Summary
我们的目标是产生一个动静脉瘘，操作简便，重现。此方法不使用缝线或胶水粘合。因此，样品可以用最少的异物的量进行分析。
Abstract
技术方面创建鼠标的动静脉瘘的讨论。在全身麻醉，腹部切口，暴露主动脉和下腔静脉（IVC）。腹主动脉近端和远端主动脉解剖钳安置和针的穿刺，分别。特别注意的是，以避免夹层主动脉和下腔静脉之间。夹紧主动脉后，25 G针用于穿刺的主动脉两壁的进入下腔静脉。周围的结缔组织用于止血压缩的。成功创建AVF将显示下腔静脉搏动的动脉血流。成功AVF可以通过多普勒超声手术后进一步确认。
Introduction
终末期肾病患者肾脏替代治疗在选择最常用的选项是血液透析。访问进行血液透析动静脉瘘（AVF），动静脉移植物，或临时导管置入。 AVF虽然是首选的访问模式，AVF还不够完善。一年主要AVF通畅率只有60-65％，许多次的失败，由于内膜增生。正常AVF的形成和适应不良形成的分子生物学和生理学仍然很差的特点。因此，很多得到改善AVF结果与随附增益理解瘘形成的调控。1-3
曝光静脉动脉血流通常研究的背景下静脉移植旁路手术是直接模式，4，5，虽然静脉移植和AVF同样暴露静脉动脉的环境，有几个关键的二它们之间fferences。首先，前端径流床的电阻是低得多的动静脉瘘，，AVF下水道右心房，而静脉移植水渠往往病变远侧小动脉，导致血流增加和剪切应力，在动静脉瘘。第二，血液中的动静脉瘘的静脉肢体可导致比纯粹的动脉静脉移植物中的含量较低的氧合静脉和动脉血液的混合物中。三，静脉AVF不会删除从它的床上，导致其venorum血管和神经支配保存，移植静脉完全性动脉床。最后，在静脉移植物吻合的数量通常是两个，而AVF通常只有一个。在这项研究中，我们将介绍的小鼠模型中aortocaval瘘，可用于AVF研究。
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Protocol
1。麻醉和手术前的程序
- 全身麻醉诱导
获得由适当的机构动物护理和使用委员会的批准。男性C57/black小鼠，年龄10周，麻醉。提供4％的异氟醚0.8升/分钟氧气到一个有机玻璃框通过异氟醚蒸发器放置在鼠标内部。另外，如果由外科医生，优选，腹腔麻醉可以使用。 - 保留麻醉
由缺乏反应脚趾捏麻醉确认后，鼠标被放置在手术台上用硅胶面罩在仰卧位。异氟醚减少至2％，以维持适当的麻醉水平。 - 脱毛
腹取出头发从脖子到小腹使用头发卸妆。毛发去除是优选的，因为使用剃须刀留头发可能会干扰多普勒超声。
2。术前Ultrasoun的ð
- 超声波的目标
AVF手术前进行多普勒超声检查，以便记录发现可与手术后的结果看解剖和生理变化的基础水平。 - 观测点
颈内静脉，超和肾红外线的下腔静脉（IVC）和腹主动脉，采用脉冲多普勒和B型检查。 - 测量
使用B模式，每个血管直径进行了测量。此外，最大速度（在动脉的收缩期峰值流速）和波形记录，可在上述的各测量点。
3。手术
- 鼠标准备
准备切口部位的局部消毒剂，并继续在手术过程中，包括适当的无菌技术采用外科悬垂性，无菌手套和工具等 - 剖腹探查
中线腹部切口制F罗肝脏到稍高于耻骨下缘。 - 曝光主动脉和下腔静脉。
一个拉钩插入所有的肠子被拉出腹腔的右侧，并不停地用生理盐水浸泡的纱布包裹。解剖膜连接后腹膜和结肠下得到充分的主动脉和下腔静脉的看法。如果是扩张和得到应用对膀胱的压力。 - 穿刺部位的曝光
穿刺部位之间的一半到四分之三的距离主动脉分叉左肾静脉。 （ 图1）解剖主动脉的左页边，以便它可以被穿刺。请记住的位置大约45度，后面的下腔静脉和主动脉，它必须被向后剥离除到左边。 （ 图2），这种手术最重要的一点是不要解剖主动脉和下腔静脉之间。保持离他们很远。 - 曝光的AOR钳站点TA
解剖腹主动脉周围组织。要小心，不要伤到左，左肾静脉及其支流在右边的下腔静脉。 - 夹紧的主动脉
钳的近端主动脉通过应用显微片段。 - 主动脉的旋转
通过抓住周围的结缔组织主动脉，主动脉旋转，从而使穿刺可从稍微的主动脉的背侧（ 图2）。 - 至下腔静脉，主动脉穿刺
保持在一个旋转的位置，使用25 G针的穿刺至下腔静脉，主动脉主动脉。 （ 图2），如果成功的话，针可以通过下腔静脉壁薄。 - 止血
拉腹膜后组织，包括肌肉，包裹主动脉穿刺部位。不要压缩对下腔静脉，主动脉，因为它可能血块AVF（ 图3）。 - 夹紧主动脉
确认后主止血钳主动脉。附加可能发生出血，但它可以被进一步压缩上述停止。后夹紧中可以看出，动脉血流入下腔静脉，而不是黑暗的静脉血流。 - 腹部闭幕
返回其自然位置接近腹部的肠子。
4。手术后的程序
- 手术后的护理
封闭的腹部后，异氟醚停止。手术后的护理包括镇痛和伤口护理是按照机构动物护理和使用委员会推荐的指示。镇痛，我们使用丁丙诺啡在0.1毫克/千克都intrasmuscularly 12小时24小时后，外科手术。 - 手术后的超声
在手术后的第一天，多普勒超声检查确认AVF。此外，其他变量的测量，判断是否从手术前的变化值。
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Representative Results
经过实践，生存在第一次手术后的一天通常是超过95％，在手术后第7天，存活率为91.3％。 图1和图2显示了理想的穿刺点在冠状面和剖视图;放置穿刺现场没有过多出血，取得了良好的生存是至关重要的。出血通常是由于手术中的死亡和手术后早期死亡。这往往会发生过多的夹层之间的主动脉和下腔静脉，或从止血压力不足， 图3示出了示意性的重要性与结缔组织包裹穿刺部位止血施加压力前，允许良好的止血效果不压缩的AVF。在我们的经验，技术上成功的AVF可以证实超声第三天; AVF AVF一旦确认存在双工，将通常是稳定，至少要等到28天。 图4显示成功AVF形成典型的多普勒超声所见。波形的变化，观察上面的水平的下腔静脉的动静脉瘘管朝心脏。手术后3天的整体AVF确认率是71.4％。
图1。图显示了穿刺部位。理想的穿刺部位之间的一半到四分之三的左肾静脉和髂分叉之间的距离。 IVC：下腔静脉。
图2。交叉截面图的AVF形成站点 。黑色箭头表示地点和方向的对夹层主动脉暴露。蓝色箭头表示的穿刺部位和方向。
图3。本图显示的方法止血。上排：包装主动脉结缔组织和肌肉。下行：施加直接的压力。动静脉瘘管闭合的机会高，直接压缩。
图4。 AVF手术后的超声所见 AVF高分辨率超声手术后检查。 AVF波形下面是典型的静脉波形，而AVF以上的波形显示的叠加是不存在低于AVF动脉血流。 <A HREF =的“http://www.jove.com/files/ftp_upload/50449/50449fig4large.jpg”目标=“_blank”>点击这里查看大图。
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Discussion
有几个报告所描述的动静脉瘘管的影响，包括股骨AVF，6，7颈颈AVF 8和主动脉腔AVF。9，10，将大鼠比鼠标大几倍，允许更容易的手术相比，在大鼠鼠标。然而，为了利用小鼠遗传品系和变体的步骤，必须扩大到包括小鼠模型。几个先前公布的报告介绍了AVF的小鼠模型中，但这些报告一般都在开发一个模型右路心脏衰竭的背景下，使用较大尺寸的针头。11-13古斯曼我们报告了类似的技术，但是在该报告的作者用缝合关闭的动脉切开13我们不使用缝线随后提取蛋白质和RNA分子分析，以避免潜在的干扰。此外闭的动脉切开缝合进行施加过大的风险瘘，可能会导致急性或晚期出血的紧张局势。在其他报告中，动静脉瘘管被创建，我们描述一个简单的，可重复的方法，该方法可以用在动静脉瘘本身的研究，不依赖于一个吻合口周围的袖带之间的颈动脉和颈静脉，在这项研究中使用的压脉袋14的方法。 。
我们创建了一个与25 G针鼠红外线肾主动脉穿刺，动静脉瘘，通过主动脉侧壁入肾红外线腔静脉穿刺延伸。我们目前的方法在开发过程中，我们已经注意到了一些关键技术，提高技术的成功和一致性的程序：
- 主动脉穿刺部位被放置在远端腹主动脉。正如图1中所示，下腹主动脉的近端部分的位置不与下腔静脉侧侧，这两者之间的血管抑制的动静脉瘘管的稳定有较多结缔组织导致出血和低通畅。
- 需要不需要夹子向远侧超出在主动脉上的穿刺点。近侧夹紧是足够的，以尽量减少在手术过程中的血压。此外，前端钳位干扰与穿刺的主动脉。
- 如图2所示，最有效的和生理的方向通过下腔静脉穿刺的左后右腹侧。如果不这样做，可能会导致较小的瘘口大小，导致较慢的成熟或早期闭塞。因此，我们优选解剖的外后部主动脉和主动脉旋转，稍微右侧，以便取得直接穿刺部位的视图。
- 止血，主动脉入口孔仅与压缩周围组织修复，不需要修补缝合动脉切开术或任何粘接胶。缝合主动脉可能会拉远，从下腔静脉，可能导致闭塞AVF。胶可加强止血，但也可能干扰多普勒超声检查过程中以及手术后组织提取困难。至于压缩，我们不应用直接对下腔静脉穿刺部位上的压力，因为它也可能压缩瘘。如上所述， 如图3所示，包装主动脉与周围的结缔组织和肌肉。
这项研究是一个潜在的局限性，这个模型是由小老鼠的主动脉和下腔静脉大血管之间。目前尚不清楚这种模式是否模仿AVF用于人类患者的临床护理， 即 AVF外周小动脉。此外，对于实验中的对照动物，必须仔细地进行，并依赖于实验的协议。我们通常使用假手术控制，我们在全身麻醉下进行剖腹探查，立即关闭，没有任何puncturE可言。
我们描述了一种短的协议中，操作员可以在小鼠中进行动静脉瘘管，在15-20分钟之内。我们预期，这种模式将是有益的瘘适应，可用于人类终末期肾脏疾病患者，特别是如果配合小鼠疾病模型用于研究。
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Disclosures
没有。
Acknowledgments
这项工作是由国家卫生部授予R01-HL095498在弗吉尼亚州，西黑文，CT康涅狄格卫生保健系统的资源和设施的使用，以及部分支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vevo 770 ultrasound machine | Visualsonics | 20-60 Mhz scan head; RMV-704 | |
| Vascular clamp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Clamp applying forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| 25 Gauge Needle | Becton Dickinson | BD PrecisionGlide Needle 25G x 7/8 #305124 |
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