Summary
אנחנו יצאנו כדי לקבוע ריכוזים נסבלים של שלוש חומצות שומן (חומצות אולאית, לינולאית ולינולנית) ורעלן הכולרה שלא באופן משמעותי ולהשפיע לרעה על הישרדות תא על ידי solubilizing את חומצות שומן והרעל והשימוש בהם במבחני הישרדות תא.
Abstract
התפקיד החיובי של חומצות שומן במניעה ובהקלה של מחלות שאינן בני אדם והאנושיים היה וממשיך להיות מתועדים בהרחבה. תפקידים אלה כוללים השפעות על מחלות זיהומיות ולא זיהומיות כולל מניעה של דלקת, כמו גם חסינות רירית למחלות זיהומיות. כולרה היא מחלה הנגרמת על ידי מעי חריף החיידק Vibrio cholerae. זה מתרחש במדינות מתפתחות, ואם אינם מטופל, עלול לגרום למוות. אמנם חיסונים נגד כולרה קיימים, הם לא תמיד יעילים ושיטות מניעות אחרות יש צורך. אנחנו יצאנו כדי לקבוע ריכוזים נסבלים של שלוש חומצות שומן (חומצות אולאית, לינולאית ולינולנית) ושימוש ברעלן הכולרה מקרופאגים BALB / C עכברים ותאי אפיתל במעי אדם, בהתאמה. אנו solubilized את חומצות שומן הנ"ל ומבחנים המשמשים התפשטות תאים כדי לקבוע את טווחי הריכוז וריכוזים מסוימים של חומצות השומן, כי הם לאלא מזיק לכדאיויות תא אפיתל במעי אדם. אנו solubilized רעלן הכולרה והשתמשנו בו בassay כדי לקבוע את טווחי הריכוז וריכוזים מסוימים של רעלן הכולרה שאינם סטטיסטי להקטין כדאיות תא במקרופאגים BALB / C.
מצאנו את ריכוזי חומצת השומן האופטימליים להיות בין 1-5 ng / μl, וכי לרעלן הכולרה להיות <30 ng לכל טיפול. נתונים אלה עשויים לסייע למחקרים עתידיים שמטרתם למצוא תפקיד הרירי מגן לחומצות שומן במניעה או הקלה של דלקות כולרה.
Introduction
היתרונות הבריאותיים של חומצות שומן, כגון אולאית, לינולאית וחומצות ינולאית היו וממשיכים להיות מתועדים. לדוגמה, חומצה אולאית עוזרת להקל על חדירה של תרופות lipophilic ב1,2 הגוף, מפחיתה את מחלות לב כליליות ב -24%, כאשר מחליפה חומצות שומן רוויות 3, והוא משמש לטיפול במחלות מטבוליות כגון adrenoleukodystrophy 4 אשר צמודות X הפרעה גנטית של חילוף החומרים של חומצות שומן. . בעוד מבשר הכרחי לחומצה הארכידונית ביונקים, חומצה לינולאית (שלא כמו חומצה אולאית) אינו מסונתז על ידי הגוף ויש לקבל באמצעות מקורות חיצוניים, כגון על ידי צריכת זרעי פשתן 5 מחקרים מראים כמה השפעות בריאותיות מיטיבות של חומצה לינולאית, כגון: תכונות אנטי אייג'ינג לעור; 6 תכונות אנטי דלקתיות; 7 הפצה מופחתת של תאי סרטן מעי גס וערמונית, 8 ואת היכולת להילחם בהשמנה והקידום O. חומצה לינולנית ו בריאות לב וכלי דם 9 משחקת תפקיד בהפחתת דלקת חניכיים, 10 והוויסות thromboxane וסינתזת prostacyclin. 11
12 Arpita למד את ההשפעה של חומצות שומן וכולסטרול במרת V. ביטוי של cholerae של גורמים ארסיות ותנועתיות. דואדי 13 הצביע על כך שתמצית מתנול מאדום פלפל צ'ילי, ותרכובות המופקים באופן טבעי אחרות, עלולה להקטין את ייצור הרעלן כולרה. זה מתקבל על הדעת לשקול את השימוש במוצרי מזון עשירים בחומצות השומן הנ"ל (כגון זרעי פשתן) במניעה ובהקלה של מחלות זיהומיות כגון כולרה באמצעות מתן חסינות רירית. ערכנו את חקירות לsolubilize חומצות שומן ולקבוע, באמצעות מבחני שגשוג תאים, הריכוז המרבי של חומצות שומן שתאי אפיתל במעי אדם יכולים לסבול ללא השפעות מזיקות על ceכדאיות LL. חוקרים שיערנו כי חומצות אולאית, לינולאית ולינולנית לספק השפעה חיובית על כדאיות תא בריכוזים נמוכים יותר, אבל זה בריכוזים גבוהים יותר הם יהיו רעילים לתאים. כמו כן, אנו solubilized רעלן הכולרה וקבענו את הריכוז המרבי של רעלן הכולרה שמקרופאגים עכבר BALB / C יכולים לסבול ללא ירידה משמעותית בכדאיויות תא. אנו משערים אפקט רעיל של רעלן הכולרה על כדאיות תא אפילו ברמה נמוכה מאוד. השיטה של solubilizing רעלן הכולרה ולהשתמש בו כדי לקבוע את הכמות המקסימלית של הרעל שהתאים יכולים לסבול ללא ירידה משמעותית בשרידות מספקת יתרון למחקרים עתידיים. לדוגמה, שילוב של מתודולוגיות לעיל יכול לשמש כדי לקבוע אם חומצות שומן לספק תאים רירית עם חסינות מפני זיהומי כולרה. למיטב ידיעתנו, שיטה רציונלית וזה לא נחקרה.
אנחנו דיscuss כיצד ניתן להשתמש בנתונים הראשוניים שלנו בחקירות מאוחרות יותר כדי לקבוע אם אולאית, חומצות לינולאית ולינולנית לספק תאים רירית עם חסינות מפני זיהום כולרה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. תרבית רקמה
- השתמש מקרופאגים מאסכאלאס Mus (BALB / ג) לקביעות רעלן הכולרה. בתחילה כל התרבות של מ ' תאי מאסכאלאס בעקבות הוראותיו של הספק.
- הפץ תאי BALB / C עכברים בבינוני השתנה Dulbecco של הנשר עם L-גלוטמין סיים עם 10% בסרום שור עוברי, ובסיס מדיה 1% אנטיביוטיקה / antimycotic או RPMI 1640 הושלמה 10% בסרום שור עוברי, 5% L-גלוטמין, ו1 % מגיב לאנטיביוטיקה / antimycotic.
- לגדל תאים ב75 ס"מ 2 צלוחיות קורנינג עם כובעים פרקו על 37 מעלות צלזיוס, באוויר 95% ו 5% CO 2.
- להביא את תאי אפיתל במעי אדם בתוך 24 שעות מלידה כהוראות יצרן לקביעת קביעות חומצת שומן.
- הפץ את תאי המעיים epithelia אדם ב75 ס"מ 2 צלוחיות קורנינג עם כובעים פרקו בתקשורת HybriCare סיימו עם FBS 10% וEGF 30 ng / ml האנושי על 37 ° C. אל תשתמש באנטיביוטיקהריאגנטים / antimycotic בהתאם להוראות יצרן.
- פיצול כל התאים (1:3) בכ -70% confluency.
- להקפיא ולהביא את כל התאים לאורך כל תקופת המחקר תוך שימוש בפרוטוקולים סטנדרטיים הקפאה.
- הערה: לקביעת ריכוז קנה מידה גדולה יותר של חומצות שומן, השתמש בצמיחה מהירה יותר, קל יותר לתחזוקה, מקרופאגים עכבר בתחילה. לקביעת ריכוז חומצת שומן סולם קנס, להשתמש בתאי אפיתל אנושיים. השתמש בעכבר מקרופאגים עבור כל טיפולי רעלן הכולרה (ראה דיון).
2. חומצת שומן וטיפולי רעלן הכולרה
- העבר את החומצות אולאית, לינולאית ולינולנית מהחברה שסיפקו ampules זכוכית לצלוחיות זכוכית מעוקרות.
- העבר כל חומצת שומן לצינור Eppendorf מעוקר נפרד ולפזר אותו לראשונה בשנת 100% אתנול בדילול של 01:06, ולאחר מכן שנת 1640 מדיה שלמה RPMI לריכוז סופי של 10 מיקרוגרם / μl.
- מערבולת כל פתרון וtransfאה זה לצלוחיות זכוכית לאחסון במקפיא (-20 ° C).
- פלייט תאים ב-2,500 תאים / גם ב96 צלחות תרבית רקמה כן.
- הוסף את מדיה המלאה המתאימה כדי להביא את הנפח הכולל גם עד 200 μl לטיפול בתאים עם חומצות שומן בהכנה למבחני MTT.
- לאחר תקופת שגשוג הפועל 24 שעות, להסיר את המדיה ולהחליף אותו עם מדיה חדשה.
- הוסף את הריכוזים המתאימים של כל חומצות שומן שנבדק לבארות (תוצאות ראו מסגרת). הוסף מדיה מלאה כדי להביא את הכרכים גם לסך 200 μl.
- דגירה צלחות שטופלו במשך 24 שעות לפני תחילת assay MTT.
- ממיסים את רעלן הכולרה ב PBS בריכוז של 1 מ"ג / מ"ל ו aliquot הפתרון בcryovials ולאחסן את cryovials ב 2-8 מעלות צלזיוס
- לטיפולים בתא, לדלל את הרעל 1:100 באו PBS מעוקר (pH 7.4) או DMEM שלמה לריכוז עבודה סופי של ng 1 / μl.
- לטיפול בתאים עם רעלן הכולרה בהכנה למבחני MTT, תאי צלחת כפי שתואר לעיל.
- לאחר תקופת שגשוג הפועל 24 שעות, מוסיף את הריכוזים המתאימים של רעלן הכולרה (תוצאות לריכוזים שלנו, ראו מסגרת) כדי להיבדק על הבארות הבאות הנהלים בשימוש ביישומי חומצת שומן (לעיל).
- דגירה צלחות שטופלו במשך 24 שעות לפני תחילת assay MTT.
- כ( ג חיובי לאורך נייר) חיובי ובקרה שלילית (ג השלילי), לשניהם חומצת השומן וטיפולי כולרה רעל, תאי דגירה עם מדיום מלא ו -70% אתנול, בהתאמה.
- לכל הדגימות וטיפולים להשתמש במינימום של שלוש חזרות (n = 3), עם חזרות יותר עבור בקרות חיוביות (n = 6 במחקר זה).
3. Assay MTT
- הפוך פתרון מניות MTT לריכוז של 2.5 מ"ג / מ"ל.
- הסר את הפתרון בכל טוב של 96 הצלחת גם להיבדק ולהחליף אותו עם 200 μl של פתרון תקשורת שלם צח.
- מודעהד μl 10 של פתרון MTT היטב כל אחד.
- דגירה את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס במשך שעה 3-4.
- מחק את פתרון התקשורת ולהוסיף 100 μl של 0.04 M HCl בisopropanol היטב כל אחד.
- דגירה את הצלחת בטמפרטורת חדר במשך חמש דקות.
- מעבירים את הפתרון מכל אחד גם לצינור צנטריפוגות חדש.
- צנטריפוגה ב 20,000 XG, בטמפרטורת חדר, 1 דקות, או עד גלולה הוקמה.
- העברה בין 20-40 μl של כל דגימה לקורא microplate.
- קרא הספיגה ב 570 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
קביעת הריכוז האופטימלי של חומצות שומן
הריכוז האופטימלי לחומצות שומן מוגדר כריכוז המרבי שבו צמיחת תאים היא דומה או עולה על זו של תאי בקרה, עם שונות נמוכות יחסית בתוצאות. כדי לקבוע את הריכוז האופטימלי של אולאית, טופלו תאי חומצות לינולאית ולינולנית בתחילה עם ריכוזים שונים של כל חומצת שומן במרווחים גדולים, ומאוחר יותר עם מרווחים קטנים יותר. איור 1 מציג את ההישרדות של תאים מתוארת כפונקציה של הבקרה החיובית לטיפולים באמצעות ריכוז גדל והולך של חומצות השומן. ברור כי התאים לא לסבול ריכוזים של מעל 100 ng / μl לכל אחת מחומצות השומן. דרך אחת ANOVA הראה כי עבור כל אחד מהטיפולים, אחד או יותר מהאמצעים שונים מהאחרים (p <0.001). פוסט הוק מבחן (טיוקי של) הראה כי לחומצה אולאית כל הטיפולים מלבדng 1 / μl היו שונה מהביקורת החיובית. מעניין לציין, כי בשל שונות גבוהות, טיפול זה שולי שלא היה שונה באופן משמעותי מהביקורת השלילית או. לחומצות גם לינולאית ולינולנית, בכיוון אחד ANOVA הראה כי ממוצע אחד לפחות הוא שונה מהאחרים (p <0.001). הבדיקה שלאחר מעשה של טיוקי גילתה כי הממוצע של טיפול ng / μl 10 לשתי חומצות השומן אינו שונה באופן משמעותי מביקורת החיובית, אבל הם מהשליטה השלילית (p <0.05).
הניסוי הזה חזר על עצמו לריכוזים שהיו נמוכים מ 100 ng / μl, במרווחים של 10 ng / μl (עד 70 ng / μl, תוך שימוש בתאי אפיתל אנושיים). הישרדות תא מסופקת לכל ריכוז באיור 2. לחומצה אולאית (איור 2 א), בדרך זו ANOVA הראה כי אחד או יותר מאמצעי היו שונה (p <0.001). עם זאת, הטיפולים רק בריכוזים גבוהים יותר (40 ו -50ng / μl) שניתן משמעות שונה סטטיסטית מזה של הביקורת החיובית. מעניין, את ההבדלים שנצפו היו כתוצאה מגידול בכדאיויות תא (עם יותר השתנות, איור 2a). דרך אחת ANOVA הניב תוצאות דומות לחומצות לינולאית ולינולנית. באופן ספציפי, אף לא אחד מאמצעי הטיפול היה שונים מהממוצע של הביקורת החיובית. שוב, נראית השתנות להגדיל עבור חלק מהריכוזים הגבוהים יותר (האיורים 2b ו2 ג).
קביעת הריכוז האופטימלי של רעלן הכולרה
הריכוז האופטימלי לרעלן הכולרה מוגדר כריכוז שבי כדאיות תא אינה מושפעות או רק מתחילה ירידה בהשוואה לתאים שלא טופלו. על מנת להעריך את הריכוז המינימאלי של כולרה רעל שמינימאלי יורד כדאיות תא, טופלו בתחילה תאים עם ריכוזים שונים של רעלן הכולרה בincremen גדולTS, ומאוחר יותר עם מרווחים קטנים יותר 3a איור מראה מגמת ירידה בכדאיות להישרדות תא כתוצאה מטיפולי רעלן הכולרה לרמות רעלן במרווחים גדולים יחסית (בין 100-1,000 נג, 2 R; = 0.5436).. כצפוי, כדאיות תא מגוונות מאוד עבור כל טיפול (איור 3 א). השונות הנצפות גדולות בכדאיות הביאו לשום הבדל משמעות בין הממוצע של הבקרה החיובית שלנו עם כל אחד מהטיפולים (בכיוון אחד ANOVA). בהתבסס על תוצאות אלו, קבענו כי רמות רעל <100 ng צריך להיבדק עוד יותר. איור 3 מציג את כדאיות תא לטיפולים ברמת רעלן הקטנים יותר. כדאיות תא הוא משתנה מאוד עבור כמעט כל ריכוזי הרעל, אם כי עליות קלות נצפו בכדאיות כתוצאה מהטיפולים. עליות אלה (איור 3) הן לא משמעותיות מבחינה סטטיסטית לכל אחד מהטיפולים בהשוואה לממוצע של הבקרה החיובית (דרך אחת ANOVA, טיוקי של).
איור 1. קביעת ריכוזים שמישים של חומצות שומן:. השפעת ריכוזים שונים של חומצות שומן במרווחים גדולים יחסית (100-1,000 ng / μl) לחומצה אולאית, חומצה לינולאית וחומצות ינולאית לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.
איור 2. סולם קנס נחישות ריכוז חומצת שומן: השפעות של ריכוזים שונים של חומצות שומן במרווחים קטנים יותר (10 ng / μl) על אדם אפיתל במעיתא הישרדות. תאי אפיתל במעי טופלו בריכוזים שונים של אולאית (א), חומצה לינולאית (ב) וחומצה לינולנית (ג). הביקורת החיובית היא תאים שטופלו עם מדיה מלאה בלבד, וביקורת השלילית עם 70% אתנול. עבור כל ניסוי, n = 3 עבור כל הטיפולים למעט ביקורת חיובית (n = 6). לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.
איור 3. קביעת ריכוזי רעלן הכולרה שמישות המבוססים על הערכה של יישום של ריכוזים שונים של רעלן הכולרה על הישרדות מקרופאג עכבר: מקרופאגים עכבר טופלה בריכוזים שונים של רעלן הכולרה במרווחים גדולים יותר ()לאחר מכן קטן יותר (ב). הביקורת החיובית הוא תאים שטופלו עם מדיה מלאה בלבד, וביקורת השלילית עם 70% אתנול. עבור כל ניסוי, n = 3 עבור כל הטיפולים למעט ביקורת חיובית (n = 6). לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.
איור 4. עיצוב-נחישות ניסיונית של חומצת שומן מתאימה וריכוזי רעל לשימוש במחקרים עתידיים: lysates התא יכולה לשמש לטיפול במקרופאגים ודינמיקה ציטוקינים יכול להיות assayed איכותי וכמותית על ידי immunoblotting וELISA באמצעות נוגדנים נגד ציטוקינים ספציפיים כסמנים לזיהום.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הצעה של ריכוז חומצות שומן ורעלן הכולרה
בעוד המנגנון של כמה חומצות שומן לשפר את החסינות רירית המדויק אינו ידוע, אך מספר מחקרים ניסו לבדוק ההשפעות המועילות שלהם. המחקר שלנו נועד לספק למתודולוגיית כדי לקבוע את הריכוז המרבי של חומצות שומן שתאים יכולים לסבול, כמו גם את הריכוז המרבי של רעלן הכולרה שתאים יכולים לסבול ללא השפעה משמעותית על הישרדות תא.
כדי לקבוע את הריכוז של שלוש חומצות שומן (אולאית, לינולאית ולינולנית), כמו גם זה של רעלן הכולרה לטיפול בתאים ללא השפעה שלילית משמעותית מאוד על כדאיות תא אנו solubilized את חומצות השומן ורעלן הכולרה ותאים בתרבית רקמה שטופלו לשונים ריכוזים אחרי assay MTT להעריך כדאיות. המבוססים על מתודולוגיה והתוצאות שלנו אנו מספקים טווחים של חומצות שומן ורעלן הכולרה שימושיתלחקירות עתידיות שמטרתם להשתמש בחומצות שומן אלה או רעלן הכולרה (ראה להלן). אנו ממליצים ריכוזים של 1, 5-10, ו5-10 (ng / μl) לחומצה אולאית, חומצה לינולאית, וחומצות ינולנית, בהתאמה, לשימוש בתאי אפיתל במעי אדם. כמו כן, אנו ממליצים על השימוש ב< 30 ng (לכל 200 μl, ראה שיטות) של רעלן הכולרה באמצעות מקרופאגים עכבר BALB / ג. אנו מכירים בכך, לפחות לרעלן הכולרה, לא נצפה הבדל משמעותי בין כדאיות תא לביקורת החיובית בהשוואה לטיפולים. עם זאת, המלצתנו מתבססת על השונות גבוהות יחסית בכדאיויות תא שנצפתה כתוצאה חשיפות ברמה גבוהה יותר של רעל.
חקר עתיד
הנתונים שסופקו במחקר זה לחומצות שומן ורמות רעלן הכולרה יכולים לשמש במחקרים עתידיים. אנו מספקים דוגמה לחקירה אחד כזה כאן.
כולרה היא מחלה הקשורה devכשהם ברחו מדינות שאין להם ביוב תקין ומתקנים לטיפול במים ומים ראויים לשתייה. בשנת 2009, מספר מקרי מוות של מעל 3,000 דווח לתקופה של חמישה חודשים בשל סימפטומים הקשורים הכולרה בזימבבווה לבד. 14 החל משנת 2011, נשארה כולרה מגיפה באזורים שונים של העולם, כולל התפרצות בהאיטי (CDC, 2010) . מחקר גנטיקה מולקולרי בשנת 2010 הראה ראיות לכך שהחיידק בהתפרצות זו היה ממוצא נפאלי. -15 המחלה נגרמת על ידי בליעה של מזון או שתיית מים מזוהמים בצואה וקולוניזציה של המעי של ו ' cholerae, ואחרי שחרורו של enterotoxin. בעוד חיסונים כולרה אכן קיימים, הם לא תמיד יעילים במניעת הזיהום במהלך התפרצויות. התערבויות יעילות ולא יקרות נדרשות לאוכלוסיות שבו מתרחשות התפרצויות כולרה. גישה אחת היא ללמוד אם מקורות מזון שעשירים בנגזרים כגון אולאית, לינולאית וחומצות ינולאיתלספק או לשפר את החסינות רירית נגד זיהום כולרה. פונקציות חסינות ריריות באמצעות השימוש בקולטני חלבון המצוי על פני השטח של תאים, כגון קולטנים דמויי Toll 16 (TLRs) ותחומים נוקלאוטיד מחייבים (NLRs). באמצעות שינויים בהרכב הקרום ושחרורו של ligands כי אינטראקציה עם TLRs וNLRs, התוספת של חומצות שומן לאפיתל המעי עשויה לשפר את תפקוד הקולטן בהכרה בחיידקים מסוכנים וגיוס את התגובה החיסונית המתאימה. כדי לקבוע השפעות חומצות שומן בזיהום כולרה, דינמיקה ציטוקינים, כגון שחרורו של התא של TNF-α, IL-6, IL-10 ו-IL-12, יש ללמוד יותר מכך בתאי אפיתל במעי אדם מאשר במקרופאגים עכבר (איור 4). ידע כזה ממחקרים עתידיים יסייע לנו להבין טוב יותר את המנגנון שבאמצעותו יכולות חומצות שומן לפעול על מנת למנוע זיהום, בסופו של דבר על מנת לספק התערבויות יעילות לעכב חמהלהתפרצויות. יתכן כי טיפול בתאים עם חומצות שומן לפני הדבקת רעלן הכולרה יעזרו לעודד ו / או לשפר את התגובה החיסונית ברירית באפיתל במעי, סופו של דבר להגדיל את כדאיות תא במהלך זיהום חיידקי הכולירה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
מחברי מחקר זה אין לי אינטרס כלכלי מתוצאות מחקר זה. מימון למחקר זה הועבר לFT על ידי אוניברסיטת קין, עם זאת, FT הוא כיום עובד בKingsborough מכללה קהילתית.
Acknowledgments
אנו מודים לד"ר פאולה קובוס וEvros Vassiliou לסיוע מעבדה ומתן מקרופאגים העכבר, בהתאמה. אנו מודים גם מנהל המעבדה ריצ'רד Criasia להדרכה ועזרה עם חומרים. לבסוף, המחברים מודים קאור Ramanpreet לקבלת עזרה בהפקת וידאו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 | |
References
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
- Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
- Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
- Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
- Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
- Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
- Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
- Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
- Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
- Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
- Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
- Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
- WHO | Efforts must be intensified to control Zimbabwe cholera outbreak [WHO PRESS RELEASE] [Internet]. , World Health Organization. Available from: http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/ (2010).
- Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
- Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).
