Summary
Biz önemli ölçüde ve olumsuz yağ asitleri ve toksin çözücü ve hücre yaşam deneyleri bunları kullanarak hücre yaşamını etkilemedi üç yağ asitleri (oleik linoleik ve linolenik asit) ve kolera toksin tolere konsantrasyonlarını belirlemek için yola çıktı.
Abstract
Önlenmesi ve insan olmayan ve insan hastalıklarının hafifletilmesi yağ asitlerinin olumlu rol oynamaktadır ve yaygın belgelenmelidir devam etmektedir. Bu roller iltihabı önlenmesi hem de bulaşıcı hastalıklara mukozal bağışıklık dahil olmak üzere bulaşıcı ve bulaşıcı olmayan hastalıklar etkiler içerir. Kolera bakterisi Vibrio cholerae neden olduğu akut bağırsak hastalıktır. Bu gelişmekte olan ülkelerde ortaya çıkar ve eğer tedavi edilmezse, ölümle sonuçlanabilir. Kolera için aşı mevcut olmakla birlikte, her zaman etkili değildir ve diğer önleyici yöntemlere ihtiyaç vardır. Biz sırasıyla fare BALB / C makrofajlar ve insan bağırsak epitel hücreleri kullanarak tolere üç yağ asitleri konsantrasyonları (oleik, linoleik ve linolenik asit) ve kolera toksin belirlemek için yola çıktı. Bu konsantrasyon aralıkları ve hiçbir olan yağ asitlerinin belirli bir konsantrasyonlarını belirlemek için, yukarıda bulunan yağ asitleri ve kullanılan hücre çoğalma deneyleri çözündürülmüşİnsan bağırsak epitel hücre canlılığı için zararlı t. Biz, kolera toksini ile çözülür ve konsantrasyon aralıkları ve istatistiksel BALB / C makrofaj hücre canlılığı azalma yok kolera toksin belirli konsantrasyonlarda tespit etmek için bir ölçüm içinde kullanılabilir.
Bu optimum yağ asidi konsantrasyonları arasında 1-5 ng / ml, ve bu tedavi için <30 ng olması kolera toksininin. Olduğu bulundu Bu veri önlenmesi veya kolera enfeksiyonların azaltılması yağ asitleri için koruyucu mukozal rol bulmak amacı ileride yapılacak çalışmalar yardımcı olabilir.
Introduction
Oleik, linoleik ve linolenik asitler gibi yağ asitleri, sağlık yararları olmuştur ve belgelendirilmesi devam ediyor. Örneğin, oleik asit, vücut 1,2 lipofilik ilaçların penetrasyonu kolaylaştırır yardımcı doymuş yağ asitleri 3 yerine% 24 oranında azaltır, koroner kalp hastalığı, ve X,-bağlı böyle adrenolökodistrofi 4 gibi metabolizma hastalıkları tedavi etmek için kullanılır yağ asidi metabolizmasının genetik bozukluk. . Memelilerde araşidonik asit, linoleik asit (oleik asit aksine) için gerekli bir öncü vücut tarafından sentezlenir değildir ve bu keten tohumu tüketimi gibi dış kaynaklardan elde edilmelidir ise 5 Çalışmaları gibi linoleik asit birçok yararlı sağlık etkileri gösterir: cilt için anti-aging özellikleri, 6 anti-inflamatuar özellikleri, kolorektal ve prostat kanseri hücreleri 7 azaltılmış çoğalması, 8 ve obezite mücadele yeteneği ve promosyon of kalp-damar sağlığı. 9 linolenik asit, periodontal iltihabı, 10 ve modüle tromboksan ve prostasiklin biyosentezi azaltılmasında rol oynamaktadır. 11
Arpita 12 V. üzerinde safra yağ asitlerinin etkisi ve kolesterol okudu virülans faktörleri ve motilite cholerae 'nin ifadesi. Yamasaki 13 kırmızı acı biber, ve diğer doğal çıkarılan bileşikler, metanol özü potansiyel kolera toksin üretimini azaltır belirtti. Bu mukozal bağışıklık sağlayarak kolera gibi bulaşıcı hastalıkların önlenmesi ve azaltılması, yukarıda yağ asitleri (örneğin, keten tohumu gibi) bakımından zengin olan gıda ürünlerinin kullanımını dikkate almak düşünülebilir. Bu hücre çoğalma deneyleri, insan bağırsak epitel hücreleri Ce üzerinde zararlı etkiler olmadan tolere yağ asitlerinin en fazla konsantrasyonu kullanılarak, yağ asitleri çözünür hale getirmek için ve belirlemek için yapılan araştırmalarll canlılığı. Biz, oleik, linoleik ve linolenik asit daha düşük konsantrasyonlarda hücre canlılığı üzerinde yararlı bir etki sağlamak varsayıldı fakat daha yüksek konsantrasyonlarda bu hücreleri için toksik olacaktır. Ayrıca, kolera toksini ile çözülür ve BALB / C fare makrofaj hücre canlılığını önemli bir azalma olmadan tolere kolera toksin maksimum konsantrasyonu belirlenmiştir. Hatta çok düşük seviyede hücre canlılığı üzerine kolera toksin bir toksik etkisi hipotez. Bir kolera toksin çözündürülmesi ve hücrelerin hayatta kalma önemli bir azalma olmadan tolere edilebileceği toksin miktarının saptanması için kullanılma yöntemi, ileri çalışmalar için bir avantaj sağlar. Örneğin, yukarıdaki yöntemlerin bir arada yağ asitleri kolera enfeksiyonlara karşı mukozal bağışıklık ile ilgili hücre sağlamak olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir. Bildiğimiz kadarıyla en iyi için, bu rasyonel ve metodoloji araştırılmış değildir.
Biz diBizim ön verilere oleik, linoleik ve linolenik asit kolera enfeksiyona karşı mukozal bağışıklık hücreleri sağlamak olmadığını belirlemek için daha sonra araştırmalarda kullanılabilir nasıl scuss.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Doku Kültürü
- Kolera toksini belirlemeleri için Mus musculus makrofajlar (BALB / c fareleri) kullanın. Başlangıçta, her kültür M. satıcının talimatları musculus hücreleri.
- % 10 cenin sığır serumu ile tamamlanmış L-glutamin ile Dulbecco Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı içinde BALB / c farenin hücreleri yay, ve% 1 antibiyotik / antimikotik ya da RPMI 1640 baz ortam,% 10 fetal sığır serumu,% 5 L-glutamin ve 1 ile tamamlandı % antibiyotik / antimikotik reaktif.
- 37 Bacalı kapakları ile 75 cm 2 Corning matara hücreleri büyütün ° C,% 95 hava ve% 5 CO 2.
- Yağ asidi tespitler belirlenmesi için başına üreticinin talimatlarına olarak teslim 24 saat içinde insan bağırsak epitel hücreleri getirin.
- 37,% 10 FBS ve 30 ng / ml insana ait EGF ile tamamlanmıştır HybriCare medya havalandırmalı kapak ° C ile 75 cm 2 Corning şişelerinde, insan intestinal epitel hücreleri yayma Antibiyotik kullanmayınÜreticinin talimatlarına göre / antimikotik reaktifler.
- Confluency yaklaşık% 70 her gözün (1:3) ile ayrıldı.
- Freeze ve standart dondurma protokollerini kullanarak çalışma boyunca tüm hücreleri getirmek.
- Not: yağ asitlerinin büyük ölçekli konsantrasyonunun belirlenmesi için, başlangıçta daha hızlı büyüyen, bakımını daha kolay fare makrofaj kullanın. Ince çaplı yağ asidi konsantrasyonunun belirlenmesi için, insan epitel hücreleri kullanır. Tüm kolera toksin tedavisi (tartışma) için fare makrofajlar kullanın.
2. Yağ Asidi ve Kolera Toksin Tedaviler
- Gelen, oleik linoleik ve linolenik asit transferi şirketi tarafından sağlanan steril cam şişe cam ampul.
- Ayrı bir steril Eppendorf tüpüne her yağ asidi transfer ile 1:6 arasında bir seyreltme% 100 etanol içinde ilk önce çözülür ve daha sonra 10 ug / ml bir son konsantrasyon için RPMI 1640 ortam içinde eksik.
- Vortex her çözüm ve transfer bu dondurucuda saklama için cam şişe (-20 ° C).
- 2,500 hücre / oyuk 96 yuvalı doku kültür plakaları içinde plakası hücreleri.
- MTT testleri için hazırlık olarak yağ asitleri ile hücre tedavisi için 200 ul toplam hacmi getirmek için de uygun olan tam bir ortam ekleyin.
- 24 saat çoğalma döneminden sonra, ortamı çıkarın ve taze ortam ile değiştirin.
- (Bakınız) içeren kuyucuklara test edilecek her yağ asidi, uygun konsantrasyonlarda ekleyin. 200 ul toplam iyi hacimleri getirmek için eksiksiz bir medya ekleyin.
- MTT başlamadan önce 24 saat süre ile muamele edilen inkübe edin.
- Cryovials 1 mg / ml çözelti ve kısım bir konsantrasyonda PBS içinde kolera toksin çözülür ve 2-8 ° C'de saklayın kriyotüplerin
- Hücre tedaviler için, 1 ng / ml bir son çalışma konsantrasyonu için ya da steril PBS (pH 7.4) ya da eksik DMEM toksin 1:100 seyreltin.
- Kolera toksin ile hücreleri tedavi etmek içinyukarıda tarif edildiği gibi MTT testleri, levha hücreler için hazırlama.
- 24 saatlik bir süreden sonra proliferasyon, yağlı asit uygulamaları (yukarıda) 'de kullanılan prosedürler takip oyuklara test edilecek kolera toksini uygun konsantrasyonları (eden konsantrasyonları için bkz sonuçlar) ekleyin.
- MTT başlamadan önce 24 saat süre ile muamele edilen inkübe edin.
- Pozitif (pozitif kağıt boyunca c) ve yağ asidi ve kolera toksin tedaviler, tam ortam ve% 70 etanol ile inkübe hücreleri, sırasıyla hem de negatif kontrol (negatif c) 'de.
- Tüm örnekler ve tedaviler pozitif kontroller için daha fazla tekrarlı (Bu çalışmada, n = 6), üç tekrarlamalı (n = 3), en az bir kullanın.
3. MTT
- 2.5 mg / ml 'lik bir konsantrasyona kadar bir MTT stok çözeltisi hazırlanır.
- , Test edilecek olan 96 çukurlu bir levhanın her iyi çözüm çıkarın ve taze tam ortam çözeltisi 200 ul ile değiştirin.
- Ilanher kuyuya MTT çözüm d 10 ul.
- 37 ° C 3-4 saat için plaka inkübe edin.
- Ortam çözüm atın ve her bir oyuğa, izopropanol içinde 0.04 M HCl 100 ul ekleyin.
- Beş dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe plakası.
- Her bir yeni bir santrifüj tüpüne çözüm aktarın.
- 1 dakika için ya da bir pelet oluşana kadar, oda sıcaklığında, 20,000 x g'de santrifüjleyin.
- Bir mikro okuyucuya her numunenin 20-40 ul arasında transfer.
- Bir spektrofotometre kullanılarak 570 nm de absorbans okuyun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Yağ Asitleri Optimum Konsantrasyon belirlenmesi
Yağ asitleri için optimum konsantrasyon hücre büyümesi ile karşılaştırılabilir ya da sonuç olarak nispeten düşük bir değişkenlik, kontrol hücreleri bu aştığı maksimum konsantrasyon olarak tanımlanır. Oleik optimum yoğunluğunu belirlemek için, linoleik ve linolenik asit hücreler başlangıçta büyük artışlarla her yağ asidi konsantrasyonlarının değiştirilmesi ve daha sonra daha küçük artımlarla ile muamele edilmiştir. Şekil 1, hücrelerin hayatta kalma kullanarak tedavi için pozitif bir kontrol fonksiyonu olarak gösterir tasvir yağlı asitlerin artan konsantrasyonları. Bu hücreler, yağ asitlerinin herhangi biri için 100 ng / ml konsantrasyonları arasında yukarıda tahammül yok olduğu açıktır. Bir tek yönlü ANOVA, uygulamaların her biri için, araçlar bir ya da daha fazla olduğu (p <0,001) farklı olduğunu göstermiştir. Bir post-hoc testi (Tukey) gösterdi dışında oleik asit tüm tedaviler için1 ng / ml pozitif kontrol farklıydı. İlginç bir şekilde, yüksek değişkenlik nedeniyle, bu tedavi ya marjinal negatif kontrol önemli ölçüde farklı değildi. , Linoleik ve linolenik asite için, tek yönlü ANOVA, en az bir ortalama diğerleri (p <0.001) daha farklı olduğunu göstermiştir. Bir Tukey post-hoc testi ya da yağlı asit için 10 ng / ul tedavinin ortalama pozitif kontrol önemli ölçüde farklı değildir, ancak negatif kontrol (p <0.05) için olduğunu ortaya koymuştur.
Bu deney, daha düşük konsantrasyonlar için de tekrarlandı 100 ng / ml, 10 ng / ul artışlarla (insan epitel hücreleri kullanılarak 70 ng / ul) içinde. Hücre yaşama Şekil 2'de her bir konsantrasyonu için sağlanmıştır. Oleik asit (Şekil 2a) için, tek yönlü ANOVA araçlardan bir ya da daha fazlasına (p <0.001), farklı olduğunu göstermiştir. Ancak, daha yüksek konsantrasyonlarda sadece tedavi (yani 40 ve 50render o) ul / ng pozitif kontrol arasında istatistiksel fark anlamına gelir. İlginçtir, gözlenen farklılıklar hücre canlılığı artış (daha fazla değişkenlik, Şekil 2a ile) bağlı idi. Tek yönlü ANOVA linoleik ve linolenik asit için benzer sonuçlar vermiştir. Özellikle, tedavi araçlardan herhangi birinin pozitif kontrolün ortalama farklıdır. Bir kez daha, değişkenliği daha yüksek konsantrasyonlarda (Şekil 2b ve 2c) bir artış için görünmektedir.
Kolera Toksin optimum Konsantrasyonunun Belirlenmesi
Kolera toksini için optimum konsantrasyon hücre canlılığı etkilenen ya da tedavi edilmemiş hücrelere kıyasla azalmaya başlar değildir edildiği konsantrasyon olarak tanımlanır. Minimal hücre canlılığını azaltır kolera toksin en az konsantrasyon değerlendirmek için, hücreler başlangıçta büyük incremen kolera toksini, değişen konsantrasyonlarda ile muamele edildits ve daha sonra daha küçük artışlarla birlikte Şekil 3a, nispeten büyük bir darbe (ng, R, 2 100-1.000 arasında; = 0,5436) de toksin seviyeleri için kolera toksin tedaviler sonucunda hücre hayatta kalmak için azalan bir canlılığı eğilimi göstermektedir.. Beklendiği gibi, hücre canlılığı her tedavi (Şekil 3a) için büyük farklılıklar. Canlılığı büyük gözlenen değişkenlik tedavilerin herhangi bir (tek yönlü ANOVA) ile pozitif kontrol ortalama arasında anlamlı fark sonuçlandı. Bu sonuçlara dayanarak, belirlenen toksin düzeyleri <100 ng daha test edilmelidir. Şekil 3b küçük toksin düzeyi tedaviler için hücre canlılığını gösterir. Hücre canlılığı, hafif bir artış tedaviler sonucunda canlılığı gözlendi olsa, hemen hemen tüm toksin konsantrasyonu için oldukça değişkendir. Bu artışlar (Şekil 3b) pozitif kontrol ile karşılaştırıldığında ortalama tedavisi için herhangi bir istatistiksel olarak önemli değildir (tek yönlü ANOVA, Tukey).
Şekil 1. Yağ asitlerinin kullanılabilir konsantrasyonlarının belirlenmesi:. Oleik asit, linoleik asit ve linolenik asit için nispeten büyük artışlarla (ul / 100-1.000 ng) yağ asitlerinin konsantrasyonu değişen etkisi büyük rakam görmek için buraya tıklayın .
Şekil 2. İnce ölçek yağ asidi konsantrasyonunun belirlenmesi: insan bağırsak epitel küçük artışlarla (ul / 10 ng), yağ asitlerinin, değişen konsantrasyonlarda Etkilerihücrenin hayatta kalması. bağırsak epitel hücreleri oleik arasında değişen konsantrasyonlarda (a), linoleik asit (b) ve linolenik asit (C) ile tedavi edildi. Pozitif kontrol ancak tam ortam, ve% 70 etanol ile negatif kontrol ile muamele hücredir. Her deneme için, n = 3 pozitif kontrol (n = 6) dışındaki tüm tedaviler için. büyük rakam görmek için buraya tıklayın .
Şekil 3,. Fare makrofaj sağkalıma kolera toksin, değişen konsantrasyonlarda uygulamalarının değerlendirilmesi göre kullanılabilir kolera toksin konsantrasyonu belirlenmesi: Fare makrofaj büyük artışlarla kolera toksin, değişen konsantrasyonlarda ile tedavi edilen (a)daha küçük olanlar (B). pozitif kontrol ancak tam ortam, ve% 70 etanol ile negatif kontrol ile muamele hücredir. Her deneme için, n = 3 pozitif kontrol (n = 6) dışındaki tüm tedaviler için. büyük rakam görmek için buraya tıklayın .
Şekil 4. Uygun yağlı asit ve daha sonraki çalışmalarda kullanım için toksin konsantrasyonu Deneysel tasarım tayin: Hücre lizatları, kalitatif ve kantitatif immün ve ELISA enfeksiyonu için belirteç olarak spesifik sitokinler karşı antikorlar kullanılarak tahlil edilebilir makrofajlar ve sitokin dinamikleri tedavi etmek için de kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Yağ asitleri konsantrasyonu ve Kolera Toksin önerisi
Yağ asitleri mukozal bağışıklık geliştirmek nasıl mekanizması tam olarak bilinmemekle birlikte, çeşitli çalışmalar, yararlı etkileri araştırmak için çalıştılar. Çalışmamız hücreler hücre sağkalım üzerinde önemli bir etkisi olmadan tolere ki de kolera toksin maksimum konsantrasyon olarak tolere olabilir yağ asitlerinin maksimum konsantrasyonunu belirlemek için yöntem sağlamayı amaçlamaktadır.
Üç yağ asitleri (oleik, linoleik ve linolenik) konsantrasyonu yanı sıra, hücre canlılığı ile ilgili çok önemli bir olumsuz etki olmadan hücrelerin tedavisi için kolera toksin ki farklılık ile yağ asitleri ve kolera toksin ve işlenmiş doku kültür hücreleri belirlemek için, çözündürülmüş konsantrasyonları uygulanabilirliğini değerlendirmek için bir MTT testi ile takip etti. Bizim metodoloji ve sonuçlara dayanarak biz yağ asitlerinin aralıkları ve yararlı kolera toksin sağlamakBu yağ asitleri veya kolera toksin (bkz. aşağıda) kullanmayı hedefliyoruz gelecekteki araştırmalar için. Biz, insan bağırsak epitel hücreleri kullanılarak, sırasıyla, oleik asit, linoleik asit, ve linolenik asit için (ng / ml), 5-10 ve 05-10 Ocak konsantrasyonları, önerilir. Ayrıca, BALB / C fare makrofajlar kullanılarak kolera toksini <30 ng kullanımı (200 ul başına, yöntem bakınız) önerilir. Biz kolera toksini için en az, anlamlı bir fark tedavilere kıyasla pozitif kontrol için hücre canlılığı arasında gözlendi, farkındayız. Ancak, daha yüksek bir öneri toksin düzeyi maruz kalma sonucu gözlendi hücre canlılığı nispeten yüksek değişkenliği esas alınmaktadır.
Gelecek Çalışmaları
Yağ asitleri ve kolera toksin seviyeleri için bu çalışmada sağlanan veriler daha sonraki çalışmalarda kullanılabilir. Biz burada böyle bir soruşturmanın bir örnek sağlar.
Kolera dev ile ilişkili bir hastalıkUygun kanalizasyon ve su arıtma tesisleri ve güvenli içme suyu olmayan ülkeler eloping. 2009 yılında, 3.000 'in üzerinde bir ölü Zimbabve tek başına kolera ilgili belirtiler nedeniyle beş ay süreyle bildirildi. 14 2011 itibariyle, kolera Haiti'de salgını (CDC, 2010) dahil olmak üzere dünyanın farklı bölgelerinde bir salgın kalır . 2010 yılında bir moleküler genetik çalışma, bu salgının bakteri Nepal kökenli olduğunu kanıt gösterdi. 15. Hastalık V. tarafından bağırsak dışkı ile kontamine olmuş yiyecek veya içme suyu ve kolonizasyon tüketilmesi neden olmaktadır bir enterotoksin salınımını takip cholerae. Kolera aşıları mevcut yaparken, her zaman salgınlar sırasında enfeksiyonu önlemede etkili değildir. Etkili ve ucuz müdahaleler kolera salgınları meydana nüfus için gereklidir. Bir yaklaşım çalışma olup olmadığını Oleik, linoleik ve linolenik asit gibi türevleri zengin gıda kaynaklarıkolera enfeksiyona karşı mukozal bağışıklık sağlamak veya geliştirmek. Bu Toll benzeri reseptörler 16 (TLR) ve nükleotid-bağlayıcı etki (NLR) olarak hücreleri yüzeyinde bulunan protein reseptörleri aracılığıyla mukozal bağışıklık fonksiyonları. Membran kompozisyonu ve TLR ve NLR etkileşim ligandların serbest değişiklikler aracılığıyla, bağırsak epiteli, yağ asitlerinin yanı sıra zararlı mikropların tanıma ve uygun bağışıklık tepkilerinin işe de reseptör fonksiyonunu artırmak olabilir. TNF-α, hücre serbest bırakılması, IL-6 gibi yağ kolera enfeksiyonu asit etkileri, sitokin dinamiği, belirlemek için, IL-10 ve IL-12, (Şekil fare makrofaj göre insan bağırsak epitelial hücrelerinde daha çok araştırılması gerekmektedir 4). Ileri çalışmalardan elde edilecek bu bilgi daha iyi yağ asitleri sonuçta öd engellemek için etkili müdahaleler sağlamak amacıyla, enfeksiyonu önlemek için işe yarayabilecek hangi mekanizma anlamanıza yardımcı olacaktırbir salgın. Kolera toksini enfeksiyon öncesinde yağ asitleri ile hücre tedavisi neden ve / veya sonuçta kolera mikrobik enfeksiyon sırasında artan hücre canlılığı, bağırsak epiteli, mukozal bağışıklık tepkisini geliştirmek, yardımcı olması mümkündür.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Bu çalışmanın yazarları bu çalışmanın sonuçlarından herhangi bir mali ilgi var. Bu çalışma için fon Kean Üniversitesi tarafından FT sağlanmıştır, ancak FT şu anda Kingsborough Community College'de bir çalışanıdır.
Acknowledgments
Biz Paula Cobos ve laboratuar yardım için Dr Evros Vasiliu teşekkür ve sırasıyla fare makrofajlar sağlar. Ayrıca rehberlik için laboratuar yöneticisi Richard Criasia teşekkür ve malzeme ile yardımcı olur. Son olarak, yazarlar video üretimi ile yardım için Ramanpreet Kaur teşekkür ederim.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 | |
References
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
- Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
- Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
- Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
- Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
- Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
- Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
- Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
- Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
- Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
- Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
- Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
- WHO | Efforts must be intensified to control Zimbabwe cholera outbreak [WHO PRESS RELEASE] [Internet]. , World Health Organization. Available from: http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/ (2010).
- Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
- Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).
