Summary
हम काफी और प्रतिकूल फैटी एसिड होता है और विष solubilizing और सेल अस्तित्व assays में उन का उपयोग करके सेल अस्तित्व को प्रभावित नहीं किया है कि तीन फैटी एसिड (, ओलिक linoleic और linolenic एसिड) और हैजा विष की सहनीय सांद्रता निर्धारित करने के लिए निकल पड़े.
Abstract
रोकथाम और गैर मानव और मानव रोगों के उन्मूलन में फैटी एसिड की सकारात्मक भूमिका रही है और बड़े पैमाने पर दस्तावेज जारी किया. इन भूमिकाओं में सूजन की रोकथाम के साथ ही संक्रामक रोगों के mucosal उन्मुक्ति सहित संक्रामक और गैर संक्रामक रोगों पर प्रभाव शामिल हैं. हैजा जीवाणु विब्रियो कोलरा की वजह से एक गंभीर आंतों की बीमारी है. यह विकासशील देशों में होता है और अगर अनुपचारित छोड़ दिया, मौत में परिणाम कर सकते हैं. हैजा के लिए टीके मौजूद हैं, वे हमेशा प्रभावी नहीं हैं और अन्य बचाव के तरीकों की जरूरत है. हम क्रमशः माउस / BALB सी मैक्रोफेज और मानव आंतों उपकला कोशिकाओं का उपयोग कर सहनीय तीन फैटी एसिड की सांद्रता (ओलिक, linoleic और linolenic एसिड) और हैजा विष निर्धारित करने के लिए निकल पड़े. हम एकाग्रता पर्वतमाला और नहीं कर रहे हैं कि फैटी एसिड की विशिष्ट सांद्रता निर्धारित करने के लिए ऊपर फैटी एसिड होता है और इस्तेमाल सेल प्रसार assays के solubilizedमानव आंतों उपकला सेल व्यवहार्यता के लिए हानिकारक टी. हम हैजा विष solubilized और एकाग्रता पर्वतमाला और सांख्यिकीय / BALB सी मैक्रोफेज में सेल व्यवहार्यता कमी नहीं है कि हैजा विष की विशिष्ट सांद्रता निर्धारित करने के लिए एक परख में इसका इस्तेमाल किया.
हम इष्टतम फैटी एसिड सांद्रता के बीच 1-5 μl / एनजी, और कहा कि इलाज के प्रति <30 एनजी होना हैजा विष के लिए. हो पाया इस डेटा रोकथाम या हैजा संक्रमण के उन्मूलन में फैटी एसिड के लिए एक सुरक्षात्मक श्लैष्मिक भूमिका को खोजने के लिए लक्ष्य है कि भविष्य के अध्ययन सहायता कर सकते हैं.
Introduction
ऐसे ओलिक, linoleic और linolenic एसिड के रूप में फैटी एसिड होता है, के स्वास्थ्य लाभ दिया गया है और प्रलेखित किया जाना जारी है. उदाहरण के लिए, ओलिक एसिड, शरीर 1,2 में lipophilic दवाओं की पहुंच की सुविधा में मदद करता है संतृप्त फैटी एसिड 3 के लिए प्रतिस्थापित जब 24% से कोरोनरी हृदय रोग को कम कर देता है, और एक्स से जुड़े एक है जो इस तरह के Adrenoleukodystrophy 4 के रूप में चयापचय रोगों का इलाज किया जाता है फैटी एसिड चयापचय की आनुवंशिक विकार. . स्तनधारियों में arachidonic एसिड, linoleic एसिड (ओलिक एसिड के विपरीत) के लिए एक आवश्यक अग्रदूत शरीर द्वारा संश्लेषित नहीं है और इस तरह सन बीज की खपत के रूप में बाहर स्रोतों के माध्यम से प्राप्त किया जाना चाहिए जबकि 5 स्टडीज जैसे लिनोलेनिक एसिड की कई लाभकारी प्रभाव स्वास्थ्य दिखाना: त्वचा के लिए विरोधी उम्र बढ़ने गुण, 6 विरोधी भड़काऊ गुणों, कोलोरेक्टल और प्रोस्टेट कार्सिनोमा कोशिकाओं के 7 कम प्रसार, 8 और मोटापे से लड़ने की क्षमता और संवर्धन ओच हृदय स्वास्थ्य. 9 linolenic एसिड periodontal सूजन, 10 और नियमन थ्राम्बाक्सेन और prostacyclin जैवसंश्लेषण को कम करने में एक भूमिका निभाता है. 11
अर्पिता 12 वी. पर पित्त फैटी एसिड के प्रभाव और कोलेस्ट्रॉल का अध्ययन विषैलापन कारकों और गतिशीलता का कोलरा की अभिव्यक्ति. Yamasaki 13 लाल मिर्च मिर्च, और अन्य प्राकृतिक रूप से निकाले यौगिकों से मेथनॉल निकालने संभावित हैजा विष उत्पादन कम हो सकता है कि संकेत दिया. यह mucosal उन्मुक्ति प्रदान करने के माध्यम से हैजा जैसे संक्रामक रोग की रोकथाम और उन्मूलन में ऊपर फैटी एसिड (जैसे सन बीज के रूप में) में अमीर हैं कि खाद्य उत्पादों के इस्तेमाल पर विचार करने के लिए बोधगम्य है. हम सेल प्रसार assays है, मानव आंतों उपकला कोशिकाओं CE के पर हानिकारक प्रभाव के बिना बर्दाश्त कर सकते हैं कि फैटी एसिड की अधिकतम एकाग्रता का उपयोग कर, फैटी एसिड solubilize करने और निर्धारित करने के लिए जांच का आयोजनटू व्यवहार्यता. हम ओलिक, linoleic और linolenic एसिड कम सांद्रता में सेल व्यवहार्यता पर एक लाभदायक प्रभाव प्रदान धारणा है कि है, लेकिन उच्च सांद्रता में वे कोशिकाओं को विषाक्त हो जाएगा. हम भी हैजा विष solubilized और / BALB सी माउस मैक्रोफेज सेल व्यवहार्यता में एक महत्वपूर्ण कमी के बिना बर्दाश्त कर सकते हैं कि हैजा विष का अधिकतम एकाग्रता निर्धारित की. हम भी बहुत कम स्तर पर सेल व्यवहार्यता पर हैजा विष की एक जहरीले प्रभाव परिकल्पना है. एक हैजा विष solubilizing और कोशिकाओं बचे रहने में एक महत्वपूर्ण कमी के बिना बर्दाश्त कर सकते हैं कि विष की अधिकतम राशि निर्धारित करने के लिए इसे का उपयोग करने की विधि भविष्य के अध्ययन के लिए एक लाभ प्रदान करता है. उदाहरण के लिए, ऊपर के तरीके का एक संयोजन फैटी एसिड हैजा संक्रमण के खिलाफ mucosal प्रतिरक्षा के साथ कोशिकाओं को प्रदान कि क्या यह निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हमारी जानकारी के अनुसार, यह तर्कसंगत और कार्यप्रणाली का पता लगाया नहीं गया है.
हम diहमारे प्रारंभिक आंकड़ों ओलिक, linoleic और linolenic एसिड हैजा संक्रमण के खिलाफ mucosal प्रतिरक्षा के साथ कोशिकाओं को प्रदान अगर यह निर्धारित करने के बाद जांच में इस्तेमाल किया जा सकता है कि कैसे scuss.
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Protocol
1. ऊतक सम्वर्ध
- हैजा विष निर्धारण के लिए मुसलमानों मस्कुलस मैक्रोफेज (BALB / ग चूहों) का प्रयोग करें. प्रारंभ में संस्कृति एम. के सभी विक्रेता के निर्देशों का पालन मस्कुलस कोशिकाओं.
- 10% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरा एल glutamine साथ Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम में BALB / ग चूहों की कोशिकाओं का प्रचार, और 1% कवकनाशी / एंटीबायोटिक या 1640 RPMI आधार मीडिया 10% भ्रूण गोजातीय सीरम, 5% एल glutamine, और 1 के साथ पूरा % कवकनाशी / एंटीबायोटिक अभिकर्मक.
- 37 में दिए टोपी के साथ 75 सेमी 2 कोर्निंग बोतल में कोशिकाओं को विकसित डिग्री सेल्सियस, 95% हवा और 5% सीओ 2.
- फैटी एसिड निर्धारण के निर्धारण के लिए प्रति निर्माता के निर्देशों के रूप में प्रसव के 24 घंटे के भीतर मानव आंतों उपकला कोशिकाओं को लाओ.
- 37 में 10% FBS और 30 एनजी / एमएल मानव EGF साथ पूरा HybriCare मीडिया में दिए टोपियां डिग्री सेल्सियस के साथ 75 सेमी 2 कोर्निंग बोतल में मानव आंतों epithelia कोशिकाओं का प्रचार एंटीबायोटिक का प्रयोग न करेंनिर्माता के निर्देशों के अनुसार / कवकनाशी अभिकर्मकों.
- Confluency लगभग 70% पर सभी कोशिकाओं (1:3) भाजित.
- रुक और मानक ठंड प्रोटोकॉल का उपयोग अध्ययन के दौरान सभी कोशिकाओं को ले आओ.
- नोट: फैटी एसिड की बड़े पैमाने पर एकाग्रता दृढ़ संकल्प के लिए, शुरू में तेजी से बढ़ रही है,, बनाए रखना आसान माउस मैक्रोफेज का उपयोग करें. ठीक पैमाने फैटी एसिड एकाग्रता दृढ़ संकल्प के लिए, मानव उपकला कोशिकाओं का उपयोग करें. सभी हैजा विष उपचार (चर्चा देखने के लिए) के लिए माउस मैक्रोफेज का प्रयोग करें.
2. फैटी एसिड और हैजा विष उपचार
- से, ओलिक linoleic और linolenic एसिड स्थानांतरण कंपनी प्रदान निष्फल कांच की शीशियों को कांच ampules.
- एक अलग निष्फल Eppendorf ट्यूब के लिए प्रत्येक फैटी एसिड स्थानांतरण और 1:6 के कमजोर पड़ने पर 100% इथेनॉल में पहली बार इसे भंग, और फिर 10 माइक्रोग्राम / μl के अंतिम एकाग्रता के लिए 1640 RPMI अधूरा मीडिया में.
- भंवर प्रत्येक समाधान और transfएर इसे फ्रीजर में भंडारण के लिए कांच की शीशियों (-20 डिग्री सेल्सियस) के लिए.
- 2,500 कोशिकाओं में अच्छी तरह / 96 अच्छी तरह से टिशू कल्चर प्लेटों में प्लेट कोशिकाओं.
- MTT assays के लिए तैयारी में फैटी एसिड के साथ कोशिकाओं के इलाज के लिए 200 μl के लिए कुल अच्छी तरह से मात्रा लाने के लिए उपयुक्त पूरा मीडिया जोड़ें.
- एक 24 घंटा प्रसार अवधि के बाद, मीडिया को हटाने और ताजा मीडिया के साथ की जगह.
- (देखें परिणाम) कुओं को परीक्षण किया जाना प्रत्येक फैटी एसिड की उचित सांद्रता जोड़ें. 200 μl के लिए कुल अच्छी तरह मात्रा में लाने के लिए पूरा मीडिया जोड़ें.
- MTT परख शुरू होने से पहले 24 घंटे के लिए इलाज प्लेटें सेते हैं.
- Cryovials में 1 मिलीग्राम / एमएल और विभाज्य समाधान की एकाग्रता में पीबीएस में हैजा विष भंग और 2-8 पर cryovials दुकान डिग्री सेल्सियस
- सेल उपचार के लिए, 1 एनजी / μl के अंतिम काम एकाग्रता के लिए या तो निष्फल पीबीएस (7.4 पीएच) या अधूरा DMEM में विष 1:100 पतला.
- हैजा विष के साथ कोशिकाओं का इलाज करने के लिएजैसा कि ऊपर वर्णित MTT assays है, थाली कोशिकाओं के लिए तैयारी.
- एक 24 घंटा प्रसार अवधि के बाद, फैटी एसिड अनुप्रयोगों (ऊपर) में प्रयोग किया जाता प्रक्रियाओं का पालन कुओं को परीक्षण किया जाना हैजा विष का उचित सांद्रता (हमारे सांद्रता के लिए, देखने परिणाम) जोड़ें.
- MTT परख शुरू होने से पहले 24 घंटे के लिए इलाज प्लेटें सेते हैं.
- एक सकारात्मक (पॉजिटिव कागज भर ग) और फैटी एसिड और हैजा विष उपचार, पूरा मध्यम और 70% इथेनॉल के साथ सेते कोशिकाओं, क्रमशः दोनों के लिए नकारात्मक नियंत्रण (नकारात्मक ग), के रूप में.
- सभी नमूनों और उपचार के सकारात्मक नियंत्रण के लिए अधिक अनुकरण (इस अध्ययन में n = 6) के साथ तीन अनुकरण (एन = 3), की एक न्यूनतम उपयोग के लिए.
3. MTT परख
- 2.5 मिलीग्राम / एमएल के एक एकाग्रता के लिए एक MTT के शेयर समाधान करें.
- परीक्षण किया जा करने के लिए 96 अच्छी तरह से थाली के प्रत्येक अच्छी तरह से समाधान निकालें और ताजा पूरा मीडिया के समाधान के 200 μl के साथ बदलें.
- विज्ञापनप्रत्येक अच्छी तरह से MTT के समाधान की घ 10 μl.
- 37 डिग्री सेल्सियस पर 3-4 घंटे के लिए थाली सेते हैं.
- मीडिया समाधान त्यागें और एक अच्छी तरह से isopropanol में 0.04 एम एचसीएल के 100 μl जोड़ें.
- पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर थाली सेते हैं.
- प्रत्येक अच्छी तरह से एक नया अपकेंद्रित्र ट्यूब समाधान स्थानांतरण.
- 1 मिनट के लिए, या एक गोली बनाई गई थी, जब तक कि कमरे के तापमान पर, 20,000 XG पर अपकेंद्रित्र.
- एक microplate रीडर को प्रत्येक नमूना के 20-40 μl के बीच स्थानांतरण.
- एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग 570 एनएम पर absorbance पढ़ें.
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Representative Results
फैटी एसिड का इष्टतम एकाग्रता का निर्धारण
फैटी एसिड के लिए इष्टतम एकाग्रता सेल के विकास के बराबर है या परिणामों में अपेक्षाकृत कम परिवर्तनशीलता के साथ, नियंत्रण कक्षों की है कि अधिक है, जिस पर अधिकतम एकाग्रता के रूप में परिभाषित किया गया है. ओलिक के इष्टतम एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए, linoleic और linolenic एसिड कोशिकाओं को शुरू में बड़े वेतन वृद्धि में प्रत्येक फैटी एसिड की सांद्रता अलग और बाद में छोटी वृद्धि के साथ साथ इलाज किया गया. चित्रा 1 कोशिकाओं के अस्तित्व का उपयोग कर उपचार के लिए सकारात्मक नियंत्रण के एक समारोह के रूप में दर्शाया गया पता चलता है फैटी एसिड की सांद्रता में वृद्धि. यह कोशिकाओं फैटी एसिड से किसी के लिए 100 एनजी / μl ऊपर की सांद्रता बर्दाश्त नहीं है कि स्पष्ट है. एक एक तरह से एनोवा उपचार से प्रत्येक के लिए, साधन में से एक या अधिक दूसरों (पी <0.001) से अलग कर रहे हैं कि पता चला है. एक के बाद अस्थायी परीक्षण (Tukey के) से पता चला है कि सिवाय ओलिक एसिड सभी उपचार के लिए1 एनजी / μl सकारात्मक नियंत्रण से अलग थे. दिलचस्प है, उच्च परिवर्तनशीलता के कारण, इस इलाज या तो मामूली नकारात्मक नियंत्रण से काफी अलग नहीं था. Linoleic और linolenic दोनों एसिड के लिए, एक तरह से एनोवा कम से कम एक मतलब दूसरों (पी <0.001) की तुलना में अलग है कि पता चला है. एक Tukey के बाद अस्थायी परीक्षण या तो फैटी एसिड के लिए 10 μl / एनजी उपचार का मतलब सकारात्मक नियंत्रण से काफी अलग नहीं है, लेकिन नकारात्मक नियंत्रण (पी <0.05) से कर रहे हैं कि पता चला.
इस प्रयोग से कम थे कि सांद्रता के लिए दोहराया गया था 100 μl / एनजी, 10 μl / एनजी वेतन वृद्धि (मानव उपकला कोशिकाओं का उपयोग करने के लिए 70 एनजी / μl,) में. सेल अस्तित्व चित्रा 2 में प्रत्येक एकाग्रता के लिए प्रदान की जाती है. ओलिक एसिड (चित्रा 2) के लिए, एक तरह से एनोवा अर्थ में से एक या एक से अधिक (पी <0.001) से अलग थे. हालांकि, यह उच्च सांद्रता में ही उपचार (40 और 50गाया है) μl / एनजी सकारात्मक नियंत्रण के उस से सांख्यिकीय अलग मतलब है. दिलचस्प है, मनाया मतभेद सेल व्यवहार्यता में वृद्धि (अधिक परिवर्तनशीलता, चित्रा 2) के साथ की वजह से थे. एक तरह से एनोवा linoleic और linolenic एसिड के लिए इसी तरह के परिणाम सामने आए. विशेष रूप से, उपचार का मतलब है की कोई भी सकारात्मक नियंत्रण के मतलब से अलग थे. एक बार फिर, परिवर्तनशीलता उच्च सांद्रता (आंकड़े 2b और -2 सी) में से कुछ के लिए वृद्धि करने के लिए लगता है.
हैजा विष का इष्टतम एकाग्रता का निर्धारण
हैजा विष के लिए इष्टतम एकाग्रता सेल व्यवहार्यता प्रभावित या बस अनुपचारित कोशिकाओं की तुलना में कम करने के लिए शुरू होता नहीं है, जिस पर एकाग्रता के रूप में परिभाषित किया गया है. न्यूनतम सेल व्यवहार्यता कम हो जाती है कि हैजा विष का न्यूनतम एकाग्रता का आकलन करने के लिए, कोशिकाओं को शुरू में बड़े incremen में हैजा विष के अलग सांद्रता के साथ इलाज किया गयाटीएस और बाद में छोटी वृद्धि के साथ चित्रा 3a अपेक्षाकृत बड़े वेतन वृद्धि (एनजी, 2 आर 100-1,000 के बीच; = 0.5436) में विष के स्तर के लिए हैजा विष उपचार का एक परिणाम के रूप में सेल अस्तित्व के लिए एक कम व्यवहार्यता प्रवृत्ति को दर्शाता है.. जैसी कि उम्मीद थी, सेल व्यवहार्यता प्रत्येक उपचार (चित्रा 3a) के लिए बहुत विविध. व्यवहार्यता में बड़े मनाया परिवर्तनशीलता उपचार के किसी भी (एक तरह से एनोवा) के साथ हमारी सकारात्मक नियंत्रण का मतलब के बीच कोई महत्व अंतर में हुई. इन परिणामों के आधार पर हमने निर्धारित किया है कि विष के स्तर <100 एनजी आगे परीक्षण किया जाना चाहिए. चित्रा 3b छोटे विष स्तर उपचार के लिए सेल व्यवहार्यता से पता चलता है. सेल व्यवहार्यता मामूली वृद्धि उपचार का एक परिणाम के रूप में व्यवहार्यता में मनाया गया, हालांकि लगभग सभी विष सांद्रता के लिए अत्यधिक चर रहा है. इन बढ़ जाती है (चित्रा 3b) सकारात्मक नियंत्रण की औसत की तुलना में उपचार से किसी के लिए सांख्यिकीय महत्वपूर्ण नहीं हैं (एक तरह से एनोवा, Tukey के).
चित्रा 1. फैटी एसिड का प्रयोग करने योग्य सांद्रता का निर्धारण:. ओलिक एसिड, linoleic एसिड और लिनोलेनिक एसिड के लिए अपेक्षाकृत बड़े वेतन वृद्धि (μl / 100-1,000 एनजी) में फैटी एसिड की सांद्रता में परिवर्तन के प्रभाव बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 2. ललित पैमाने फैटी एसिड एकाग्रता दृढ़ संकल्प: मानव आंतों उपकला पर छोटे वेतन वृद्धि (μl / 10 एनजी) में फैटी एसिड की सांद्रता में परिवर्तन के प्रभावसेल अस्तित्व. आंतों उपकला कोशिकाओं ओलिक के अलग सांद्रता (एक), लिनोलेनिक एसिड (ख) और लिनोलेनिक एसिड (ग) के साथ इलाज किया गया. सकारात्मक नियंत्रण ही पूरा मीडिया, और 70% इथेनॉल के साथ नकारात्मक नियंत्रण के साथ इलाज किया कोशिकाओं है. प्रत्येक परीक्षण के लिए, एन = 3 सकारात्मक नियंत्रण (एन = 6) को छोड़कर सभी उपचार के लिए. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 3. माउस बृहतभक्षककोशिका अस्तित्व पर हैजा विष के अलग सांद्रता के आवेदन पत्र के आकलन के आधार पर प्रयोग करने योग्य हैजा विष सांद्रता का निर्धारण: माउस मैक्रोफेज बड़ा वेतन वृद्धि में हैजा विष के अलग सांद्रता के साथ इलाज किया गया (एक)फिर छोटे लोगों (ख). सकारात्मक नियंत्रण ही पूरा मीडिया, और 70% इथेनॉल के साथ नकारात्मक नियंत्रण के साथ इलाज किया कोशिकाओं है. प्रत्येक परीक्षण के लिए, एन = 3 सकारात्मक नियंत्रण (एन = 6) को छोड़कर सभी उपचार के लिए. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
4 चित्रा. उचित फैटी एसिड और भविष्य के अध्ययन में इस्तेमाल के लिए विष सांद्रता के प्रायोगिक डिजाइन दृढ़ संकल्प: सेल lysates गुणात्मक और मात्रात्मक immunoblotting और एलिसा संक्रमण के लिए मार्कर के रूप में विशिष्ट साइटोकिन्स के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करके assayed किया जा सकता मैक्रोफेज और साइटोकाइन गतिशीलता के इलाज के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
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Discussion
फैटी एसिड की एकाग्रता और हैजा विष का सुझाव
फैटी एसिड mucosal प्रतिरक्षा बढ़ाने कैसे की सटीक व्यवस्था अज्ञात है, कई अध्ययनों उनके लाभकारी प्रभाव की जांच करने का प्रयास किया. हमारे अध्ययन से कोशिकाओं कोशिकाओं सेल अस्तित्व पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव के बिना बर्दाश्त कर सकते हैं और साथ ही हैजा विष की अधिकतम एकाग्रता के रूप में बर्दाश्त कर सकते हैं कि फैटी एसिड की अधिकतम एकाग्रता का निर्धारण पद्धति को प्रदान करना है.
तीन फैटी एसिड (, ओलिक linoleic और linolenic) की एकाग्रता के साथ ही सेल व्यवहार्यता पर बहुत महत्वपूर्ण प्रतिकूल प्रभाव के बिना कोशिकाओं के इलाज के लिए हैजा विष की कि हम भिन्न करने के लिए फैटी एसिड होता है और हैजा विष और इलाज ऊतक संवर्धित कोशिकाओं solubilized निर्धारित करने के लिए सांद्रता व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए एक MTT परख द्वारा पीछा किया. हमारी कार्यप्रणाली और परिणामों के आधार पर हम फैटी एसिड की श्रृंखला और उपयोगी हैजा विष प्रदानइन फैटी एसिड या हैजा विष (देखें नीचे) का उपयोग करने का लक्ष्य है कि भविष्य में जांच के लिए. हम मानव आंतों उपकला कोशिकाओं का उपयोग करने के लिए, क्रमशः, ओलिक एसिड, linoleic एसिड और लिनोलेनिक एसिड के लिए (μl / एनजी) 5-10, और 5-10 1 की सांद्रता, सलाह देते हैं. हम भी / BALB सी माउस मैक्रोफेज का उपयोग कर हैजा विष का <30 एनजी का उपयोग करें (200 μl प्रति, तरीकों देखें) की सलाह देते हैं. हम हैजा विष के लिए कम से कम, कोई महत्वपूर्ण अंतर यह है कि उपचार की तुलना में सकारात्मक नियंत्रण के लिए सेल व्यवहार्यता के बीच मनाया गया, समझते हैं कि. हालांकि, हमारी सिफारिश उच्च विष स्तर जोखिम का एक परिणाम के रूप में मनाया गया है कि सेल व्यवहार्यता में अपेक्षाकृत उच्च परिवर्तनशीलता पर आधारित है.
फ्यूचर स्टडीज
फैटी एसिड होता है और हैजा विष के स्तर के लिए इस अध्ययन में उपलब्ध कराए गए आंकड़ों के भविष्य के अध्ययनों में इस्तेमाल किया जा सकता है. हम यहां एक ऐसी जांच का एक उदाहरण प्रदान करते हैं.
हैजा देव के साथ जुड़े एक बीमारी हैउचित सीवेज और जल उपचार संयंत्रों और सुरक्षित पीने का पानी नहीं है कि देशों भागने. 2009 में, 3,000 से अधिक की मौत टोल जिम्बाब्वे अकेले में हैजा संबंधित लक्षण के कारण एक पांच महीने की अवधि के लिए रिपोर्ट किया गया था. 14 2011 के रूप में, हैजा हैती में एक प्रकोप (सीडीसी, 2010) सहित दुनिया के विभिन्न क्षेत्रों में एक महामारी बनी हुई है . 2010 में एक आणविक आनुवंशिकी के अध्ययन के इस प्रकोप में जीवाणु नेपाली मूल के थे कि सबूत से पता चला है. 15 रोग वी. से आंत का मल दूषित भोजन या पीने के पानी और उपनिवेशवाद की घूस के कारण होता है एक आंत्रजीवविष के रिलीज के द्वारा पीछा कोलरा,. हैजा टीकाकरण मौजूद करते हैं, वे हमेशा फैलने के दौरान संक्रमण को रोकने में कारगर नहीं हैं. प्रभावी और सस्ती हस्तक्षेप हैजा फैलने पाए जाते हैं जहां आबादी के लिए आवश्यक हैं. एक दृष्टिकोण के लिए अध्ययन करने के लिए है कि क्या इस तरह के ओलिक, linoleic और linolenic एसिड के रूप में डेरिवेटिव से समृद्ध होती हैं कि खाद्य स्रोतोंहैजा संक्रमण के खिलाफ mucosal उन्मुक्ति प्रदान करने या बढ़ाने के लिए. ऐसे टोल की तरह रिसेप्टर्स 16 (TLRs) और nucleotide के बंधन डोमेन (NLRs) के रूप में कोशिकाओं की सतह पर पाया प्रोटीन रिसेप्टर्स के उपयोग के माध्यम से mucosal प्रतिरक्षा के कार्य करता है. झिल्ली संरचना और TLRs और NLRs के साथ बातचीत कि ligands की रिहाई में परिवर्तन के माध्यम से, आंतों उपकला के लिए फैटी एसिड के अलावा खतरनाक रोगाणुओं को पहचानने और उचित प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की भर्ती में रिसेप्टर समारोह में वृद्धि हो सकती है. ऐसे TNF-α की सेल की रिहाई, आईएल -6 के रूप में फैटी हैजा संक्रमण पर एसिड प्रभाव, साइटोकाइन गतिशीलता, यह निर्धारित करने के लिए, आईएल -10 और आईएल -12, (चित्रा माउस मैक्रोफेज की तुलना में मानव आंतों उपकला कोशिकाओं में तो और अधिक अध्ययन किया जाना चाहिए 4). भविष्य के अध्ययन से इस तरह के ज्ञान हमें बेहतर फैटी एसिड अंततः अमर्ष बाधित करने के लिए प्रभावी उपायों को उपलब्ध कराने के क्रम में, संक्रमण को रोकने के लिए काम कर सकते हैं जिसके द्वारा तंत्र को समझने में मदद मिलेगीएक प्रकोप. यह हैजा विष संक्रमण से पहले फैटी एसिड के साथ कोशिकाओं के इलाज के लिए प्रेरित और / या अंत में माइक्रोबियल हैजा संक्रमण के दौरान सेल व्यवहार्यता बढ़ रही है, आंतों उपकला में mucosal प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ाने में मदद मिलेगी कि संभव है.
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Disclosures
इस अध्ययन के लेखकों ने इस अध्ययन के परिणामों से कोई वित्तीय हित है. इस अध्ययन के लिए अनुदान Kean विश्वविद्यालय द्वारा एफटी के लिए प्रदान किया गया था, लेकिन, एफटी वर्तमान Kingsborough सामुदायिक कॉलेज में एक कर्मचारी है.
Acknowledgments
हम पाउला Cobos और प्रयोगशाला सहायता के लिए डॉ. Evros Vassiliou धन्यवाद और क्रमशः, माउस मैक्रोफेज प्रदान करते हैं. हम भी मार्गदर्शन के लिए हमारी प्रयोगशाला प्रबंधक रिचर्ड Criasia धन्यवाद और सामग्री के साथ मदद. अंत में, लेखकों वीडियो उत्पादन के साथ मदद के लिए Ramanpreet कौर धन्यवाद.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 | |
References
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