Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Slide Forberedelse Metode til at bevare tre-dimensionelle Chromatin Arkitektur testikelceller

Published: January 10, 2014 doi: 10.3791/50819
Automatic Translation
1,2
1Division of Reproductive Sciences, Division of Developmental Biology, Perinatal Institute, Cincinnati Children's Hospital Medical Center, 2Department of Pediatrics, University of Cincinnati College of Medicine

Summary

Materialet her beskriver en metode udviklet til at bevare den tredimensionelle chromatin struktur testikel kimceller. Dette er blevet kaldt den tredimensionale (3D) diasmetode. Denne metode forbedrer følsomheden for påvisning af subnukleare strukturer og gælder for immunfluorescens, DNA og RNA-fluorescens in situ-hybridisering (FISH).

Abstract

Under testikelkimcelledifferentiering ændres strukturen af nuklear kromatin dynamisk. I det følgende beskrives en metode, der er udformet med henblik på at bevare det tredimensionale chromatinarrangement af testikelkimceller, der findes hos mus; Denne metode er blevet kaldt den tredimensionale (3D) diasmetode. I denne metode behandles testikelrør direkte med et gennemtrængningstrin, der fjerner cytoplasmisk materiale, efterfulgt af et fikseringstrin, der løser nukleare materialer. Tubules adskilles derefter, celleaffjedringen er cytospun, og celler klæber til dias. Denne metode forbedrer følsomheden over for påvisning af subnukleare strukturer og gælder for immunfluorescens, DNA og RNA-fluorescens in situ-hybridisering (FISH) og kombinationen af disse detektionsmetoder. Som et eksempel på en mulig anvendelse af 3D-diasmetoden vises en Cot-1 RNA FISH til at registrere spirende RNA'er. 3D-slidemetoden vil lette den detaljerede undersøgelse af rumlige relationer mellem kromatinstruktur, DNA og RNA under testikelkimcelledifferentiering.

Introduction

I testikler differentierer kimceller fra diploid spermatogonia gennem meiose til moden, haploid spermatozoa. Under denne proces omformes den nukleare chromatinstruktur af kimceller kontinuerligt og dynamisk. Overfladespredninger er almindeligt anvendt til cytologisk undersøgelse af individuelle spermatogene celler. En fremherskende metode til overfladespredning anvender hypotonisk behandling, hvorved individuelle spermatogene celler spredes og flades1. Disse betingelser er optimale til detaljeret analyse af meiotiske kromosomer. Kromosomale træk såsom synaptisk status og rekombination foci observeres let ved hjælp af denne metode. Den hypotoniske behandling forstyrrer imidlertid subnuklear kromatinarkitektur, således at denne teknik ikke er egnet til strukturel analyse af kerner. Derfor er en forbedret metode designet til at bevare den tredimensionelle chromatinstruktur af testikelkimceller. Denne metode er blevet kaldt den tredimensionale (3D) diasmetode (Figur 1). 3D-diasmetoden har gjort det muligt at detektere spirende RNA-lokalisering i kerner, fordi den oprindeligt blev optimeret til at undersøge genekspression og kromatinestater under testikelkimcelledifferentiering ved RNA-fluorescens in situ-hybridisering (FISH)2,3. Denne 3D-metode gælder også for kombinationen af immunfluorescens, DNA og RNA FISH. Derudover har denne metode hjulpet med opdagelsen af postmeiotisk sexkromati (PMSC), et stille rum af kønskromosomerne, der findes i postmeiotiske spermatids2.

3D-diasmetoden blev oprindeligt optimeret gennem kombinationen af to væsentlige trin i diaspræparatet, der almindeligvis anvendes til nuklear farvning: fikseringstrinet designet til at fastsætte nukleare materialer og gennemtrængningstrinnet, der har til formål at fjerne cytoplasmiske materialer for at forbedre tilgængeligheden af farvningsreagenser, såsom antistoffer og FISH-sonder. Som tidligere beskrevet i en andenpublikation 3er det blevet fastslået, at gennemtrængningstrinnet skal gå forud for fikseringstrinnet for at opnå optimale resultater med lav cytoplasmisk baggrund. I denne 3D-diasmetode udføres gennemtrængningstrinnet og det efterfølgende fikseringstrin direkte på seminiferøse tubules og efterfølges af mekanisk dissociation af kimceller med pincet, før de cytospines på dias. En alternativ metode til RNA FISH af spermatogene celler blev udviklet i et andet laboratorium4. I denne metode, der er i overensstemmelse med 3D-metoden, skal gennemtrængningstrinnet gå forud for fikseringstrinnet for at opnå optimale resultater af RNA FISH.

Følgende protokol beskriver 3D-diasmetoden og giver et eksempel på en mulig applikation, Cot-1 RNA FISH til påvisning af nukleare spirende RNA'er. Cot-1 DNA består af gentagne elementer i genomet. Her hybridiseres en Cot-1 DNA-sonde til en intron og UTR af de spirende udskrifter og registrerer derved de transskriptionsmæssigt aktive regioner i kerne5,6. 3D-dias er alsidige og kan anvendes på en kombination af immunfluorescens, DNA og RNA FISH teknikker med henblik på at opnå en detaljeret undersøgelse af rumlige relationer mellem chromatin arkitektur.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1.3D Forberedelse af dias

  1. Forbered følgende reagenser:
    1. CSK buffer: 100 mM NaCl, 300 mM saccharose, 10 mM RØR, 3 mM MgCl2. Juster pH til 6,8 med 1 M NaOH. CSK-bufferen opbevares ved 4 °C.
    2. CSK buffer med 0,5% Triton X-100: Tilsæt 200 μl Triton X-100 til 40 ml CSK buffer. Opløsningen blandes med magnetisk omrører, indtil Triton X-100 er helt opløst. CSK-bufferen opbevares med 0,5% Triton X-100 ved 4 °C.
    3. 4% Paraformaldehyd (PFA)-PBS, pH 7,4: 4 g PFA opløses i ca. 70-80 ml vand. For at fremskynde opløsningsprocessen tilsættes ca. 20 μl af 4 N NaOH og opløsningen opbevares i et vandbad ved 60 °C, indtil PFA er helt opløst, og opløsningen er gennemsigtig. Denne proces tager ca. 1 time. Efter PFA er helt opløst, tilsættes 10 ml 10x PBS. Det endelige volumen justeres til 100 ml med vand, og opløsningen afkøles til stuetemperatur (25 °C). Brug frisklavet opløsning til hvert nyt eksperiment.
      Bemærk: Få institutionel tilladelse til alt dyrearbejde, og følg de relevante retningslinjer for dyrepleje.
  2. Aflive mandlige mus. Brug pincet og saks, punktafgifter testis fra musen. Testis anbringes i PBS (eller RPMI 1640). Efter fjernelsen af testis skal du hurtigt udføre følgende trin 1.3-1.4 for at forhindre nedbrydning af RNA.
  3. Brud testis på en lille petriskål og fjern tunica albuginea. Optrævle seminiferous tubules i PBS på is ved hjælp af pincet.
  4. Ved hjælp af pincet overføres flere rør (flere stykker tubules ca. 5-10 mm i længden) til en brønd af en 4-brønds skål, der indeholder 500 ml CSK-buffer + 0,5% Triton X-100 på is og inkuberes i 6 min. Overeksponering for CSK-buffer kan resultere i afbrydelse af celler.
  5. Brug pincet, overføre alle tubules til en brønd af en 4-brønds skål, der indeholder 4% PFA-PBS løsning. Dette trin kan præformeres uden stereomikroskop, men eventuelt kan det bruges. Inkuber i 10 minutter ved stuetemperatur. Samtidig begynder at forberede 12 cytospinkamre i inkubationsperioderne.
  6. Brug pincet, overføre alle tubules til en brønd af en 4-brønds skål, der indeholder PBS. Inkuber i 5 minutter ved stuetemperatur.
  7. På bagsiden af en glassjebane overføres alle rør til 30 μl PBS (toppen af rutsjebanen bør undgås på grund af kationisk ladning). Brug spidsen af to pincet, rive tubules i stykker. Hak tubules i vandret retning ved at klippe tubules mellem spidsen af to pincet og trække tang vandret. Fortsæt med dette trin i ca. 10-20 sek.
  8. Affjedringen blandes ved pipetter ved hjælp af en P20-pipette.
  9. Suspensionen overføres til et mikrocentrifugerør, fortyndes med PBS til ca. 1,3 ml. Der påføres 100 μl suspension på hvert af de 12 cytospinkamre (i alt 1,2 ml). På dette trin behøver koncentrationen af celler ikke at blive bestemt.
  10. Cytospin prøverne ved 2.000 omdrejninger i minuttet i 10 minutter ved stuetemperatur. Efter cytospinning glider tørre på laboratoriebænken i et par minutter ved stuetemperatur. Når dias har fået lov til at tørre helt i nogle minutter, skal du gå til næste trin.
  11. Brug en Coplin krukke, der indeholder PBS, vask lysbillederne i 5 minutter ved stuetemperatur.
  12. Overfør lysbilleder til en Coplin krukke, der indeholder 70% ethanol og vente mindst 2 min før påbegyndelsen af RNA FISH. Rutsjebanerne er stabile i et par uger i 70 % ethanol ved 4 °C. Til langtidsopbevaring, dehydrere dias ved hjælp af seriel behandling med 80% og 100% ethanol i Coplin krukker i 2 min hver og lufttørre helt dehydrere dias. Opbevares ved -80 °C i en glidekasse.

2. Barneseng-1 DNA Probe Forberedelse ved Random Priming

  1. Forbered følgende reagenser:
    1. Hybridiseringsbuffer: Bland de procedurekomponenter, der skal bruges til at forberede 900 ml hybridiseringsbufferlager; denne opløsning vil blive brugt til at opbevare sonder. Dette hybridiseringsbufferlager giver mulighed for tilsætning af 10% volumen RNase-hæmmeropløsning (Ribonucleoside Vanadyl Complex) før hybridisering.
      komponent Beløb (μl) Endelig koncentration
      Formamide 500 50% (v/v)
      50% Dextran 200 10% (w/v)
      20x SSC 100 2x
      1% BSA 100 0.1%
      Før hybridisering tilsættes 1/10 vol 200 mM Ribonucleoside Vanadyl Complex eller vand til hybridiseringsbufferlageret for at matche den endelige koncentration. Ved -20 °C er denne blanding stabil i mere end et år.
    2. 20x SSC: 88,2 g natriumcitrat og 175,3 g NaCl opløses i ca. 800 ml vand. Juster pH til 7,0 ved hjælp af et par dråber 1 M HCl. Tilsæt vand for at justere det endelige volumen til 1 L. Steriliser ved autoklavering. Efter forberedelse kan 20x SSC opbevares ved stuetemperatur.
    3. 50% (w/v) Dextran: Rør vand og tilsæt langsomt 50 g dextran sulfat. Hold omrøring natten over ved stuetemperatur. Tilsæt vand for at justere det endelige volumen til 100 ml. Opbevares ved stuetemperatur.
  2. Tilføj følgende komponenter, der er anført nedenfor, til et PCR-rør. Ved hjælp af en PCR-maskine blandes og inkuberes opløsningen i 5 min ved 95 °C.
    komponent Mængde pr. reaktion (μl) endegyldig
    Cot-1 DNA: 1 mg/ml 1 1 μg
    Tilfældig 9mer primer (fra kit) 10
    Vand 27
  3. Centrifuge kort og sted på is.
  4. Tilføj følgende komponenter. Bland og inkuber i 30 min ved 37 °C ved hjælp af en PCR-maskine. (Nærmere oplysninger om det anvendte sæt findes i tabellen over reagenser og udstyr).
    komponent Mængde pr. reaktion (μl) Endelig koncentration
    Blanding tilberedt af trin 2.2 38
    5x nukleotidbuffer (fra kit) 9.2
    Cy3-dUTP (1 mM) 0.8 16 μM
    Klenow (fra kit) 2
  5. Der tilsættes 2 μl stopbuffer (fra sæt) for at afbryde reaktionen.
  6. Rense den standsede reaktion ved hjælp af microspin kolonner.
  7. Der tilsættes 50 μg (5 μl) DNA til sildesæd (50 gange så meget af skabelon cot-1 DNA) til den rensede fraktion.
  8. Mål den samlede volumen ved hjælp af en pipette. Der tilsættes 0,7x volumen på 100% ethanol og 0,1x volumen på 3 M natriumacetat (pH 5,2), blandes godt og centrifuge i 15 minutter ved maksimal hastighed (17.000 x g) ved hjælp af en mikrocentrifuge ved 4 °C.
  9. Væsken fjernes, og der tilsættes 200 μl ethanol på 70 %, blandes godt og centrifuges i 5 min ved maksimal hastighed ved 4 °C.
  10. Fjern den overskydende væske. Tør bundfaldet i 10-30 minutter ved stuetemperatur.
  11. Pellet opløses i 20 μl hybridiseringsbufferlager. Fordi pellet er ofte svært at opløse, pipette gentagne gange. Som en alternativ mulighed, en vortex mixer kan også bruges til effektivt at opløse pellet. Sonder kan opbevares ved -20 °C indtil brug.

