Summary
For at demonstrere MR kræft molekylær billeddannelse med en lille peptid målrettet MRI-kontrastmiddel specifik for størknet plasmaproteiner i tumorstroma i en mus prostatakræft model.
Abstract
Tumor ekstracellulære matrix har overflod af cancer relaterede proteiner, der kan anvendes som biomarkører for kræft molekylær billeddannelse. I dette arbejde har vi demonstreret, effektiv MR kræft molekylær billeddannelse med en lille molekylær peptid målrettet Gd-DOTA monoamid kompleks som en målrettet MRI-kontrastmiddel specifik for størknet plasmaproteiner i tumor stroma. Vi udførte forsøget for at evaluere effektiviteten af midlet i ikke-invasiv detektion af prostata tumor med MRI en mus ortotopisk PC-3 prostatacancer model. Den målrettede kontrastmiddel var effektiv til at producere signifikant forøgelse tumor kontrast med en lav dosis på 0,03 mmol Gd / kg. Peptid målrettet MRI-kontrastmiddel er lovende for MR molekylær billeddannelse af prostata tumor.
Introduction
Effektiv billeddannelse af kræftrelaterede molekylære mål er af stor betydning for at forbedre nøjagtigheden af tidligere påvisning og diagnosticering af kræft. Magnetic resonance imaging (MRI) er en stærk klinisk afbildningsmodalitet med høj rumlig opløsning og ingen ionisering stråling 1. Dog ikke målrettet kontrastmiddel er tilgængelige for klinisk MR kræft molekylær billeddannelse. Innovativt design og udvikling af målrettede MRI-kontrastmidler ville i høj grad fremme anvendelsen af MR kræft molekylær billeddannelse. Der er gjort en betydelig indsats for at udvikle målrettede kontrastmidler til MR-scanning af de biomarkører udtrykt på overfladen af kræftceller. Grundet relativt lave følsomhed MRI og lav koncentration af disse biomarkører, er det en udfordring at skabe tilstrækkelig kontrast ekstraudstyr til effektiv MR molekylær billeddannelse ved hjælp af små molekylære målrettet kontrastmidler 2,3. For at opnå tilstrækkelig ekstraudstyr, forskellige doseringssystemer such som liposomer, nanopartikler og polymerkonjugater med høj nyttelast paramagnetiske Gd (III) chelater er udarbejdet for at øge den lokale koncentration af kontrastmidler ved målstederne 4,5. Selv om disse doseringssystemer var i stand til at generere betydelige tumorforbedring i dyremodeller, deres store størrelser resulteret i langsom og ufuldstændig eliminering fra kroppen, hvilket resulterer i forlænget ophobning af giftige Gd (III) ioner, som kan medføre alvorlige betænkeligheder angående sikkerheden 6.. For nylig har nogle undersøgelser vist, at de begrænsninger af MRI til molekylær billeddannelse kan overvindes ved at vælge korrekte molekylære biomarkører med høj lokal ekspression i læsioner og ved hjælp af små molekylære stoffer, der let kan udskilles 7,8. Det centrale element i disse midler er, at de målrette molekylære markører rigeligt til stede i syge væv med lidt tilstedeværelse i normale væv. En høj koncentration af kontrastmidler kan binde til disse mål, hvilket resulterer i tilstrækkeligstrækkelig kontrast ekstraudstyr for effektiv MR molekylær billeddannelse. Eftersom deres størrelse er mindre end renal filtration tærskel kan ubundne kontrastmidler let udskilles fra kroppen med reduceret baggrundsstøj. Vi har udvalgt en universel cancer-relaterede biomarkør, størknet plasmaproteiner, som rigeligt findes i tumor stroma, og er sjældent til stede i normale væv 9. Syntetiserede vi en målrettet kontrastmiddel indeholdende en lille peptid CGLIIQKNEC (CLT1), som udviste stærk specifik binding til PC3 prostatatumor model 10, og fire Gd-DOTA monoamid chelater. Her giver vi en metode til MR kræft molekylær billeddannelse til at opdage tumorer hos mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Protokol tilpasset fra en forudgående undersøgelse 11.
1.. Konjugering af Gd-DOTA til CLT1 Peptid
- Ved anvendelse af standard fastfase-peptidsyntese syntetisere CLT1 peptid (CGLIIQKNEC) fra Fmoc-beskyttede aminosyrer på en 2-chlortritylchlorid-harpiks (1,0 mmol).
- Efter tilsætning af sidste aminosyre, cyklisere det lineære peptid på harpiksen med thallium (III)-trifluoracetat (1,09 g, 2,0 mmol, 2 ækvivalenter) i DMF (20 ml) ved 0 ° C i 2 timer.
- Dernæst konjugat PEG og lysin sekventielt til den N-terminale ende af CLT1 peptid (1,0 mmol) på harpiks ved omsætning successivt med Fmoc-NH-PEG-COOH (3,0 mmol), Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (3,0 mmol), og et andet parti af Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (6 mmol).
- Fjern Fmoc med piperidin. Tilføj DOTA-tris (t-Bu) (4,58 g, 8,0 mmol, 2 ækvivalenter til hver aminogruppe) til at reagere med de fire frie aminer fra lysin dendrimer på harpiksen i 2 timer.
- Endelig spalte og afbeskytte produktetfra harpiksen ved behandling med en cocktail af trifluoreddikesyre, vand og triisobutylsilane (TIS) (20 ml, 95/2.5/2.5) i 8 timer ved stuetemperatur. Fjern harpiksen ved filtrering efterfulgt af vask med trifluoreddikesyre (TFA). Tilsæt de kombinerede filtrater dråbevis til kold ethylether (200 ml), centrifugeres og vaskes med ethylether 4x. Tør under vakuum for at give et farveløst faststof (1,99 g, 61% udbytte).
- Rens råproduktet med præparativ HPLC under anvendelse af en gradient på 0-40% opløsningsmiddel B (0,1% TFA i acetonitril) i opløsningsmiddel A (0,1% TFA vandig opløsning) i 20 minutter og 40-90% opløsningsmiddel B i opløsningsmiddel A i 10 min .
- Opløs CLT1-dl-(DOTA) 4 (250 mg, 0,077 mmol) i DI vand (15 ml) og pH indstilles til 6 ved anvendelse af 1 M NaOH. Tilføj Gd (OAc) 3 .4 H 2 O (472 mg, 0,462 mmol, 1,5 ækvivalenter til DOTA monoamid) i portioner af løsningen, samtidig med at pH-værdien på 6 ved hjælp af 1 M NaOH. Reaktionsopløsningen ved stuetemperatur i 48 timer omrøres.
- Complex den resterende Gd (III) med ethylenediaminetetraacetic syre (EDTA) (90 mg, 0,31 mmol) og oprense det rå produkt med en størrelse eksklusion søjle for at give det endelige produkt CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (169 mg, 57%).
2. Karakterisering af kontraststoffer
- Mål indhold med induktivt koblet plasma-optisk emissionsspektroskopi Gd (III).
- Erhverve matrix-assisteret laser desorption / ionisering time-of-flight (MALDI-TOF) massespektre i lineær tilstand med 2,5-dihydroxybenzoesyre (2,5-DHB) som en matrix.
- Måle relaksationstider for den vandige opløsning af kontrastmidlerne CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 og en nontargeted kontrolmiddel sCLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 med forskellige koncentrationer ved 60 MHz (1,5 T) med en relaxometer ved 37 ° C. Brug en inversion-recovery puls sekvens til at måle T 1 og en Carr-Purcell-Meiboom-Gill sekvens med 500 ekkoer til at måle T2. Beregn T 1 og T 2 Relaksiviteterne the agenter fra skråningerne af afbildninger af 1 / T 1 og 1 / T 2 versus Gd koncentrationer.
3. Cell Kultur og Udvikling af Animal Model med ortotopisk PC3 prostatatumor
- Kultur PC3 prostatacancerceller med konstitutiv ekspression af grøn fluorescens protein (GFP) i RPMI-medium suppleret med 5% føtalt bovint serum og penicillin / streptomycin / fungizon, høst ved trypsinisering og resuspender i densitet på 2,5 x 10 4 celler / gl PBS.
- Bevar mandlige NIH athymiske nøgne mus (4-5 uger gamle) på Atymiske Animal Core Facility, Case Western Reserve University (CWRU) i henhold til et dyr protokol godkendt af CWRU Institutional Animal Care og brug Udvalg.
- Den kirurgiske overflader blev sprøjtet med 2% chlorhexidin-opløsning og derefter dækket med absorberende gardiner. Sterile operationshandsker blev båret under proceduren. Før Dyrekirurgien, ip injicere Avertin (250 mg / kg) til anesthetize mus. Alternativt kan ketamin / xylazin / acepromazin anvendes i en koncentration på 50/5/1 mg / kg. Ophthalmisk salve blev påført på musen til at opretholde tilstrækkelig fugt under anæstesi.
- Start operation ved at skære et lille snit gennem huden og peritoneum langs den nedre midterlinjen med en længde på omkring 1 cm ved hjælp af en steril skalpel. En steril operationsafdækningsstykke var dækket omkring incisionssted under overlevelse operationer.
- Forsigtigt eksteriorisere og stabilisere prostata dorsale lapper at eksponere prostata. Injicer suspensionen af PC3-GFP-celler i PBS (20 ul) i prostata med en 30 gauge nål. Endelig lukke snittet med sår Autoclip 12..
- Til post-procedure overvågning, overvågning af dyrene to gange om dagen i 1 uge. Tegn på sygdom omfatter manglende spise, mørk urin indsamling omkring urinrøret, og usikker gangart, som kunne indikere infektion eller okklusion af blæren i hæfteklammer.
- Efter 10 dage fjernes than hæfteklammer bruge en korte remover. Overvåg dyrene dagligt for at vurdere tumor størrelse og ethvert tegn på smerte, såsom vægttab, adfærdsmæssige afvigelser og motoriske defekter. Aflive de dyr, som viste en tumor størrelse overstiger den etisk tilladte grænse eller tegn på smerter under tumorvækst.
4.. Bekræftelse af tumorbindende specificitet peptider med fluorescensimagografi og histologi
- Efter tumorcelleinokulering, tillader cirka 4 ugers tumorvækst, før du begynder med billeddannelse. Før injektion af peptid sonder erhverve GFP-fluorescens billeder med levende mus på en fluorescens imager at kontrollere tilstedeværelsen af tumor.
- Iv injicere Texas Red mærkede peptider til tumorbærende mus i en dosis på 10 nmol / mus.
- Sacrifice musene 2 timer senere ved cervikal dislokation, indsamle tumor og større organer, og det samme billede på et fluorescens-imager. Brug grønne lys filtre til GFP (excitation: 444-490 nm, emission: 515 nm langpasfilter, indstillinger erhvervelsesomkostninger: 500-720 i 10 nm trin) og rødt lys filtre til Texas Red (excitation: 576 til 621 nm, emission: 635 nm langpasfilter; erhvervelse indstillinger: 630-800 i 10 nm trin). 10 msek eksponeringstid for GFP og 150 msek for Texas Red.
- Umiddelbart efter måling af hele væv fluorescens, indsamle tumorvæv, fix med formalin, og kryosektion i 5-um skiver.
- Efter skylning med PBS, monteres med 1 dråbe montering medium indeholdende 4 ',6-diamidino-2-phenylindol (DAPI), billede straks på en konfokal laser scanning mikroskop.
5.. Magnetic Resonance Imaging (MRI)
- Ca. 4 uger efter tumorcelleinokulering tillade tumorer at vokse op til 0,3-0,6 cm i diameter. Brug en 7 T MR-scanner med en volumen radiofrekvens (RF) spole til MR undersøgelse.
- Bedøve mus med isofluran-oxygen-blandingen i et isofluran induktion kammeret 2%. OPHthalmic salve blev påført på musen til at opretholde tilstrækkelig fugt under anæstesi.
- Sæt en 30 gauge nål i en 1,0 m lang slange fyldt med hepariniseret saltvand. Placer self-made kateter i mus halevenen.
- Placer musen ind i magneten og holdes under inhalation anæstesi med 1,5% isofluran-ilt via en næse kegle.
- Placer en respiratorisk sensor tilsluttet et overvågningssystem på maven til at overvåge hastighed og dybde af respiration. Opretholde kroppens temperatur på 37 ° C ved at blæse varm luft ind i magneten gennem en feedback-kontrolsystem.
- Begynd med sagittale sektion billeder ved hjælp af en lokalisering sekvens for at identificere tumor placering (TR / TE = 200/3.7 msek FOV = 3,0 cm, skive tykkelse = 2,2 mm, skive nummer = 16, gennemsnitlig = 2, flipvinkel = 45 °, matrix = 128 x 128).
- Brug en 2D T1-vægtet gradient fedt undertrykkelse sekvens til at erhverve 2D aksiale billeder til CE-MRI (TR / TE = 151.2/1.9 msek FOV = 3,0 cm x 3,0 cm, slus tykkelse = 1,2 mm, skive nummer = 12, gennemsnitlig = 1, flipvinkel = 80 °, matrix = 128 x 128).
- Efter præ-injektion baseline MR-billede erhvervelse, begynde at injicere targeted middel eller kontrol middel ved en dosis på 0,03 mmol Gd / kg ved skylning med 200 pi saltvand.
- Fortsæt med at erhverve CE-MRI-billeder på forskellige tidspunkter i op til 30 minutter.
6.. Image Processing and Analysis
- Brug imaging software til billedanalyse.
- Tegn områder af interesse (ROI'er) over hele tumoren og nyrerne i de to-dimensionelle afbildningsplanet og måle gennemsnitlige signalintensitet.
- At kvantificere de CE-MRI data, måle tumor eller nyre kontrast ekstraudstyr (ΔSNR) ved beregning af stigningen i post-kontrast SNR i pre-kontrast SNR ved hjælp af følgende ligning: ΔSNR = (S t / σ t) - (S 0 / σ 0), hvor S 0 og S t betegner signalet i tumeller eller nyrerne før og efter kontrast og σ 0 og σ t er standardafvigelsen af støj måles fra baggrunden luft før og efter kontrast.
- Beregn p-værdier ved hjælp af den studerendes tohalede t-test, forudsat statistisk signifikans ved p <0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 viser syntese af de målrettede kontrastmiddel CLT1-DL-(Gd-DOTA) 4 og den samlede ordning af forsøget. CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 viser meget højere relaksivitet end kliniske Gd-DOTA (tabel 1). Ved 1,5 T, T 1 relaksiviteten pr gadolinium af CLT1-DL-(Gd-DOTA) 4 i PBS (pH 7,4) er ca 3 gange højere end for Gd-DOTA 10. Maestro billeddannelse bekræfter stærkt specifikke binding af Texas Red mærkede CLT1 (CLT1-TR) til tumoren med ringe binding til normale organer og væv, medens den ikke-specifikke krypteret peptid (sCLT1-TR) viser meget lidt tumorbindende (figur 2). Figur 3 viser typisk præ-og post-injektion kontrast forstærket (CE) T 1-vægtede billeder. Det targeted middel resulterer i større og mere forbedring i tumorvæv sammenlignet med ikke-målrettede kodede midler. Kontrast forbedring i urinblæren øges gradvisttid, hvilket indikerer, at kontrastmidlerne blev udskilles via renal filtration. Kvantitativ signal analyse afslører, at targetedmidlet produceret mere væsentlig forbedring signal i tumorvæv end i kontrolgruppen middel (p <0,05) op til 30 min. Biofordelingen Undersøgelsen viser agenten har minimal Gd tilbageholdelse i de vigtigste organer og væv 2 dage efter injektion. Vores foreløbige data viser, at CLT1 målrettet MRI-kontrastmidler kan afgives specifikt til tumoren ved relativt lav dosis (en tredjedel af den kliniske dosis).
| r2 (mM -1. s -1) | r 1 (mM -1. s -1) | Gd indhold (mmol-Gd / g) | |||
| per Gd | per molekyle | per Gd | pis molekyle | ||
| CLT1-(Gd-DOTA) 4. | 10,1 ± 1,0 | 40,4 ± 3,0 | 13,0 ± 3,1 | 52,0 ± 9,6 | 1,05 ± 0,10 |
| sCLT1-(Gd-DOTA) 4. | 11,5 ± 1,4 | 46,0 ± 5,0 | 12,4 ± 0,3 | 49,6 ± 1,3 | 0,97 ± 0,08 |
| Gd-DOTA 4 | 2.9 * | 2.9 * | 3.2 * | 3.2 * | |
Tabel 1. Fysisk-kemiske egenskaber målrettede og forvrænget MRI-kontraststoffer ved 1,5 t, 37 ° C (* Relaksiviteterne for Gd-DOTA i vand ved 37 ° C er fra henvisning 10).
> Figur 1. Grafisk afbildning af syntesen procedure og den samlede eksperiment. Klik her for at se større figur .
Figur 2. Tumor binding af CLT1-TR. Målrettet CLT1-TR (A) og ikke-målrettet sCLT1-TR (B) blev injiceret intravenøst til athymiske nøgne mus, der bærer ortotopisk PC3-GFP prostata i en dosis på 10 nmol / mus. Efter 2 timer tumorer og forskellige organer blev opsamlet og afbildes. Grøn fluorescens billeder er fra PC3-GFP tumorceller. Rød fluorescens billeder er fra CLT1-TR (A) og sCLT1-TR (B)-prober. 1.. tumor, 2. milt, 3. hjerte; 4.. nyre; 5.. testikel; 6.. lever; 7.. lunge; 8.. muskel; 9.. hjerne.565fig2highres.jpg "target =" _blank "> Klik her for at se større figur.
Figur 3. Repræsentative T1-vægtede aksiale 2D gradient billeder af ortotopisk PC-3 humant prostata tumor før og efter intravenøs injektion af CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (A) og sCLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (B) på 0,03 mmol GD / kg i nu / nu-mus. Tumor mærket med rød cirkel og blære mærket med grøn cirkel. Klik her for at se større figur .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kritiske trin
Valg af korrekt biomarkør og målretning lille peptid
For at kunne udvikle en målrettet kontrastmiddel med lille størrelse, to centrale punkter skal overvejes. Først er det vigtigt at vælge korrekte molekylære biomarkører, der rigeligt til stede i syge væv med ringe tilstedeværelse i normale væv. Vores udvalgte cancer-relaterede biomarkør, størknet plasmaproteiner, opfylder dette krav. For det andet bør de valgte målrettede små molekylære midler har høj bindingsaffinitet for biomarkører så der er tilstrækkeligt kontrastmidler kan binde til disse mål, hvilket resulterer i tilstrækkelig kontrastforbedring. I denne undersøgelse valgte vi blodproppen bindingspeptid CLT1 der viser stærkt specifik binding til de størknet plasmaproteiner i tumoren 11.
Kontrastmiddel Syntese
Peptidsyntesen indebærer oxidizing to thiolgrupper i det lineære peptid-molekyle til dannelse af den endelige cykliske CLT1 peptid. Mens peptid ringslutning udføres sædvanligvis i opløsning ved lav koncentration for at minimere potentiel aggregering dimerisering og oligomerisering, on-harpiks ringslutning drager fordel af pseudo-fortynding fænomen såvel som fjernelse af reagenser ved simpel vask og filtrering 13. I vores syntese procedure, finder vi, at på-harpiks cycliseringen hjælp thallium (III) trifluoroacetate fungerer godt med højt udbytte og lidt dimerisation, selvom thallium (III) trifluoroacetat er meget giftigt og pleje skal tages, mens håndtering af den. En anden metode anvender 20% DMSO i opløsning ved lav peptidkoncentration. Imidlertid flere trin er nødvendige for at fjerne DMSO og lyofilisering af stort volumen opløsning tager længere tid. Ved at bruge begge metoder, er det afgørende at sørge for fuldstændig dannelse af intramolekylær disulfidbinding. Når komplekserende peptid ligand med Gd kan de frie thioler fremkaldebetydelige aggregeringer fordi spormetaller i bufferen katalyserer luftoxidation, hvilket resulterer i overoxidation af cystein til dannelse af polymerisation 14. Dette formindsker normalt dramatisk udbyttet og renheden af slutproduktet. For at sikre fuldstændig disulfid band dannelse, vi først nødt til at bruge milde oxidering betingelser for at undgå dannelse af intermolekylære disulfidbinding resulterer i dimer eller højere oligomerdannelse. For det andet skal tilstrækkelig lang reaktionstid opretholdes for at sikre, at alle thiolgrupper oxideres før Gd konjugering trin.
Animal Model og Kanylerings of Mouse Tail Vein
Forberedelse af dyret tumor model og hale vene kanylering er også meget vigtige aspekter af denne procedure. Under operationen skal værktøj / bænk skal holdes rene og sterile for at undgå potentiel infektion, som kan skade eller dræbe mus. For at undgå at bevæge musen inden og efter injektiontion, er det nødvendigt at cannulate mus hale vene. For at forberede kateteret til kanylering, bryde en 30 gauge nål fra navet og indsætte den stumpe ende i en 1,0 m lang slange, og forbinde den anden ende af slangen til en sprøjte fyldt med 1% hepariniseret saltvand. Skub sprøjten til at fylde slangen. Spile halen med varmt vand (~ 105 ° F). Stik nålen ind i venen. Blod tilbageløb i rørledningen indikerer vellykket indføring af kateteret. Du kan kontrollere, at nålen er i venen, skub forsigtigt sprøjten og saltvand kan anvendes uden problemer injiceres, venen ryddes med indsprøjtning af en lille mængde saltvand. Fastgør kateteret på plads med tape, før du flytter musen til scanneren.
Begrænsninger og eventuelle ændringer
Der er flere begrænsninger i vores nuværende undersøgelse. Først fra de foreløbige resultater bemærker vi, at CLT1 udvasker meget hurtigt fra målretning webstedet, selvom det shOWS fremragende binding til tumoren. In vivo proteolytisk nedbrydning sandsynligvis forårsager ustabilitet CLT1. Ændring af CLT1 at beskytte mod proteolytisk nedbrydning bør forbedre sin stabilitet og forlænge dets wash-out tid in vivo. Brug D-type aminosyrer til at erstatte naturlige L-type aminosyrer er en potentiel strategi for at nå dette mål. For det andet betyder den aktuelle undersøgelse ikke præcisere, hvilke præcise komponenter i clotted plasmaproteiner den CLT1 peptidet bindes til. Endelig syntetisere vi kontrastmidlerne hovedsagelig anvendelse af fastfasesyntese med relativt lavt udbytte og høje omkostninger. Udvikling af en flydende fase syntese metode bør øge udbyttet og sænke omkostningerne.
Ansøgninger
Vi er ved at udvikle teknikker til nøjagtig detektering af små maligne tumorer med kontrast forstærket MRI. MRI med targeted midlet giver en mere effektiv og sikrere alternativ til kræft molekylær billeddannelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
Dette arbejde er delvist understøttet af American Heart Association GRA Spring 09 Postdoc Fellowship (09POST2250268) og NIH R01 CA097465. Vi værdsætter meget Dr. Wen Li og Dr. Vikas Gulani for MR-protokol test og opsætning, og Ms Yvonne Parker for hendes hjælp på tumor implantation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| REAGENTS | |||
| Fmoc protected amino acids | EMD Chemicals Inc | ||
| DOTA-tris(t-Bu) | TCI America | ||
| PyBOP, HOBt, HBTU | Nova Biochem | ||
| DIPEA, Thallium(III) trifluoroacetate, TIS | Sigma-Aldrich Corp. | ||
| Texas Red, succinimidyl ester, single isomer | Invitrogen | T20175 | |
| EQUIPMENTS | |||
| Agilent 1100 HPLC system | Agilent | ||
| ZORBAX 300SB-C18 PrepHT column | Agilent | ||
| ICP-–S Optima 3100XL | Perkin-Elmer | ||
| MALDI-TOF mass spectrometer | Bruker | AutoflexTM Speed | |
| Maestro FLEX In Vivo Imaging System | Cambridge Research Instrumentation, Inc. | ||
| Biospec 7T MRI scanner | Bruker | ||
References
- Brown, M. A., Semelka, R. C. MRI Basic Principles and Applications. , 3rd, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, New Jersey. (2003).
- Artemov, D. Molecular magnetic resonance imaging with targeted contrast agents. J. Cell. Biochem. 90, 518-524 (2003).
- Kalber, T. L., Kamaly, N., et al. A low molecular weight folate receptor targeted contrast agent for magnetic resonance tumor imaging. Mol. Imaging Biol. 13, 653-662 (2011).
- Schmieder, A. H., Winter, P. M., et al. Molecular MR imaging of melanoma angiogenesis with alphanubeta3-targeted paramagnetic nanoparticles. Magn. Reson. Med. 53, 621-627 (2005).
- Mulder, W. J., Strijkers, G. J., et al. MR molecular imaging and fluorescence microscopy for identification of activated tumor endothelium using a bimodal lipidic nanoparticle. FASEB J. 19, 2008-2010 (2005).
- Wang, S. J., Brechbiel, M., Wiener, E. C. Characteristics of a new MRI contrast agent prepared from polypropyleneimine dendrimers, generation 2. Invest. Radiol. 38, 662-668 (2003).
- Amirbekian, V., Aguinaldo, J. G., et al. Atherosclerosis and matrix metalloproteinases: experimental molecular MR imaging in vivo. Radiology. 251, 429-438 (2009).
- Overoye-Chan, K., Koerner, S., et al. EP-2104R: a fibrin-specific gadolinium-Based MRI contrast agent for detection of thrombus. J. Am. Chem. Soc. 130, 6025-6039 (2008).
- Pilch, J., Brown, D. M., et al. Peptides selected for binding to clotted plasma accumulate in tumor stroma and wounds. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 2800-2804 (2006).
- Rohrer, M., Bauer, H., Mintorovitch, J., Requardt, M., Weinmann, H. J. Comparison of magnetic properties of MRI contrast media solutions at different magnetic field strengths. Invest. Radiol. 40, 715-724 (2005).
- Wu, X., Burden-Gulley, S. M., et al. Synthesis and evaluation of a peptide targeted small molecular Gd-DOTA monoamide conjugate for MR molecular imaging of prostate cancer. Bioconjugate Chem. 23, 1548-1556 (2012).
- Burden-Gulley, S. M., Gates, T. J., et al. A novel molecular diagnostic of glioblastomas: detection of an extracellular fragment of protein tyrosine phosphatase mu. Neoplasia. 12, 305-316 (2010).
- McBride, J. D., Birgit, H., Leatherbarrow, R. J. Resin-coupled cyclic peptides as proteinase inhibitors. Protein and Peptide. 3 (3), 193-198 (1996).
- Cline, D. J., Thorpe, C., Schneider, J. P. General method for facile intramolecular disulfide formation in synthetic peptides. Anal. Biochem. 335 (1), 168-170 (2004).
