Summary
미세 유체 산소 제어 생물학적 실험 저산소 챔버를 통해 단지 편리함과 속도보다 더 부여. 막을 통해 확산을 통해 구현 특히, 미세 유체 산소 마이크로 수준에서 동시 액체 및 기체 상 변조를 제공 할 수있다. 이 기술은 섬의 병태 생리를 연구하는 동적 멀티 파라미터 실험은 중요 할 수 있습니다.
Abstract
하나의 기술에서 포도당 자극 분비 커플 링 요소를 동시에 산소 및 모니터링은 특히 이식 환경에서, 섬 저산소증의 병리 생리 학적 상태를 모델링하는 것이 중요합니다. 기본 저산소 챔버 기술은 동시에 자극을 변조 또는 이용 글루코스 자극 - 분비 커플 링 요소의 실시간 모니터링을 제공 할 수 없다. 이러한 어려움을 해결하기 위해, 우리는 확산 막을 통해 수성 및 가스 위상 변조 모두를 통합하는 다층 마이크로 유체 기술을 적용 하였다. 이 형광 현미경을 통해 상기 커플 링 요소의 모니터링을 가능하게 투명 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 장치 내의 microscaled 섬 주위에 자극 샌드위치를 만듭니다. 또한, 가스 입력은 0-21% 간의 산소의 정량적, 정 분 변조를 제공 microdispensers의 쌍에 의해 제어된다. 이 간헐적 저산소증이 섬의 새로운 현상을 조사하기 위해 적용T 전처리. 또한, 복합 현미경으로 무장 한, 우리는 이러한 저산소 발생시 상세한 칼슘과 K ATP 채널 역학 볼 수 있었다. 우리는 독도를 공부뿐만 아니라 많은 생체 조직에 가치있는 도구로, 미세 유체 저산소증, 특히이 동시 듀얼 위상 방법을 구상.
Introduction
동적 저산소증은 특히 섬 이식, 생물학에서 중요하다
동적 저산소증은 많은 생물 조직에서 중요한 생리뿐만 아니라 병리 생리 학적 매개 변수입니다. 산소의 변화는, 예를 들어, 혈관 신생의 잠재적 발달 신호이다. 또한, 저산소증에 공간과 시간적 패턴 HIF1 - 알파를 조절하고 췌장 암과 같은 질병에 역할을한다. 저산소증은 섬 이식 결과에 영향을 미치는 교란 요인이다. 최근, 저산소증, 또는 간헐적 인 저산소증 (IH)의 시간적 진동은 "사전 조정"독도 1에 혜택을 증명하고있다. 그러나, 섬의 생리에 대한 정적 및 과도 모두 저산소증 효과는 잘 주로 섬의 미세 환경을 제어하는 적절한 도구의 부족으로 이해하고, 공부 못하고있다.
독도 아니라 생체 내에서 혈관이 있습니다
췌장은 50-400입니다 56, 베타 세포와 포도당 항상성에 대한 책임은 알파 세포를 포함한 내분비 세포의 M의 구상 집계. 독도 ATP에 민감한 칼륨 (K ATP) 채널과 인슐린 과립의 세포 외 유출을 유발 칼슘 유입의 결과를 열어 ATP 생산에 혈액, 흡수와 작용 리드 자극 포도당에 노출 된 경우. 산소이 심하게 대사 프로세스를 구동 및 인슐린 분비가 현저 글루코스 구배 이외에 혈류와 산소 공급의 역학에 의해 영향 중요하다. 그들은 높은 각, 췌장 관류대로 독도는 쉽게 모세 혈관에서 하나의 셀 길이 내에서 생체 내에서이 포도당 - 인슐린 반응을 수행 할 수 있습니다. 그러나 intraislet 모세관의 고밀도 네트워크는 아일렛 분리 2,3 동안 콜라게나 제에 의해 제거된다. 따라서, 산소와 영양소를 모두 공급으로 인해 확산 제한으로 100 μm의 경계에 제한됩니다.
섬의 미세 환경을 다시 단계 "> 현재 기술은 제한된 성공다시 섬의 원시 산소와 포도당 역학, 생리 및 병리 생리 학적 조건을 모델링의 핵심은 정교한 흐름을 필요로하고 섬 기능의 지속적인 모니터링이 부족 표준 저산소 챔버로 달성하기가 어렵습니다. 또한, 유형 이식 치료는 I 당뇨병은 췌장 생리 (5.6 %, 40 mmHg로)에 비해 훨씬 낮은 PO 2 (<2 %, 5 ~ 15 mmHg로) 가지고 간 포털 시스템 4 저산소증에 고립 된 섬을 노출합니다. 이식 후, 섬 이식은 revascularized 될 2 주 이상 걸릴. 이는 저산소 노출 아일릿의 포도당 - 인슐린 결합 메커니즘을 손상하는 것이 증명되었다. 자극 - 분비 커플 링 인자, 칼슘 신호, 미토콘드리아의 잠재력, 인슐린 반응 속도 사이에서 쉽게 미세 유체를 사용하여 모니터링 할 수 있습니다. 우리의 이전의 마이크로 유체 기술이 재 입증알 - 시간이 하나의 섬 5,6 주위의 수성 미세 환경의 정확한 조절과 모니터링. 그러나, 섬의 저산소 성 손상의 정량화 동시 자극 및 모니터링 기술의 부족에 의해 좌절된다. 따라서, 산소 및 아일릿 모니터링 미세 유체 제어 결합 아일릿 저산소증 연구를 향상시킬 수있다.
미세 유체는 수성과 산소 미세 환경을 재현하고 변조 할 수있다
조직 문화 저산소증 연구를위한 표준 기술은 저산소 챔버를 기반으로하고있다. 일반적으로, 저산소 챔버 분 스케일 동적 저산소증과 호환 ~ 10 ~ 30 분의 평형 번에 하나의 산소 농도를 제공합니다. 최근 두 연구는 포도당에 의한 인슐린 반응 7,8에 상반되는 결과로, 전체 마우스에 간헐적 저산소 노출 작은 사용자 지정 챔버를 사용했다. 전체 동물 수준에서, 호흡으로 산소가 직접 트란 아니라는 것을 명심인해 호흡기의 컨트롤에, PO 2 모세관 섬 예정. 또한,이 연구는 표준화 된 산소 수준이 없습니다 없으며 독도의 조직 수준에서 실시간 측정을 제공 않습니다.
한편, 산소 가스가 미세 유체 채널 네트워크를 통해 산소를 제어함으로써, 이러한 한계를 넘어 설 수있다. 또한, 미세 유체는 산소 변조시 표준 저산소 챔버와 위업하실 수 없습니다 라이브 영상과 호환됩니다. 이러한 신규 한 마이크로 유체의 숫자는 표적 세포 9-14 위에 미디어 흐름 마이크로 채널에 산소 농도를 용해 된 폴리 디메틸 실록산의 가스 투과성을 이용하는 접근한다. 이 소자는 또한 다수의 이산 산소 농도, 형광 기반 산소 센서 및 온 - 칩에서도 화학적 산소 발생을 통합 하였다.
액체 매화 기반의 미세 유체 내가으로 힘든 시간을 안정적, 지속적으로 그라데이션을 유지하는이T 조건 흐름에 민감하다 대류 혼합에 따라 달라집니다. 비교에서, 우리는 여기에 사용 된 기술은 산소 전달의 확산 경로를 감소에 초점을 맞춘다. 가스 매화 전단 흐름은 직접 세포 나 췌장 조직의 시드 막에 걸쳐 산소를 확산에 의해 제거된다. 이 매화를 제어하는 데 필요한 여분의 마이크로 유체를 제거하고 그 자체가 인슐린 분비를 트리거 할 수있는 섬, 불필요한 전단 응력을 방지 할 수 있습니다. 이 플랫폼은 활성 산소 종 (ROS)을 설명하는 데 사용 된 최대 규제 세포 배양 1.15의과 산소 저산소 두 극단 (2-97%의 O 2)에서. 때문에 산소와 전단 흐름의 제거를 직접 배달에, 우리의 확산 기반 플랫폼은 섬 저산소증 공부를위한 최적의 미세 유체 솔루션을 제공합니다.
모드의 자극 및 모니터링
섬 마일을 공부에 적용 할 때 확산 기반의 미세 유체는 또한 추가 혜택을 제공합니다crophysiology. 확산 장벽 막을 사용함으로써, 액체는 저산소 자극 독립적 수성 글루코스 자극의 컨트롤을 가능하게 산소 변조로부터 단리 할 수있다. 이는 독도에 대한 공간적으로 핀 포인트 배달 샌드위치 같은 동시 자극을 만듭니다. 가스가 일시적으로 컴퓨터 microinjectors를 통해 변조 더욱이, 우리는 60 초 미만의 과도와 디지털 21-0% 산소 농도를 조절 할 수 있습니다. 현미경의 산소와 포도당의 미세 환경의 동적 컨트롤은 표준 저산소 챔버를 사용 불가능하거나 매우 성가신되지 않을 것 실시간 멀티 모드 프로토콜을 할 수 있습니다. 이 장치를 사용하여, 칼슘 신호 (의 Fura-AM), 미토콘드리아 전위 (로다 민 (123)), 및 인슐린 속도론 (ELISA)을 저산소 하에서 동적 포도당 인슐린 반응의 완벽한 그림을 제공하기 위해 모니터링되었다.
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Protocol
1. 마우스 독도 준비
- C57BL / 6 쥐를 해부 및 콜라게나 소화 피콜 밀도 구배 분리에 의해 섬을 격리 할 것. (2,3에서 참조 조브 기사 참조).
- 10 % FBS, 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신, 및 배양 접시에 20 mM의 HEPES를 포함하는 RPMI-1640 배지에 독도를 품다 (37 ° C, 5 % CO 2). 후 분리, 배양 실험에 사용하기 전에 24 시간 동안 섬. 일관된 결과를 보장하기 위해 1-2 일 안에 독도를 사용합니다.
2. 미세 유체 플랫폼 만들기
- 각 장치 계층에 대한 투명성 포토 마스크의 미세 형상을 생성합니다 : 1) 입구와 출구, perifusion 실 2) 포도당 미세 유체 층 (8 mm 직경 × 3 mm의 150 μL), 마이크로 웰 3) 200 μm의 막 (500 μm의 직경, 100 깊은 μM), 4) 가스 미세 유체 층.
- 입구와 출구 층을 제조하기에 탈기, 예비 혼합 된 PDMS를 부어2 시간 동안 80 ° C에서 빈 페트리 접시 및 치료에 1.5 mm의 높이. 2mm 직경의 입력 / 출력 포트를 펀치.
- 글루코스 미세 층을 제조하기 위해, 실리콘 웨이퍼에서 04 번의 700 ㎛의 층을 형성하는 SU8-2150이 350 ㎛의 층을 스핀.
- 700 μm의 키 마스터를 생산, 개발 후 SU8에 마이크로 패턴을 전송하는 데 적합한 포토 마스크를 통해 UV 빛에 노출됩니다.
- 3mm의 높이로이 마스터에 탈기, 예비 혼합 된 PDMS를 붓고 2 시간 동안 80 ° C에서 치료. 이 컷은 면도날과 모양을 PDMS.
- 2mm 직경의 입력 / 출력 포트들뿐만 아니라 8mm 직경 챔버 펀치.
- 마이크로 웰과 200 ㎛ 멤브레인을 제조하기 위해, 100 μm의 SU8-2100 스핀. 이 100 μm의 키 마스터에 마이크로 웰 패턴을 전송하는 동일한 자외선 리소그래피를 적용합니다.
- 스핀은 30 초 동안 900 rpm에서이 마스터로, 예 혼합 PDMS를 탈기하고 10 분 동안 80 ° C에서 치료. SPI마이크로 웰의 패턴을 포함하는 200 ㎛ PDMS 막으로 인해 발생하는 동일한 조건을 이용하여 제 위에 NA의 두번째 층.
- 이 막을 통해 2mm 직경의 입력 / 출력 포트를 펀치
- 가스 미세 유체 층을 제조하기 위해, 100 μm의 SU8-2100 스핀. 이 100 μm의 키 마스터에 가스 미세 패턴을 전송하는 동일한 자외선 리소그래피를 적용합니다.
- 1.5 mm의 높이로이 마스터에 탈기, 예비 혼합 된 PDMS를 붓고 2 시간 동안 80 ° C에서 치료. 면도날 모양으로 PDMS를 잘라.
- 이 층을 2mm 직경의 입력 / 출력 포트를 펀치
- , 여러 레이어를 결합, 스카치 테이프로 청소 코로나 아크에 노출 한 후 다음과 같은 순서로 손으로 맞추어을 준비합니다.
- 마이크로 웰이 위를 향하도록 바닥 가스 층에 막을 본드.
- 마이크로 웰 막 위에 포도당 미세 접합.
- 입구와 출구 층 O를 결합n은 전체 어셈블리를 캡슐화 맨.
- 상단에 1kg의 무게를 추가하고 3 시간 동안 100 ° C에서 소성하여 결합을 강화.
- 물에서 장치 전체를 침지 한 후, 수층에 물을 로딩하여 완성 장치를 누설 테스트. 이어서, 빈 주사기와 가스층을 통해 공기 흐름.
- 장치를 사용할 때까지 4 ° C에 저장되어있는 PBS 버퍼와 다음 플러시 수성 층을 70 % 에탄올로 누출이 장치를 소독.
3. Microdispenser 설치
- 산소 혼합 및 배달 설정을 구성하는 2 microdispensers, 5 V, 20 V DC 전원 공급 장치, 디지털 I / O 보드를 얻습니다.
- 포함 된 드라이버 유닛에 microdispensers 통제 리드를 연결합니다.
- 랩뷰 컨트롤에 해당 포트에서 디지털 I / O 보드에 드라이버를 연결합니다.
- 드라이브 유니에 연락처를 대응하는 5 V, 20 V 전원 공급 장치를 연결합니다TS.
- 가스 제어 (부록)을위한 LabVIEW 코드를 실행하는 노트북, 디지털 I / O를 연결합니다.
- 반면 다른 압축 공기에, 모두 5 % CO 2와 질소 한 microdispenser를 연결합니다. 2 PSI에 모두 가스를 설정합니다. 이전에 마이크로 유체 장치를 입력하는 T-접합에 디스펜서 '출력을 사용하여 네트워크에 연결한다.
- 누설 검사 장치를 사용하여, (장치 목록 및 대표적인 결과 참조) 광섬유 산소 센서와 물에 용해 된 산소를 측정하면서, 5~21% 산소 사이 microdispensers를 순환시킴으로써 산소 변조의 과도 응답을 특성화.
4. 현미경으로 설정
- 거꾸로 현미경의 가열 단계에 장치를 장착합니다.
- 장치에 0 % ~ 21 % O 2 가스를 연결하고 산소 센서를 보정합니다.
- 분수의 집에 포도당 미세 유체의 출력 포트를 연결합니다.
- 크렙스 링거 중탄산에게 준비버퍼 (KRB) : 129 밀리미터의 NaCl, 5 mM의 탄산 수소 나트륨, 4.7 밀리미터의 KCl, 1.2 mM의 KH 2 PO 4, 1 ㎜ 염화칼슘 2 · 2H 2 O, 1.2 ㎜ 망초 · 7H 2 O, 10 mM의 HEPES 산도 7.35-7.40 2 ㎜ 기저 글루코스, 5 % FBS.
- 원뿔 튜브가 37 ° C의 물을 욕조에 목욕을 50 ㎖에 각각 2 ㎜, 14 mM의 포도당을 포함하는 두 개의 버퍼 솔루션을 준비합니다.
- 튜브에 250 μL / 분에서 버퍼를 그리는 연동 펌프를 연결합니다. 미세 유체 장치를 입력하기 전에 37 ° C의 열판에 튜브를 흐른다.
- 독도를 염색하기 위해, 각각 최종 염료 5 μM의 농도 2.5 μM에 도달 KRB 2 ㎖에 100 % 에탄올에 DMSO 및 Rh123에서의 Fura-2 오전에 추가합니다.
- 10 μL 피펫으로 섬을 선택하고 37 ℃에서 30 분 동안 염료 품어
- 포도당 마이크로 입구를 통해 장치에 약 20 섬을로드합니다. T 백에 콘센트에서 버퍼를 프라이밍에 의해 챔버에 독도를 직접그는 입구.
- 여분의 염료를 씻어 10 분 동안 버퍼에 독도를 Perfuse.
5. 동시에 산소와 포도당 자극을 실행
- 14 mM의 자극의 15 분 뒤에 KRB2에 의해 설립 기준의 5 분으로 포도당 자극 펄스를 제공하고 KRB2에서 15 분 동안 세척한다.
- Rh123 용의 Fura-2와 534 방출 녹음 380분의 340 nm의 여기 파장.
- 각 실험 전에 정상 펄스 (14 mM의 정상 산소)의 측정을 수행합니다.
- 산소 변조 (저산소증 / 간헐적 인 저산소증)의 경우, 만 대류 교란을 최소화하기 위해, 자극과 세척 단계와 다른 단계에있는 아무 흐름 중에 버퍼 흐름을 적용합니다.
- ELISA 인슐린 분석을 위해 1 분 간격으로 혈당 콘센트에서 폐수를 수집합니다.
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Representative Results
이 섬의 저산소증 기술의 중심이 분 규모의 과도와 같은 마이크로 유체 챔버에서 수성과 기상 자극을 조절하는 기능입니다. 그림 1)의 대표 결과 섬의 챔버 내에서 측정 된 듀얼 자극 및 B) 빠른 변조. 챔버에 형광의 도입으로 도시 수성 변조, 혼합 3-4 분 균형을 달성한다. 또한, 산소는 2 분 정도로 짧은 기간에 산소의 순환을 가능하게 빠른 과도로 5-21% 강화 될 수있다. 도 2에 도시 된 바와 같이 서로 다른 순환 안쪽과 주파수는 성취 될 수있다.
이 순환은 아일렛에 간헐적 저산소증을 생성인가되면 일반, 정상 산소 펄스,도 3a에 비해, 하나는 저산소증에 대해 독도 전처리의 이점을 관찰 할 수있다. 세포 내 칼슘 플럭스 신호 mechanis 때문에인슐린의 분비가 M-되어 실시간으로 모니터링, 저산소증과 IH의 효과는 칼슘 과도, 그림 3b의 오버 슈트와 진동 감쇠에 관찰 할 수있다. 이러한 K ATP 채널 전처리 과정을 제어하는 제안과 관련된 중요한 파라미터이다. 또한, 신진 대사 및 저산소증에 미토콘드리아의 링크는 Rh123을 사용하여 미토콘드리아의 잠재력을 모니터링하여 시각화 할 수있다. 마지막으로, 미세 유체 유출의 컬렉션은 총 인슐린 양의 ELISA 분석을 할 수 있습니다. 칼슘, 미토콘드리아의 잠재력, 인슐린은 저산소 과도,도 3c에서 포도당 - 인슐린 반응의 멀티 모달 뷰를 구축하기 시작 세 가지 매개 변수입니다.
그림 1. 동시에 산소와 포도당 자극. () 정적 제어합니다. 최고 : 250 μL에서 FITC 분자의 실 소개 / 분 혼합 시간 3 분 이내에 안정. 아래 : 가스 제어가 안정 5 배달, 10, 막에서 21 %의 산소를 제공한다 (B) 임시 제어 할 수 있습니다.. (용해) 가스 전달 (확산)에 표면 마이크로 웰의 양 측정 5~21% 사이에 산소의 순환은 1 분 동안 가능합니다.
그림 2. 미세 유동 장치는 또한 다른 산소 프로파일을 생성 할 수있다. 다른 IH 프로파일 가스 전산화 microinjectors에서 믹싱을 통해 깊이 (5-10-15 %)의 변화뿐만 아니라 순환의 기간 (3-6-1 분)에 의해 수득 될 수있다 .
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그림 3. IH는 독도가 저산소증에 대한 응답을 향상 미리 조정. IH를 사용하여 전처리의 () 대표 개요, 정상 산소 펄스 (이전 실험에서 같은 섬 배치)에 비해 개선 된 저산소 반응을 보여, 5 %에서 30 분 노출을 총. 이후 저산소증 10 분 이상은 여전히 필수 조건을 유지합니다. 평균 정상 산소, 저산소, 그리고 미리 조정 저산소 반응의 (b)에 오버레이 비교. 인셋은 발진 동작의 회수로 대표 트레이스를 도시 다른 산소 및 화학적 조건 (c) 다 모드의 Fura-2, 인슐린, 및 Rh123 응답 :. 21 % 산소, 5 % 산소, 전처리 (P 5퍼센트) diazoxide (D + 5 %), 및 5HD (5HD + P 5%). 5HD 개방과 blocki에 의해 사전 조정의 장점을 부정하면서 Diazoxide은 필수 조건과 일치각각 NG KATP 채널. , * P <0.05, ** p <0.01, *** 5HD 대 P 대 5 % 대 21 %, 5 % 5%, D 5% + P 5퍼센트 : T-테스트 양측 P <0.001.
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Discussion
이 섬의 저산소증 기술에 통합 된 여러 양식은 현재 몇 점은 문제를 해결하려면 여기 지적했다. 먼저 고립 된 섬이 저하 인해 선방 세포에서 소화 효소에 문화를 분해하는 것을 계속한다. 섬 격리 후 1-2 일 실험을 표준화하면 일관성있는 결과를 얻기에 따라서 중요합니다. 둘째, 수성 유동은 층류 확산 사이의 경계에서 대류 일소 방지 할 저산소증 및 간헐적 저산소증 동안 중단 하였다. 이것은 베이 전처리의 지속 시간을 제한하는 것으로 보인다. 아직도 막에서 빠른 가스 변조를 허용하면서 수성 채널에서 가스 교환의 미래 통합이 작은 간극을 제거 할 수 있습니다. 독도를로드하는 동안 셋째, 수성 튜브는 공기 방울이 방지하기 위해 (콘센트 다음 입구) 역순으로 조심스럽게 다시 연결해야합니다. 마지막으로, 미래의 장치 분포를 돕기 위해 삼진 아웃 미세 유체 분배로 보강 될 수있다사냥꾼 포켓의 배열 패턴 화 될 수있는 바닥에, 전체 챔버를 통해 독도의 클러스터 테. 포켓 배열 외에 추가로이 마이크로 유체 분포는 높은 처리량 실험 독도의 위치 배열을 만드는 데 도움이됩니다.
이전이 미세 섬 저산소증 기술로, 가장 빠른 간헐적 인 저산소증 변조는 가압 가스의 높은 흐름을 작은 사용자 지정 저산소 챔버를 사용하여 1~3분주기에 달성했다. 그러나, 이들에만 단일 베이 레벨에서 전체 동물 및하지에 이용 될 수있다. (호흡 평형 후) 전체 동물의 췌장에서 달성 실제 저산소증 수준의 불확실성 외에도 실시간, 잘 조절 된 미세 환경에서 포도당 - 인슐린 반응을 조사하는 무능력도 있습니다. 비교에서 두 수성 가스 자극은 우리의 마이크로 유체에 분 시간 규모로 제어된다. 이러한 변조는 FO 현미경에 직접 장착R multiparametric 모니터링. 이전에 우리의 기술로, 반복 가능하고 잘 특성화 섬의 전제 조건이 달성되지 않았습니다. 같은 섬으로 산소에 민감한 생체 조직은 최적의 작은 세포 배양 플랫폼과 큰 챔버 장치 사이에 갇혀 자신의 microscaled 차원 (즉, 100 μm의 반경)으로이 미세 유체 플랫폼에 적합합니다. 섬 너머, 다수의 생체 조직을 포함하여 심장 조직, 뇌 조각, 배아가 - 수있는이 기술을 사용하여 조사.
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Disclosures
저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.
Acknowledgments
이 작품은 건강 보조금 R01 DK091526 (JO), NSF 0,852,416 (DTE)의 국립 연구소와 시카고 당뇨병 프로젝트에 의해 지원되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent/Material | |||
| Spinner | Laurell | WS-400 | |
| SU8 | MicroChem | SU8-2150/SU8-2100 | |
| Digital Hotplate | PMC Dataplate | 722A | |
| UV Curing Lamp | OmniCure | S1000 | |
| PMDS | Dow Chemical | Sylgard 184 | |
| Corona Wand | ETP | BD-20AC | |
| Vacuum Chamber | Bel-Art | 420220000 | |
| Microdispensers | The Lee Company | IKTX0322000A | |
| 5 V and 20 V DC Power | Radio Shack | ||
| NI USB | National Instrument | NI USB-6501 | |
| Thermometer | Omega Engineering, Inc. | ||
| Peristaltic Pump | Gilson | Minipulse 2 | |
| Oxygen Sensor | Ocean Optics | NeoFox | |
| Fraction Collector | Gilson | 203 | |
| Pippette | Fisher Scientific | Finnpipette II 100μl | |
| Inverted Epifluorescence Microscope | Leica | DMI 4000B | |
| 50 ml Conical Tubes | Fisher Scientific | ||
| Fura-2 Fluorescence Dye | Molecular Probes, Life Technologies | ||
| Rhodamine 123 Fluorescence Dye | Molecular Probes, Life Technologies | ||
| Culture Media | Sigma-Aldrich | RPMI-1640 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | ||
| Glucose | Sigma-Aldrich | ||
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | ||
| 30 in Silicone Tubings | Cole-Parmer | 1/16 in x 1/8 in | |
| 1.5 ml Eppendorf Tubes | Fisher Scientific | ||
| Y-connectors | Cole-Parmer | 1/16 in and 4 mm | |
| Syringe Connectors | Cole-Parmer | female Luer plug 1/16 in | |
| Straight Connectors | Cole-Parmer | 1/16 in | |
| Elbow Connector | Cole-Parmer | 1/16 in | |
References
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