten nukleinsyra linker. En kombination av elektrofil, interkalation och interaktioner oligomeriserings underlättar självorganisering i runda 10-20 nm partiklar. HerDox uppvisar stabilitet i blod liksom i utökad lagring vid olika temperaturer. Systemisk tillförsel av HerDox i tumör-bärande möss resulterar i tumör-celldöd med några påvisbara negativa effekter på icke-tumörvävnad, inklusive hjärta och lever (som genomgår märkt skada av oriktade doxorubicin). HER2 höjd underlättar målsökning till celler som uttrycker den humana epidermal tillväxtfaktorreceptor, därav tumörer uppvisar förhöjda HER2 nivåer uppvisar högre ackumulering av HerDox jämfört med celler uttrycksjunga lägre nivåer, både in vitro och in vivo. Fluorescensintensitet avbildning i kombination med in situ konfokala och spektralanalys har tillåtit oss att kontrollera in vivo tumörsökande och tumörceller penetration av HerDox efter systemisk tillförsel. Här har vi detalj våra metoder för att bedöma tumörmålsökning via multimode avbildning efter systemisk tillförsel.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tumörsökande av kemoterapi har potential att eliminera cancerceller vid lägre dos jämfört med oriktade droger eftersom flera av de levererade terapi kan ansamlas vid sin destination istället dela ut till icke-tumörvävnad. Eftersom den senare situationen skulle späda ut effekten av läkemedlet och därmed kräva högre doser för att vara effektiva, har tumörsökande både terapeutiska och säkerhet fördelar jämfört med vanliga icke-riktad behandling.

Targeting kemoterapi genom inkapsling i egna sammansatta nanopartiklar låter drogen förbli kemiskt oförändrad i motsats till läkemedel som är kovalent kopplade till målsökande molekyler. Som sådan koppling har potential att förändra aktiviteten av både läkemedlet och den målsökande molekylen, icke-kovalent montering tillåter läkemedelspotens ska behållas.

Vi har tidigare visat att den nya tre-komponent, egna sammansatta komplex, HerDox, mål HER2 + tumörer 1. HerDox bildas genom icke-kovalenta interaktioner mellan receptorbindande cell-penetration protein, HerPBK10, och det kemoterapeutiska medlet, doxorubicin (Dox), via en liten nukleinsyra linker. HerPBK10 binder den humana epidermal tillväxtfaktorreceptor (HER) och utlöser receptormedierad endocytos 2-4, medan endosomala membranet penetrering sker genom inkorporering av adenovirus härlett-penton base kapsidprotein 4-6. En positivt laddad domän på proteinet möjliggör nukleinsyrabindning 4, 5, genom vilka DNA-intercalated Dox kan transporteras för målinriktad leverans. Elektrofil, inskjutning, och eventuellt protein oligomeriseringsdomäner interaktioner underlättar självorganisering i runda 10-20 nm partiklar som är stabila i blodet och under långvarig förvaring vid olika temperaturer 1. Företrädesrätt inriktning till HER2 + tumörceller underlättas av den förstärkta ligandaffinitet när HER2 är förhöjd.

Våra tidigare studier har visat att systemisk tillförsel av HerDox utbyten företrädesrätt ackumulering i tumörer gentemot icke-tumörvävnad och i jämförelse med oriktade Dox 1, och penetration in i tumörceller in vivo 7. Vi har observerat att HerDox släpper Dox efter tumörcell inträde, så att Dox ackumulering in i kärnan 1. Tumör-ackumulering tycks korrelera med receptor nivå, som relativt låg HER2-uttryckande tumörer ackumuleras mindre HerDox jämfört med dem med jämförelsevis högre HER2 nivå 1. Dessutom uppvisar den effektiva celldöd koncentration ett omvänt samband med HER2 display på tumör cellinjer som uttrycker olika cellytan HER2 nivå 1. HerDox uppvisar en terapeutisk och säkerhet fördel över oriktade Dox, som tumör dödandet sker vid mer än 10 gånger lägre dos jämfört med untartade läkemedel och ger ingen påvisbar negativ effekt på hjärtat (upptäcks med ekokardiografi och histologiska fläckar) eller levern (detekteras av TUNEL fläcken) vävnad, i motsats till oriktade Dox 1. Trots dess härledning från ett viralt kapsidprotein, uppvisar HerPBK10 ingen påvisbar immunogenicitet vid terapeutiska nivåer 2. De pre-existerande antikroppar till hela adenovirus kan känna igen HerPBK10, är de oförmögna att förhindra cellbindning 2.

Tumör volym mätt över tiden är en vanlig metod för att bedöma terapeutiska effekten av riktad terapi, och har varit anställd för att bedöma den terapeutiska effekten av HerDox. Komplettera denna metod med in vivo och ex vivo fluorescensintensitet avbildning har gett oss möjlighet att bättre bedöma inriktning effektivitet 7. Vi har specifikt integrerats in situ konfokal avbildning av utskurna tumörer med spektralanalys av Dox fluorescens för att kontrollera att HerDox ingent ackumulerade endast på tumörer in vivo men trängde in i tumörceller och levererade Dox i cytoplasman och kärnan 7. Spektralanalys aktiveras dessutom oss att skilja Dox fluorescens från autofluorescens 7.

Här kan vi visa mer i detalj vårt tillvägagångssätt för att bedöma HerDox in vivo efter systemisk leverans, och viktigast av allt, för att bedöma målinriktning genom multimode avbildningsmetoder och analyser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ett. Systemisk tillförsel in vivo

  1. Blanda tillräckligt HerDox med steril koksaltlösning för att jämställa 0,2 ml av en 0,004 mg / kg dos av HerDox per injektion under 6-8 veckor gamla nu / nu mus bärande subkutana bilaterala tumörer flanken xenograft.
  2. Försiktigt dra HerDox blandningen i en 3/10 cc insulin spruta med en 29G nål, undvika bubblor.
  3. Anestesi induceras genom kortvarig isofluran exponeringen i en induktion kammare utrustad med en gas spolningssystem (Oxygen flödeshastigheter: 0,5-1 l / min, isofluran koncentration: 3-4% (eller lägre).
  4. Injicera hela blandningen i svansvenen hos en sövd mus (0,2 ml per injektion). IV injektion kan också utföras i en återhållen, obedövade mus.
  5. Upprepa injektioner på samma mus ytterligare sex sekventiella dagar, en gång per dag.

2. Fluorescensavbildning In vivo

Ackumuleringen av HerDox fluorescens i tumörer kankunna detekteras av den sista dagen för injektionen (dag 7) med hjälp av en multimode imager. Procedurerna nedan innebär användning av ett anpassat makro-belysning och detektionssystem (figur 1) 8.

  1. Slå på Multimode In vivo optisk Imager.
  2. Välj ett filter utsläpp bandpass (590 nm ± 30 nm) lämpad för doxorubicin fluorescensdetektering.
  3. Slå på Argon-Krypton laser och placera ett filter excitation bandpass (488 nm ± 10 nm) på laserns optiska banan.
  4. Slå på anestesi-systemet och sedan placera en mus i anesthetizing kammaren (Oxygen flöden: 0,5-1 l / min, isofluran koncentration: 3-4% (eller lägre) är utrustade med en gas spolningssystem.
  5. Överför musen från anesthetizing kammaren till avbildning kammaren i Multimode In vivo optisk Imager när musen är sövd.
  6. Placera en noskon över näsan av musen och öppna flödet att administrera kontinuerlig anestesiSIA under bildtagning (Oxygen flöden: 0,5-1 l / min, isofluran koncentration: 2-3% (eller lägre).
  7. Förvärva fluorescens bilder med en exponeringstid på 5-15 sek.
  8. Utför bildanalys och bearbetning, inklusive bakgrunden korrigering eller kontrast justering.

Tre. Fluorescens Imaging Ex vivo

HerDox fluorescens kan avbildas i tumörer och specifika organ (inklusive lever, njure, mjälte, hjärta och skelettmuskel) skördas från euthanized möss vid 24 timmar efter den sista (Dag 7) injektion av HerDox.

  1. Slå på Multimode In vivo optisk Imager.
  2. Välj ett filter utsläpp bandpass (580 nm ± 20 nm) för Doxorubicin fluorescensdetektering.
  3. Slå på Argon-Krypton laser och placera ett filter excitation bandpass (488 nm ± 10 nm) på laserns optiska banan.
  4. Placera tumörer och specifika organ anordnade på en Petri-skål i avbildning kammare of den Multimode In vivo optisk Imager.
  5. Förvärva fluorescens bilder av vävnader med en exponeringstid på 5-15 sek. Ett exempel på initial fluorescens bilden förvärvet visas i figur 2a. Upprepa samma med en tom Petri-skål, som kommer att fungera som bakgrund (figur 2b).
  6. Utför bildanalys och bearbetning, inklusive bakgrunden korrigering eller kontrast justering. Ett exempel på en korrigerad bild visas i figur 2c, som har uppstått genom subtraktion av fig. 2b från fig. 2a.

4. In situ Confocal avbildning av tumörer

In situ konfokal avbildning möjliggör detektion och analys av HerDox tumör ackumulering på cellnivå.

  1. Slå på en Leica SPE konfokalmikroskop.
  2. Välj 488 ljus nm laser för excitation av doxorubicin och emissionsvåglängder (560-620 nm) för doxorubicinfluorescensdetektion.
  3. Välj ett 40X eller 63X objektiv och släpp immersionsolja på objektivet.
  4. Utdrag färska tumörer från euthanized möss som tidigare fått HerDox och hånar behandlingar som beskrivs i proceduren 2.
  5. Placera tumörer på en Petri-skål på is för att undvika nedbrytning av vävnad, och sedan överföra tumörerna till ett Delta T kammare för konfokal avbildning.
  6. Förvärva konfokala bilder av tumörerna vid sekventiella fokaldjup (steglängd: 1 um, tjocklek: 20 pm). Ett exempel på sekventiellt tagna bilder längs z-axeln visas i figur 3, vänstra panelen.
  7. Utför maximal intensitet z-projektion av bilderna. En maximal intensitet projektion av z-stacked bilder visas i figur 3, högra panelen.
  8. Beräkna menar fluorescensintensiteterna av maximal intensitet Z -. Projektionsbilder Mean fluorescensintensiteter av bilderna över hela synfältet var beräknad med ImageJ.

Fem. Propportionell Spectral Imaging och analys

Propportionell spektral avbildning och analys möjliggör diskriminering mellan Dox fluorescens och autofluorescens.

  1. Slå på en laserskanning fluorescens konfokalmikroskop.
  2. Förvärva 15 bilder av HerDox-behandlade och obehandlade tumörer på ett specificerat djup inom spektralområdet 510-650 nm, med en stegstorlek av 10 nm och excitation vid 488 nm ljus med användning av en Leica SPE konfokalmikroskop.
  3. Bered en 100 pM lösning av doxorubicin.
  4. Utför spektral avbildning av 100 iM doxorubicin för att erhålla den rena spektrala signatur av Dox fluorescens (spektralområdet: 510-650 nm, ett steg storlek: 10 nm). Typiska resultat av bildinhämtning från spektral avbildning och resulterande fluorescensspektrum ritas som en graf visas i figur 4.
  5. Skaffa autofluorescens spektrala signatur från en bild cube (spektralområdet: 510-650 nm, ett steg storlek: 10 nm) som erhållits genom spektral avbildning av obehandlade tumörer. Typiska resultat av bildinhämtning från spektral avbildning och resulterande fluorescensspektrum ritas som en graf visas i figur 5.
  6. Generera fyra referens spektrala signaturer (ren autofluorescens, 0.1.doxorubin +0,9. Autofluorescens, 0,2. Doxorubicin +0,8. Autofluorescens, 0.3.doxorubin +0,7. Autofluorescens) med hjälp av program som vi utvecklade 9. En typisk kurva som visar fyra referens spektrala signaturer visas i figur 6.
  7. Utför spektrala klassificering av bilderna som definieras av referens spektrala signaturer genom euklidiska avståndet åtgärd med hjälp av program som vi tidigare utvecklat 9.
  8. Utför linjär spektral unmixing av dessa bilder genom att använda en spektral unmixing program (plug-in i ImageJ) vi utvecklat 7, 10, för jämförelse med kvotmetriska spektral avbildning och analys. Ett example att separera HerDox fluorescens från autofluorescens genom linjär spektral unmixing visas i figur 7.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Figur 1 visar in vivo optisk imager prototyp, som byggdes för att bilden förvärvet enligt flera kommunikationssätt, däribland fluorescens intensitet, spektrala, livslängd, 2-fotonen, intra-vital konfokala, och mareld avbildning. Dessutom ger den kylda högkänslig kamera och kraftlinor laser införlivad i detta system högre kontrast fluorescensbilder jämfört med kommersiella optiska bildsystem 11, särskilt för in vivo detektion av doxorubicin fluorescens. Därför var detta system kritiskt för användning i föreliggande studie för att förvärva flera komplementära datapunkter i bedömningen av HerDox in vivo.

Den höga tumör fluorescens visas i figur 2 är typiskt efter systemisk leverans av HerDox, och tecken på dess tumor-företrädesrätt inriktning. Den fluorescens detekteras i skelettmuskulaturen är atypisk och kan leda tillbakam anomalier i injektionen (dvs. injicerar alltför nära kroppen). Kvalitativt, har bilden som visas i figur 2a låg bakgrund. Men för att göra en kvantitativ analys av de relativa intensiteterna vävnad fluorescens, är det nödvändigt att utföra en bakgrundskorrigering hjälp av en tom skålen, såsom visas i fig. 2b. Detta kan resultera i en "korrigerad bakgrund" bilden som visas i figur 2c som har en högre bakgrundssignal vid kanten av bilden jämfört med den ursprungliga (figur 2a), eftersom bakgrundsbilden (figur 2b) har lägre intensiteter vid kanten av den image. Således, medan bakgrundskorrigering kan ge en signal ökning vid kanten av bilden, är detta ett nödvändigt steg för efterföljande kvantitativ analys.

För att erhålla en kvantitativ bedömning av HerDox ackumulering i tumörer har konfokala fluorescensbilder som erhålls vid olika fokaldjup i situ följt av maximal intensitet z-projektion av bilderna (figur 3), och förvärv av den genomsnittliga fluorescensintensiteten av den projicerade bilden. Den resulterande bilden innehåller HerDox ackumulering information över de indikerade z-djup vid varje pixel, och således genomsnittet av de fluorescensintensiteterna som helhet överensstämmer HerDox ansamlingar i tumörer vid olika djup kvantitativt.

För att skilja HerDox fluorescens från autofluorescens i tumörer och kvantitativt diskriminera de två med hög specificitet, kvotmetriska spektral avbildning och analys utfördes. De rena spektrala signaturer för doxorubicin och autofluorescens erhållits genom spektral avbildning visas i fig 4 och 5, respektive. Referens spektrala signaturer (Figur 6) skapades också genom att blanda olika proportioner av de rena spektrala signaturer med det program som vi utvecklat 9. Varje reference spektrala signatur här representerar relativ fluorescens av HerDox ackumuleras i tumörer med avseende på autofluorescens. De spektrala klassificering bilder (data visades inte i detta dokument) visade bättre kvantitativa HerDox ansamlingar 7 jämfört med den spektrala oblandade bild erhållen genom att använda de rena signaturer referens spektrala (Figur 7). Figurerna 4-7 representerar typiska resultat när utför ratiometrisk spektral avbildning och analys.

Figur 1
Figur 1. In vivo optisk imager. En optisk imaging-system med fluorescens intensitet, spektrala, fluorescenslivstid och intravital konfokala kapacitet avbildning måste användas. Den multimode optiska avbildningssystem som används här visas, och har varit som beskrivered tidigare 8. Bild försedd med snäll tillåtelse från Springer Science & Business Media BV: Hwang, JY, et al, Mol.. Imaging Biol., 14, 431-42 (2012).

Figur 2
Figur 2. Representativa fluorescensintensitetsvärdena bilder av inre organ och tumörer extraherade från en mus får HerDox. Vävnader och tumörer skördades från euthanized möss vid 24 timmar efter den sista (Dag 7) injektion av HerDox fluorescensintensitet bilder före och efter korrektion för bakgrunden (b) representeras av (a) och (c), respektive. Klicka här för att se större figur .


Figur 3. Högsta stödnivå z-projektion av de bilder som erhållits vid sekventiella z-djup. De staplade bilder som visas till vänster är representativa för de konfokala skanningar av tumörvävnad erhölls vid sekventiella 1 um djup. Bilden till höger visar en sammanställning av de staplade bilderna till vänster.

Figur 4
Figur 4. Förvärv av en ren spektrala signatur för doxorubicin. När bilderna av doxorubicin-lösning erhölls vid sekventiella våglängder inom 510-650 nm, med en steg-storlek på 10 nm (till vänster), den rena spektrala signatur för doxorubicin erhölls med det program som vi utvecklat. Klicka här för att visa en större bild .

Figur 5
Figur 5. Förvärv av en ren spektrala signatur för autofluorescens. När bilderna av obehandlad tumör erhölls vid sekventiella våglängder inom 510-650 nm, med en steg-storlek på 10 nm (vänster), den rena spektrala signaturen för autofluorescens erhölls med hjälp av program som vi utvecklat. Klicka här för att visa en större bild .

load/50396/50396fig6.jpg "/>
Figur 6. Fyra referens spektrala signaturer för ratiometrisk spektral avbildning och analys. De referensnivåer spektrala signaturer skapades genom att blanda de rena spektrala signaturer med det program som vi utvecklat. Den grönfärgade heldragna linjen representerar ren autofluorescens, representerar den rödfärgade heldragen linje 0.1.doxorubin +0,9. Autofluorescens, representerar den blå-färgade heldragna linjen 0.2. doxorubicin +0,8. autofluorescens och cyan-färgad fast linje 0.3.doxorubin +0,7. autofluorescens, respektive. Figur reproduceras från författarnas tidigare arbete: Hwang, JY, et al, PLoS One 7 (4), (2012)...

Figur 7
Figur 7. HerDox fluorescens i vävnaden före och efter spektrala un-blandning. Efter att ha fått de spektrala signaturer av Dox och autofluorescens, the Dox signaler separeras med hjälp av linjär spektrala un-mixning 12,13. Figuren visar autofluorescensen och HerDox blandad bild innan spektrala un-blandning och den separerade HerDox bilden efter spektrala un-blandning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Dox fluorescens kan detekteras in vivo med hjälp av multimode Imager när tumörer är subkutan. Emellertid är den terapeutiskt effektiva dosen av HerDox (0,004 mg / kg) under detekteringströskeln efter en enda dos. Däremot efter 7 dagliga injektioner (1x/day i 7 dagar), är tumören ackumulering och retention av partikeln tillräcklig för att möjliggöra visualisering av Dox fluorescens.

Det är kritiskt när man arbetar med Dox eller någon annan fluorofor för in vivo-avbildning som ren teknik används. Dropp på utsidan av musen bör undvikas, eftersom avbildaren detekterar fluorescensen på utsidan av huden utan diskriminering huruvida Dox är extern eller intern. Likaså kan Dox kontamination på handskarna lämnar fluorescerande märken på utsidan av musen under djurhantering, varigenom felaktig fluorescensdetektion.

I det multimode optiska systemet, enlaserstråle används för excitation av HerDox. Laserstrålen har typiskt en Gauss-profil. Därför, för jämn excitering av exemplar av intresse, är optiska don utnyttjas. Ändå bevarar diffust laserljus något en gaussisk stråle profil. Således, för ideal kvantitativ analys måste bakgrundskorrektion utföras. De före-korrigerade och bakgrundsbilder har typiskt ett djup av 16 bitar. Därför, innan bakgrunden korrigeringen utförs ska bilddjupet konverteras till 32 bitar för att undvika oönskade fel från bilden djup diskrepans mellan resulterande och input bilder.

Vid förvärv av en bakgrundsbild, var ett svart papper (Artagain) som tidigare satt på en bildplatta för att förhindra belysning reflektioner innan du utför fluorescens avbildning. Eftersom kameran är mycket känslig, var låg bakgrund signaler från svart-papper upptäcks av kameran. Därför bakgrundensignaler som visas i fig 2 kom från svart papper snarare än från en tom Petriskål.

En hög koncentration av doxorubicin-lösning användes för att erhålla rena spektrala signaturer med hög noggrannhet. Vi undersökte vidare spektrala resolutioner där systemet kan upptäcka tillräckligt fluorescens från provet för att producera tillförlitliga spektrala signaturer. Som ett resultat var den spektrala upplösningen avstämd till 10 nm. Här fann vi att mikroskopet under inställningen av högre spektral upplösning (<10 nm) kunde inte detektera tillräcklig fluorescens för att ge tillförlitliga spektrala signaturer. Med de rena spektrala signaturer, vi kunde generera flera ratiometrisk spektrala signaturer (Figur 6). Framför allt kunde vi urskilja kvantitativt HerDox fluorescenssignaler från autofluorescens av respektive ratiometrisk spektrala signaturer 7. Den spektrala oblandade bild som erhållits med den rena spektrala signaturs (figur 7) var liknande den sekretessbelagda bilden av de två referens spektrala signaturer (blå:. 0.2.Dox +0,8 Autofl och Grön:.. Autofl). Sammantaget gav kvotmetriska konfokala / spektral avbildning mer kvantitativ information om HerDox ackumulering i tumörceller in situ med hög upplösning, vilket verifiera dess användbarhet i analysen av nanopartiklar levererade till HER2 + tumörer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författaren, Daniel Farkas, är ordförande i Spectral Molecular Imaging. De återstående Författarna har inga konkurrerande intressen.

Acknowledgments

Detta arbete har finansierats med bidrag till LKM-K från National Institutes of Health / National Cancer Institute (R01CA129822 och R01CA140995). Dr Medina-Kauwe tack C. Rey, M. M-Kauwe och D. Revetto för fortsatt stöd.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fluorescence laser scanning confocal microscope Leica SPE
In Vivo Optical Imager Spectral Molecular Imaging Multimode In Vivo Optical Imager
Doxorubicin-HCl Sigma-Aldrich D4035
Nude (NU/NU) mouse, female, 6-8 week Charles River Strain code 088
MDA-MB-435 human HER2+ tumor cells NCI-Frederick Cancer DCTD Tumor/Cell Line Repository 0507292
3/10 cc insulin syringe U-100 with 29G x 1/2" Ultra-FineIV permanently attached needle BD 309301
Delta T chamber Bioptechs 04200417B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Agadjanian, H., Chu, D., et al. Chemotherapy Targeting by DNA Capture in Viral Protein Particles. Nanomedicine. 7, (3), 335-352 (2012).
  2. Agadjanian, H., Ma, J., et al. Tumor detection and elimination by a targeted gallium corrole. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, (15), 6105-6110 (2009).
  3. Agadjanian, H., Weaver, J. J., et al. Specific delivery of corroles to cells via noncovalent conjugates with viral proteins. Pharm. Res. 23, (2), 367-377 (2006).
  4. Medina-Kauwe, L. K., Maguire, M., et al. Non-viral gene delivery to human breast cancer cells by targeted Ad5 penton proteins. Gene Therapy. 81753-81761 (2001).
  5. Medina-Kauwe, L. K., Kasahara, N., et al. 3PO, a novel non-viral gene delivery system using engineered Ad5 penton proteins. Gene Therapy. 8795-8803 (2001).
  6. Rentsendorj, A., Xie, J., et al. Typical and atypical trafficking pathways of Ad5 penton base recombinant protein: implications for gene transfer. Gene Ther. 13, (10), 821-836 (2006).
  7. Hwang, J. Y., Park, J., et al. Multimodality Imaging In vivo for Preclinical Assessment of Tumor-Targeted Doxorubicin Nanoparticles. PLoS ONE. 7, (4), e34463 (2012).
  8. Hwang, J. Y., Wachsmann-Hogiu, S., et al. A Multimode Optical Imaging System for Preclinical Applications In Vivo: Technology Development, Multiscale Imaging, and Chemotherapy Assessment. Mol. Imaging Biol. (2011).
  9. Hwang, J. Y., Gross, Z., et al. Ratiometric spectral imaging for fast tumor detection and chemotherapy monitoring in vivo. J. Biomed. Opt. 16, (6), 066007 (2011).
  10. Fujimoto, J. G., Farkas, D. L. Biomedical Optical Imaging. Oxford University Press. New York. (2009).
  11. Hwang, J. Y., Moffatt-Blue, C., et al. Multimode optical imaging of small animals: development and applications. Proc. of SPIE. 6411, (2007).
  12. Ducros, M., Moreaux, L., et al. Spectral unmixing: analysis of performance in the olfactory bulb in vivo. PLoS One. 4, (2), e4418 (2009).
  13. Zimmermann, T. Spectral imaging and linear unmixing in light microscopy. Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 95245-95265 (2005).
Analys av riktad virala protein Nanopartiklar levereras till HER2 + tumörer
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hwang, J. Y., Farkas, D. L., Medina-Kauwe, L. K. Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors. J. Vis. Exp. (76), e50396, doi:10.3791/50396 (2013).More

Hwang, J. Y., Farkas, D. L., Medina-Kauwe, L. K. Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors. J. Vis. Exp. (76), e50396, doi:10.3791/50396 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter