Summary
我々はマウスに圧縮されたホルモンペレットの製造だけでなく、皮下の外科的移植について説明します。この戦略は、ホルモン発癌および良性前立腺増殖の調節を評価するために、無胸腺ヌードマウスの腎被膜下に細胞および組織の異種移植片の増殖と組み合わせることができる。
Abstract
つの一般的な前立腺疾患、前立腺癌（PRCA）および良性前立腺肥大症（BPH）のための新しい治療は、それらのホルモン調節を評価する実験に決定的に依存する。性ステロイドホルモン（特にアンドロゲンおよびエストロゲン）がPRCAおよびBPHに重要である、私たちは、圧縮されたホルモンのペレットを用いた実験でマウスの前立腺の成長と発癌を誘導するそれぞれの役割を探る。ホルモンおよび/または薬物ペレットを容易にペレットプレスで製造され、外科的に雄マウス宿主の皮下組織に移植される。我々はまた、免疫不全マウスの腎臓被膜下前立腺細胞組換え体の異種移植皮下ホルモンペレット移植を組み合わせることにより、ホルモン発癌性の評価のためのプロトコルを記述します。また、皮下ホルモンペレット移植は、BPH組織の腎カプセル異種移植との組み合わせで、より良い良性プロストのホルモン調節を理解することが有用である成長を食べ、性ステロイドホルモン経路を標的新しい治療法をテストする。
Introduction
前立腺癌（PRCA）および良性前立腺肥大症（BPH）は、重大な健康上の負担である。 PRCAは、男性で二番目に普及して固形臓器癌および癌関連死1の主要な原因である。 BPHは、また高齢の男性の間で非常に流行している、そしてそれがBPHの臨床症状は、下部尿路症状（LUTS）、男性の2の50から90パーセントに影響を与えると推定されている。アンドロゲンおよびエストロゲンは、PRCAおよびBPHに重要であることが知られているが、発癌および成長ホルモンの根底にあるメカニズムの理解は不完全なままである3,4。シンプルかつ遺伝的に扱いやすい動物モデルは、前立腺の研究にこれらの優先順位に取り組む研究を支える。このようなPRCAおよびBPH、immunocompに単独で、または腎被膜の異種移植と組み合わせて、皮下、徐放ホルモンペレットの使用、（別のものに1種からの細胞、組織または臓器の譲渡）などのホルモン応答性の疾患におけるromisedマウス宿主、成長と発がんのホルモン調節を研究するための簡単で再現性のある方法を提供する。
皮下ホルモンペレット移植は、発癌や前立腺5良性成長ホルモン調節を研究するための簡単で再現性のある手法である。 25 mgのテストステロン（T）および2.5 mgの17β-エストラジオール（E2）の成人雄マウスの皮下移植は、加齢男性5,6のダイナミックなホルモン環境を再現し、血清中のE 2の増加とTが徐々に低下する。また、このモデルは、BPH-LUTS 5,7の臨床的特徴の多くを再現する。ホルモン投与の代替方法としては、経口/強制経口投与又は腹腔内注射を含む齧歯類に苦痛を引き起こす、時間をかけて同量の薬物を提供する上であまり一貫性があり、より多くの労働集約的な1回限りの外科的移植よりも。 Hのための他の皮下モードormoneおよび/ または薬物送達は、シラスティックカプセル8が含まれています。我々はまた、シラスティックカプセルの使用経験がありますが、圧縮されたペレットを使用し、再現が容易であるため好まれている。また、圧縮されたホルモンペレットの放出速度は、より良好な老化、男性5,7で観察され、動的性ステロイドホルモン比を模倣する。
遺伝的に免疫不全マウスの開発以来、異種移植技術を組み込む多数のin vivoモデル系は、正常および疾患組織の多種多様な研究のために開発されてきた。異種移植のいくつかの基本的なカテゴリがあります。組織異種移植片は正常な構造、悪性腫瘍、良性成長することができ、無傷の組織の小片で構成されています。 Szot ら （2007）は最近、膵島9の腎カプセル異種移植を照らしています。 Aamdal ら （1985）は、筋肉中の27のヒト癌細胞株の異種移植腎カプセルを記載munocompromisedマウスが10を開催しています。移植片はまた、単一の不死化細胞株（癌性または非腫瘍形成性）から構成することができる、または間葉（組換え細胞移植）から単離された細胞と組み合わせて不死化細胞株からなることができる。
私たちは、PRCAとBPHの開発の間質および上皮のそれぞれの役割を調べるために、細胞の組換え体の異種移植を支持する。クーニャら （1980）は、成人のマウス膀胱上皮が雄マウスホストの腎被膜下に胚性生殖洞間充織（UGM）と異種移植さと組み合わせた場合、組織が 前立腺腺房11に似た構造へと発展していることを初めて報告した。ノーマンら （1986）は、組織の組換え体に結合したとき、成体マウスの前立腺管上皮とUGMは、乳管の成長と形態形成12分枝を受けることを示した。ヘイワードら （1988）は、ヒト前立腺上皮胎児mは誘導性に応答することが示された同様の方法で13 esenchyme。前立腺における発癌のホルモンモデルは、UGMで不死化したヒト前立腺上皮細胞株BPH-1を組み合わせることにより、第Wang らによって報告された。14（2001）、我々の研究室15で広く使用されている。良性前立腺上皮がヒト5で高度なPRCAをモデル化し、転移性疾患への変換ので、このモデルでは、PRCAの進行を理解するために適しています。特定の成分が遺伝的に操作することができるので、組換え細胞移植は、間質 - 上皮相互作用を評価するためのアプローチとして特に有用である。
異種移植に適した他のサイトでは、皮内、皮下および同所場所16である。目的の組織および疾患プロセスに応じて、これらは適切な代替アプローチであってもよい。前立腺ホルモン発癌および良性の成長調節の研究のために、我々は腎被膜を選択そのより高いグラフトに異種移植するための部位は、速度、豊富な血液供給、一部位16内に閉じ込められた異種移植片のより多くを注入する能力を取る。また、前立腺の萎縮をもたらし宿主マウスのホルモン操作は、前立腺同所移植16の使用を制限する。
このプロトコルは、圧縮されたホルモン/薬剤ペレット製造、外科的移植、ならびにヒト前立腺細胞および組織移植片の腎カプセル異種移植の技術の概要を説明します。一緒に、これらの技術は、遺伝的に改変されたマウスは、PRCAおよび/または対照株よりBPH開始に対してより感受性であるかどうかを決定するための高感度アッセイを提供する。異種移植は、組織学的悪性度および分子の特徴、ならびに良性および悪性疾患の多種多様な新規治療戦略のためのアッセイを開発するために実験細胞の電位のインビボ評価のための強力な技術である。
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Protocol
1。圧縮されたホルモン/薬剤ペレットの調製
- 白衣、手袋、マスク、保護メガネ、ボンネットを装着したままこの手順では、化学物質安全フード内で行う必要があります。交差汚染を防止するためには、ペレット製造設備が十分に先立って70％エタノールで、ペレットの各タイプの製造後に洗浄されることが重要である。
- 分析スケールを使用して、紙の重さ、ホルモン/薬剤粉末の所望の量を測定する。約5％の追加材料はプレス時の損失を受け入れることをお勧めします。
- いくつかのホルモン/薬は、製造をペレット化する前に混合され、結合剤または充填剤を必要とする。例えば、25mgのペレットをもたらすコレステロール22.5mgのでホルモンを組み合わせ、17β-エストラジオール2.5mgのペレットを製造した。
- 慎重に押して、下のダイセット、所定の場所に転送して、ペレットを圧縮するためにしっかりと下のレバーを押してください。ある一定の表面を維持するために一貫性の圧力を使用して、体積比。
- 次のダイホルダーを逆にして、ペレットを解放し、再びダウンして、レバーを押します。
- 整合性のために、ペレットを検査し、最終質量が所望の範囲内にあるかどうかを決定。許容範囲（例えば、25 mgのペレットの許容範囲は23.8から26.3ミリグラム）で、最終的な質量の±5％の差である。
- ペレットは、手術前に作られ、（条件および貯蔵の長さは、ペレット製造に使用されるホルモンまたは薬物の安定性に依存して）記憶することができる。ホルモンペレットは、ペレット製造の代替として購入することができる。それらは配合され、配合されるので、ペレットを購入する非医薬品グレードの薬物の使用を回避する。
2。携帯組換え異種移植片の作製
- 4週間未満のため、収穫し、培養一次マウスの泌尿生殖器の間葉（UGM）間質細胞の計数のために収集される前に。
- 文化はいつも悩ますの前立腺上皮細胞株を不死化イオンとカウントのために収集します。この例では、懸濁液中の移植25万UGM間質細胞を移植100,000 BPH-1上皮細胞を混合することにより、細胞の組換え移植片を準備します。
- ペレット細胞を一緒に50μlに25μLの容量で移植片の望ましい数、それぞれを行うのに十分な中和タイプ1ラット尾コラーゲンで再懸濁。
- 15分間37℃で、組換えグラフトを設定し、グラフト前に48時間まで37℃で貯蔵のために増殖培地で覆う。
3。組織異種移植片の準備
- 組織の調達や、外科手術中に血液媒介病原体について普遍的予防策を維持する。施設内倫理委員会の承認とインフォームドコンセントの後、外科的切除から新鮮な前立腺組織を得る。 BPH成長の研究のために、組織は、前立腺や簡単な前立腺切除手順の経尿道的切除から収穫することができます。 PRCAまたは良性プロストの一次異種移植食べた組織は、根治的前立腺切除術の標本から得ることができる。
- ストアは氷上で等張緩衝細胞培地または生理食塩水で組織を採取した。組織及び貯蔵条件に応じて、検体の前組織移植片の調製に24時間まで保存することができる。一般的な方法は、1セクションをホルマリンで固定し、定期的に組織学的に処理して、3個に標本を分割するために1ピースが分子解析のために急速凍結し、さらなる組織の異種移植片（大きさ1〜3 mm）の分かれワンピースです。
4。ガラスピペットポリッシュ火の調製
- 起動には約60°の角度でブンゼンバーナーの炎に目の保護、実験室のコートと耐熱手袋、場所ガラスパスツールピペットの先端を身に着けている。
- ホットスポットを避けるために、ピペットに一定の、わずかな動きを保つ。
- 目標は、丸みを帯びた、閉じられた先端がわずかに湾曲した状態で終わり薄く先端と火ポリッシュを描く。 5。楽器の準備と手術室
- すべての楽器をオートクレーブ。手術前に、無菌領域を維持するために注意しながら、すべての機器を点検します。
- 吸収性パッド、解剖スコープ、麻酔ノーズコーン、手術器具や作業領域に向かう加熱ランプ無菌手術領域を設定します。マウス、予熱したビーズ滅菌器の間でツールを殺菌する。
- 組み立て、検査麻酔器、ガススカベンジャーの重量を量る。
- 全てのワックスが均一に溶融するまで、70〜80％の電力で（未溶融および溶融したワックスを結合するために、ワックスパッドを混練し、1分刻みで）最大5分間、マイクロ波、熱ワックスパッドの使用。タッチすることで、パッドが熱すぎると空の齧歯類回復ケージの下の場所ではありませんことを確認してください。
- 外科手術用マスク、ボンネット、手袋、ガウンなどの齧歯類の外科的処置のためのドン·個人用保護具。
- 研究動物に関わるすべての手順は、施設内動物のケアと使用委員会の承認を得て行われるべきである。麻酔の導入に先立ち、健康と幸福を確保するために、マウスを観察します。
- 百分の3から5にイソフルラン麻酔を誘導するためのチャンバー内にマウスを置きます。動物が移動を停止しており、呼吸数が減少した場合、腹臥位でノーズコーンに移し、1〜3％に麻酔を維持。
- 必要であれば、マウスの背中を剃るためにバリカンを使用しています。無胸腺ヌード（nu / nu）マウスを利用する場合、これは必要ありません。
- 麻酔の妥当性を評価するために拡張された後足のウェビングにしっかりと圧力をかける。マウスは圧力に応答した場合、より多くの時間を有効にするには、麻酔のために必要とされる。必要に応じて、適切な麻酔を達成するために、わずかに麻酔の流れを調整します。
- マウスが適切に麻酔をされたときに、続い外科ヨウ素（ベタジン）溶液を用いて手術部位を消毒70％アルコール。
- ドン·滅菌手袋やガウン、手術部位に無菌ドレープを適用します。歯ピンセットで背中の皮膚を持ち上げ、粗ハサミを使用して、2〜3センチ背側正中切開を行います。
- 鈍ハサミやプローブを使用して、（二国間の移植のための切開の両側または一方的な移植のための一方の側に）体壁から根底にある真皮を分離する。
- 横方向の位置にマウスの位置を変更し、筋肉の壁を貫通して腎臓のプロフィールを見ることによって、腎臓の位置を特定する。腹部上の親指と人差し指で穏やかな手動の圧力を適用すると、内部器官を可視化を助けることができる。
- 細かいアイリスはさみを使用しており、主要な血管や脊髄神経を避けるように注意しながら、脊椎に体壁と平行に1cmの切開を行います。そっと最初の切開でそれらを配置した後、ハサミを広く開くことで（腎臓の長軸よりも少し長い）1.5〜2.0センチメートルにこの切開を広げる。
- 人差し指と親指を用いて、腎臓の両側の筋肉壁の外側に穏やかな圧力を適用することによって、腎臓を体外に。タックは、皮膚は、体壁に載るれる、体外腎臓の下方縁。腎臓を体外に出している間に、滅菌生理食塩水を適用することにより、腎被膜の水和を維持する。
- 細かい＃5鉗子を使用すると、静かに腎臓の実質から腎臓被膜を持ち上げ、細いメスで、カプセル内の2 -4 mmの切開を行います。切開部の大きさは、移植片のサイズによって決定されるが、カプセルの完全性を維持するために最小化されるべきである。
- 腎臓の表面に対して接線方向に被膜下に丸められ、閉鎖端で薄く、熱加工描画されているガラスパスツールピペットを操作します。優しく腎実質を損傷しないように細心の注意を使用して、移植片のための小さなカプセルポケットを開きます。
- 腎臓被膜の切り口は、細かい鉗子で持ち上げ、および移植片IであるSは、ファイアーポリッシュガラスピペットを用いて、被膜下のポケットの中に挿入。いくつかの移植片は腎臓被膜下に置き、均一に腎臓面に離間させることができる。
- グラフト化の過程で、カプセルは、脱水となり、場合には、滅菌生理食塩水を適用することによって湿らされるべきである。
- グラフト化が完了したら、静かに体腔内に腎臓を交換する筋肉壁の切開部の側部を持ち上げ。移植片はカプセルの下から滑らないことを確認します。
- 単一の縫合糸（4-0、FS-2ビクリル縫合糸）で筋肉壁を閉じます。外科的処置は、マウスを再配置することによって反対側の腎臓に繰り返すことができる。
- グラフト化が完了すると、マウスは同じ外科手順（プロトコルステップ7を参照）の間に皮下ペレット移植を受けることができる。
- 歯付き鉗子を使用して、皮膚切開の端を揃え、切開を閉じるために、2〜3手術創クリップを適用します。鎮痛を管理する（我々が使用する5月10日mg / kgのcarprof皮下注射を使用したエン）と回復ケージに側臥位にマウスを置きます。ランプや加熱パッドからの熱で体温の維持を確認してください。 15分以内に発生したマウスの完全な回復のために守ってください。
- マウスは出血および/またはその他の合併症、術後の痛みの兆候については、次の24時間、観察されるべきである。定期的に感染の兆候が外科的切開を点検。
- 7〜14日手術後手術創クリップ除去装置と創傷クリップを取り外します。
- 繰り返して外科手術を異種移植腎カプセルから6.1から6.5を繰り返します。
- 皮膚ピンセットで背中の皮膚を持ち上げ、粗ハサミを使用して、1〜2センチ背側正中切開を行います。
- 鈍ハサミやプローブを使用して、頭蓋方向に体壁から基礎となる真皮を分離する。
- 皮膚の鉗子を使用して、優しく皮膚切開の頭蓋側面を持ち上げ、ストレート、鋸歯状の鉗子で軽くホルモンペレットを保持し、ペレットを挿入し、鈍いプローブを用いて作成されたポケットに、首筋にリリースする。
- 繰り返して外科手術を異種移植腎カプセルから6.18から6.20を繰り返します。皮下ペレット注入を行う場合にのみ、外科的切開を閉じるために1手術創クリップを使用しています。
6。外科的手技：腎被膜異種移植
7。外科的手技：皮下ペレット移植
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Representative Results
試験すべき仮説に応じて、組織または細胞の組換え体の腎カプセル異種移植は単独で、または皮下ホルモンペレット移植と組み合わせて行うことができる。皮下ホルモンペレット移植と腎被膜の異種移植実験を組み合わせた仮想的な実験の概略図を図1に示す。粉末及び/又は結晶性物質には、様々なペレットプレスで圧縮されたペレットの製造に使用することができる。 図2は、25ミリグラム、12ミリグラム、および6mgの圧縮されたホルモンのペレットを示す。
図3は、外科手術中に使用される火仕上げガラスピペットの例を示しています。ブンゼンバーナーの炎を介してガラスパスツールピペットの複数のパスは、腎被膜下に移植片のためのポケットを作成し、腎被膜下に移植片を操作するために使用されているファイアーポリッシュ、丸い先端になる。
ntent "> 図4に示すように、男性の人間のホルモン環境をシミュレートするために、外因性のテストステロン（25mgを皮下ペレット）を補足し、BPHの患者からの一次組織の異種移植片は、生き残るためには、組織構造にも含まれて示した。（ 図4A）に保存されている図4は 、腎カプセル移植、ホルモン発癌性を評価するために使用することができる。未処理マウスで増殖させ、良性前立腺上皮（BPH-1）と誘導性尿生殖間葉（UGM）を含有する細胞の組換え体は、良性の増殖（ 図4B）。同じ移植片中で増殖を形成する4ヶ月間25mgのTと2.5ミリグラムのE 2の皮下ホルモンペレットを受信したホストは、腎被膜（ 図4C）5,14 に侵入前立腺癌に発展する。upload/50574/50574fig1.jpg "/>
図1。腎被膜の異種移植とペレット移植手順の概略。腎カプセル異種移植は、背側正中線アプローチを介して行われる。同じ外科処置中、マウスを外科的に頚部首筋領域における徐放性皮下圧縮されたホルモンおよび/または薬物ペレットを移植されている。
図2。この議定書で製造圧縮ホルモンペレットの例。 A. 12 mgのペレット。B. 6 mgのペレット℃で 25 mgのペレット。
図3。ファイアーポリッシュガラスパスツールピペット。完成ピペットはあばたの作成 に適し、滑らかな丸いチップで、湾曲している腎被膜下に移植片のための他。ピペットはまた、腎被膜下に移植片を操作するために使用される。
図4。腎被膜異種移植片の一例。人間BPH組織のA.組織異種移植片（矢頭）がヌード雄のマウスの腎臓被膜下に1ヶ月間栽培されています。マウス宿主はヒトの男性のホルモン環境をシミュレートするために25 mgのテストステロンペレットが補充される腎下で増殖させたヒト前立腺上皮細胞株（BPH-1）と誘導性尿生殖間葉（UGM）を含む。B.細胞組換え異種移植（矢印）また、サブを受けたヌードマウスの腎被膜下で成長させ、BPH-1とUGMを含む4ヶ月。C.細胞組換え異種移植のための皮下ホルモンペレットを移植していなかったヌードマウスのカプセル4ヶ月間25 mgのテストステロンおよび2.5 mgの17β-エストラジオールの皮膚ペレット移植。
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Discussion
この紙と概説したプロトコルは、ここに圧縮され、ホルモンおよび/または薬物のペレットを製造し、マウスの皮下ペレット移植のための外科的処置について説明します。対処すべき研究課題に応じて、この技術は、単独で、又は前立腺広く研究17-19で使用される技術である前立腺細胞組換え移植片または前立腺組織異種移植片の腎カプセル異種移植と組み合わせて行うことができる。まとめると、これらの技術は、ヒトおよびマウスの前立腺に良性の成長ホルモン発癌および制御を研究するための強力なアプローチを提供します。
ペレット製造が容易に再現、実施が簡単であり、かつ限定された装置を必要とする。それは、種々のホルモン及び薬物製剤に適用することができる。これは、化学物質安全フード内でこの手法を実行するために重要であり、適切な保護具を着用してください。前立腺発癌aを評価する実験のためにND我々は25mgのTおよび2.5 mgのE 2 5,7,15を使用してマウス膀胱出口閉塞の誘導。これらは生体応答に希望を生成するので、彼らが関心6の疾患過程で人間の男性のために、生理学的に関連する血清ホルモンレベルを作成するため、これらの用量が選択されている。ペレット型はペレットのいくつかの異なるサイズを製造することができるように、我々は一般的に発癌および良性の成長を評価するための25 mgのペレットを使用しています。ペレットサイズの選択は、対処すべき仮説だけでなく、所望の効果、目的の循環レベルの生産と実験期間の生産に依存している。薬物またはホルモンは（コレステロールなど）、結合剤と組み合わせた場合、我々はホルモンの均質な混合物と結合剤をお勧めします。
研究によっては、皮下ペレット移植は、雄ホスト15の去勢後に行うことができる。我々の経験では、T 25mgの注入は、内因性分泌を阻害すること、視床下部 - 下垂体 - 精巣軸のフィードバック阻害を引き起こす。そこで我々は維持し、内因性のT分泌と、無傷であるが、未処置の雄と人間の男性の男性ホルモンの環境をシミュレートするために、25mgのTで処置したマウスを比較するために選択します。我々は日常的に起因するアンドロゲン除去に前立腺および前立腺異種移植片の萎縮応答に去勢ホストを利用しない。
このプロトコルは、腎カプセル異種移植、ファイアーポリッシュガラスパスツールピペットに特化した機器の一部の作成方法を説明します。これは、容易に製造及び外科的処置に使用する前に滅菌することができるよりも、カスタマイズされた外科用器具で、その結果、ほとんどの研究室で本装置を用いて行うことができる。個人用保護具を身に着けていることは火仕上げガラスピペットを作成するときに、スタッフの安全を確保することが重要である。
embarki前にこのプロトコルに概要の外科的処置のいずれかにNGのすべての技術が見直され、制度的動物管理使用委員会によって承認されなければならない。げっ歯類で行われる外科的手法は、訓練と実践手順の技術的側面の両方で、同様に無菌操作の原則と実践を必要とする。これらの手順で重要な機器や技術の紹介のために我々は、スタッフが最近ら Prichettコーニングによって報告されたビデオの原稿を閲覧をお勧めします。（2011）20。我々はまた、すべてのスタッフが、げっ歯類の外科的処置や無菌操作で実践的な研修を受けるお勧めします。
当研究室では、これらの手順は、一般的に2名のスタッフで行っている。外科助手は、麻酔を管理し、リカバリ中に動物を観察し、処置の非無菌面で外科医を支援し、すべての手順を文書化する。外科医が鎮痛aを管理し、無菌領域を維持NDは、このプロトコルで概説手術手順を実行します。適切な計画と訓練で、皮下ホルモンペレット移植の外科的手順は簡単で、実行するのは簡単です。
セル組換え異種移植のためのいくつかの実験的設計上の考慮事項があります。不死化細胞株を利用し、任意の実験と同様に、汚染が最小化し、検出することが重要である。 BPH-1細胞株を用いた実験のために、我々は、低継代数（25未満）をお勧めします。間質の影響をコントロールするために、我々は1腎臓と反対側の腎臓にBPH-1とUGMを含む移植片のための唯一のBPH-1細胞を含む移植片を利用する。ホルモン発癌に対処するために設計された実験のために、我々は、典型的には、未処理の対照条件（マウスがペレットを移植されていない、またはコレステロールペレットが注入される）を有する。他の条件のTHAを評価する際に陽性対照は（宿主マウスは、T + E 2ペレットを移植されている）も同様に重要であるtがこのモデル系で発癌を促進することができる。対処すべき研究課題に応じて、ペレット移植および/または異種移植片の成長の期間は数週間から4ヶ月の範囲でよく;四ヶ月を超えることが計画された実験のために、我々は、外因性ホルモンのレベルを維持するために追加のペレット移植することをお勧めします。良性前立腺組織異種移植片を含む実験のためには、適切な個人用保護具を着用し、血液媒介病原体のための普遍的予防策を維持することが重要である。新たに採取組織は前に12〜72時間、異種移植に保存することができます。
腎被膜の異種移植のための手術法は、計画、実践、いくつかの手先の器用さを必要とします。外科的処置の持続時間を最小にする、体温と慎重な外科的技術を維持することは、周術期死亡および外科的合併症を軽減することができる。私たちの経験では、周術期死亡の可能性がSUの期間とともに増大rgical手順は、このような理由のために我々は、外科的処置にはもはやよりも20〜25分が制限されます。加熱ランプの使用と手術と回復の間にワックスパッドを温め、体温を維持するための理想的です。ルーチン術後ケアは、この技術の成功の別の重要な局面である。マウスは、痛みや苦痛の徴候のための外科手術後の麻酔の回復、日中に観察されるべきである。術後の痛みや苦痛を最小化するよう適切な鎮痛を管理する。
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Disclosures
著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。
Acknowledgments
著者らは、過去と現在Rickeラボのすべてのメンバーに感謝したいと思います。私たちは、プロトコルに関する有益なコメントを、カルバン·パッテン、ジュニア、DVMとブリジット·ラーベ、DVMに感謝します。 R01DK093690、R01CA123199、RC2ESO18764：我々は、これらの研究のための彼らの財政支援のためのNIDDK、NCIとNIEHSを承認したいと思います。 TMNは、NIH T32 GM07356によって資金を供給ロチェスター大学の医学者養成プログラムでの受講者で、ルースL.キルシュシュタイン国立研究サービス賞F30DK093173下NIHはまた、このプロジェクトをサポートしています。 CDVは、ウィスコンシン大学マディソン校でT32ES007015でサポートされていT32CA157322とABTでサポートされています。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも一般的な医学やNIHの国立研究所の公式見解を示すものではありません。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pellet press | PARR Industries | 2815 | 3mm Punch & Die set |
| Analytical Balance | Ohaus | 1918302 | Voyager or other |
| Bunsen burner | Fisher Scientific | 03-962Q | |
| Dissecting microscope | Leica | L2 | |
| Deltaphase Pad Kit (reheatable wax) | Braintree Scientific | 39DP | Alternative to an electric heating pad |
| Hot Bead sterilizer | F.S.T. | 18000-45 | |
| Isoflurane Vaporizer | Supera Anesthesia Innov | VAP3000 | |
| Induction Chamber | Supera Anesthesia Innov | RES644 | |
| F/AIR Canister | Supera Anesthesia Innov | 80120 | |
| 4 port Manifold | Supera Anesthesia Innov | RES536 | |
| Rebreathing Circuits | Supera Anesthesia Innov | CIR529 | |
| Inlet/Outlet Fittings | Supera Anesthesia Innov | VAP203/4 | |
| Pressure Reg/Gauge | Supera Anesthesia Innov | OXY508 | |
| Oxygen Flowmeter | Supera Anesthesia Innov | OXY660 | |
| 21mm Clear Tubing | Supera Anesthesia Innov | 301-150 | |
| Small Mice Nose Cone | Supera Anesthesia Innov | ACC526 | |
| Sterile surgical gown | Midwest Vet Supply | 350.79866.2 | |
| Surgical mask | Midwest Vet Supply | 350.50111.2 | 2-ply w/ earloops |
| Sterile gauze | Midwest Vet Supply | 001.14100.2 | 2 x 2 inches |
| Sterile Gloves | Kimberly Clark | 55092 | |
| Bouffant | Midwest Vet Supply | 001.27100.2 | |
| Cotton Tip Applicator | Midwest Vet Supply | 001.06220.2 | |
| Surgical Scrub Wash | Midwest Vet Supply | 733.80010.3 | |
| Sterile Fields (Fenestrated) | General Econopak, Inc | 88VCSTF | |
| REAGENTS | |||
| Cholesterol | Sigma-Aldrich | C-3292 | |
| Testosterone Proprionate | Sigma-Aldrich | T-1875 | |
| 17β-estradiol | Sigma-Aldrich | E-2758 | |
| Isoflurane | Midwest Vet Supply | 193.33161.3 | |
| Carprofen | Midwest Vet Supply | 193.70200.3 | Injectable (Rimadyl) |
| Betadine | Webster Veterinary | 07-836-3379 | |
| Sterile saline | Midwest Vet Supply | 193.74504.3 | NaCl 0.9%, Injectable |
| SURGICAL INSTRUMENTS | |||
| Straight Sharp/Blunt Scissors | Fine Scientific Tools (F.S.T.) | 14054-13 | |
| Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved) | F.S.T. | 11055-10 | |
| Fine Iris scissors | F.S.T. | 14090-09 | |
| Graefe Scalpel | F.S.T. | 10071-12 | |
| Dumont #5 forceps | F.S.T. | 11251-20 | |
| Glass Pasteur pipets | Fisher Scientific | S67050 | 5" length |
| Graefe forceps (Serrated, Curved) | F.S.T. | 11052-10 | |
| Graefe forceps (Serrated, Straight) | F.S.T. | 11050-10 | |
| Vicryl Suture | Midwest Vet Supply | 295-92100.2 | 4-0, FS-2, Absorbable |
| Needle Holder w/ scissor action | F.S.T. | 12002012 | |
| Wound Clips | Braintree Scientific | ACS CS | May use 7mm or 9mm clips |
| Reflex Wound Clipper | F.S.T. | 12031-09 | Correspond w/ wound clip size |
| Would Clip Remover | F.S.T. | 12033-00 | Universal |
| Sterilization Container | F.S.T. | 20810-01 | Any autoclavable container will do |
| Syringe w/ needle | BD | 148292C | 1cc, 25Gx1 |
| Ear Tag Applicator | National Band Tag Co. | 1005s1 | Alternative to ear notching |
| Small Animal Ear Tags | National Band Tag Co. | 1005-1 | |
References
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