Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

Senesent Kanser Hücreleri ölçmek için bir Hassas Yöntem

doi: 10.3791/50494 Published: August 2, 2013

Summary

Yaşlanması önler veya tümörogenez tartışmalıdır teşvik olsun. Kemoterapik ilaçlar senesce için kanser hücrelerinin neden olabilir bu yana, yaşlılık okuyan yeni tedaviler önermek için gereklidir. Ancak, standart ve geniş kullanılan β-galaktosidaz tahlil büyük sakıncaları sunar. Burada yaşlılık ölçmek için hızlı ve hassas akım sitometri bazlı analiz öneriyoruz.

Abstract

İnsan hücreleri süresiz çoğalmaya yok. Dış ve / veya iç kuyrukları üzerine, hücreler ölür veya yaşlılık olarak adlandırılan sabit bir hücre siklüs hapsine girebilir. Bu telomer kısalması ve mitojenik onkogenlerin anormal ifadesi olarak çeşitli hücresel mekanizmaları, yaşlılık neden olduğu gösterilmiştir. Yaşlılık normal hücreler ile sınırlı değildir, kanser hücreleri de senesce bildirilmiştir.

Kemoterapik ilaçlar kanser hücrelerinde yaşlanmasının neden olduğu gösterilmiştir. Ancak, yaşlılık engelleyen veya tümörogenez teşvik olmadığını tartışmalıdır. Bunun sonunda hastaya özgü olabilir gibi, kanser hücresi yaşlanmayı değerlendirmek için hızlı ve hassas bir yöntem bir süre gerekli olacaktır.

Bu amaçla, standart β-galaktosidaz deney, şu anda kullanılan yöntem, büyük sakıncaları sunulur: o zaman alıcı ve duyarlı değildir. Burada li yaşlılık çalışma bir akım sitometri bazlı analiz teklifhücreleri ettik. Bu deney, hassas ve hızlı olma avantajına sahiptir, ve çeşitli hücresel belirteçlerin immün akuple edilebilir.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Erken altmışlı ve Hayflick ve Moorhead tarafından keşfedilmesinden bu yana, yaşlılık hala bir cep merak 1 kalır. İnsan hücreleri süresiz yaşlanma ile, Hayflick ve Moorhead yaşlanma hücresel süreci icat, çoğalırlar ve yok. Yaşlanması hücresel ölüme karşı hücrelerin metabolik olarak aktif kaldığı istikrarlı bir hücre döngüsü tutuklama olduğunu. Telomer kısalması, DNA hasarı, kromatin pertürbasyon ve mitojenik onkogenler anormal ifadesi 2: Bugüne kadar, dört hücresel mekanizmaları yaşlanması neden gösterilmiştir. Bu, normal hücrelere değil sadece göstermekle kalmaz, ayrıca kanser hücrelerinin yaşlanmayı 3 geçmesi mümkündür. Nitekim olarak, yaşlanması geçiren kanser hücreleri daha fazla tümör ilerlemesi 4-5 için bir engel teşkil gösterilmiştir. Ancak, bazı raporlar artık belirli koşullar altında, hücresel yaşlanma da malignite 6-7 teşvik edebilir, dikkat çekmişlerdir. Kanser cel bir yaşlılık incelenmesils şu anda kemoterapötik ilaçların in vitro hem de in vivo 8'de sadece kanser hücrelerinin yaşlanması yol açabilir kullanılan kanser araştırmalarında bir dürtü haline üzere.

Senil hücrelerin varlığını araştırmak için ana tahlil asidik pH değerinde β-galaktosidaz deneyidir. Bu, histokimyasal deney en yaşlı hücrelerdeki meydana lizozomal biogenesizdeki artış gösterir. Kısaca, hücreler uygulanmış ekzojen X-gal, mavi bir renk 9 sebebiyet veren, yaşlanmış hücrelerin lizozomlarında zenginleştirilmiş β-galaktosidaz ile yarılır. Mavi ihtiyarlık hücreler daha sonra bir parlak saha mikroskop altında ölçülebilir. Çok popüler olsa da, β-galaktosidaz deney büyük sakıncaları sunulur. İlk olarak, bu tahlil sabit hücreler üzerinde gerçekleştirilir. Bir mikroskop altında yaşlanan hücrelerin oldukça yüksek sayarak yaşlılık derecesini ölçmek için ima çünkü İkinci olarak, zaman alıcıdır. Üçüncü olarak, bu testteyaşlılık ve olmayan yaşlanan hücreler arasındaki ayrım tamamen gözlemci dayanır gibi hassas değildir.

Burada canlı yaşlanan hücrelerin varlığı için değerlendirmek için bir keşfedilmemiş, hızlı ve hassas sitometri bazlı analiz tartışmak. Bu tahlil, bir membran geçirgen molekülünün hidrolizi, 5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galaktopiranosid (C 12 FDG) esas alınmaktadır, β-galaktosidaz ile yaşlı hücrelerdeki zenginleştirilmiştir. Hidroliz ve lazer uyarımı sonra C 12 FDG yeşil flüoresan yayan ve bu nedenle akış sitometrisi 10, 11 ile tespit edilebilir. Akım sitometrisi ile senil hücrelerin tespit hızlı ve hassas olma büyük bir avantaj sunar. Buna ek olarak, akış sitometrisi ile ihtiyarlık hücrelerin saptanması diğer hücresel markerlerin saptanması ile akuple edilebilir. Bu deney, kemoterapi ile tedavi edilen kanser hücrelerinin bir popülasyon içindeki senil hücrelerin tespit etmek için kullanılabilir ve rutin olarak ayarlanabilirkadar doku kesitlerinde, hücresel ayrışma sonra, klinikte.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. C12FDG bafilomisin A1 ve Hücre Kültürü hazırlanması

  1. 20 mM'lik nihai bir konsantrasyona kadar, dimetil sülfoksit (DMSO) içinde 12 C FDG toz çözülür. -20 ° C'de kısım ve mağaza DMSO uygun emniyet koşulları ile birlikte kullanılmalıdır.
  2. 0.1 mM nihai konsantrasyona kadar DMSO içinde bafilomisin A1 toz çözülür. De kısım ve mağaza - 20 ° C Bafilomisin uygun emniyet koşulları ile birlikte kullanılmalıdır.
  3. 37,% 10 fetal sığır serumu ve% 1 antibiyotik, ° C,% 5 CO2 içeren bir ortam içinde, RPMI 8226 hücre hattı ile, ya da bağlı olan veya olmayan diğer hücre hatları geliştirin. Deney için gereken hücre sayısı tahmin. Akış sitometrisi analizi sırasında yeterli sayıda kayıt altına almak için, 5 x 10 5 hücre gereklidir. Yaşlanan hücrelerin yüzdesini belirlemek için, üç hücre örnekleri gereklidir: etiketsiz örnek, tedavi edilmezse hücreleri C 12 FDG ile boyanmış, tedavi hücreleri ile boyandıC 12 FDG.
  4. Hücrelerinin hücre çoğalmasını eğrisinin log-faz böylece tohum hücreleri, 24 saat önce bir deney.

2. Yaşlılık indüksiyon

  1. Bir kemoterapik madde ekleyerek kanser hücrelerinin yaşlanması neden olur. İlaç konsantrasyonu ve tedavi süresi, test edilen hücre tipi için adapte edilmelidir. Yaklaşık 10 6 hücre / ml 'de bir hücre konsantrasyonu 50 nM doksorubisin nihai konsantrasyonda, 48 saat tedavi ile başlar. (Negatif kontrol) tedavi edilmemiş örnek eklemeyi unutmayın.

3. Bafilomisin A1 Tedavi

  1. Önceki adımda kullanılan kemoterapik ilaç hücre apoptoza yol olabilir gibi, tripan mavisi (v / v) ile karıştırılması hücreleri tarafından hücre canlılığı edin. Bir Malassez odasına doldurun ve mavi hücreleri (ölü hücreleri) ve beyaz hücreleri (canlı hücreler) sayısını. Canlılığı yüzdesi en az% 70 olması durumunda, ölü hücreler ayni olabilirsağlamak için uygun bir kiti kullanılarak çekip çıkarılmış ölü hücreleri önyargı sonraki analiz olmaz ki.
  2. Kültür ortamı çıkarın ve önceden ısıtılmış taze kültür ortamı ile değiştirin. Bafilomisin A1, 100 nM bir nihai konsantrasyon hücreler ile tedavi. Bafilomisin A1 lizozomlar asidik pH hale getirmek için kullanılır. 37 ° C,% 5 CO2 'de 1 saat inkübe edin.

4. C 12 FDG Boyama

  1. 2 mM'lik nihai bir konsantrasyona kadar önceden ısıtılmış taze kültür ortamı C 12 FDG çözülür.
  2. 33 uM'lik bir son konsantrasyonda hücrelere ait bileşik ekleyin ve 37 ° C'de 2 saat inkübe ° C,% 5 CO2. Yapışmayan hücreler kullanılıyorsa, 4 ° C (hız kullanılan hücre tipi için ayarlanması sahip olabilir), 5 dakika boyunca 300 x g'de santrifüj hücreler, PBS ile 2x yıkayın. Soğuk PBS ile 500 ul hücre pelletini. Yapışık hücreleri kullanıyorsanız, ortamı çıkarın ve PBS ile 2x yıkayın. Bir tripsin çözeltisi ve santrifüj kullanarak yapışık hücreler hasat4, 5 dakika boyunca 300 xg'de hücreleri ° C (hız kullanılan hücre tipi için ayarlanabilir için) olabilir. Soğuk PBS ile 500 ul hücre pelletini. Her iki durumda da, hücre konsantrasyonu yaklaşık 10 6 hücre / ml olmalıdır.
  3. Daha ihtiyarlık hücre popülasyonunun, karakterize etmek için bir ko-immün gerçekleştirin.

5. Sitometrisi Analizi

  1. Akış sitometresinin üretici tarafından önerilen kontrol boncuklar kullanarak akış sitometresinin kalibre edin. Tüm adımları için, en az 10 4 olaylar kaydedilmelidir.
  2. Etiketsiz hücreleri içeren ilk örnek çalıştırın. Iki parametre grafik görüntüleme Forward Scatter Kanal (FSC) karşı Side Scatter Kanal (SSC) hazırlayın. Photomultiplier Tüpler (Proje Yönetim Ekipleri) ayarlayın ve örnek hazırlama sırasında ortaya olabilir ölü hücreleri ve hücresel enkaz faiz hariç bir bölge tanımlar. Günlük ölçekte FL1 gösteren tek parametre histogram Gate ilgi bu bölgedex-ekseni ve y-ekseni olayların sayısını. Olayların sayısı analiz hücrelerin sayısını temsil eder. Etiketsiz hücrelerin x-ekseninin günlük ölçekte ilk on görünür şekilde PMT ayarlayın. Gerekirse hücrelerin otofloresans belirler.
  3. Tedavi edilmezse hücreleri içeren ikinci örnek çalıştırın. FL1 (C 12 FDG floresan) gösteren tek parametre histogramda, loş etiketli nüfusun sonra imleci. Bu eşik olmayan yaşlanan hücreleri (loş etiketli hücreleri) ve yaşlanan hücreler (parlak etiketli hücreleri) arasındaki ayrımcılığa izin verecek.
  4. Tedavi edilen hücreleri içeren üçüncü örnek çalıştırın. Aydınlık hücreleri etiketli örneğin, senil hücrelerin önceki adımda belirlenen eşik üzerinde görüntülenir. Olaylarının toplam sayısı başına parlak etkinlikleri sayısına bölünmesiyle senil hücrelerin yüzdesini değerlendirmek. Gerekirse, β-galaktosidaz aktivitesi ortalama floresan kullanılarak tahmin edilebilir,yoğunluğu.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Multipl Miyelom, bir hematolojik kanser, bir kemoterapik prosedür ile uyarılan yaşlanmayı değerlendirmek için kullanılmıştır. Bir ticari olarak temin edilebilen MM hücre hattı (RPMI 8226) doksorubisin, bir kemoterapik madde ile 2 gün boyunca tedavi edildi yapmak için. Hücreler daha sonra bafilomisin A1 muameleye tabi tutulur ve daha da C 12 FDG ile inkübe edildi. Hücreler akış sitometrisi ile analiz edilmiştir. Şekil 1, senil hücrelerin yüzdesi C 12 FDG kullanımı ile, bir gün içinde tespit edilebilir olduğu farklı adımlar ve görüldüğünü göstermektedir. Etiketsiz hücreleri akış sitometresinin ilk çalıştırmak. Şekil 2A gösterildiği gibi, ilgi bir bölge ölü hücreleri ve hücresel enkaz dışlamak için grafik FSC karşı SSC üzerinde kurulmuştur. Ilgi bu bölgede Hücreler x-ekseni ve y-ekseninde olayların sayısı C 12 FDG (FL1) ve floresan gösteren histogramı sonra kapılı idi. Tedavi edilmeyen hücreleri analiz edildi. Birkırmızı imleç tasvir Şekil olarak loş etiketli nüfusun sonra kuruldu 2B: yaşlanan hücreler bölgede mevcut olacaktır V. tedavi hücreler daha sonra akış sitometresinde çalışılmış ise olmayan yaşlanan hücreler, bölgenin U görünür. Şekil 2C (sol panel) gösterildiği gibi parlak işaretli hücrelerin bir nüfus, bölgede V, önceden belirlenen kırmızı imleç üzerinde çıktı. Bu nüfus ihtiyarlık hücreleri temsil eder ve bunların yüzdesi daha sonra hesaplanabilir. Buna paralel olarak, aynı hücre örneği gösterildiği gibi (sağ panel) ve β-galaktosidaz deney kullanılarak boyandı. Bu temsilci resimde, tamamen mavi hücreler ve kısmen mavi hücreler gerçekten mavi yaşlanan hücreleri ayırt etmedeki güçlükler göstermek için gösterilmiştir.

Senil hücrelerin yüzdesinin belirlenmesi C 12 FDG özgüllüğü göstermek için, hücreler çeşitli konsantrasyonlarda doksorubisin ile tedavi edildi. Yüzdesisenil hücrelerin Şekil 2B'de olduğu gibi belirlenmiştir. Kullanılan doksorubisin konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak artar parlak hücrelerin yüzdesi olarak Şekil 3'te gösterilmiştir. Bu, C 12 FDG etiketleme ihtiyarlık hücrelere özgü olduğunu göstermektedir.

Şekil 1
Şekil 1. Deney düzeni Genel. Hücreler önce 1 24 saat kemoterapik ilaç 2 ile tedavi ekildi. Deney gününde, hücreler bafilomisin A1 3 ile ve daha sonra 4 C12FDG ile inkübe edildi. Hücreler daha sonra akış sitometresi 5 üzerinde analiz edilmiştir.

Şekil 2,
Şekil 2. Flow sitometri analizi. Ilgi wa (A) bir bölgeölü hücreleri ve hücresel enkaz dışlamak için arsa FSC karşı SSC belirlenir. (B) Nokodazol akış sitometresinde çalışılmış ve kırmızı imleç kuruldu. (C) tedavi hücreler akış sitometresinde çalıştırmak. Yaşlanan hücreler kırmızı imleci üzerinde çıktı. U ve V sırasıyla ilgi bölge, yani sigara yaşlanan ve yaşlı hücreleri temsil eder. (D) paralel olarak, (aynı numune, aynı tedavi), hücreler, β-galaktosidaz deneyi kullanılarak boyandı. Senil hücrelerin ayrım sağlayan bir eşik değeri için zorluk göstermektedir hücrelerin boyanması çeşitli derecesi (tamamen mavi hücreler, kısmen mavi hücreleri), dikkat edin. İleri Saçılım Kanal (FSC), Side Scatter Kanal (SSC), Floresan 1 (FL1).

Şekil 3,
Şekil 3,. C 12 ÖzelliğiFDG etiketleme. Hücreler 5 (koyu gri histogram), 25 (açık gri histogram) ve doksorubisin, 50 nM (beyaz çubuk) ile muamele edildi. U olmayan ihtiyarlık hücreleri içeren bölgeyi temsil eder. Senil hücrelerin yüzdesi olaylarının toplam sayısı başına parlak olaylar sayısına bölünmesiyle tarafından değerlendirilir. Senil hücrelerin yüzdeleri sırasıyla% 0.8,% 15.78, 5, 25 bir doz için 26,31 ve% 50 nM doksorubisin vardır.

Tahlil C12FDG β-galaktosidaz deney
Duyarlılık + -
Maliyet = =
Çıktı + -
Testi süresi - +
Hücre tipine Uygulanabilirlik = =
Hücreler Hücre Canlı Sabit hücre
Özel ekipman gereksinimi Akım sitometrisi Parlak alan mikroskobu

Tablo 1. (-) Ve (=), sırasıyla, yan ve eşdeğer dereceye karşılık gelmektedir. Süre C 12 FDG sitometrisi bazlı tahlil ve β-galaktosidaz deney (+) avantajları ve dezavantajları yüksek bir dereceye kadar gelir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Burada canlı kanser hücrelerinin hücresel yaşlanma ölçmek için bir akım sitometri tabanlı bir yöntem sundu. Bu yöntem, zarın geçirgen bileşik, C 12 FDG kullanımına dayanmaktadır, ve bu bileşiğin hücreler tarafından alınır gibi bu nedenle herhangi bir hücre tipinde ve uzun gibi çeşitli tedavilerden sonra kullanılabilir. Hücresel alımı üzerine, C 12 FDG senil hücrelerin lizozomlarında zenginleştirilmiş β-galaktosidaz ile hidrolize edilir. Lazer uyarımı geçtikten sonra, bileşik senil hücrelerin ölçümü sağlayan, yeşil floresan yayar. Yeşil floresan Bu miktar her iki akış sitometrisi ile, ya da flüoresan mikroskobu ile yapılabilir. Bununla birlikte, bu durumda, flöresanlı hücre zaman gerektiren, bir gözlemci tarafından sayılır gerekecektir. C 12 FDG β-galaktosidaz ile hidrolize olduğu için, bu yöntem, β-galaktosidaz aktivitesini ölçmek için, yaşlanmış hücrelerin miktarının yanı sıra, sağlar:ve enzim lokalizasyonu, çoğunlukla lizozomal vezikül içinde mevcut. Yöntem basit olmasına rağmen, dikkat 3. adımda çizilmelidir. Yaşlanan hücrelerin başarılı algılama çoğunlukla lizozomlar sağında pH dayanır. Bunu yapmak için, lizozomlar asidik pH nötralize etmek için bafilomisin A1 kullanılır. Kullanılan hücre tipine bağlı olarak, bu adım gerekli olabilir. Yaşlanması beklenen ve herhangi bir boyama tespit edilirse, biz bafilomisin A1 için bir negatif kontrol (yok bafilomisin) dahil etmek ve bafilomisin A1 konsantrasyonunu artırmak için öneririz. Böylece, bu artış hücre ölümüne sebep olmadığından emin olmak. Alternatif olarak, klorokin bafilomisin A1 veya lizozomlar pH'ı artırmak için mümkün olan diğer bileşikleri ile ikame edilebilir.

Açıklanan protokol kullanarak, başarılı bir gün içinde doksorubisin tedavi sonrasında multipl miyelom hücreleri, yaşlanan hücrelerin yüzdesi ölçülür. Bu protokol oth kullanılabilirer kanseri hücre tipleri, aynı zamanda kanser dışı hücre tiplerinde. Hücre içi pH'nın de kontrol edilmesi gerekir ki için popüler ve gereksiz yere β-galaktosidaz deney, en az 2 gün gerektirir. Gerçekten de β-galaktosidaz, X-gal ayrılmasından sonra elde edilen maksimal mavi renk, 12 sonra elde edilir - Kuluçka 9 16 sa. Bu deney, bu nedenle, önerilen sitometrisi bazlı tahlil daha fazla zaman alır. Gerçekten yaşlılık değil olurken mavimsi bir hücre yaşlanan hücre olarak kabul olabilir çünkü Ayrıca, bu testte duyarlı değildir. Iki teknik için Tablo 1 özetlediği avantaj ve dezavantajları.

Bu yöntemin başka bir avantajı, hücre yüzeyi üreticileri immün ile akuple edilebilir olmasıdır. Multipl miyelom durumunda, bu bize olmayan kanser kök hücreleri 12 yaparken multipl miyelom kanser kök hücreleri, aşağıdaki doksorubisin tedavisi senesce yok göstermek için izin verdi. Yaşlılık için pro-ve anti-tümör oluşumu ile gösterilmiştir. Kemoterapik ilaçlar yaşlanması neden olabilir bu yana, yaşlılık eğitim klinikte önemli hale gelebilir. Bu amaçla, hızlı ve hassas bir tahlilleri gibi burada tarif edilen tahlil olarak, kullanılabilir olması gerekir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Biz sitometri tesisin kullanımı için SF 4206 icore (Université de Caen) teşekkür ederim. JC Conseil de Radyokorunum d'EDF ve Basse-Normandie Conseil Régional gelen doktora sonrası burslar aldı. Comites de l'Orne et du Calvados - Bu veriler Ligue Nationale contre le Kanser tarafından finanse edilen projelerin bir parçasıydı.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galactopyranoside Invitrogen D-2893
Dimethyl sulfoxide Sigma D2650
Bafilomycin A1 Sigma B1793
Doxorubicin Sandoz
Trypan blue Sigma T8154
RPMI 1640 cell culture medium Lonza BE12-702
Fetal calf serum PAA Laboratories GmBH A15 101
Antibiotics Gibco 5290-018
Gallios flow cytometer Beckman Coulter A94291

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hayflick, L., Moorhead, P. S. The serial cultivation of human diploid cell strains. Experimental Cell Research. 25, 585-621 (1961).
  2. Campisi, J., d'Adda di Fagagna, F. Cellular senescence: when bad things happen to good cells. Nature Review Molecular Cell Biology. 8, (9), 729-740 (2007).
  3. Shay, J. W., Roninson, I. B. Hallmarks of senescence in carcinogenesis and cancer therapy. Oncogene. 23, (16), 2919-2933 (2004).
  4. Bartkova, J., Rezaei, N. Oncogene-induced senescence is part of the tumorigenesis barrier imposed by DNA damage checkpoints. Nature. 444, (7119), 633-637 (2006).
  5. Takacova, S., Slany, R., Bartkova, J., Stranecky, V., Dolezel, P., Luzna, P., et al. DNA damage response and inflammatory signaling limit the MLL-ENL-induced leukemogenesis in vivo. Cancer Cell. 21, 517-531 (2012).
  6. Krtolica, A., Parrinello, S., Lockett, S., Desprez, P. Y., Campisi, J. Senescent fibroblasts promote epithelial cell growth and tumorigenesis: a link between cancer and aging. Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 12072-12077 (2001).
  7. Coppe, J. P., Patil, C. K., Rodier, F., Sun, Y., Munoz, D. P., Goldstein, J., et al. Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor. PLoS Biology. 6, 2853-2868 (2008).
  8. Roninson, I. B. Tumor cell senescence in cancer treatment. Cancer Research. 63, (11), 2705-2715 (2003).
  9. Dimri, G. P., Lee, X., et al. A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences. 92, (20), 9363-937 (1995).
  10. Kurz, D. J., Decary, S., Hong, Y., Erusalimsky, J. D. Senescence-associated (beta)-galactosidase reflects an increase in lysosomal mass during replicative ageing of human endothelial cells. Journal of Cell Science. 113, 3613-3622 (2000).
  11. Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo. Nature Protocols. 4, (12), 1798-1806 (2009).
  12. Cahu, J., Bustany, S., Sola, B. Senescence-associated secretory phenotype favors the emergence of cancer stem-like cells. Cell Death and Disease. Dec 20, 3-e446 (2012).
Senesent Kanser Hücreleri ölçmek için bir Hassas Yöntem
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Cahu, J., Sola, B. A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells. J. Vis. Exp. (78), e50494, doi:10.3791/50494 (2013).More

Cahu, J., Sola, B. A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells. J. Vis. Exp. (78), e50494, doi:10.3791/50494 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter