Summary
Wir wollten tolerierbaren Konzentrationen von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) und Cholera-Toxin nicht wesentlich und nachteilig beeinflussen hat das Überleben der Zelle durch das Lösen der Fettsäuren und das Toxin und mit ihnen in das Überleben der Zelle Assays zu bestimmen.
Abstract
Die positive Rolle von Fettsäuren in der Prävention und Linderung von nicht-menschlichen und menschlichen Krankheiten wurden und weiterhin umfassend dokumentiert werden. Diese Rollen sind Einflüsse auf infektiösen und nicht-infektiösen Krankheiten einschließlich Prävention von Entzündungen sowie Schleimhaut-Immunität gegen Infektionskrankheiten. Cholera ist eine akute Darm-Erkrankung, die durch das Bakterium Vibrio cholerae verursacht wird. Es tritt in den Entwicklungsländern, und wenn sie unbehandelt, kann zum Tod führen. Während Impfstoffe gegen Cholera existieren, sind sie nicht immer effektiv und vorbeugende Methoden erforderlich sind. Wir wollten tolerierbaren Konzentrationen von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) und Cholera-Toxin mit der Maus BALB / C Makrophagen und humanen intestinalen Epithelzellen, bzw. zu bestimmen. Wir solubilisiert die oben genannten Fettsäuren und verwendet Zellproliferationsassays die Konzentrationsbereiche und spezifische Konzentrationen der Fettsäuren, die nicht bestimment schädlich für die menschliche Darm-Epithelzellen Lebensfähigkeit. Wir solubilisiert Cholera-Toxin und benutzte es in einem Test, um die Konzentrationsbereiche und spezifische Konzentrationen von Cholera-Toxin, die nicht statistisch nicht verringern die Lebensfähigkeit der Zellen in BALB / C Makrophagen bestimmen.
Wir fanden die optimale Fettsäure-Konzentrationen zwischen 1-5 ng / ul, und dass für die Cholera-Toxin auf <30 ng pro Behandlung sein. Sein Diese Daten können helfen zukünftige Studien, die eine schützende Schleimhaut Rolle Fettsäuren in der Prävention oder Linderung von Cholerainfektionen finden sollen.
Introduction
Die gesundheitlichen Vorteile von Fettsäuren, wie Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure waren und sind weiterhin zu dokumentieren. Zum Beispiel hilft Ölsäure erleichtern das Eindringen von lipophilen Arzneistoffen im Körper 1,2 reduziert koronaren Herzerkrankung um 24%, wenn für gesättigte Fettsäuren 3 substituiert ist, und dient dazu, Stoffwechselerkrankungen wie Adrenoleukodystrophy 4, die eine ist, X-chromosomale behandeln genetische Störung des Fettsäurestoffwechsels. . Während eine notwendige Vorstufe für Arachidonsäure in Säugetieren, Linolsäure (anders als Ölsäure) wird nicht vom Körper synthetisiert und muss durch externe Quellen wie zB durch Leinsamen Verbrauch erzielt werden 5 Studien zeigen mehrere positive Auswirkungen auf die Gesundheit von Linolsäure wie: Anti-Aging-Eigenschaften für die Haut; 6 entzündungshemmende Eigenschaften; 7 reduzierte Proliferation von Darm-und Prostata-Karzinom-Zellen; 8 und die Fähigkeit zur Bekämpfung von Adipositas und Förderung of Herz-Kreislauf-Gesundheit. 9 Linolensäure spielt eine Rolle bei der Verringerung der parodontalen Entzündung, 10 und modulierende Thromboxan und Prostacyclin-Biosynthese. 11
Arpita 12 untersuchten den Einfluss der Galle Fettsäuren und Cholesterin auf V. cholerae 's Ausdruck von Virulenzfaktoren und Beweglichkeit. Yamasaki 13 angedeutet, dass Methanol-Extrakt aus roten Chilischoten und anderen natürlich extrahierten Verbindungen können möglicherweise verringern Cholera-Toxin-Produktion. Denkbar ist es, die Verwendung von Lebensmittel-Produkten, die reich an den oben genannten Fettsäuren (wie Leinsamen) bei der Vorbeugung und Linderung von Infektionskrankheiten wie Cholera durch die Bereitstellung von Schleimhaut-Immunität sind zu berücksichtigen. Wir haben Untersuchungen an Fettsäuren löslich zu machen und zu bestimmen, unter Verwendung Zellproliferationsassays, die maximale Konzentration der Fettsäuren, die humanen intestinalen Epithelzellen ohne nachteilige Auswirkungen auf ce vertragenll Lebensfähigkeit. Wir vermuten, dass Öl-, Linol-und Linolensäure eine positive Wirkung auf die Lebensfähigkeit der Zellen bei niedrigeren Konzentrationen enthalten, aber dass bei höheren Konzentrationen werden sie für die Zellen toxisch. Wir haben auch die gelösten Cholera-Toxin und bestimmt die maximale Konzentration von Cholera-Toxin, dass BALB / C Maus-Makrophagen können, ohne einer signifikanten Abnahme der Lebensfähigkeit der Zellen zu tolerieren. Wir vermuten, eine toxische Wirkung von Cholera-Toxin auf die Lebensfähigkeit der Zellen auch bei sehr niedrigen Niveau. Das Verfahren zur Solubilisierung eine Cholera-Toxin und benutzen, um die maximale Menge des Toxins, dass die Zellen ohne einer signifikanten Abnahme der Überlebensfähigkeit tolerieren bestimmen stellt einen Vorteil für künftige Studien. Zum Beispiel kann eine Kombination der oben genannten Methoden zu bestimmen, ob Zellen bereitzustellen Fettsäuren mit Schleimhaut-Immunität gegen Cholera Infektionen. Nach bestem Wissen versichern wir, hat dies rational und Methodik nicht erforscht worden.
Wir discuss wie unsere vorläufigen Daten in späteren Untersuchungen kann verwendet werden, um festzustellen, ob Öl-, Linol-und Linolensäure bieten Zellen mit Schleimhaut-Immunität gegen Cholera-Infektion.
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Protocol
1. Tissue Culture
- Verwenden Mus musculus Makrophagen (BALB / c-Mäusen) für Cholera-Toxin Bestimmungen. Zunächst Kultur alle M. musculus Zellen nach Anweisungen des Herstellers.
- Propagieren BALB / c-Mäusen Zellen in Dulbecco-modifiziertes Eagle-Medium mit L-Glutamin mit 10% fötalem Rinderserum abgeschlossen und 1% Antibiotikum / Antimykotikum oder RPMI 1640 Basismedium mit 10% fötalem Kälberserum, 5% L-Glutamin und 1 abgeschlossen % Antibiotikum / Antimykotikum Reagenz.
- Wachsen Zellen in 75 cm 2 Corning Kolben mit belüfteten Deckeln bei 37 ° C, 95% Luft und 5% CO 2.
- Rufen Sie humanen intestinalen Epithelzellen innerhalb von 24 Stunden der Lieferung nach den Anweisungen des Herstellers für die Bestimmung von Fettsäure-Bestimmungen.
- Propagieren der menschlichen Darm-Epithelzellen in 75 cm 2 Corning Kolben mit belüfteten Deckeln in HybriCare Medien mit 10% FBS und 30 ng / ml humanen EGF bei 37 ° C abgeschlossen Verwenden Sie keine Antibiotika/ Antimykotikum Reagenzien gemäß den Anweisungen des Herstellers.
- Split alle Zellen (1:3) bei ca. 70% Konfluenz.
- Frieren und bringen alle Zellen während der gesamten Studie unter Verwendung von Standard-Protokollen Einfrieren.
- Hinweis: Bei größeren Maßstab Bestimmung der Konzentration von Fettsäuren, verwenden Sie den schneller wachsenden, leichter zu pflegen, Maus Makrophagen zunächst. Für feine Skala Fettsäurekonzentration Bestimmung, verwenden menschlichen Epithelzellen. Mit der Maus Makrophagen für alle Cholera-Toxin Behandlungen (siehe Diskussion).
2. Fettsäure und Cholera Toxin Behandlungen
- Übertragen Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure aus Unternehmen bereitgestellte Glasampullen, die sterilisiert Glasfläschchen.
- Übertragen jedes Fettsäure zu einem separaten sterilisiert Eppendorf-Röhrchen und lösen sich zunächst in 100% Ethanol bei einer Verdünnung von 1:6, und dann in RPMI 1640 unvollständig Medien für eine Endkonzentration von 10 ug / ul.
- Vortex jede Lösung und transfer es Glasfläschchen zur Speicherung in dem Gefrierfach (-20 ° C).
- Platte Zellen bei 2.500 Zellen / Well in 96-Well-Gewebekulturplatten.
- In die entsprechenden vollständigen Medien, um die insgesamt gut auf 200 ul für die Behandlung von Zellen mit Fettsäuren in Vorbereitung MTT-Assays zu bringen.
- Nach einem 24-Stunden-Zeitraum Proliferation, entfernen Sie die Medien und ersetzen Sie es mit frischem Medium.
- Fügen Sie die entsprechenden Konzentrationen der einzelnen Fettsäuren zu den Vertiefungen getestet werden (siehe Ergebnisse). In komplette Medien, die insgesamt gut Volumina bis 200 ul zu bringen.
- Inkubieren der behandelten Platten 24 Stunden vor Beginn des MTT-Tests.
- Lösen Sie das Cholera-Toxin in PBS in einer Konzentration von 1 mg / ml und Aliquot der Lösung in Kryoröhrchen und speichern die Kryoröhrchen bei 2-8 ° C.
- Zur Zell-Behandlungen, verdünnt 1:100 in das Toxin entweder sterilisiert PBS (pH 7,4) oder unvollständig DMEM für eine endgültige Arbeitskonzentration von 1 ng / ul.
- Um Zellen mit Cholera-Toxin in BehandlungVorbereitung MTT Assays Platte Zellen wie oben beschrieben.
- Nach einem 24-Stunden-Zeitraum Proliferation, fügen Sie die entsprechenden Konzentrationen von Cholera-Toxin (für unsere Konzentration, siehe Ergebnisse), um den Brunnen nach den Verfahren in Fettsäure-Anwendungen (oben) getestet werden.
- Inkubieren der behandelten Platten 24 Stunden vor Beginn des MTT-Tests.
- Als positiver (positive C während des Papiers) und Negativkontrolle (negative c), die sowohl Fettsäure und Choleratoxin Behandlungen inkubieren Zellen mit Vollmedium und 70% Ethanol auf.
- Für alle Proben und Behandlungen mit einem Minimum von drei Wiederholungen (n = 3), mit mehr Wiederholungen für positive Kontrollen (n = 6 in dieser Studie).
3. MTT Assay
- Machen Sie eine MTT-Stammlösung zu einer Konzentration von 2,5 mg / ml.
- Entfernen Sie die Lösung in jede Vertiefung der 96-Well-Platte getestet werden und ersetzen Sie es mit 200 ml frisches komplette Media-Lösung.
- Add 10 ul der MTT-Lösung in jede Vertiefung.
- Inkubieren der Platte bei 37 ° C für 3-4 Stunden.
- Entsorgen Sie die Media-Lösung und 100 ul 0,04 M HCl in Isopropanol in jede Vertiefung.
- Inkubieren der Platte bei Raumtemperatur für fünf Minuten.
- Übertragen Sie die Lösung aus jeder Vertiefung in eine neue Zentrifugenröhrchen.
- Zentrifugieren bei 20000 × g bei Raumtemperatur für 1 Minute oder bis ein Granulat gebildet wird.
- Der Transfer zwischen 20-40 ul jeder Probe auf einem Mikroplatten-Lesegerät.
- Optische Dichte bei 570 nm mit einem Spektralphotometer.
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Representative Results
Bestimmung der optimalen Konzentration von Fettsäuren
Die optimale Konzentration für die Fettsäuren ist als die maximale Konzentration, bei der das Zellwachstum ist vergleichbar oder übersteigt die Kontrollzellen, mit relativ geringen Schwankungen bei den Ergebnissen festgelegt. Um die optimale Konzentration von Ölsäure zu bestimmen, Linol-und Linolensäure Zellen wurden zunächst mit verschiedenen Konzentrationen von jeder Fettsäure in großen Schritten und dann mit kleineren Schritten behandelt. Abbildung 1 zeigt das Überleben von Zellen als Funktion der positiven Kontrolle für Behandlungen mit dargestellten steigenden Konzentrationen der Fettsäuren. Es ist offensichtlich, dass die Zellen nicht tolerieren Konzentrationen von über 100 ng / ul für jede der Fettsäuren. Eine Einweg-ANOVA zeigten, dass für jede der Behandlungen, einer oder mehrerer der von den anderen verschieden (p <0,001) sind. Eine Post-hoc-Test (Tukey) zeigten, dass für Ölsäure alle Behandlungen außerdie 1 ng / ul waren anders als die positive Kontrolle. Interessanterweise aufgrund der hohen Variabilität dieser Behandlung war knapp nicht signifikant von der Negativkontrolle nicht. Für beide Linolsäure und Linolensäure, zeigte eine ANOVA, dass mindestens ein Mittel von den anderen unterscheidet (p <0,001) ist. Ein Tukey-post-hoc-Test zeigte, dass der Mittelwert der 10 ng / ul Behandlung entweder Fettsäure nicht signifikant von der positiven Kontrolle, sind aber von der negativen Kontrolle (p <0,05).
Dieses Experiment wurde für Konzentrationen, die niedriger waren als wiederholt 100 ng / ul, in 10 ng / ul Schritten (bis zu 70 ng / ul, mit menschlichen Epithelzellen). Das Überleben der Zellen wird für jede Konzentration in Fig. 2 vorgesehen. Für Ölsäure (2a), einer ANOVA zeigte, dass eine oder mehrere der Mittel unterschiedlich waren (p <0,001). Es ist jedoch nur die Behandlung bei höheren Konzentrationen (40 und 50ng / ul), die gerendert bedeutet statistisch verschieden von dem der positiven Kontrolle. Interessanterweise waren die beobachteten Unterschiede aufgrund einer Zunahme der Lebensfähigkeit der Zellen (mit mehr Variabilität Abbildung 2a). One way ANOVA ergab ähnliche Ergebnisse für Linol-und Linolensäure. Insbesondere waren keine der Behandlungsmittel vom Mittelwert der positiven Kontrolle. Wiederum scheint Variabilität für einige der höheren Konzentration (Fig. 2b und 2c) zu erhöhen.
Bestimmung der optimalen Konzentration von Cholera Toxin
Die optimale Konzentration für Cholera-Toxin wird als die Konzentration, bei der die Lebensfähigkeit der Zellen nicht beeinträchtigt wird oder gerade abzufallen beginnt als Vergleich zu unbehandelten Zellen definiert. Um die minimale Konzentration von Choleratoxin, die minimal abnimmt Zelllebensfähigkeit zu bewerten, wurden die Zellen zunächst mit verschiedenen Konzentrationen von Choleratoxin in großen inkrementell behandeltts und später mit kleineren Schritten 3a zeigt eine Abnahme der Lebensfähigkeit Trend für das Überleben der Zellen als Folge von Choleratoxin Behandlungen für Toxingehalt in relativ großen Schritten (zwischen 100-1000 ng, R 2, = 0.5436).. Wie zu erwarten, die Lebensfähigkeit der Zellen stark für jede Behandlung (Abbildung 3a) variiert. Die große Variabilität in beobachteten Rentabilität führte zu keiner Bedeutung Differenz zwischen dem Mittelwert der positiven Kontrolle mit einem der Behandlungen (one-way ANOVA). Basierend auf diesen Ergebnissen haben wir festgestellt, dass Toxingehalt <100 ng sollte weiter geprüft werden. 3b zeigt die Lebensfähigkeit der Zellen für die kleineren Toxin Ebene Behandlungen. Die Lebensfähigkeit der Zellen ist sehr variabel für fast alle Toxinkonzentrationen, wenn auch geringe Zuwächse Lebensfähigkeit infolge der Behandlungen beobachtet. Diese Erhöhungen (3b) statistisch nicht signifikant sind für jede der Behandlungen mit dem Mittelwert der positiven Kontrolle (Einweg-ANOVA, Tukey).
Abbildung 1. Bestimmung der nutzbaren Konzentrationen von Fettsäuren:. Auswirkung von unterschiedlichen Konzentrationen von Fettsäuren in relativ großen Schritten (100-1000 ng / ul) für Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure Klicke hier, um eine größere Abbildung anzuzeigen .
Abbildung 2. Feinskaliertes Fettsäurekonzentration Bestimmung: Effekte von unterschiedlichen Konzentrationen von Fettsäuren in kleineren Schritten (10 ng / ul) auf humanen intestinalen EpithelzellenÜberleben der Zelle. Darmepithel-Zellen wurden mit verschiedenen Konzentrationen von Ölsäure (a), Linolsäure (b) und Linolensäure (c) behandelt. Die Positivkontrolle ist Zellen mit Vollmedium nur, und die negative Kontrolle mit 70% Ethanol behandelt. Für jeden Versuch, n = 3 für alle Behandlungen außer positive Kontrolle (n = 6). Klicken Sie hier, um eine größere Abbildung anzuzeigen .
Abbildung 3. Bestimmung der nutzbaren Choleratoxin Konzentrationen auf die Beurteilung der Anwendung von unterschiedlichen Konzentrationen von Choleratoxin auf Maus-Makrophagen Überleben basierend: Maus-Makrophagen wurden mit variierenden Konzentrationen von Choleratoxin in größeren Schritten (a) behandeltendann kleinere (b). Die Positivkontrolle ist Zellen mit Vollmedium nur, und die Negativ-Kontrolle mit 70% Ethanol behandelt. Für jeden Versuch, n = 3 für alle Behandlungen außer positive Kontrolle (n = 6). Klicken Sie hier, um eine größere Abbildung anzuzeigen .
Abbildung 4. Experimentelles Design-Festlegung geeigneter Fettsäure und Toxin-Konzentrationen für den Einsatz in zukünftigen Studien: Zelllysate können verwendet werden, um Makrophagen und Zytokin Dynamik behandeln kann qualitativ und quantitativ durch Immunoblot und ELISA unter Verwendung von Antikörpern gegen bestimmte Zytokine als Marker für die Infektion untersucht werden.
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Discussion
Tipps der Konzentration von Fettsäuren und Cholera Toxin
Zwar ist der genaue Mechanismus, wie Fettsäuren verbessern Schleimhaut-Immunität ist unbekannt, haben mehrere Studien versucht, ihre positiven Wirkungen zu untersuchen. Unsere Studie soll Methode bereitzustellen, um die maximale Konzentration an Fettsäuren, die Zellen als auch die maximale Konzentration von Choleratoxin tolerieren kann, dass Zellen ohne einen signifikanten Einfluß auf das Überleben der Zelle zu bestimmen tolerieren.
Um die Konzentration von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) sowie, dass der Cholera-Toxin zur Behandlung von Zellen ohne sehr erhebliche nachteilige Auswirkungen auf die Lebensfähigkeit der Zellen solubilisiert wir die Fettsäuren und die Cholera-Toxin und behandelten Gewebe kultivierten Zellen zu unterschiedlichen bestimmen Konzentrationen gefolgt von einem MTT-Assay zur Rentabilität zu beurteilen. Basierend auf unserer Methodik und Ergebnisse stellen wir im Bereich von Fettsäuren und Cholera-Toxin nützlichfür zukünftige Untersuchungen, die diese Fettsäuren oder Cholera-Toxin (siehe unten) verwenden wollen. Wir empfehlen Konzentrationen von 1, 5-10, und 5-10 (ng / ul) für Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure, jeweils für die Verwendung von humanen intestinalen Epithelzellen. Wir empfehlen auch die Verwendung von <30 ng (je 200 ul, siehe Methoden) von Cholera-Toxin mit BALB / C Maus-Makrophagen. Wir wissen, dass, zumindest für Cholera-Toxin, kein signifikanter Unterschied zwischen der Lebensfähigkeit der Zellen wurde für die Positivkontrolle im Vergleich zu der Behandlung beobachtet. Allerdings ist unsere Empfehlung für die relativ hohe Variabilität in der Lebensfähigkeit der Zellen, die als Folge der höheren Toxin Expositionen beobachtet beruhte.
Zukunftsforschung
Die Daten in dieser Studie für Fettsäuren und Cholera-Toxin Ebenen zur Verfügung gestellt werden in zukünftigen Studien genutzt werden. Wir bieten Ihnen ein Beispiel für eine solche Untersuchung hier.
Cholera ist eine Erkrankung mit dev verbundeneloping Ländern, die keine ordnungsgemäße Abwasser-und Kläranlagen und sauberem Trinkwasser. Im Jahr 2009, ein Todesopfer von über 3.000 für fünf Monate wegen Cholera in Simbabwe Symptome allein gemeldet wurde. 14 Ab 2011 bleibt eine Epidemie Cholera in verschiedenen Regionen der Welt, einschließlich eines Ausbruchs in Haiti (CDC, 2010) . Eine molekulargenetische Studie im Jahr 2010 ergaben sich Hinweise, dass das Bakterium in diesem Ausbruch von nepalesischer Herkunft war. 15. Die Krankheit durch die Einnahme von fäkal-kontaminierte Lebensmittel oder Trinkwasser und Kolonisierung des Darms durch V. verursacht cholerae, durch die Veröffentlichung eines Enterotoxin gefolgt. Während Cholera Impfungen existieren, sind sie nicht immer wirksam verhindert Infektion während der Ausbrüche. Effektive und kostengünstige Interventionen sind für die Bevölkerung, wo Cholera-Ausbrüchen auftreten benötigt. Ein Ansatz besteht darin zu untersuchen, ob Nahrungsquellen, die reich an Derivate wie Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure sindbereitzustellen oder zu verbessern Schleimhaut-Immunität gegen Cholera-Infektion. Schleimhaut-Immunität Funktionen durch die Verwendung von Protein-Rezeptoren auf der Oberfläche von Zellen, wie zB Toll-like-Rezeptoren 16 (TLR) und Nukleotid-bindenden Domänen (NLR) gefunden. Durch Veränderungen in der Zusammensetzung der Membran und die Freisetzung von Liganden, die mit TLR und NLRs interagieren kann der Zusatz von Fettsäuren an das Darmepithel Verbesserung der Rezeptor-Funktion bei der Erkennung gefährlicher Mikroben und die Rekrutierung der geeigneten Immunreaktionen. Um Fettsäuren Auswirkungen auf Cholerainfektion, Zytokin Dynamik, wie der Zelle Freisetzung von TNF-α, IL-6 zu bestimmen, muss IL-10 und IL-12, um so mehr in humanen intestinalen Epithelzellen untersucht werden als in Maus-Makrophagen (Abbildung 4). Solches Wissen von zukünftigen Studien wird uns helfen, besser zu verstehen, durch welchen Mechanismus Fettsäuren arbeiten, um eine Infektion zu verhindern könnte, um letztlich eine wirksame Interventionen zur choler hemmenein Ausbrüche. Es ist möglich, dass die Behandlung der Zellen mit Fettsäuren vor Choleratoxin Infektion zu induzieren und / oder Verbesserung der mukosalen Immunantwort im Darmepithel, letztlich zu einer Steigerung der Lebensfähigkeit der Zellen während der mikrobiellen Cholerainfektion.
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Disclosures
Die Autoren dieser Studie haben kein finanzielles Interesse aus den Ergebnissen dieser Studie. Die Finanzierung für diese Studie wurde durch FT Kean University zur Verfügung gestellt, jedoch ist derzeit FT Mitarbeiter bei Kingsborough Community College.
Acknowledgments
Wir danken Dr. Paula Cobos und Evros Vassiliou für Labor-Unterstützung und die Bereitstellung der Maus-Makrophagen sind. Wir danken auch unserem Labor Manager Richard Criasia für Beratung und Hilfe mit Materialien. Schließlich danken die Autoren Ramanpreet Kaur für die Hilfe bei Videoproduktion.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 | |
References
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