Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Flybar: Sineklerin için Alkol yönetme

doi: 10.3791/50442 Published: May 18, 2014

Summary

Drosophila alkole davranışsal yanıtların hücresel ve moleküler temellerini kesme için önemli bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. İşte biz kolayca başka deneylere uygulanabilir ve lisans araştırma için çok uygun bir sirkadiyen bağlamda alkol duyarlılık verilerinin toplanması için bir protokol mevcut.

Abstract

Meyve sinekleri (Drosophila melanogaster) alkol araştırma ve sirkadiyen biyoloji hem de kurulu bir modeldir. Son zamanlarda, sirkadiyen saat alkol hassasiyeti değil, tolerans oluşumu modüle gösterdi. Burada ayrıntılı olarak bizim protokol açıklar. Alkol flybar kullanarak sinekler uygulanır. Bu kurulumda, doymuş alkol buharı grubu oranlarda nemlendirilmiş hava ile karıştırılır ve aynı anda dört tüplerde sinekler uygulanmıştır. Sinekler çoğaltır varyasyonu en aza indirmek için, standart koşullar altında yetiştirilir. Farklı genotipleri ya da muamele maddelerinin üç günlük sinekler, tercihen doğrudan karşılaştırma yapmak mümkün bulunan iki farklı zaman noktalarında (örneğin, CT 5 ve CT 17) sinekleri eşleştirerek, deneyler için kullanılmıştır. Deney sırasında, sinekler refleks (lorr) düzeltilmesi en kaybı sergileyen alkol buharın önceden belirlenmiş bir yüzde ve sinekler sayısı 1 saat boyunca maruz veya sed ediliration her 5 dakikada sayılır. Veriler üç farklı istatistiksel yaklaşımlar kullanılarak analiz edilebilir. İlk sineklerin% 50'si doğrulma refleksini yitirmiş olan süreyi belirlemek ve önemli farklılıklar zaman noktaları arasında var olup olmadığını belirlemek için, bir varyans analizi (ANOVA) kullanmaktır. İkinci bir varyans analizi ve ardından bir dakikalık belirtilen sayıda sonra lorr göstermektedir yüzdesi sinekler belirlemektir. Son yöntem değişkenli istatistikleri kullanarak bütün zamanlar serisi analiz etmektir. Bu protokol, aynı zamanda genotipler arasında olmayan sirkadiyen deneyleri ya da karşılaştırma için kullanılabilir.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Drosophila melanogaster bu ilaç 2,3 insan yanıtlarına benzer olan alkol 1 Bifazik davranışsal cevapları göstermektedir. Ve sedasyon (tepki motor aktivite eksikliği tamamlamak: alkol, düşük konsantrasyonlarda ilk maruz sonra, motor koordinasyon eksikliği, postural kontrolün kaybı ve doğrulma reflekslerinin (lorr düzeltilmesi refleks kaybı) yerine, sergi artan lokomotor aktivite uçar mekanik uyarıya) alkol maruz 4-9 ilerledikçe. Endojen sirkadiyen saat 10,11 fareler, sıçanlar 12 gözlenen gibi alkol duyarlılık ve toksisite güçlü bir modülatörü olan ve 13, insanlarda. Drosophila araştırma son gelişmeler sirkadiyen saat akut alkol duyarlılığı değil alkol toleransı 1 modüle göstermiştir. Mutant çalışmaları ve uzaysal transjenik manipülasyon yoluyla Drosophila mevcut güçlü genetik yaklaşımlarve zamansal gen ekspresyon karmaşık davranışların altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları belirlenmesinde hızlı bir ilerleme sağlayan bir sistem sağlar. Bir araştırma aracı olarak Drosophila kullanımı hızla memelilere 14-16 tercüme edilebilir alkol nörobiyoloji anlamada maddi gelişmeler izin verdi. Sirkadiyen saat alkol duyarlılık modüle, üzerinden moleküler mekanizmalar anlaşılmasını kolaylaştırmak ve muntazam bir sirkadiyen zaman noktalarındaki davranışsal tepkileri, loş kırmızı ışık koşullarında kullanım için uygun olan bir alkol yönetim protokol ölçmek için gereklidir. Drosophila, alkol kronik maruz kalma için güvenilebilir akut riskler için buhar şeklinde alkol idare yoluyla gıda takviyesi ile tatbik edilebilir. Burada, Kayıp-of-doğrulma refleksini (lorr) 1 sirkadiyen modülasyonu değerlendirilmesi yanı sıra uygun bir alkol yönetim protokolü açıklamaksedasyon.

Sabit bir sıcaklıkta, 12 saat LD döngüler ve daha sonra deney söz bağlı olarak 2-5 gün için, kontrollü ışık rejimi aktarılır: Sinekler 12 saat ile sürüklenir. Sinekler flybar olarak bilinen bir cihaz etanol buharına maruz kalmaktadır. Bu cihazda, hava kontrollü miktarda bir su ve alkol fokurdatıldı edilir; buharlar, daha sonra bir şişe yuva sinekler karıştırılır ve yönlendirilir. Sinekler dk her 5 refleksleri doğrulma veya sedasyon haline gelmiş görüntülemek için başarısız numarası için puanlanır. Her zaman noktası için lorr yüzdeler sirkadiyen zaman noktaları arasında ya da sinek suşları arasında hesaplanmış ve karşılaştırılmıştır. Davranış analizi seçenekleri ile birlikte Flybar alkol teslim kullanılarak alkol teslimat basitliği ve güvenilirliği karanlık koşulları altında gerçekleştirilmiştir sirkadiyen deneyler için önemli bir fayda sağlar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Flybar 1. Meclisi

Gerekçe ve bakış: sistem sinekler alkol buharının kontrollü yüzdeleri yönetmek için tasarlanmıştır. Not: Şekil 1, şematik bir incelemesini sunar Flybar kurulum üç aşamada (hava akışının düzeneği, alkol ve su şişeleri kurulumu ve gözlem şişelerin montaj), aşağıda tarif edildiği gibi. Kısacası, sürekli bir hava akımı, sırasıyla alkol ve su fokurdatıldı karıştırılmış ve 4 gözlem şişelerine tatbik edilmektedir iki fraksiyon ayrılır.

  1. Hava akışı montajı
    1. Esnek silikon tüp bina hava veya bir y-konnektörü kullanılarak tutarlı bir hava akımı ve bölünme oluşturmak için bir akvaryum perlatör birine kısa bir parça bağlayın. Sistemin (4 gözlem şişeler için, tipik olarak 1,000 ml / dakika) üzerinden toplam hava miktarını kontrol hava akış regülatörüne ilk dalı bağlayın.
    2. Ikinci tüp içinde bir hızlı konektör kaydedinhava akımı, hava akımı kalibre etkilemeden Deneyin başında kesildi, böylece. Bir Y-bağlantı ekleyin ve hava akış regülatörüne her dallanma tüp bağlayın.
    3. Hava akımı düzenleyiciler için boru bağlayın ve daha sonra iki hava akımı metre bağlayın.
  2. Alkol ve damacanaların Set-up
    1. Hava akışı metre çıkışında esnek borular ekleme ve boru uzunluğunun her ucuna bir 90 ° 'lik dirsek ile ince bir cam tüp (1 ml bir cam pipetler bölümlerinin) yerleştirin. Bu su ve alkol şişeleri içine giren hava akışını olarak görev yapacak.
    2. Alkol ve su ile doldurulmuş şişelerin içine içlerinden 2 delikli kauçuk tıpa yerleştirin. Bir su banyosu kullanılarak dış hava sıcaklığından daha yüksek bir sabit sıcaklık 2 ° C 'de hem de şişe tutun. Su banyosu 27 ° C 'de iken Deneylerde, çevresel odası, 25 ° C' de muhafaza edilir
    3. A için düz cam pipet takınir lastik tıpadan bir girişine ve şişenin tabanından yaklaşık 1 cm kadar sıvı içine uzanır.
    4. Camın ucu şişe içinde durdurucunun alt ile aynı hizaya gelene kadar kauçuk tıpa içinde kalan deliğe cam pipet bir dirsek bölümü yerleştirin. Bir başka boru uzunluğunda bu hava çıkış yerleştirin.
    5. Bir y-konnektör kullanarak hava akışlarını yeniden birleştirecek ve iki delikli lastik tıpa ile yerleştirilen kavisli cam pipet bölümleri ile boş bir karıştırma şişesi veya şişenin içinden hava akışını yönlendirmek için silikon tüp başka bir uzunluk kullanın. Çıkış karışık hava akımı için silikon tüp başka bir uzunluk kullanın.
  3. Gözlem Vial'e Meclisi
    1. Birden çok gözlem şişeler, her bir deney kullanılabilir, böylece hava, 4 veya 8 küçük akışları elde etmek için karıştırma şişe 2-3x çıkan çıkış hava dalgasının ayrıldı. Gözlem şişelerine esnek silikon boru bağlayın.
    2. Görünen kaydetme kurmakCam tüpler alkol buhar için bir giriş ve bir çıkış sağlayan, üzerinden iki delik içeren lastik bir tıpa ile kapatılmış boş şişeler kullanılarak şişeler üzerinde.
    3. Örgü ile birinci cam borunun ucunu Kapak ve esnek bir plastik boru, bir parça kullanarak yerine örgü tutun. Bu şişe yaklaşık yarısı uzunluğu kadar uzanan birinci delikten bu tüp yerleştirin. Gerekirse, bir rahat uyum elde etmek için teflon bant kullanımı.
    4. Bu lastik bir tıpa iç kenarı ile aynı hizaya gelene kadar örgü kapsadığı ucu, ikinci cam tüp yerleştirin.
    5. Loş kırmızı ışık koşulları altında sinekler ile kontrast maksimize etmek için yatay beyaz bir kâğıt parçası üzerinde şişeleri yerleştirin.
    6. Hava akımının içinde karıştırın Uygun fraksiyonlar alkol fokurdatıldı ve hava akımı su fokurdatıldı. Sürekli hava basıncı izleme ve hava akımlarının arzu karışmasını sağlamak için gerekli ayarlamaları yapmak.
      Not: Sürekli çalışanküçük bir oda içinde paralel olarak ya da tek bir deneyde çok Fly Bar deneylerinin alkol buharı gözle görülür bir birikimine yol açabilir. Potansiyel olarak kapalı bir odada araştırmacı etkileyebilir alkol buharı sürekli salınımını önlemek için, uygun bir sistem yeterli deney sırasında oluşturulan alkol buharı kaldırır yerine koymak gerekmektedir. , Alkol buharları çıkarmak her şişeye çıkıntılı ikinci cam tüpün üzerine bir boru 6-12 inç parçası bağlamak, onları paket ve bir huni-vakum sistemine yönlendirmek için. Araştırmacılar ayrıca deneysel test odası yeterince havalandırılmış olduğundan emin olmanız gerekir.

Deney Hayvanlarının 2. Hazırlanması

Gerekçe ve genel bakış: Özgün kültür ve sineklerin konut verileri değişkenlik azaltacaktır. Bu sinekler yaşadığı stres standardizasyonu ve azaltılması ile elde edilir. Bu nedenle, hiçbir anestezi (CO 2 veya alternatifleri) Duri kullanılırng protokol aşağıdaki adımları herhangi biridir. Ayrıca, sinekler, öğrenme ve hafıza deneyleri 17 dahil olmak üzere diğer davranışsal analizler için standart olarak değişkenliği en aza indirmek için deneyler ve zaman noktaları arasında uyumlu yaş olmalıdır.

Farklı aydınlık: karanlık koşullar etanole davranışsal yanıt olarak sirkadyen saatin çalışmasını araştırmak için kullanılabilir. Bir gündüz ritim olup olmadığını belirlemek için, deneyler belirli Zeitgeber Times (ZT) performansı ölçmek için bir tanımlanmış LD döngüsü altında yapılabilir. ZT 12 kez ışıklar 12:12 saat LD döngüsü ile kapalı iken ZT 0, şafak temsil ve LD çevrimleri altında ışıkların süre olarak tanımlanır. Sabit şartlar altında, sirkadiyen zaman (CT) çevre sinyalleri örneğin, serbest çalışma süresi yokluğunda hayvan için zaman ölçer ve bir önceki LD kenetleme döngüsü ile ilgilidir. Vahşi tip Drosophila olarak, CT ilk birkaç günü için önceki ZT yansıtırsabit serbest çalışan sirkadiyen dönemi olarak koşullarda ve ritimler s ~ 24 saat vardır. Karanlık döngüleri ve sonra deneylerden önce sürekli karanlık koşullarda (DD) aktarıldı: sirkadiyen modülasyonu ölçmek ve davranışları üzerinde akut ışık etkilerini ortadan kaldırmak için, sinekler ışığa sürüklenir. Sirkadiyen deneyler belirli sirkadiyen Times (BT) de performansını ölçmek için DD ikinci gününde yapılır.

Drosophila, sürekli ışık (LL) koşulları çekirdek sirkadiyen genler ve aritmik lokomotor aktivite 18-21 ve aritmik kısa-süreli hafıza 17 kanıtladığı gibi davranışsal sirkadiyen ritmin bozulması nemli veya kaldırılmış moleküler salınımlar ile sirkadiyen bozukluğuna neden. Protokol sirkadiyen çalışmaları için optimize edilmiştir ve diğer deneyler için basitleştirilebilir. Tüpler 12 inç kullanılan küçük kırmızı ışıklar; Tüm sirkadiyen deneyler loş kırmızı ışık (ortam havai kırmızı ışık <tezgah üstüne 1 lux kullanılarak yürütülmüştür~ 1 lux ışık).

  1. 12:12 saat ışık altında 25 ° C'de arka sinekler: koyu sürüklenme koşulları (LD).
  2. Gün 1 ve gün ışığı süresinin sonunda taze eclosed sinekleri toplayın ve gıda yapışkanlığını en aza indirmek için, yüksek agar konsantrasyonu gıda küçük bir miktarını ihtiva eden küçük şişeler tutan LD koşullar altında 24 saat için saklayın. Not: Sağlıklı, normal gelişmiş sinekler toplanır sağlamak için, eclosion bir kültür şişe başladıktan sonra sadece ilk gün içinde toplanan sinekler kullanın.
  3. Yaklaşık 30 (25-35) toplu halde toplayın bir ışık döneminin sonuna doğru günde 2 aspiratör, ve taze tutma şişelere transfer kullanarak uçar.
  4. Şişenin kadar sonuna kadar sinekleri yönlendirmek için güçlü bir ışık kaynağı kullanın. Davranışsal gözlemler her deney sonunda sayılmıştır sinekler sayısı ile yüzde olarak rapor edildiği gibidir, bu aralık içinde, her bir küçük şişe içinde sinekler tam sayısı kritik değildir.
  5. 25 ° C'de fo DD koşullarda sinekler koruyuniki gün r.
  6. Deney gününde, farklı koşullar ya da deney öncesinde en az 1 saat için oda deneysel davranış oda dışında kuluçka içinde yer tüm sinekler yerleştirin. Acclimation nedeniyle sıcaklık ve nem değişikliklerine değişkenliği azaltır.
  7. Davranış sirkadiyen modülasyonu için test etmek amacıyla, altı zaman noktalarında bir gün (CT 1, 5, 9, 13, 17 ve 21) gözlemler olun.
  8. Deneysel tasarım dayanıklılığını arttırmak ve tek bir deneye değişkenlik özgü en aza indirmek için davranışsal deneyler tek bir set içinde birden çok kez puan karşılaştırın. Ters ışık-karanlık programları ile iki kuluçka sürüklenme için kullanılır Örneğin, CT 1 ve CT 13 gözlemleri aynı anda elde edilebilir.
    Not: yukarıdaki prosedür, sürekli karanlıkta sirkadyan durumda gerçekleştirilen deneyleri için deney hayvanlarının hazırlanmasını tarif etmektedir. Farklı ışık: karanlık koşulları saatin çalışmasını araştırmak için kullanılabiliralkol davranışsal yanıtların. Bir gündüz ritim deneyler belirli Zeitgeber Times (ZT) performansı ölçmek için bir LD döngüsü altında yapılabilir olup olmadığını belirlemek için. Ek olarak, iletişim kuralı deneyler test sirkadiyen fonksiyon bozukluğu için sürekli ışık altında ortaya sinek ile kullanılabilmektedir. Işık koşullarında muhafaza sinekler sınamak alternatif protokoller için, davranışsal deneyler hala karanlık koşullarda yapılmalıdır. Sinekler nedeniyle davranışı üzerindeki ışık akut etkilerine davranış değişkenliği en aza indirmek için deney öncesinde 1 saat boyunca karanlıkta içine transfer edilmelidir.

3.. Davranış Gözlemler

Gerekçe ve genel bakış: Aşağıdaki alkol verilmesi protokol loş kırmızı ışık koşulunda gözlemler için optimize edilmiştir. İki davranışsal tedbirler lorr ve sedasyon sinek sarhoşluk iki farklı noktalarını temsil eder. Lorr kaybı o içeren sarhoşluk geç bir noktasını temsilf motor ve postural kontrol, zehirlenme sedasyon önlemler ise çok geç bir bitiş noktası. Genotip veya sirkadiyen modülasyon farklı bu iki önlemlerini etkileyebilecek; dolayısıyla bir iki incelemek isteyebilirsiniz. Kısacası, sinekler şişeler içinde yüklenir, lorr veya sedasyon gösteren sinekler sayısı alkol buhar uygulama boyunca her 5 dakika ve deney sonunda sayılmıştır sineklerin sayısı puanlanır.

  1. Deneye başlamadan önce, en az 10 dakika boyunca sistem (hava, su ve alkol şişeleri fokurdatıldı) üzerinden havayı çalıştırmak ve hava akımı ayarlamak için bu zaman kullanın.
  2. Hava akışını durdurmak için hızlı serbest ayırın. Şişelerde sinekler yük ve hava akışını yeniden ve sayaçlarını başlar. Not: tepkisiz sinekler veya ölü sinekler tutma şişelerde bırakılırsa, bu stres koşulları göstergesi olabilir. Genel olarak, bu koşullar tutan şişelerde az sinekler konut veya hafif kullanan gıda yapışkanlık azaltarak hafifletilebilirYemek hazırlama sırasında daha yüksek ly agar konsantrasyonu. Optimum davranışsal analiz ve deneyler arasındaki minimal değişkenlik için, sinekler, deneylerden önce sağlıklı olmalıdır.
  3. Doğru zaman tutmak için, alkol maruziyet toplam süre takip etmek için bir zamanlayıcı kullanın ve 5 dakikalık aralıklarla işaretlemek için ikinci bir sayım-geri zamanlayıcı kullanın.
  4. Kontrastı artırmak ve görünürlük sinek, özellikle loş kırmızı ışık koşulları altında şişelere altında beyaz bir kağıt parçası yerleştirin.
  5. Sabit düzeylerini korumak için bir deney sırasında düzenli hava akımını kontrol edin. Hava akımları stabilize kez Genel olarak, bu deney uzunluğu boyunca sabit kalır.
  6. 1 saat süreyle her 5 dk sonra doğrulma refleksini kaybetmiş sinek sayısını. Alkol duyarlılık genotipler ve genetik arka arasında değişir gibi, daha sık değerlendirme yapmak ya da daha uzun bir süre için deney yapmak için istenebilecektir.
  7. Şişe slightl kaldırınyüzeyden y ve şişe arkasında kağıt doğru bir kırmızı ışık el feneri gelen ışığı doğrudan. Loş kırmızı ışık koşullar altında tüm deneylerde 1 lux daha büyük bir ışık seviyesini korumak üzere deney şişesine, en az 12 inç arasında bir mesafede el fenerleri kırmızı tutun.
  8. Tüm deneyler için standartlar oluşturmak için bir ışık ölçer kullanarak ışık düzeylerini ölçmek.
  9. Flakon bir firma musluk uygulayarak doğrulma refleksini yitirmiş ve yaklaşık 4 saniye içinde kendilerini sağa başarısız kaç sinekler saymak var sinekler sayısını belirleyin. Lorr gösterilecek sinekler hala kendi ayakları ve kanatları hareket edebilir, ama dik kendilerini açamıyorum.
  10. Seansının sonunda, her şişede sinekler sayısı.
    Not: Bazen, bir tek sinek yükleme deney şişeleri içine uçar tıpa ve tarafı arasında yakalanmış olabilir. Bu karanlıkta yapılır gibi, hali hazırda bu nedenle toplam uyuşmuş sayısı için gerekli olan fark edilmeyebilirdoğru yüzdeleri hesaplamak için deney sonunda sinekler er.

Buna ek olarak, bu prosedür, aynı zamanda, farklı bir davranış gösteren bir bitiş noktası sinekler sedasyon, ölçmek için kullanılabilir. Sedasyon sinekler onların sağ refleksini kaybetmiş olsa da, sedasyon fazla alkol pozlama gerektirir. Davranışsal, sedasyon sinekler şişeye aa sağlam musluk sonra küçük şişe içinde hareketsiz kalan belirgin motor aktivitenin tam eksikliği ile karakterize edilebilir. Sedasyon, hareketsiz hiçbir bacak flakon sağlam bir musluğun aşağıdaki teslim sallayarak kalır sinek sayısını. Ayrıca, şişe bireysel sinekler hala kendi kapma refleksini korumak olmadığını belirlemek için yan yana rulo olabilir.

4.. Veri Analizi

  1. Her şişede sinekler toplam sayısına bağlı olarak değerlendirilen her zaman yüzde lorr belirler.
  2. Calculati sirkadiyen zaman noktaları veya suşları arasındaki farklar Tahminisigmoid eğrinin lineer kısmı içinde kalan her bir örnek için% 50 lorr, (aşağıdaki Şekil 2) ng.
  3. Alternatif istatistikleri:
    1. Genotipler arasında karşılaştırmalar planlanmıştır, bu fark (Şekil 3) post-hoc testi ile önemli olduğu zaman noktaları aralığını belirlemek için tekrarlanan ölçümler için ANOVAand kullanarak tüm zaman süreci analizi için tercih edilir. Bu testler için, 0.001 bir değerini kullanmayı tercih. Bu bireysel maruz zamanlarda farklılık eğrinin eğimi genotip arasındaki farklar hem de değerlendirilebilir sağlar.
    2. Için duyarlılık farklılıklar, grafiğin doğrusal bölümü (Şekil 4) sedasyon gibi belirli bir tepki için alkol maruz belirli zamanlarda için belirlenebilir.
    3. Suşları veya sirkadiyen zaman noktaları arasındaki farklar standart F-istatistikleri ve post-hoc testleri kullanılarak tahmin edilebilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bir Marker olarak% 50 lorr kullanarak Alkol Duyarlılık sirkadiyen modülasyonu.

Gündüz alkol hassasiyeti sirkadiyen modülasyonu gösteren temsili bir örneği, Şekil 2'de gösterilmiştir. Lorr Canton-S DD, 2. gün boyunca altı zaman noktalarında ölçülmüştür ve% 50 lorr her bir zaman noktası için belirlendi. (: F 5,45 = 7.39, p <0,001, N = 6-10 Nokta zaman başına ANOVA) Analizi günün önemli bir zaman etkisini göstermiştir. Fisher LSD testi CT 21 vs CT13, CT17 vs CT9 ve CT9 vs CT 21, CT9 vs CT17, CT5 vs CT13, CT5 vs CT5, CT5 vs CT1 arasında anlamlı farklılıklar gösterdi. Bu sonuç tutarlı daha önce yayınlanmış sonuçlar 1.

Vahşi tip ve mutant sinekler arasında farklar.

İkinci örnek lorr farklılıkları ve vahşi tip Canton-S sinek ve FLI arasında sedasyon göstermek için zaman serisini kullanıraynı genetik arka planda (1118 w) bir kayıp fonksiyon-beyaz mutasyonu (Şekil 3) taşıyan es. Transgenik hatları sık sık da w 1118 mutasyonu olan bu sinekler ve sirkadiyen saat genleri için birçok mutant hatları kullanılarak oluşturulan gibi w 1118 mutasyon Drosophila araştırmacıların özel ilgi. Sonuçlar, bütün işlem süresi boyunca her 5 dakika boyunca gösterilen verilerle bir zaman serisi (Şekil 3) olarak sunulmaktadır. Gözlemler hızlı tolerans birikimini 22-24 etkilerini önlemek için 60 dakika ile sınırlıdır. W 1118 mutantlar önemli ölçüde azaltılmış lorr (denek F 1,10 arasında ANOVA = 57.12, p <0,001, N = 6) Canton-S göre daha etanol buharı yanıt hassasiyeti gösterecektir. Önemi farklar (a = 0.001) 60 dakika (Şekil 3A, 20 dakika boyunca bu deneyde bulundu 1118 ve Canton-S w arasındaki farklar da (denek F 1,10 = 137.301, p <0.001 arasında ANOVA N = 6) sedasyon oranında bulundu. Sedasyon tahlilde, anlamlı bir fark (a = 0.001) 50 dakika, 55 bulundu ve 60 (Şekil 3B). Gözlerinde tarama pigmentlerin eksikliği ek olarak, w 1118 mutantlar aynı zamanda serotonin, dopamin ve histamin 25,26 seviyelerini azaltmıştır. Biyojenik amin seviyelerindeki bu değişiklikler, w 1118 mutantlar 27,28 etanol için hassasiyet değiştirilmiş sorumlu olabilir. Bu nedenle, tahlil genotip beyaz ifade seviyesini kontrol etanol duyarlılık doğru bir değerlendirme için gerekli olabilir.

Sedasyon sirkadiyen modülasyonu.

Üçüncü örnekte, Canton-S yüzdesi oturaklı uçan ölçülürsedasyon üzerinde alkol sirkadiyen etkisi (Şekil 4) olup olmadığını belirlemek için zaman belirli bir miktar sonra d. Biz CT 5 ve 17 C'de 40 dakika (% 30 alkol buharı) de sedasyon sinekler yüzdesi karşılaştırılmış ve sonuçlar orada önemli ölçüde daha az sedasyon sinekler gece boyunca alkol maruz oranla gündüzleri (ANOVA olduğunu göstermektedir: F 1,20 = 6.21, p = 0.022, N = 10 (CT5) ve 12 (CT17)). Gözlemler doğrudan bir karşılaştırma mümkün kılmak amacıyla standart lorr şartlar altında yapılmış gibi sinekler saat içinde% 50 sedasyon işaretine ulaşamadı. Saat ötesinde Tespitler hızla tolerans 22-24 birikimine sorunludur. Bu deneyde, sirkadyan zaman noktasında ya da sinekler az% 25 bu gruplar arasında öncü sedasyon duyarlılığında bir fark olduğunu gösteren, 40 dakika süre ile yatıştırılmıştır. Sedasyon bu erken bir noktada verilerin toplanması yararlı değil Göstergeler olduğunufarklar bu iyon, ancak sedasyon cevaplarda dağıtım şekline tedavinin etkisini tespit etmek yeteneği sınırlıdır. Tüm sedasyon dağılımında bir fark olup olmadığını belirlemek için, daha yüksek bir etanol konsantrasyonu sedasyon daha hızlı bir oran sağlamak için kullanılmalıdır.

Şekil 1
Şekil 1.. Meyve sineklerinin alkol duyarlılık ve sedasyon ölçmek için Flybar.

Şekil 2,
.. Şekil 2 gün boyunca alkol duyarlılığında önemli sirkadiyen modülasyonu gösteren Temsilcisi örneği (ANOVA: F 5,45 = 7.39, p <0.001, N = 6-10 zaman noktasında; CT1 vs CT5, CT13, CT17 & CT21 ve CT9 CT13 vs, CT17 & CT21) arasında anlamlı farklılıklar.

Şekil 3,
Davranışsal tepkiler üzerindeki alkol Şekil 3.. Etkileri vahşi tip Canton-S uçar ve kıyasla lorr ile ölçülen kayıp fonksiyon-beyaz 1118 mutant sinekler. A) Canton-S sinekler alkol önemli ölçüde artmıştır duyarlılık göstermesi arasında anlamlı fark vardır beyaz mutasyonu taşıyan aynı genetik arka plan (F 1,10 = 57.12 denekler arasında ANOVA, p <0,001, N = 6). B) Canton-S sinekler konular arasında 1118 mutantlar (ANOVA w daha alkol sedasyon daha duyarlı ile uçar F 1,10 = 137.301, p <0,001, N = 6). *p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001.

Şekil 4,
. Şekil 4 Canton-S yüzdesi karşılaştırarak Temsilcisi veri CT 5 ve BT 17 arasındaki 40 dk sedasyon sinekler Yabani tip sinekler CT 5 (ANOVA ile karşılaştırıldığında BT 17 seviyesinde ilk sedasyon anlamlı olarak daha fazla artış gösterecek:. F 1,20 = 6.21, p = 0.022, N = 10 (CT5) ve 12 (CT17)).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alkol ve toplum için alkolizm maliyetler de 29 insan ve ekonomik maliyetleri açısından, muazzam 30,31. Drosophila bir model olarak hızla bireylerin çok sayıda davranışsal tepkileri incelemek için hızlı ve çok yönlü bir sistem sunar ve gibi yaygın alkol 5,7,32-34 ve sirkadiyen araştırma 35-37 her ikisi için de kullanılmıştır.

Burada, sirkadiyen koşullar altında yetişkin sinek alkol buharı kontrol uygulanması için basit bir protokol tarif.

Standart koşullar altında kültive sinekleri doğrulma refleksini yitirmiş olan sineklerin sayısı her 5 dakika atacak sırasında 1 saat boyunca alkol buharı maruz kalmaktadır. Burada açıklanan protokol nedeniyle sürekli koşullar altında sürüklenmesine ve konut için ek gereksinimleri sirkadiyen deneyleri için optimize edilmiştir. Çeşitli adımlar basitleştirilmiştir olabilirörneğin en az bir gün ya da loş kırmızı ışık koşulları altında deney yapmak için karanlıkta depolama sirkadiyen deneyler için gerekli olan bu adımları kaldırarak genel çalışmaları için ed. Bu protokol, aynı zamanda daha sonra biyokimya ve moleküler analiz için değişen konsantrasyonlarda alkol için kontrollü bir şekilde sinekler çok sayıda ortaya çıkarmak için kullanılabilir. Bu tür öğrenme ve hafıza gözlemler, loş kırmızı ışık koşullarında davranışsal tepkilerin ölçülmesi gibi diğer Drosophila davranışsal deneyler ile tutarlılık için bile olmayan sirkadiyen deneyler için istenebilir.

Deney bağımsız çoğaltır arasındaki varyasyon mutantların veya transgenik suşları arasında veya sirkadiyen zaman noktaları arasındaki küçük farklılıklar gizlenebilir. 'Kopya' ortadan kaldırmak amacıyla rastgele bir değişken olarak eklenebilir, böylece bu nedenle aynı anda birden fazla suşları veya sirkadiyen zaman noktalarının test örnekleri (bizim örneklere bakın) önerilirkopyaları arasında varyasyonun etkisi.

Alkol için duyarlılık suşları arasında değişir. Alkol yüzdeler (alkol fokurdatılarak hava akımının yüzde olarak) buna uygun olarak ayarlanması gerekebilir. Şekil 3'te görüldüğü gibi, vahşi tip Canton-S uçan göre alkol maruz etkilerine karşı daha az duyarlı olan, beyaz mutasyonu taşıyan uçar. Beyaz mutasyonunu taşıyan hatların analizi için, hızlı bir toleransa neden olabilir alkol için daha uzun maruz kalma gibi diğer deneyler, aynı süre içinde davranış analizi gerçekleştirmek üzere sinekler maruz kaldığı alkol yüzdesinin arttırılması istenebilecektir gelişme. Son derece hassas mutantlar için, ve bu tür sarı genindeki bir mutasyonu ihtiva eden sinekler için gözlemlenen olarak kullanılan alkol yüzdesini azaltmak için gerekli olan deneyler için, hava akımı doğru alkol, doymuş hava akımını ayarlamak için artırılabilir gerekebilir. Küçük artışlar veya Aralıktoplam hava akımına reases (±% 10) (uygulanabilir hava akımı aralığı 900-1100 4 gözlem flakon için ml / dak) olumsuz sinekler etkiler görünmüyor.

Mümkünse 1 saat ötesinde gözlemler çünkü alkol hassasiyetini etkileyen sinekler 22-24 hızlı tolerans birikimini potansiyeli kaçınılmalıdır. Bunun yerine, 30-40 dakika süre ile yaklaşık olarak% 50 lorr ile sonuçlanan, her bir suş için alkol yüzdesini belirlemek. Birden fazla bağımsız suşların karşılaştırılması gerekli ise, tüm suşlar için çalışan alkol tek bir yüzdesi seçin.

Bu protokol, davranışsal gözlemler büyük ölçüde bağlıdır, böylece standart bir protokole sıkı bağlılık zamanla davranışsal gözlemler sapmayı önlemek için şarttır. Mümkünse gözlemci genotip veya zaman noktası, test edilen kör, böylece, davranış gözlemleri yapılmalıdır. Bu ve bilinmeyen diğer faktörlere dayanarak potansiyel önyargı tespit etmek amacıyla,Bir zaman kurs verileri incelemek ve gözlemler deneysel dizi boyunca aynı aralıkta kalması doğrulamak için tavsiye edilir.

Flybar set-up özellikle lisans araştırmacı veya etanol olumsuz etkileriyle ilgili sirkadiyen çalışmalar için, sinekler için alkol idarenin diğer yöntemlere göre bazı avantajlar sağlamaktadır. Sinekler motor kontrolü alkolün etkisini ölçmek için alternatif bir cihaz inebriometer olduğu, etanol yükselen buhar saptırma plakaları ve postürel kontrolü veya sinek duyarlılık kaybı üzerinden sirküle edildiği bir dikey sütun gereken süreyi saptanmasıyla ölçülebilir sütunun 38,39 altına düşecek. Inebriometer kaybı-postürel kontrolü otomatik olarak okunmasını sağlar ve Drosophila 9,22,39,40 alkol araştırmalar için önemli olduğu kanıtlanmıştır, ancak bu davranış paradigma nispeten pahalı ekipman, cihaz için alan ve kalibre etmek için zaman gerektirirve koşullarını optimize. Böylece, inebriometer sınırlı bütçeleri veya alana sahip birçok lisans eğitim laboratuvarları için, ya da sirkadiyen analizler yapmak araştırmacılar için uygun olmayabilir. Sinekler için alkol sunan ve sedasyon ölçüm için bir başka yöntem en üstünde ya da bir şişenin altındaki ya da bir emici malzemenin sıvı alkolün küçük bir miktar yerleştirerek ve daha sonra alkol zaman 41,42 ile buharlaştırmak için izin içerir. Zamanla artar alkol buharı konsantrasyonu olarak, davranışsal tepkileri değerlendirilebilir. Bu dağıtım yöntemi kurulumu kolay olsa da, sinekler maruz kaldığı alkol buharının miktarı, zaman ve şartlara göre değişmektedir. Farklar sirkadiyen modülasyonu gibi duyarlılık veya sedasyon başlangıç ​​hızları, değerlendirilmektedir ki deneysel soru için, sinekler teslim alkol buharı sabit bir seviyede olması tercih edilir. Buna ek olarak, alkol exposur sabit bir miktar için sinekler çok sayıda şaryoe, Flybar ile gerçekleştirilen gibi, alt-hücresel veya biyokimyasal tahlillerin doğru performans için tercih edilir. Erken Drosophila alkol araştırma ortak sinekler için alkol teslim başka bir yöntemi hazırlanan olarak gıda içine alkol karıştırma dahil. Bu yöntem, çok kolay ve az kurulum gerektiriyorsa, o zaman alkol değişikliklerin konsantrasyonu olarak gün boyunca sürekli alkol maruz kalma en uygundur.

Daha sofistike, otomatikleştirilmiş yöntemleri, aynı zamanda video aktivite kayıt ve görüntü analizi yazılımı 7,43 gibi alkol maruziyeti sineklerin lokomotor yanıtları değerlendirmek için kullanılabilir. Bunlar etanol pozitif, hiper aktive etkilerini değerlendirmek için özellikle güçlüdür. Ancak, bu otomatik yöntemler lisans araştırma projeleri veya eğitim laboratuvarları için pahalı olabilir ve optimal sirkadiyen Condi altında sinekler çok sayıda analizi için tasarlanmış olabiliryerlerine (örneğin, karanlık koşullarda video yakalama dengeli gerektirir ve kızılötesi aydınlatma ve kızılötesi hassas kameralar yaygın). Biz flybar alkol dağıtım sistemi ve koşulları ve laboratuar tasarımları çeşitli çok uygundur alkole davranışsal tepkilerin değerlendirilmesi için set-up, maliyet-etkin bir yöntem kolay oluşturduğuna inanıyoruz.

PROTOKOL DEĞİŞİKLİKLER:

Yukarıda açıklanan protokol Kaybı-of-Altı düzeltilmesi-Reflex sirkadiyen bir bağlamda alkol pozlama etkisinin incelenmesi hedeflenmektedir. Bununla birlikte, deney protokolü kolay alkol diğer türlerine uyum sağlamak için modifiye edilebilir.

12 saat-12 saat Açık-Koyu altında alkol yanıtı incelenmesi (LD; Zeitgeber Zaman) koşulları: 12 saat altında sinekler koruyun: 12 saat LD döngüsü deney kadar. Işık faz (ZT 1, 5 sırasında yapılan deney öncesi karanlık, yaklaşık 1 saat kadar sinekler aktarınVe 9), günün. Bu ışığın akut etkisi sonuçları karıştırıcı değil sağlayacaktır.

Kendi sirkadiyen saat 18-21 ve alkol maruz 1 aritmik yanıtların bozulması sürekli ışık koşulları sonuçlarının altında kültüre sinekler: sabit ışık koşulları altında alkol yanıtı incelenmesi. Sinekler LD ya da DD koşullarında muhafaza sinekler ile aynı koşullar altında test edilir, böylece Sinekler deneyden önce yaklaşık olarak 1 saat karanlık aktarılabilir.

Sedasyon: sinekler lorr uçarken hala kanatları, kafasını ve bacaklarını hareket edecek, şişenin dibinde hareketsiz kalması nedeniyle sakinleştirildikten Sinekler lorr ayrılabilir uçar. Flakon rahatsız olduğunda sergi lorr hala ince hareketleri ile yanıt uçar. Sinekler sedasyon bir firma sonra sinekler hareketsiz kalan sayısının sayılması ta belirlenirşişeye p. Buna ek olarak, şişenin haddeleme bireysel sinekler hala çekici refleks korumak olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir.

Geri Kazanım: davranışsal deney alkol tepkisinin ek bir parametre olarak bir iyileşme ölçülerek uzatılabilir. Alkol pozlama durdurun ve lorr her 5 dk ilgili gözlem yapmaya devam. Toparlanma dönemleri sırasında, şişeler üzerinden nemlendirilmiş hava akışını devam edin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Acknowledgments

Bu araştırma için fon Florida State Üniversitesi Tıp Fakültesi ve FSU Biyolojik Bilimler Bölümü'nden destek Neuroscience Ödülü bir Programı tarafından sağlanmıştır. Ek Finansman bir Grant-in-Aid Alkollü İçki Üretici Araştırma Fonu tarafından sağlanmıştır.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alcohol 190 proof Various
Aerator Local pet store We use Whisper 60
Silicone tubing 1/8” VWR 408060-0030
120° Y-connector VWR 82017-256
Quick disconnects VWR 46600-048
Plastic tube clamps Bell-art products 132250000 Either this or next
Miniature air regulator McMaster-Carr 8727K11 Either this or previous
Miniature air regulator mounting bracket McMaster-Carr 9891K66
Gilmont size 12 flow meter VWR 29895-242
Tool clips McMaster-Carr 1722A43 To hold flow meters
Vial VWR 89092-722
Rubber stopper with two holes VWR 59585-186 Fits in vials
5 mm Pyrex glass tubes Trikinetics PGT5x65 Fits best in previous stopper
Teflon tape Hardware store To achieve snug fit in stoppers if necessary
Rubber stopper with two holes VWR 59582-122 Fits our bottles
Disposable glass pipets VWR 53283-768 Cut to length and bend by heating
Very fine nylon netting VWR Various
15 watt bulbs Hardware store Overhead red light
Photographic red safe light filters Overhead red light
Mini flashlights with red filters Mag-light

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Linde, K., Lyons, L. C. Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila. Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).
  2. Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).
  3. Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila. Science. 335, 1351-1355 (2012).
  4. Bellen, H. J. The fruit fly: A model organism to study the genetics of alcohol abuse and addiction. Cell. 93, 909-912 (1998).
  5. Guarnieri, D. J., Heberlein, U. Drosophila melanogaster, a genetic model system for alcohol research. International Review of Neurobiology. 54, 203-232 (2003).
  6. Scholz, H. Intoxicated fly brains: Neurons mediating ethanol-induced behaviors. J. Neurogenet. 23, 111-119 (2009).
  7. Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. Y., Heberlein, U. High-resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila. J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).
  8. Schumann, G., Spanagel, R., Mann, K. Candidate genes for alcohol dependence: Animal studies. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 27, 880-888 (2003).
  9. Singh, C. M., Heberlein, U. Genetic control of acute ethanol-induced behaviors in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 24, 1127-1136 (2000).
  10. Perreau-Lenz, S., Zghoul, T., de Fonseca, F. R., Spanagel, R., Bilbao, A. Circadian regulation of central ethanol sensitivity by the mPer2 gene. Addiction Biology. 14, 253-259 (2009).
  11. Brager, A. J., Prosser, R. A., Glass, J. D. Circadian and acamprosate modulation of elevated ethanol drinking in mPer2 clock gene mutant mice. Chronobiol. Int. 28, 664-672 (2011).
  12. Sinclair, J. D., Geller, I. Ethanol consumption by rats under different lighting conditions. Science. 175, 1143-1144 (1972).
  13. Danel, T., Jeanson, R., Touitou, Y. Temporal pattern in consumption of the first drink of the day in alcohol-dependent persons. Chronobiol. Int. 20, 1093-1102 (2003).
  14. Kapfhamer, D., et al. Taok2 controls behavioral response to ethanol in mice. Genes, brain, and behavior. 12, (1), 87-97 (2012).
  15. Lasek, A. W., et al. An evolutionary conserved role for anaplastic lymphoma kinase in behavioral responses to ethanol. PLoS One. 6, 226-236 (2011).
  16. Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse. Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).
  17. Lyons, L. C., Roman, G. Circadian modulation of short-term memory in Drosophila. Learning & Memory. 16, 19-27 (2009).
  18. Hamblen-Coyle, M. J., Wheeler, D. A., Rutila, J. E., Rosbash, M., Hall, J. C. Behavior of period-altered circadian-rhythm mutants of Drosophila in ligh-dark cycles (Diptera Drosophilidae). J. Insect Behav. 5, 417-446 (1992).
  19. Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. Reciprocal behavior associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants. J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).
  20. Power, J. M., Ringo, J. M., Dowse, H. B. The effects of period mutations and light on the activity rhythms of Drosophila melanogaster. Journal of Biological Rhythms. 10, 267-280 (1995).
  21. Yoshii, T., et al. Temperature cycles drive Drosophila circadian oscillation in constant light that otherwise induces behavioural arrhythmicity. Eur. J. Neurosci. 22, 1176-1184 (2005).
  22. Berger, K. H., Heberlein, U., Moore, M. S. Rapid and chronic: two distinct forms of ethanol tolerance in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 28, 1469-1480 (2004).
  23. Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. M., Heberlein, U. Functional ethanol tolerance in Drosophila. Neuron. 28, 261-271 (2000).
  24. Kong, E. C., et al. Ethanol-regulated genes that contribute to ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 34, 302-316 (2010).
  25. Borycz, J., Borycz, J., Kubow, A., Lloyd, V., Meinertzhagen, I. Drosophila ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of biogenic amines in the brain. J. Exp. Biol. 211, 3454-3466 (2008).
  26. Sitaraman, D., et al. Serotonin is necessary for place memory in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).
  27. Bainton, R. J., et al. Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila. Current Biology. 10, 187-194 (2000).
  28. Kong, E. C., et al. A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila. Plos One. 5, (2010).
  29. Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. Deaths: Final data for 2007. U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention: National Center for Health Statistics. (2010).
  30. The National Center on Addiction and Substance Abuse. Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. Columbia University. (2009).
  31. NIAAA, Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States. Available from: www.medtext.com/hdcn.htm (1992).
  32. Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).
  33. Devineni, A. V., Heberlein, U. Addiction-like behavior in Drosophila. Communicative & Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).
  34. Rodan, A. R., Rothenfluh, A. The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila. International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).
  35. Boothroyd, C. E., Young, M. W. Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention. Annals of the New York Academy of Sciences. Pfaff, D. W., Kieffer, B. 1129, Blackwell Publishing. 350-357 (2008).
  36. Nitabach, M. N., Taghert, P. H. Organization of the Drosophila circadian control circuit. Current Biology. 18, 84-93 (2008).
  37. Sheeba, V. The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit. J. Genet. 87, 485-493 (2008).
  38. Cohan, F. M., Graf, J. -D. Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance. Evolution. 278-293 (1985).
  39. Moore, M. S., et al. Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway. Cell. 93, 997-1007 (1998).
  40. Berger, K. H., et al. Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster. Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).
  41. Pohl, J. B., et al. Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol. in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. (2013).
  42. Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).
  43. Rothenfluh, A., et al. Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms. Cell. 127, (1016).
Flybar: Sineklerin için Alkol yönetme
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

van der Linde, K., Fumagalli, E., Roman, G., Lyons, L. C. The FlyBar: Administering Alcohol to Flies. J. Vis. Exp. (87), e50442, doi:10.3791/50442 (2014).More

van der Linde, K., Fumagalli, E., Roman, G., Lyons, L. C. The FlyBar: Administering Alcohol to Flies. J. Vis. Exp. (87), e50442, doi:10.3791/50442 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter