Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Trypsin Digest protokollen til Analyser Retinal blodkar av en mus modell

doi: 10.3791/50489 Published: June 13, 2013

Summary

Trypsin fordøye er en av de mest brukte metodene for å analysere retinal blodkar. Dette manuskriptet beskriver metoden i detalj, inkludert viktige endringer for å optimalisere teknikken og fjerne ikke-vaskulære vev samtidig bevare den generelle arkitekturen av skipene.

Abstract

Trypsin fordøye er gullstandarden metode for å analysere retinal blodkar 1-5. Den tillater visualisering av hele nettverket av komplekse tredimensjonale retinale blodkar og kapillærer ved å skape en todimensjonal flate-montering av de sammenkoblede vaskulære kanaler etter oppslutning av de ikke-vaskulære komponenter av netthinnen. Dette gjør det mulig å studere ulike patologiske vaskulære endringer, for eksempel microaneurysms, kapillær degenerasjon og unormal endotelceller til pericyte forholdstall. Imidlertid er fremgangsmåten teknisk krevende, særlig hos mus, som er blitt den mest tilgjengelige dyremodell for å studere retina på grunn av den enkle genetiske manipulasjoner 6,7. I mus øyet, er det spesielt vanskelig å fjerne ikke-vaskulære komponenter og samtidig opprettholde den generelle arkitekturen av de retinale blodkar. Til dags dato, er det en mangel på litteratur som beskriver trypsin fordøye teknikken i detalj in musen. Dette manuskriptet gir en detaljert steg-for-trinn metode for trypsin fordøye i mus netthinnen, samtidig gir tips om feilsøking vanskelige trinn.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Visualisere blodkar i netthinnen er en ekstremt viktig tilnærming for å dissekere mekanismene for ulike øyesykdommer som diabetisk retinopati. Det gjør det mulig å vurdere de tidligste karlidelser, inkludert microaneurysms, kapillær degenerasjon, og pericyte tap 8,9. Hittil har det vært flere teknikker utviklet for å analysere retinal blodkar. Perfusjon av ulike fargestoffer har blitt brukt til å markere skipene, men alle har delt samme begrensninger. Injeksjon fremhever sjelden hele retinal blodkar mindre gitt på et høyt trykk, som risikerer sprekker og skader på skipene en. Farging av blodåreendotelets med fluorophore-merket G isolectin B4 (Alexa Fluor 594 konjugert; I21413, Invitrogen, 1:100 fortynning) og netthinnens flate mounts kan markere den generelle arkitekturen av skipene, men uten detaljert visualisering av kapillærene, kjelleren membraner og pericytes . Det ble bemerket avFriedenwald at fartøy kan bli markert ved farging flat-beslag av netthinnen med periodiske syre-Schiff (PAS) eller hematoxylin og eosin (H & E) farging 10. Imidlertid var flekker uspesifikk til skipene og fremhevet den ikke-vaskulære vev i tillegg, noe som gjør det vanskelig å skille skipene. I 1960, utviklet Cogan og Kuwabara trypsin fordøye teknikk som gjorde det lettere å visualisere retinal blodkar ved å fordøye de nonvascular komponentene i netthinnen en. Siden den gang har trypsin fordøye blitt gullstandarden metode i å analysere blodkar i netthinnen 2-5. Det er imidlertid viktig å merke seg at andre alternative teknikker for å isolere blodkar er blitt beskrevet. Bruken av osmotisk lysering har blitt brukt for å isolere blodkar og tillate biokjemiske studier av vevet 11,12, men fremgangsmåten er ikke benyttet som en primær fremgangsmåte for anatomisk undersøkelse. Vevet print metoden har værtanvendt for isolering av store segmenter av mikrosirkulasjon og tillater evnen til å studere den electrotonic arkitekturen av vaskulaturen 13.. I teorien kunne denne teknikk også anvendes til å studere anatomiske forandringer, som kvaliteten av fartøyene er høy. Det er imidlertid bare i stand til å isolere deler av blodkar hele nettverket. Selv om disse metodene ikke kan erstatte trypsin fordøye, er det viktig å merke seg at de har forskjellige fordeler og svakheter, og er komplementære i denne forbindelse.

Det trypsin-digest metoden er teknisk krevende og er vanskelig å utføre gjennomgående 6,7. Videre har det blitt bemerket at trypsin digest er spesielt vanskelig på en musemodell, særlig hvis man ønsker å bevare den totale vaskulær arkitekturen av netthinnen 6,7. Utfordringene omfatter (1) over-fordøyelse av retina som forårsaker tap av både blodkar samt ikke-vaskulært vev, (2) under-fordøyelse, som kreveromfattende mekanisk disseksjon som igjen kan føre til skader på fartøyet sjikt, (3) dårlig separering av den ikke-vaskulære vev fra det vaskulære karet som fører til ikke-spesifikk farging. Flere manuskripter har fremhevet disse utfordringene, men ingen har gitt en detaljert og konsistent protokollen for å overvinne dem 14,15. Dette manuskriptet vil innføre en trinn-for-trinn metode detaljering teknikk for å utføre trypsin fordøye på mus og rotter netthinne med konkrete tips om håndtering av spesielt vanskelige trinn. En skjematisk oversikt er vist i figur 1..

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

En. Retinal Forberedelse

  1. Enucleate musen øyet. Ved hjelp av en hånd, åpnes øyelokkene, slik at øyet er synlig. Med den andre hånden, ved hjelp av en buet pinsett (buede vendt oppover), press på øvre og nedre sider av den bane inntil jordkloden stikker. Lukk forsiktig tang ved den bakre del av øyet og løft i en kontinuerlig bevegelse til enucleate øyet.
  2. Fix øyet med 10% nøytral bufret formalin i minst 24 timer.
  3. Plasser øye i PBS-løsning i en liten petriskål.
  4. Dissekere ut netthinnen nøye under et mikroskop, ta vare å unngå å fremkalle store tårer. Lag et første skjær i hornhinnen med disseksjon saks. Så, mens du holder kuttet med rette tang, bruke saks til å klippe langs grensen av hornhinnen og sclera fjerne hornhinnen. Ved hjelp av gode buete og rette tang, forsiktig skrelle sclera og årehinnen bort fra netthinnen mot synsnerven. Dette trinnet krever tålmodighet somraskt å frigjøre netthinnen kan føre til rifter. Ta av objektivet, og eventuelle overskytende iris og rusk fra netthinnen 16.

2. Vann Vasker

  1. Plasser netthinnen i en 24-brønns tallerken og lokk med vann (ca. 500 mL, filtrert med minst et 45 mikrometer filter).
  2. Endring vann hvert 30 min-1 time, i det minste 4-5 ganger.
  3. La over natten i vann med forsiktig risting ved romtemperatur.

Merk: vaske trinnene er svært viktige fordi de hjelper skille de nevrale netthinnens lag fra blodkar.

3. Trypsin Digest

  1. Fjern vannet, og inkuber netthinnen i en løsning av 3% trypsin (1:250 Difco) i 0,1 M Tris buffer (pH 7,8) ved 37 ° C med forsiktig til ingen risting. Trypsin fordøye er fullført når vevet begynner å vise tegn på disintegrasjon (ca. 1,5 time).
    Merk: Unngå rask ristingda dette kan skade blodkar.
  2. Nøye, pipetteres ut trypsin i en egen brønn med et mikroskop for å unngå å ta på netthinnen. Dette overskuddet trypsin kan brukes senere, da manipulere fartøy under mikroskopet, i trinn 4.3.