3. Barneseng-1 RNA FISK

  1. Føj nedenstående komponenter til et PCR-rør. Ved hjælp af en PCR-maskine inkuberes i 10 min ved 80 °C efterfulgt af et forbehandlingstrin på ca. 10-30 min ved 42 °C. Ved 42 °C opbevares indtil hybridisering. Ribonucleoside Vanadyl Complex er valgfrit; det kan erstattes med vand.
    komponent Mængde pr. reaktion (μl) endegyldig
    Cot-1 DNA-sonde (50 ng/μl) 2 100 ng
    Ribonucleoside Vanadyl Complex (200 mM) 2 20 mM
    Hybridiseringsbuffer føjet til 20
  2. Dehydrat glider i en Coplin krukke, der indeholder 80% ethanol i 2 min, efterfulgt af en Coplin krukke, der indeholder 100% ethanol i 2 min. Tørre glider helt på lab bænk ved stuetemperatur.
  3. Forvarm et tipbokskammer (fyldt med 2-3 cm vand) i en 42 °C inkubator på forhånd. Placer rutsjebanen på tipbokskammeret. Kort centrifuge de præannealed sonder og pipette direkte på de dehydrerede dias. Undgå at lave bobler. Dæk forsigtigt rutsjebanen med et dækselsslip.
  4. Hybridisere i 6 timer til natten (14-15 timer) ved 42 °C.
  5. Forbered vaskeløsninger i Coplin krukker (to krukker med både 2x SSC og 50% formamid og to krukker med 2x SSC). Forvarm ved 42 °C i 30 minutter i et vandbad.
  6. Brug et barberblad til at fjerne dækslet glide fra kanten af diaset. Undgå at ridse prøver. Der vaskes lysbilleder i en Coplin-krukke med 2x SSC og 50% formamid i 5 min ved 45 °C. Gentag dette trin én gang.
  7. Der vaskes lysbilleder i en Coplin-krukke med 2x SSC i 5 min ved 45 °C. Gentag dette trin én gang.
  8. Der tilsættes 20 μl DAPI-monteringsmedier til diasene og dækslet med en dæksedlen. Tryk forsigtigt på dækglas for at fjerne ekstra monteringsmedier. Blot ekstra monteringsmedie med rengøringsvæv. Rutsjebanerne er klar til mikroskopi evaluering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Et repræsentativt resultat af et 3D-dias vises i figur 2. I dette eksperiment blev Cot-1 RNA FISH udført for at detektere spirende transskription sammen med immunostaining ved hjælp af anti CBX1 og γH2AX antistoffer. For at kombinere RNA FISH og immunostaining blev immunostaining udført først, efterfulgt af RNA FISH som beskrevet i3. CBX1 er et heterochromatinprotein, der lokaliserer sig til pericentromerisk heterochromatin og tavse kønskromosomer i meiose kaldet en XY-krop (eller sexkrop). γH2AX er en fosforineret form af histonevarianten H2AX og lokaliseres på XY-kroppen. På dette billede akkumuleres Cot-1-signaler på eukromatiske regioner, men udelukkes fra pericentromerisk heterochromatin og XY-kroppen.

Under overfladespredningsforberedelse svulmer behandling med hypotonisk opløsning kerner og udvider fysisk subnukleare strukturer. Denne fremherskende metode til meiotisk undersøgelse er bedst egnet til at opfange alle meiotiske kromosomer i et enkelt z-plan1. For at tydeliggøre forskellen mellem 3D-diasmetoden og overfladespredningerne efter hypotonisk behandling vises repræsentative billeder af pachytene spermatocytter af hvert eksperiment ved hjælp af den samme forstørrelse ved hjælp af et epifluorescerende mikroskop (Figur 2A og 2B). I overfladespredninger behandlet med hypotonisk opløsning forstyrres den tredimensionelle chromatinstruktur, og alle meiotiske kromosomøkser kan fanges inden for et enkelt z-plan. 3D-slideforberedelse bevarer dog den intakte chromatinstruktur.

Figure 1
Figur 1. Skematisk over 3D-diasmetode. 3D-slidemetoden kan bevare den tredimensionelle chromatinstruktur. På grund af diasets tredimensionelle karakter kræves dataopsamling med flere z-sektioner for at dække en kerne.

Figure 2
Figur 2. Sammenligning mellem 3D-slidemetoden og overfladespredningerne efter hypotonisk behandling ved samme forstørrelse. (A) Ved hjælp af 3D-diaset udføres Cot-1 RNA FISH (cy3) og immunostaining med anti CBX1 (fitc) og γH2AX (cy5) antistoffer. En pachytene spermatocyt med en enkelt z-sektion vises. (B) Ved hjælp af overfladespredningerne udføres immunistaining med anti SCP3- og γH2AX-antistoffer. Der vises en pachytene spermatocyt. Cirkler: XY krop. Stænger: 10 μm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I 3D-diasforberedelse går gennemstrængningstrinnet forud for fikseringstrinnet. Disse trin udføres direkte på seminiferous tubules og derved bevarer den tredimensionelle chromatinstruktur. En alternativ mulighed for at bevare chromatin struktur for RNA / DNA FISH er at udføre permeabilization trin og fiksering trin samtidigt. Denne alternative teknik er blevet udført i pungdyr kimceller og i mus præimplantation embryoner7,8. Men hvis fikseringstrinnet går forud for gennemtrængningstrinnet, kan det give anledning til høj cytoplasmisk baggrund. Derfor afhænger den kritiske determinant for diasoptimering for RNA og DNA FISH af rækkefølgen af permeabiliserings- og fikseringstrinnene. Varigheden af permeabiliseringstrinnet er også en vigtig faktor for optimering af diasforberedelse. Seks minutter er den generelle betingelse for denne metode. Det kan dog justeres afhængigt af variationen af de anvendte materialer.

Bevarelsen af den tredimensionelle chromatinstruktur er et træk ved 3D-diaset, der tydeligt adskiller det fra overfladespredningsdias. Denne fordel adskiller sig meget fra kromosomspredningspræparatet. 3D-slidemetoden bevarer tredimensionel chromatinstruktur, men kræver dataindsamling med flere z-sektioner for at omfatte en hel kerne. En enkelt z-sektion kan ikke opfange alle signaler fra en kerne. Derfor er nødvendigheden af flere z-sektioner en væsentlig begrænsning af denne metode. At fange en kerne i en enkelt z-sektion, overflade spreads har en fordel. Derfor har 3D-metoden og overfladespredningspræparatet forskellige fordele og gensidigt kompenserer hinandens funktioner for studiet af meiose og spermatogenese.

3D-slidemetoden kan anvendes på alle celletyper, der findes i testiklerne, herunder spermatogonia, runde spermatids og Sertoli-celler. Denne metode er også blevet anvendt til at undersøge kromatinkomprimeringen af kønskromosomerne ved starten af meiotisk kønskromosominaktivering og til at undersøge epigenetiske modifikationer på PMSC10. Med hensyn til fremtidige anvendelser kan denne metode anvendes på andre væv eller celler. Hvis det er tilfældet, anbefales det, at gennemtrængningstrinnet går forud for fikseringstrinnet. Alternativt kan gennemtrængningstrinnet og fikseringstrinnet udføres samtidigt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatteren har intet at afsløre.

Acknowledgments

Jeg takker Jeannie T. Lee for tilsynet med dette projekt, da jeg var i Lee laboratoriet og Tyler Broering for at redigere manuskriptet. Dette arbejde blev støttet af Basil O'Connor Starter Scholar Award fra marts Dimes Foundation og NIH Grant GM098605.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cot-1 DNA  Invitrogen 18440-016
Stratagene Prime-It Fluor Fluorescence Labeling Kit Agilent 300380
Herring sperm DNA Solution Invitrogen 15634-017
Ethanol. 200 proof (absolute) Pharmco-aaper 111000200
Sodium acetate Sigma-Aldrich S2889
Formamide deionized American Bioanalytical AB00600-00500
Sodium citrate tribasic dihydrate Sigma-Aldrich C8532
Bovine serum albumin Lifeblood Medical 77110-100
Dextran sulfate sodium salt from Leuconostoc spp. Sigma-Aldrich D6001
RPMI 1640 Invitrogen A10491-01
Sucrose Sigma-Aldrich S0389
PIPES Sigma-Aldrich P6757
Magnesium chloride hexahydrate Sigma-Aldrich M0250
Triton X-100 Sigma-Aldrich T8787
Paraformaldehyde Sigma-Aldrich 76240
Sodium hydroxide Sigma-Aldrich 221465
Phosphate buffered saline Sigma-Aldrich P4417
VECTASHIELD Mounting Medium with DAPI Vector Laboratories H1200
Ribonucleoside-vanadyl complex New England Biolabs S1402S
Illustra MicroSpin G-50 Columns GE Healthcare 27-5330-01
Microcentrifuge Eppendorf 5424
Forceps VWR 300-050
Microcentrifuge tubes Bioexpress C-3262-1
Cytospin 3 Shandon
Coplin Jar Fisher 08-815
Superfrost /Plus Microscope Slides Fisher 12-550-15
4-well dish Fisher 12-566-301
Cover glass  Fisher 12-544-G
Air incubator Revolutionary Science RS-IF-203

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Peters, A. H., Plug, A. W., van Vugt, M. J., de Boer, P. A drying-down technique for the spreading of mammalian meiocytes from the male and female germline. Chromosome Res. 5, 66-68 (1997).
  2. Namekawa, S. H., et al. Postmeiotic sex chromatin in the male germline of mice. Curr Biol. 16, 660-667 (2006).
  3. Namekawa, S. H., Lee, J. T. Detection of nascent RNA, single-copy DNA and protein localization by immunoFISH in mouse germ cells and preimplantation embryos. Nat Protoc. 6, 270-284 (2011).
  4. Mahadevaiah, S. K., Costa, Y., Turner, J. M. Using RNA FISH to study gene expression during mammalian meiosis. Methods in molecular biology. 558, 433-444 (2009).
  5. Hall, L. L., et al. An ectopic human XIST gene can induce chromosome inactivation in postdifferentiation human HT-1080 cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 8677-8682 (2002).
  6. Huynh, K. D., Lee, J. T. Inheritance of a pre-inactivated paternal X chromosome in early mouse embryos. Nature. 426, 857-862 (2003).
  7. Namekawa, S. H., VandeBerg, J. L., McCarrey, J. R., Lee, J. T. Sex chromosome silencing in the marsupial male germ line. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 9730-9735 (2007).
  8. Namekawa, S. H., Payer, B., Huynh, K. D., Jaenisch, R., Lee, J. T. Two-step imprinted X inactivation: repeat versus genic silencing in the mouse. Mol Cell Biol. 30, 3187-3205 (2010).
  9. Ichijima, Y., et al. MDC1 directs chromosome-wide silencing of the sex chromosomes in male germ cells. Genes Dev. 25, 959-971 (2011).
  10. Sin, H. S., et al. RNF8 regulates active epigenetic modifications and escape gene activation from inactive sex chromosomes in post-meiotic spermatids. Genes Dev. 26, 2737-2748 (2012).

Tags

Grundlæggende protokol Problem 83 Chromatin Kimceller Kønskromosomer Testis Meiotisk kønskromosominaktivering Postmeiotisk sexkromatin
Slide Forberedelse Metode til at bevare tre-dimensionelle Chromatin Arkitektur testikelceller
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Namekawa, S. H. Slide Preparation… More

Namekawa, S. H. Slide Preparation Method to Preserve Three-dimensional Chromatin Architecture of Testicular Germ Cells. J. Vis. Exp. (83), e50819, doi:10.3791/50819 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter