Summary
Olfactory ensheathing celler (OECS) är neurallistceller som tillåter tillväxt av de primära olfactory neurons. Denna särskilda egenskap kan användas för celltransplantation. Vi presenterar här en modell av cellulär transplantation baserad på användningen av OECS i en laryngeal nerve injury model.
Abstract
Olfactory ensheathing celler (OECS) är neurallistceller som tillåter tillväxt och återväxt av de primära olfactory neurons. I själva verket är det primära luktsystemet kännetecknas av sin förmåga att ge upphov till nya nervceller även hos vuxna djur. Denna speciella förmåga beror delvis på närvaron av OECS som skapar ett gynnsamt mikromiljö för neurogenes. Denna egenskap hos OECS har använts för cellulär transplantation såsom vid ryggmärgsskada modeller. Även det perifera nervsystemet har en större förmåga att regenerera efter nervskada än det centrala nervsystemet, kompletta sektioner inducerar feldirigering under axonal återväxt särskilt efter ansiktsbehandling av larynx nerv transection. Specifikt fullt sektionering av den återkommande larynx nerv (RLN) framkallar avvikande axonal återväxt vilket resulterar i synkinesis av stämbanden. I den här specifika modellen visade vi att OECS transplantation ökar effektivt axonal återväxt.
ve_content "> OECS utgöres av flera subpopulationer som är närvarande i både det olfaktoriska slemhinnan (OM-OECS) och de olfactory glödlampor (OB-OECS). Vi presenterar här en modell av cellulär transplantation baserad på användningen av dessa olika subpopulationer av OECS i en RLN skademodell. Med hjälp av detta paradigm har primära kulturer av OB-OECS och OM-OECS transplanterade i Matrigel efter avsnitt och anastomos av RLN. Två månader efter operationen, vi utvärderade transplanterade djur genom kompletterande analyser baserade på videolaryngoscopy, elektromyografi (EMG) och histologiska studier. Först videolaryngoscopy tillät oss att utvärdera laryngeal funktioner, särskilt muskel cocontractions fenomen. Sedan EMG analyser visat rikedom och synkronisering av muskelaktiviteter. Slutligen histologiska studier baserade på toluidinblå färgning tillät kvantifiering av antalet och profilen av myeliniserade fibrer.Alla tillsammans, beskriver vi här hur man isolera, kultur, idntify och transplantation OECS från OM och OB efter RLN avsnittet-anastomos och hur man ska värdera och analysera effektiviteten i de transplanterade cellerna på axonal återväxt och laryngeal funktioner.
Introduction
Det primära luktsystemet består av två separata delar, luktslemhinna (OM) i perifera nervsystemet och luktbulben (OB) i det centrala nervsystemet. Det primära luktsystemet kännetecknas av förmågan hos de primära lukt nervceller (PON) för att själv förnya hela livet i däggdjursarter. Denna förmåga är möjligt på grund av närvaron av neurala stamceller i OM. PON tillväxt och återväxt från OM till OB underlättas av specialiserade gliaceller kallas lukt ensheathing celler (OECS). OECS är neurallistceller som skapar ett gynnsamt mikromiljö för neurogenes av PON från OM till OB 1. Därigenom kan OECS finns i OM och i OB utgör olika subpopulationer av celler 2,3. De olika egenskaperna för OECS har bly forskare för att använda dem för celltransplantationer i flera nervsystemet lesion paradigm 4. Faktum OECS producerar tillväxtfaktorer, minska gliaceller skrämma, promote axonal återväxt, och kan fritt blandas med astrocyter 5,6. Men de allra flesta av dessa studier bygger på ryggmärgsskada (SCI), några av dem har använt OECS efter perifer nervskada (PNI) 7,8.
Även det perifera nervsystemet har en stor förmåga att regenerera efter nervskada, kompletta sektioner framkallar avvikande axonal återväxt. Ja, efter kompletta transections i ansiktet eller de återkommande larynx nerver (RLN) misrouted axoner orsakar muskel cocontractions kallas synkinesis. Därför är det av största vikt att föreslå en modell för PNI att inte bara kvantifiera axonal återväxt utan också för att utvärdera effektiviteten av muskelsammandragningar. I litteraturen den vanligaste modellen som beskrivs bygger på ansiktsnerven lesion 9,10. I denna modell är funktionella bedömningar baserade på återvinning av morrhår rörelser 10. Det är emellertid komplicerat att demonstrera effektiviteten i movements och att diskriminera de muskulära cocontractions fenomen. Vi föreslår här en modell som bygger på en RLN lesion. Denna modell gör det möjligt att utvärdera inte bara axonal återväxt och rörelser stämbanden utan även effektiviteten och funktionaliteten av dessa rörelser efter cellulära transplantationer 11,12. Protokollet ger en steg för steg för att kultur och transplantation OECS från OM och OB i en RLN sektion / anastomos modell och att utvärdera djur efter operationen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Primära kulturer av luktslemhinnan och lukt glödlampor
- Före dissektion
- Lägg ett medium, för 50 ml, genom tillsats av 44 ml av kalciumfritt Dulbeccos modifierade Eagles / Hams F12-medium (DMEM/F12) supplementerat med 5 ml fetalt bovint serum (FBS) och 1 ml av penicillin / streptomycin.
- Coat 75 cm 2 kolvar med poly-L-lysin (50 | ag / ml, 1,5 | ig / cm 2), en timme vid rumstemperatur.
- Skölj kolvar med PBS 1x.
- Förvara belagda kolvar i kylen i upp till 1 vecka.
- Dissection
- Varje metod för dödshjälp måste godkännas i förväg av institutionens djurvård och användning kommitté och utföras av kvalificerad personal.
- Välj inavlade råttor såsom Fischer-råttor.
- Efter råttan har bekräftats ha inträtt djup anestesi med natriumpentobarbital eller andra injicerbara former av anestesi, såsom ketamin / xylazin, decapitate honom och rEFlytta huden.
- Öppna skalle från den främre till den bakre delen.
- Ta OB noga med att undvika hjärnhinnorna.
- I samma råtta, öppnar näshålan sagittaly.
- Ta OM noga med att undvika andnings slemhinnan. Observera att OM epitel kan lätt identifieras genom sin gulaktig färg.
- Ytterligare detaljerade protokoll om dissektion av OM kan hitta i ett tidigare J. Vis. Exp . publikation 13.
- Kultur
- Placera OB i Hanks buffrade saltlösning (HBSS) innehållande 0,1% trypsin under 45 min vid 37 ° C.
- Placera OMs i HBSS innehållande 0,05% kollagenas A under 45 min vid 37 ° C.
- Stoppa enzymatisk digerering genom att tillsätta 2 ml varmt medium.
- Tvätta cellerna med medium och centrifugera dem vid 300 xg under 3 min.
- Finfördela prover av 2ml medium med användning av en P1000 pipett tills en homogen cellsuspension erhålles.
- Plate cellerna i de förbelagda kolvar (5-10 x 10 6 celler / kolv) med 25 ml varmt medium.
- Inkubera och odla cellerna vid 37 ° C med 5% CO2.
- Ändra hälften av mediet var 2 dagar.
- Efter 6-8 dagar in vitro, kontrollera andelen p75 positiva celler på små cellprover, antas vara OECS hos gnagare, med flödescytometri eller immuncytokemi. För dessa analyser, kan andra markörer studeras såsom GFAP och S100β.
- Flödescytometrianalys
- Samla cellerna som beskrivs i "cell transplantation" (avsnitt 2.2 nedan).
- Inkubera dem med p75 primär antikropp (1:100) under 15 min vid 4 ° C.
- Tvätta cellerna med 2 ml PBS-EDTA och centrifugera dem vid 300 xg under 3 min.
- Inkubera cellerna med PE-konjugerad anti-mus sekundär antikropp under 15min vid 4 ° C i mörker (1:200).
- Tvätta cellerna med 2 ml PBS-EDTA och centrifugera dem vid 300 xg under 3 min.
- Resuspendera cellerna i 500 | il PBS-EDTA.
- Analysera 10-30 x 10 3 celler med flödes cytometer.
- Immunocytokemi analys
- Plate cellerna i 6-brunnar förbelagda under 48 timmar enligt beskrivningen i "kultur" (avsnitt 1.1.2 nedan).
- Tvätta cellerna med PBS.
- Fixera cellerna med PFA 4% under 15 min vid RT.
- Tvätta cellerna med PBS.
- Inkubera cellerna med PBS / Triton X100 (0,1%) under 15 min vid rumstemperatur.
- Tvätta cellerna med PBS.
- Inkubera cellerna med primära antikroppar (1:200): p75, S100β och GFAP över natten vid 4 ° C.
- Tvätta cellerna med PBS.
- Inkubera cellerna med de sekundära antikroppar (1:500) under en timme vid rumstemperatur i mörker.
- Tvätta cellerna med PBS.
- Inkubera cellerna med Hoechst 10 min vid RT i mörker.
- Tvätta cellerna med PBS.
- Analysera cellerna med användning av ett fluorescerande mikroskop.
- GFP märkning celler
- Fem dagar före transplantation, infektera OB och OM kulturer över natten med lentivirusvektor hyser förstärkt GFP (infektions: 20).
- Före transplantation kontroll på små prover hastigheten av GFP-positiva celler genom flödescytometri såsom beskrivits tidigare i "kultur" (avsnitt 1.1).
2. Kirurgi och Transplantation
- Repetitions nerv anastomos
- Alla försök med djur måste godkännas i förväg av institutionens djurvård och användning kommitté och utföras av kvalificerad personal.
- Före operation autoklav alla instrument och bibehålla sterilitet hela kirurgiska ingrepp.
- Bedöva råtta genom intraperitoneal injektion av ketamin-hydroklorid (12,5 mg / kg) och klorpromazin-hydroklorid (0,625 mg / kg). Bedöma lämplighet anestesi med tå nypa före operation.
- Placera råttan på rygg trycksår.
- Utför en 2 cm vertikal medel livmoderhalscancer kutan snitt med en skalpell.
- Utför ett vertikalt snitt av de infrahyoid musklerna efter den mediala vita linjen.
- Exponera struphuvudet genom användning autostatic sårhake mellan infrahyoid muskler.
- Exponera RLN.
- Under mikroskopisk kontroll, skär nerven fullständigt med microscissors vid nivån för den sjunde trakeala ringen.
- Utför anastomos med hjälp av en punkt på 11,0 sutur under mikroskopisk kontroll. Denna operation leder till en specifik motor denervation av struphuvudet.
- Celltransplantation
- Precis innan transplantation, avlägsna cellerna från skålarna med användning av 0,05% trypsin EDTA under 5 minuter vid 37 ° C.
- Stoppa enzymatisk digerering genom att tillsätta 2 ml varmt medium.
- Centrifugera vid 300 x g under 3 min.
- Gör cellulär förberedelser med 01:02 blandning (30 och 60 pl i detta experiment) av DMEM/F12-Matrige li 1,5 ml tub innan ympning och placera den på is. För att undvika ospecifika effekter, använda tillväxtfaktor minskad Matrigel.
- Strax före transplantation hålla röret i handen under några sekunder för att värma upp Matrigel-medel mix.
- Avsätta mixen på anastomos platsen med hjälp av en pipett och vänta tills blandningen själv monterar på den skadade nerven.
- Stäng muskler och hud med en 4,0 sutur.
- Hus råttorna individuellt och hålla under en värmelampa i 24 timmar.
3. Utvärdering
- Laryngoscopy
- Bedöva råttor genom intraperitoneal injektion av ketamin-hydroklorid (12,5 mg / kg) och klorpromazin-hydroklorid (0,625 mg / kg). Bekräfta råttorna bedövas med en tå nypa innan du fortsätter med protokollet.
- Placera råttan på rygg trycksår.
- Sätt i en 30 ° videolaryngoscope justeras för att ge den bästa utsikten över struphuvudet. Bestäm anatomiska landmärken för att reproducera samma vy för varje inspelning.
- Spela stämbandsrörelser med hjälp av videolaryngoscope (5-10 sekvenser / djur). För varje djur väljer tre sekvenser av successiva maximal adduktion och maximal abduktion.
- Analysera laryngeal funktion med hjälp av bildanalys programvara. Bestäm absoluta vinkelrörelse genom att mäta skillnaden mellan rörelse maximal abduktion och maximal adduktion av stämbanden. Bestäm dynamisk poäng genom att mäta rörelsen amplitud. Bestäm funktionell poäng genom att mäta synkinesis och paradoxal rörelser.
- Elektromyografi (EMG)
- Exponera struphuvud och luftstrupe genom att öppna huden och musklerna som beskrivits tidigare i "återkommande nerv anastomos" (avsnitt 2.1).
- Exponera cricothyroid brosk.
- Öppna cricothyroid brosket att exponera den bakre cricoarytenoid (PCA) muskler med hjälp microscissors.
- Införa en monopolär nålelektrod (38 x 0,45 mm) i PCA muskeln.
- Spela in den elektriska muskelaktivitet i PCA muskeln genom en förvärvs systemet under spontanandning.
- Analysera muskelaktivitet i form av rikedom och synkronisering med andningen. För att analysera EMGs, tilldela en kvalitativ värdering 0-3 med hjälp av följande skala: 0: unrhymed spårning, utan ökning under inspiration, 1: rimmade spårning med inandnings ökar, men dålig spårning (Neurogen), 2: rimmade spårning med rikare aktivitet, 3: rimmade spåra, mycket rik, som utgör en interferens mönster, som liknar en maximal avsiktlig aktivitet.
- Exponera vagusnerven att mäta latens och duration. Vagusnerven väljs som platsen för stimulering eftersom RLN kan skadas under stimulering på grund av sin ringa storlek.
- Att stimulera vagusnerven med en elektrod.
- Spela elektriska signaler i PCA muskeln. Mät latens och duration. Om möjligt använda en förvärvsmodul för att spela in muskelaktivitet, latens och duration såsom Powerlab systemet.
- Histologi
- Euthanize djuret med användning av pentobarbital överdos.
- Ta bort den distala stumpen av RLN under mikroskopisk kontroll. Den distala delen av RLN definieras som delen mellan anastomos och struphuvudet. Observera att det är möjligt att hitta den anastomos platsen flera veckor efter operation på grund av att 11,0 suturen är en icke-absorberbar sutur.
- Placera den distala delen av RLN i 2% glutaraldehyd med 0,1 M fosfat(PH = 7,3) under 2 h vid 4 ° C.
- Försiktigt orientera proven att förverkliga koronalt sektioner.
- Tvätta prover i fosfatbuffert.
- Skär i mindre segment (3-4 mm längd) och postfix i 60 minuter vid rumstemperatur i 1% kakodylat buffrad OSO4 och uttorkad med etanol.
- Orient prover i silikonformar och inbäddade i harts bestående i POLYBED 812, DDSA och MNA, till vilken sattes 2% av gaspedalen BDMA.
- Gör halv tunna tvärsektioner (1 ^ m tjock) med hjälp av en Pyramitome Ultramicrotomy System.
- Fläcken med 0,1% toluidinblått i 1% natriumtetraborat under 75 sek vid 70 ° C.
- Analysera RLN prover med ett räkningsanalyssystem. Räkna antalet fibrer och mäta myeliniserade nervfiberprofiler genom att bestämma den yttre och den inre gränsen av myelinskidan.
- Transplantation
- Förbered celler för transplantation och transplantera celler som tidigare beskrivitsi "cell transplantation" (avsnitt 2.2).
- Analys
- Euthanize djuret med användning av pentobarbital överdos. Observera att fixering av djur kan utföras med användning intrakardiell injektion av PFA 4%.
- Avlägsna omkring 2 cm av RLN. Använd proximala och distala delarna av RLN.
- Fix RLN provet i flytande kväve.
- Förvara proverna vid -80 ° C.
- Cut prov i längsled med hjälp av kryostat (10-20 um tjock).
- Analysera prover i lysrörs mikroskop för att upptäcka GFP positiva celler. Observera att anti-GFP-antikropp kan användas för att öka fluorescensemission och för att utföra costainings.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Illustrationer med kontroll och reinnervated (avsnitt / anastomoseras) djur har valts som resultat kan variera beroende på de cellulära transplantationer utförda (OM, OB eller OM + OB).
Cellodling
Cellerna fäster snabbt på plastytan och blev uppdelade i parallella stråk av celler som är långsträckt eller avsmalnande, trekantiga, multipolär eller spolformad (fig. 1A och 1B). Efter 8 dagar in vitro flödescytometri analys visar graden av p75-positiva celler, 71% i primär OB, och 13% i primära OM kulturer (figur 1C och 1D).
Celltransplantation och kirurgi
Cellerna transplanteras i en Matrigel-medel mix på anastomoseras RLN. Anastomos av RLN görs med en poäng på 11,0 sutur (Figur 2).
Utvärderingar
Videolaryngoscopiera Två månader efter transplantation var laryngeal funktioner analyseras av videolaryngoscopy och elektromyografi. Inse videolaryngoscopy anatomiska landmärken valdes för att mäta skillnaden mellan abduktion och adduktion (Figur 3).
Electromyography
För att komplettera dessa analyser EMG undersökningar med användning av monopolär nålelektrod implanteras i PCA musklerna. Typiska spår för normala och reinnervated (avsnitt / anastomoseras) djur presenteras i Figur 4.
Histologiska analyser
För dessa djur, har histologiska analyser av RLN utförs av toluidinblått färgning. Typiska fiberprofiler för normala och reinnervated (avsnitt / anastomoseras) djur presenteras i fig 5A och 5B. För att komplettera dessa histologiska analyser, har spårning av GFP positiva celler utförs. Figur 5C illustrerar t han närvaron av GFP-positiva celler i ischiasnerven efter intra-nervtransplantation. Ischiasnerven har använts som kontroll som RLN storlek inte tillåter inom nervös transplantation.
Figur 1. Morfologiska egenskaper och P75-uttryck i primära kulturer av OB (A och C) och OM (B och D) in vitro. (A och B) OECS i OB och OM primära kulturer uttryckte långsträckta, triangulära eller spolformad morfologier . (C och D) Cellyteexpression av p75 i OB och OMs primära kulturer bestämdes genom flödescytometri. Siffror visar den totala befolkningen och andelen celler som finns i de angivna gated regionerna. Vänligen / 50590fig1highres.jpg "> klicka här för att se en större version av denna siffra. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Bild av en anastomos av RLN utföras med 11,0 sutur. (A) sektion RLN före operationen. (B) Anastomos mellan den proximala och den distala stumpen av RLN. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
"Src =" / files/ftp_upload/50590/50590fig3.jpg "/>
Figur 3. Typiska endoskopiska utsikt över rått glottis planen. Under utvärderingar, är landmärken fastställs för att få samma synfält för varje inspelning. Från den presenterade utsikt både maximal bortförande (A) och den maximala adduktion (B) mäts. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Exempel på EMG spår som erhållits under andning i PCA muskeln. (A) djur i kontrollgruppen presenterade en rik elektrisk muskelaktivitet, med en ökning under inspiration. (
Figur 5. Histologiska nervösa studier. (A och B) Exempel på koronala sektioner av RLN från kontrollgruppen. Denna analys visade att kontrollgruppen presenterade ett högre antal myeliniserade fibrer. (A) Förstoring 3960 X och (B) förstoring 11900 X. (C) GFP-märkt OB-OECS kvar på skadestället i krossad råttans ischiasnerven. Förstoring 100X.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De tekniker som presenteras här gör OECS en användbar modell för att studera cellulära transplantationer i perifera nervskador modeller. Cellodlings protokoll är relativt enkelt och lätt kan genomföras. Å andra sidan, kirurgiska ingrepp, särskilt avsnitt / anastomos av RLN, kräver erfarenhet och måste utföras av behörig personal.
De procedurer som beskrivs i detta protokoll belysa viktiga faktorer att fokusera på för att uppnå bästa möjliga resultat. Först under dissociation av OM, rekommenderar vi noggrann dissekering för att få bara lukt och inte respiratoriskt epitel. För det andra, för anastomos av RLN, rekommenderar vi att du utför bara en poäng med en 11,0 sutur. För det tredje, det är under utvärdering mycket viktigt att ha samma djup anestesi mellan alla djur. I synnerhet minskar djup anestesi amplituden för rörelsen av stämbanden under videolaryngoscopy. Vi rekommenderar removing laryngoskopet så snart som möjligt för att undvika kvävning av djuren. Under EMG inspelning, beroende på storleken på PCA muskler rekommenderar vi att noggrant placera monopolär nålelektroden. Slutligen, det är för histologiska studier viktigt att noggrant orientera RLN prover för att få koronalt sektioner. Det är också mycket viktigt att ta bort och analysera den distala delen av RLN där Wallerian degeneration inträffar.
De protokoll som beskrivs här kan lätt modifieras för att generera renkulturer av OECS från OB och OM. För rening av OECS från OB rekommenderar vi den teknik som beskrivs av Nash 14 och för rening av OECS från OM rekommenderar vi metoden beskriven av Bianco 15. Dessa två särskilda reningsmetoder gör det möjligt att ha högt renade kulturer av OECS (90%) och har tidigare beskrivits väl av deras författare 14,15. En annan möjlig modifiering är transplantationsförfarandet where cellerna kan injiceras direkt in i en perifer nerv som beskrivits tidigare för ischiasnerven 7. I detta fall kan cellerna injiceras utan Matrigel. Det är viktigt att notera att på grund av storleken på RLN det inte är möjligt att injicera celler direkt in i denna nerv. Slutligen en annan möjlig modifiering är optimering av EMG-protokollet. I själva verket kan utföras muskelaktivitet inspelningar av PCA-och membran muskler tillsammans, vilket eliminerar behovet av synkronisering mellan struphuvudet och andningsmuskulaturen.
De nuvarande protokoll kan tillämpas i andra nervösa lesion paradigm. Vi har redan transplanterade OECS i flera modeller av PNI exempelvis ischias och vagus nerver, kan dessa behandlingar enkelt användas i andra PNI Paradigmer 8,11,12,16. Mer intressant cellulär transplantation av OECS kan utvidgas till centrala nervsystemet i synnerhet SCI. Den metod som beskrivs här för mätning av larynxfunktion efter RLN avsnitt / anastomos kan även användas för andra cellulära transplantations protokoll. I själva verket kan laryngeal modeller vara mycket kraftfullt att utvärdera axonal återväxt och synkinesis fenomen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Författarna vill tacka för ADIR (Aide à Säte aux Insuffisants Respiratoires) och Fondation de l'Avenir för deras ekonomiska stöd och Dr Fanie Barnabé-Heider för redigering av manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM/F12 | Invitrogen | E3521T | |
| FBS | Invitrogen | E3387M | |
| Penicilin/streptomycin | Invitrogen | 1152-8876 | |
| HBSS | Invitrogen | M3467Y | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | M3513P | |
| Cacodylate | Merck | 1.03256.0100 | |
| DDSA | Biovalley | 00563-450 | |
| MNA | Biovalley | 00886-450 | |
| BDMA | Biovalley | 00141-100 | |
| Polybed 812 | Biovalley | 08791-500 | |
| PE anti-mouse | BD Bioscience | 550589 | |
| Matrigel GFR | BD Bioscience | 356231 | |
| Collagenase A | Roche | 10103586001 | |
| Mouse anti P75 | Chemicon | MAB 365 | |
| 11.0 Wire | Ethicon | FG 2881 | |
| Toluidine Blue | Ral Diagnostics | 361590-0025 | |
| Centrifuge | Sigma | Sigma 2-16PK | |
| Incubator | Thermo Scientific | ||
| Laminar flow hood | Faster | BH-EN 2003 S | |
| Flow cytometer | BD Bioscience | FACSCalibur | |
| Microscope | Zeiss | ||
| Videolaryngoscope | Karl Storz Endoskope | Telecam SL NLSC 20212120 | |
| Acquisition system | AD Instruments | Powerlab system | |
| Pyramitome Ultramicrotomy System | Leica | Ultracut S | |
| Image analysis system | Explora Nova | Mercator |
References
- Barraud, P., et al. Neural crest origin of olfactory ensheathing glia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).
- Guerout, N., et al. Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa. Glia. 58, 1570-1580 (1002).
- Honore, A., et al. Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb. Glia. 60, 404-413 (2012).
- Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord. Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).
- Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes. Glia. 32, 214-225 (2000).
- Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors. Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).
- Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells. Brain Res. 1125, 1-8 (2006).
- Guerout, N., et al. Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats. Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).
- Guntinas-Lichius, O., et al. Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons. Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).
- Makoukji, J., et al. Lithium enhances remyelination of peripheral nerves. Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).
- Guerout, N., et al. Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion. PloS one. 6, 22816 (2011).
- Paviot, A., et al. Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells. Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).
- Girard, S. D., et al. Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans. J. Vis. Exp. , (2011).
- Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb. Glia. 34, 81-87 (2001).
- Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose. Glia. 45, 111-123 (2004).
- Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model. Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).