4. Skille blodkar

  1. Legg filtrert vann til netthinnen. Deretter forsøke å skrelle av den interne begrensende membranen med pinsett, ved hjelp av saks om nødvendig. Rist med mild omrøring i 5 min. Nøye, pipette ut vannet under mikroskop for å unngå skade på netthinnen.
  2. Gjenta vann vask (for 5 min hver) for å hjelpe fri nettverket av fartøy fra tilhenger retinal vev. Vann-vaskeløsningene ble gjennomført når det er liten eller ingen rester som er igjen i vann etter vask.
  3. Forsiktige manipulasjoner under a disseksjon mikroskop er nå nødvendig å ytterligere frigjøre nettverket av fartøy. Nedenfor er flere nyttige teknikker, som kan anvendes i rekkefølge eller individually å oppnå det ønskede resultatet basert på teknisk preferanse:
    1. Ved hjelp av en 200 mL pipette, nøye pipetter vann opp og ned ved siden av fartøy, blåser vann på fartøy, forårsaker forsiktig omrøring.
    2. Ved hjelp av 200 ul pipette, pipetter trypsin opp og ned for å bidra til å belegge veggene i pipetten. Deretter NØYE pipette hele fartøyet nettverket opp og ned en gang for å bidra til å bryte ned non-vaskulære vev.
      Merk: Sentrering pipettespissen på synsnerven i stedet for kantene av vaskulære nettverket kan også hindre vaskulatur fester seg til spissen.
    3. Løft forsiktig blodkar med fin pinsett ut av vann for å fjerne ikke-vaskulære komponenter.
    4. Hvis trinnene ovenfor ikke fungerer, legger trypsin til netthinnen for å bidra til å bryte ned vevet, og inkuberes ved 37 ° C i flere minutter. Deretter fjerner trypsin og gjenta trinn 04.01 til 04.03.

<strong> Merk: Sørg for å belegge alle instrumenter som vil komme i kontakt med fartøyene i trypsin (f.eks pipette spissen, tang). Dette vil bidra til å unngå vedheft av blodkar på utstyret.

5. Visualisere blodkar

  1. Plasser en dråpe vann på en ren lysbilde. Ved hjelp av en 200 mL pipette eller tang, overføre fordøyd fartøy i vannet. Pass på at vaskulær flat-mount er utfoldet. Overflatespenningen i vannet bidrar til å utfolde den nå diaphanous vaskulære nettverk. Hvis vevet ikke utfolde seg, legge til ekstra vann og rist lysbildet til rette utfoldelsen.
  2. Fjern overflødig vann svært sakte med pipettering eller bruke et papirhåndkle.
  3. La lysbilder tørke helt.
  4. Stain lysbilder via passende protokoll med enten PAS / hematoksylin eller H & E flekken.
    Merk: PAS / hematoxylin er nyttig for å identifisere beholderveggen og cellulær kjerner, H & E er nyttig for demonstration av RBC også.
  5. Dehydrere og montere (Permount montering medium).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Det endelige produkt av en vellykket prosedyre er en flat-montering av hele nettverket av musen retinal vaskulatur, med arkitekturen opprettholdt, farget med PAS / hematoxylin eller H & E, som vist i figurene 2-4. Klar differensiering av endoteliale celler og pericytes kan sees som vist i figur 3.. I netthinnen kjerner av endotelcellene er oval eller langstrakt og ligge helt innenfor karveggen. Pericyte atomkjerner er små, kuleformede, beis tett og generelt har en utstående stilling langs den kapillære vegg.

Trypsin fordøye er en vanlig prosedyre for å analysere vaskulær patologi hos diabetikere dyremodeller. Patologiske vaskulære lesjoner som microaneurysms, pericyte spøkelser (bevis på pericyte tap), acellular kapillærer og kapillær degenerasjon er beskrevet. Figur 4 viser et eksempel på kapillær degenerasjon sett i en db / db mus, en modell for type II diabetes. Selv om prosedyren ble optimalisert for mus netthinne, har lignende resultater også blitt oppnådd i rotte netthinne som vist i figur 5.. Det er viktig å merke seg at rotte-retina er mye større, og en 12-brønns plate ble benyttet i stedet for en 24-brønns plate. Den vaskulatur nettverk av rotte netthinnen er også mindre skjørt enn musen motstykke.

Det er svært viktig å fjerne så mye av den ikke-vaskulære vev som mulig. Eventuelle rester vil føre til ikke-spesifikk farging og føre til dårlig visualisering av vaskulatur. Figur 6 representerer et eksempel på vellykket fjerning av hele den ikke-vaskulære vev i trinn 4.. Likeledes er det også viktig å ha netthinnen foldes ut ved montering, slik som å forbedre synliggjøring av blodkar. Figur 7 representerer mislykket utfolding av den vaskulære flat-mount i trinn 5.1.

ure en "fo: content-width =" 5.75in "fo: src =" / files/ftp_upload/50489/50489fig1highres.jpg "src =" / files/ftp_upload/50489/50489fig1.jpg "/>
Figur 1. . Skjematisk av Trypsin Digest Protocol (1) Retinal Forberedelse: isolere netthinnen fra øyet, (2) Vann vasker: Vask i filtrert vann over natten, (3) Trypsin Digest: Inkuber i 3% trypsin ved 37 ° C i 1-1,5 time; (4) Skille blodkar: isolere blodkar via serie av vann vasker og disseksjon i henhold mikroskop, (5) Flytt blodkar til å gli og la tørke, (6) Visualisering blodkar:. flekken lysbilde med PAS eller H & E, tørke og monter Klikk her å se større figur .

Figur 2
Figur 2. Kontroll db / m mus trypsin fordøye (H & E, 20x).Dette tallet er en oversikt over retinal vaskulær nettverk viser normal vaskulær arkitektur.

Figur 3
Figur 3. Kontroll db / m mus trypsin fordøye (H & E, 600x). Dette er et forstørret bilde av netthinnen i figur 2 viser normal vaskulær arkitektur. Endotelceller (hvit pil) og pericyte (svart pil) er uthevet.

Figur 4
Figur 4. Diabetiker db / db mus trypsin fordøye (H & E, 500x). Ved 52 uker, db / db mus begynner å utvikle vaskulær patologi som kapillær degenerasjon (hvit pil).

Figur 5
Figur 5. Normal rottenetthinnen trypsin fordøye, (PAS, 20x [a], 100x [b]). en oversikt og forstørret bilde av en normal rotte vaskulære nettverk.

Figur 6
Figur 6. Kontroll C57/Bl6 mus trypsin Digest, ikke-vaskulært vev intakte (H & E, 20x [a], 100x [b]). Med dårlig fjerning av den ikke-vaskulære vev, er det ikke-spesifikk farging svekke visualisering av fartøyer.

Figur 7
Figur 7. Kontroll db / m mus trypsin fordøye, dårlig montering (H & E, 20x). Hvis netthinnen ikke er tilstrekkelig utviklet seg, det er utilstrekkelig visualisering av vaskulære nettverk.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Trypsin digest er en standard metode for å vurdere vaskulatur av netthinnen. Dessverre er det teknisk utfordrende og kan resultere i høye frekvensen av prøven tap dersom ikke riktig utført. Videre er fremgangsmåten spesielt vanskelig i mus, noe som kan begrense anvendelsen av denne teknikk i vanlig brukte genetiske dyremodeller av øyesykdommer. Denne artikkelen gir veiledning om hvordan du skal utføre prosedyren effektivt og konsekvent i mus øyne.

Det er flere viktige skritt i protokollen. Først, er det avgjørende at netthinnen bli dissekert ut nøye for å unngå noen store tårer, for å sikre at den vaskulære nettverk forblir intakt. Sekund, vasking netthinnen i filtrert vann over natten er viktig fordi det hjelper skille neuroretinal lag fra blodkar, noe som forenkler en enklere separasjon etter trypsin fordøye. En endring som kan fremskynde prosessen ville være å plassere netthinnen i 1% triton X-100 blandes i filtrert vann i 1-2 timer. Deretter kan trypsin digest utføres samme dag etter en serie av vannet skyller å fjerne Triton X.

Det er viktig at de retinale vevene overvåkes konstant under trypsin digest for å unngå utilsiktet oppløsning av vaskulaturen vev. Basert på vår erfaring, er rundt 1-1,5 hr tilstrekkelig til å oppnå fordøyelsen av nevrale vev, og samtidig bevare blodkar intakt. Mindre tid er nødvendig for yngre mus. Forsiktig risting kan utføres i løpet av trypsin fordøye å bidra til å lette fraskilling av blodkar fra det gjenværende vevet, men er ikke nødvendig. Det er viktig å unngå sterk uro da dette kan føre til riving av skipene.

De kritiske trinn som krever mest oppmerksomhet innebære skille blodkar etter trypsin fordøyelsen. Ved utføring vannet skyller, er det viktig å unngå pipettering blodkar. Pipettering avblodkar bør bare brukes som en metode for separering av blodkar etter at veggene er blitt belagt med trypsin. Alle manipulasjoner må gjøres forsiktig under disseksjon mikroskop som nettverk av fartøy kan lett bli skadet. De forskjellige teknikker som er beskrevet i trinn 4 kan anvendes med hell i en rekke kombinasjoner. I siste instans vil det være opp til den enkelte experimenter å finne den tilnærmingen som fungerer best for dem. Det er viktig at alle verktøy som vil komme i kontakt med blodårene være belagt med trypsin. Dyppe de verktøyene midlertidig og ofte inn trypsin under prosedyren kan hindre vedheft av blodkar og potensielt brudd.

Effekten av fremgangsmåten er også avhengig av bakgrunnen mus modellen. Noen mus bakgrunn er ikke så bidrar til å bevare hele vaskulatur nettverket. For eksempel er det FVB bakgrunn homozygote for en fosfodiesterase-6 mutasjon som gjør dem tilbøyelige til å reTinal degenerasjon 17. Fra vår erfaring har vi funnet ut at deres retinal blodkar er iboende mer skjør, og vi klarte ikke å bevare hele blodkar nettverket. Således er det viktig at bakgrunnen tas i betraktning før forsøker denne teknikk.

Til syvende og sist, er den viktigste begrensningen for denne prosedyren et individs disseksjon ferdigheter. Det er viktig å merke seg at selv om en person kjenner teknikker vel, kan det ta flere forsøk før de begynner å oppnå konsistente resultater. Dermed vil vi anbefale at de interesserte lab personell utføre flere praksis dissections å få tillit og komme frem til den beste og mest konsekvent tilnærming før du utfører prosedyren på sin eksperimentelle vev. Det er viktig å merke seg at, når de mestrer, er trypsin fordøye en verdifull teknikk som kan brukes til å vurdere vaskulær patologi (figur 4). Trypsin fordøye kan også utføres lykkescessfully på bevarte netthinne som har vært i bindemiddel i flere år en.

I konklusjonen, fortsetter trypsin fordøye å være en svært nyttig metode for å analysere retinal blodkar siden beskrivelse av Cogan og Kuwabara i 1960. Den tillater detaljert visualisering av hele vaskulære nettverk, sammenlignet med immunofluorescens / H & E / PAS-fargede seksjoner, flat-montere og fargestoff-injeksjoner. Selv om det er teknisk vanskelig, beskriver dette manuskriptet til prosedyren i detalj slik at den kan utføres med hell. Som et resultat, håper vi undersøkere nybegynnere til metoden vil ha tilstrekkelig veiledning for å tillate vellykket og konsistent analyse av retinal vaskulatur i sine eksperimentelle modeller.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer at de har ingen konkurrerende finansielle interesser.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble delvis støttet av NIH RO1-EY019951 (AAF), Illinois Society for Prevention of Blindness (JCC, AAF), frie midler til Institutt for Ophthalmology fra forskning for å forhindre blindhet (RPB), NY og RPB Medical Student Fellowship Grant (JCC).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
REAGENTS
10% neutral buffered formalin Fischer Scientific SF100-4
Trypsin (1:250) Amresco 0458-50G Make 3% trypsin in 0.1 M Tris
TRIZMA base Sigma T1503-1KG Create 0.1 M Tris Buffer (pH 7.8 @ 37 °C)
TRIZMA Sigma T3253-500G
Steritop sterile vacuum bottle Millipore SCGPS05RE Create filtered water
EQUIPMENT
Dissecting microscope Any microscope that allows good visualization of the retina is adequate. (10x is sufficient with working distance of 24 mm)
Straight scissors Fine Science Tools 15024-10 Cutting edge: 8 mm; Tip diameter: 0.2 mm; 10 cm
Straight Forceps (Inox) Dumont #5 11252-20 Biologie tip; 0.05 x 0.02 mm; 11 cm
Curved Forcepts (Dumostar) Dumont #7 11297-10 Biologie tip; 0.07 x 0.04 mm; 11.5 cm
Dubnoff Metabolic Shaker Incubator Precision Scientific BDG59442 Shaker optional
24-well dish Falcon 353047
Microscope Slides VWR 82027-132

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kuwabara, T., Cogan, D. G. Studies of retinal vascular patterns. I. Normal architecture. Arch. Ophthalmol. 64, 904-911 (1960).
  2. Kuwabara, T., Cogan, D. G. Retinal vascular patterns. VII. Acellular change. Invest. Ophthalmol. 4, 1049-1064 (1965).
  3. Bell, W. R., Green, W. R., Goldberg, M. F. Histopathologic and trypsin digestion studies of the retina in incontinentia pigmenti. Ophthalmology. 115, 893-897 (2008).
  4. Danis, R. P., Wallow, I. H. HRP/trypsin technique for studies of the retinal vasculature. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 434-437 (1986).
  5. Kim, S. H., Chu, Y. K., Kwon, O. W., McCune, S. A., Davidorf, F. H. Morphologic studies of the retina in a new diabetic model; SHR/N:Mcc-cp rat. Yonsei Med. J. 39, 453-462 (1998).
  6. Cuthbertson, R. A., Mandel, T. E. Anatomy of the mouse retina. Endothelial cell-pericyte ratio and capillary distribution. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 1659-1664 (1986).
  7. Laver, N. M., Robison, W. G., Pfeffer, B. A. Novel procedures for isolating intact retinal vascular beds from diabetic humans and animal models. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 34, 2097-2104 (1993).
  8. Midena, E., et al. Studies on the retina of the diabetic db/db mouse. I. Endothelial cell-pericyte ratio. Ophthalmic Res. 21, 106-111 (1989).
  9. Chapter 30. Diabetic Retinopathy. Lippincott Williams and Wilkins. (2005).
  10. Rosenblatt, B., Benson, W. E. Chapter 6.19 Diabetic Retinopathy. Ophthalmology. Yannoff, M., Duker, J. 3rd edition, Mosby, Inc. (2008).
  11. Friedenwald, J. S. A new approach to some problems of retinal vascular disease. Am. J. Ophthalmol. 32, 487-498 (1949).
  12. Podesta, F., et al. Bax is increased in the retina of diabetic subjects and is associated with pericyte apoptosis in vivo and in vitro. Am. J. Pathol. 156, (10), 1025-1032 (2000).
  13. Dagher, Z., et al. Studies of rat and human retinas predict a role for the polyol pathway in human diabetic retinopathy. Diabetes. 53, 2404-2411 (2004).
  14. Puro, D. G. Retinovascular physiology and pathophysiology: new experimental approach/new insights. Prog. Retin. Eye Res. 31, 258-270 (2012).
  15. Roy, S., Nasser, S., Yee, M., Graves, D. T., Roy, S. A long-term siRNA strategy regulates fibronectin overexpression and improves vascular lesions in retinas of diabetic rats. Mol. Vis. 17, 3166-3174 (2011).
  16. Li, Q., et al. Diabetic eNOS-knockout mice develop accelerated retinopathy. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 5240-5246 (2010).
  17. Connor, K. M., et al. Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological angiogenesis. Nature Protocols. 4, 1565-1573 (2009).
  18. The Jackson Laboratory [Internet]. Available from: http://jaxmice.jax.org/strain/001800.html (2012).
Trypsin Digest protokollen til Analyser Retinal blodkar av en mus modell
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chou, J. C., Rollins, S. D., Fawzi, A. A. Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model. J. Vis. Exp. (76), e50489, doi:10.3791/50489 (2013).More

Chou, J. C., Rollins, S. D., Fawzi, A. A. Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model. J. Vis. Exp. (76), e50489, doi:10.3791/50489 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter