Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

إنشاء الحد الأدنى من تركيز مبيد الجراثيم لعامل مضاد للميكروبات للخلايا العوالق (MBC-P) وخلايا بيو فيلم (MBC-B)

Published: January 2, 2014 doi: 10.3791/50854
Automatic Translation
1
1Department of Biochemistry, Microbiology and Immunology, University of Ottawa

Summary

يسمح هذا البروتوكول بإجراء مقارنة مباشرة بين مقاومة العوالق والبيو فيلم لسلالة بكتيرية يمكن أن تشكل بيو فيلم في المختبر باستخدام لوحة ميكروتتر 96 بئرا. تتعرض بكتيريا العوالق أو الأغشية الحيوية لتخفيف متسلسل للعامل المضاد للميكروبات المفضل. يتم اختبار الجدوى من خلال النمو على لوحات أجار.

Abstract

يسمح هذا البروتوكول بإجراء مقارنة مباشرة بين مقاومة العوالق والبيو فيلم لسلالة بكتيرية يمكن أن تشكل بيو فيلم في المختبر. يتم تلقيح البكتيريا في آبار لوحة ميكروتتر 96 بئرا. في حالة المقايسة العوالق ، يتم إضافة التخفيفات التسلسلية للعامل المضاد للميكروبات المفضل إلى التعليق البكتيري. في الفحص الحيوي ، بمجرد تلقيحها ، يتم ترك البكتيريا لتشكيل بيو فيلم على مدى فترة زمنية محددة. تتم إزالة الخلايا غير المرفقة من الآبار ، ويتم تجديد الوسائط وإضافة التخفيفات التسلسلية للعامل المضاد للميكروبات المفضل. بعد التعرض لعامل مضادات الميكروبات ، يتم فحص الخلايا العوالق للنمو. بالنسبة للآساءة بيو فيلم، يتم تحديث وسائل الإعلام مع وسائل الإعلام الطازجة تفتقر إلى عامل مضاد للميكروبات وتترك خلايا بيو فيلم لاسترداد. يتم فحص صلاحية الخلية بيو فيلم بعد فترة الانتعاش. يتم تعريف MBC-P لعامل مضادات الميكروبات على أنه أقل تركيز للدواء يقتل الخلايا في الثقافة العوالق.  في المقابل ، يتم تحديد MBC-B لسلالة من خلال تعريض الأغشية الحيوية مسبقة التشكيل لتركيزات متزايدة من عامل مضادات الميكروبات لمدة 24 ساعة. يعرف MBC-B بأنه أقل تركيز للعامل المضاد للميكروبات الذي يقتل الخلايا في الفيلم الحيوي.

Introduction

تم تطوير مقايسات مقاومة المضادات الحيوية في البداية لتقصي مقاومة الثقافات العوالق (السباحة الحرة) للبكتيريا. نظرا لأن العديد من العدوى البكتيرية تنطوي على الأغشية الحيوية (الخلايا المرفقة بالسطح) ، فقد كنا مهتمين بتطوير طريقة لتقصي مقاومة المضادات الحيوية الخاصة بالبيو فيلم. ومع ذلك ، فإن معظم المقايسات مقاومة المضادات الحيوية غير مناسبة لقياس مقاومة الأغشية الحيوية. على سبيل المثال، تحديد الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC) هو المعيار الذهبي لتحديد مقاومة المضادات الحيوية للثقافات البكتيرية العوالق 1. هذا المقايسة ينطوي على خلط ثقافة العوالق المخففة مع سلسلة من المضادات الحيوية المخففة.  تركيز المضادات الحيوية التي تمنع النمو المرئي للخلايا العوالق هو هيئة التصنيع العسكري. وبما أن هذا الفحص يعتمد على تثبيط النمو ، بحكم تعريفه ، فإنه لا يمكن أن يعمل مع ثقافات بيو فيلم ، الأمر الذي يتطلب فحص حساسية المضادات الحيوية للخلايا في بيو فيلم متضخمة مسبقا. بدلا من قياس تثبيط النمو، يحدد المقايسة MBC-B الموصوفة هنا تركيز المضادات الحيوية التي تقتل الخلايا الموجودة بالفعل في بيو فيلم. وهكذا، يهدف هذا الفحص إلى محاكاة العلاجات بالمضادات الحيوية لالتهابات بيو فيلم الراسخة، وتوفير رؤية أكثر ملاءمة لمقاومة المضادات الحيوية البكتيرية في الجسم الحي.

منذ biofilms عموما أكثر مقاومة للمضادات الحيوية من الثقافات العوالق 2-4 ، كان من الضروري وضع طريقة تربط مباشرة مقاومة المضادات الحيوية من بيو فيلم إلى أن من ثقافة العوالق. وبالتالي فإن الهدف الآخر من هذه الطريقة هو أن تكون قادرة على مقارنة مباشرة مستوى مقاومة المضادات الحيوية بين الخلايا العوالق والبيو فيلم. إن المقايسات MBC-P و MBC-B الموصوفة هنا تجعل هذا ممكنا لأن الخلايا يتم استزراعها في ظروف مماثلة. لقد استخدمنا هذه الطريقة لدراسة العديد من الجينات التي تعتبر مهمة لمقاومة المضادات الحيوية الخاصة بيو فيلم 5-8 .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. MBC-B

  1. زراعة بيو فيلم (مقتبس من أوتول9).
    1. تنمو ثقافة سلالة البرية من نوع الاهتمام وسلالة متحولة لمدة 16 ساعة في وسيلة غنية في 37 درجة مئوية.
    2. تمييع الثقافات المشبعة بين عشية وضحاها 1:100 في وسط جديد لمقاايسات مقاومة المضادات الحيوية. وسيلة قياسية ل P. aeruginosa هو M63 الحد الأدنى المتوسط تكملها كبريتات المغنيسيوم وأرجينين (انظر الجدول 1). هذه الوسيلة تحفز تشكيل بيو فيلم أكثر قوة.
    3. إضافة 100 ميكرولتر من التخفيف لكل بئر في طبق ميكروتتر 96 جيدا (انظر الجدول 1). وبما أن هذه المقايسات عادة ما يتم إجراؤها في ثلاث نسخ لكل سلالة، يجب أن يكون هناك 24 بئرا من كل سلالة.
    4. احتضان لوحة microtiter لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية.
  2. تعريض الفيلم الحيوي مسبق التشكيل لتدرج تركيز المضادات الحيوية
    1. إعداد سلسلة تخفيف 10x من المضادات الحيوية ل7 آبار. مثال: بالنسبة لمضادات المضادات الحيوية، فإن التركيزات النهائية في الآبار هي 0.4، 0.2، 0.1، 0.05، 0.025، 0.0125، و 0.006 ملغم/مل 5-8 . من مخزون 25 ملغ / مل، وإعداد تخفيف 10x من 4، 2، 1، 0.5، 0.25، 0.125، و 0.06 ملغ / مل. غادر على الجليد.
    2. إزالة الناسخة المستهلكة (التي تحتوي على الخلايا العوالق) باستخدام ماصة متعددة القنوات (انظر الجدول 1).
    3. أضف 90 ميكرولتر M63 (ملغ/أرغ) إلى جميع الآبار.
    4. إضافة 10 ميكرولتر من كل تركيز المضادات الحيوية 10x من أجل تحقيق التركيزات النهائية المطلوبة. أضف 10 ميكرولتر من الماء (بدون مكافحة المضادات الحيوية) إلى البئر النهائي لكل تكرار وسلالة.
    5. احتضان لوحة microtiter لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية.
  3. تحديث الوسائط والسماح مفرزة من الخلايا الحية.
    1. إزالة الناسخة المستهلكة (التي تحتوي على الخلايا العوالق) باستخدام ماصة متعددة القنوات.
    2. أضف 115 ميكرولتر M63 (ملغ/آرغ) إلى جميع الآبار.
    3. احتضان لوحة microtiter لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية.
  4. الفحص للخلايا الحية.
    1. تسمية اثنين من لوحات أجار LB لكل لوحة microtiter 96 جيدا.
    2. تعقيم الجهاز متعدد الجوانب (انظر الجدول 1)عن طريق غمس شوكات في الإيثانول 100٪ وتمرير شوكات عبر الشعلة المفتوحة من الموقد بونسن. كرر. دع الشوكات تبرد قليلا. باستخدام الجهاز متعدد الجوانب، نقل ~ 3 ميكرولتر (المبلغ الذي يتم الاحتفاظ به عادة على نصائح من شوكات) من الثقافة العوالق من كل بئر من لوحة microtiter إلى سطح لوحة أجار LB.
    3. احتضان لوحات أجار LB لمدة 16 ساعة في 37 درجة مئوية.
    4. تحديد الحد الأدنى من تركيز مبيد الجراثيم من المضادات الحيوية عن طريق تحديد، عن طريق العين، وقطع لنمو البكتيريا (الشكل 1).

2. MBC-P

  1. إعداد السلالات البكتيرية
    1. تنمو ثقافة سلالة البرية من نوع الاهتمام وسلالة متحولة لمدة 16 ساعة في وسيلة غنية في 37 درجة مئوية.
    2. تمييع الثقافات المشبعة بين عشية وضحاها 1:100 في وسط جديد لمقاايسات مقاومة المضادات الحيوية. وسيلة قياسية ل P. aeruginosa هو M63 الحد الأدنى المتوسط تكملها كبريتات المغنيسيوم وأرجينين (انظر الجدول 1).
    3. أضف 90 ميكرولتر من التخفيف لكل بئر في طبق ميكروتتر 96 جيدا (انظر الجدول 1). وبما أن هذه المقايسات عادة ما يتم إجراؤها في ثلاث نسخ لكل سلالة، يجب أن يكون هناك 24 بئرا من كل سلالة.
  2. تعريض الخلايا العوالق لتدرج تركيز المضادات الحيوية
    1. إعداد 10x سلسلة من المضادات الحيوية المخفف 7 آبار. مثال: بالنسبة لمضادات المضادات الحيوية، فإن التركيزات النهائية في الآبار هي 0.032، 0.016، 0.008، 0.004، 0.002، 0.001، و 0.0005 ملغم/مل. من مخزون 25 ملغ / مل، وإعداد التخفيفات من 0.32، 0.16، 0.08، 0.04، 0.02، 0.01، و 0.005 ملغم / مل. غادر على الجليد.
    2. إضافة 10 ميكرولتر من كل تركيز المضادات الحيوية 10x من أجل تحقيق التركيزات النهائية المطلوبة. أضف 10 ميكرولتر من الماء (بدون مكافحة المضادات الحيوية) إلى البئر النهائي لكل تكرار وسلالة.
    3. احتضان لوحة microtiter لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية.
  3. الفحص للخلايا الحية.
    1. تسمية اثنين من لوحات أجار LB لكل لوحة microtiter 96 جيدا.
    2. تعقيم الجهاز متعدد الجوانب (انظر الجدول 1)عن طريق غمس شوكات في الإيثانول 100٪ وتمرير شوكات عبر الشعلة المفتوحة من الموقد بونسن. كرر. دع الشوكات تبرد قليلا. باستخدام الجهاز متعدد الجوانب، نقل ~ 3 ميكرولتر (المبلغ الذي يتم الاحتفاظ به عادة على نصائح من شوكات) من الثقافة العوالق من كل بئر من لوحة microtiter إلى سطح لوحة أجار LB.
    3. احتضان لوحات أجار LB لمدة 16 ساعة في 37 درجة مئوية.
    4. تحديد الحد الأدنى من تركيز مبيد الجراثيم من المضادات الحيوية عن طريق تحديد، عن طريق العين، وقطع لنمو البكتيريا (الشكل 2).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تم إجراء مقايسات MBC-P و MBC-B ، مقارنة حساسية نوع PA14 البرية مع PA14 ∆ndvB. تم استخدام البراميسين كممضادات حيوية. وتقدم النتائج المقابلة للخطوة 1-4-4(الشكل 1)والخطوة 2-3-4(الشكل 2). تم تلقيح PA14 و ∆ndvB في المقايسات MBC-P و MBC-B في ثلاثة نسخ. بعد الانتهاء من الخطوات 1.0-1.4 من بروتوكول MBC-B والخطوات 2.0-2.3 من بروتوكول MBC-P، تم طلاء الخلايا القابلة للحياة على لوحة أجار LB. يشار إلى تركيزات البراميسين(μغرام / مل) إلى يسار الخلايا. وMBC-B لPA14 هو 100 μغرام / مل وMBC-B ∆ndvB هو 12.5 μغرام / مل. وMBC-P لكل من PA14وndvB متحولة ∆ هو 8 μز / مل.

Figure 1
الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام 1 نتائج تمثيلية من مقايسة MBC-B مع نوع PA14 البرية مقابل PA14 ∆ndvB وتوبراميسين. تشير القيم إلى التركيز النهائي للبراميسين (μg/ml).

Figure 2
الشكل 2 - الأرقام 2- الأرقام التي تم نتائج تمثيلية من مقايسة MBC-P مع نوع PA14 البرية مقابل PA14 ∆ndvB وتوبراميسين. تشير القيم إلى التركيز النهائي للبراميسين(μغرام / مل).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

تعرف مقاومة المضادات الحيوية في الخلايا العوالق بأنها زيادة في الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) للمضادات الحيوية بسبب التغير الدائم في الخلايا(مثل الطفرة). آليات المقاومة أو التسامح بيو فيلم محددة التي تم تحديدها حتى الآن هي نتيجة للتعبير عن الجينات نوع البرية داخل الأغشية الحيوية. وبالتالي ، فإن التعريف الكلاسيكي للمقاومة لا ينطبق على الأغشية الحيوية. ومع ذلك ، تم تقديم مجموعة أخرى من التعريفات: آليات المقاومة تمنع المضادات الحيوية من الوصول إلى هدفها ، في حين أن آليات التسامح تغلق أهداف المضادات الحيوية10. تتضمن آليات مقاومة المضادات الحيوية الخاصة ببيو فيلم كلا التعريفين. وقد استخدم مصطلح "المقاومة" في جميع أنحاء هذا البروتوكول، ولكن يجب إجراء مزيد من التجارب من أجل تحديد ما إذا كان الجين يساهم في المقاومة أو التسامح.

يمكن تكييف المقايسات MBC-P و MBC-B لأي سلالة بكتيرية مكونة للبيو فيلم وأي عامل مضاد للميكروبات مبيد للجراثيم. المعياران المهمان لتكييف هذا المقايسة مع البكتيريا الأخرى وغيرها من العوامل المضادة للميكروبات هما تحديد الظروف التي تؤدي إلى تكوين بيو فيلم وتحديد النطاق المناسب للتركيزات لعامل مضادات الميكروبات باستخدام سلالة النوع البري من الاهتمام. يمكن تحديد ظروف تكوين بيو فيلم السليم باستخدام بروتوكول تشكيل بيو فيلم JoVE التي نشرتها جورج أوتول9. من أجل تحديد نطاق تركيز مناسب للمقاسة MBC-B، قاعدة جيدة من الإبهام هو استخدام 25 × هيئة التصنيع العسكري (الحد الأدنى من تركيزمثبطة 11) والتركيز الأوسط من النطاق وضبط وفقا لذلك. بالنسبة إلى المقايسة MBC-P، استخدم 1/10 من القيم المحددة لإجراء الفحص MBC-B. والهدف من ذلك هو تحديد مجموعة من التركيزات التي من شأنها أن تسمح بفرق واضح بين MBC-B من سلالة من النوع البري وسلالة متحولة حساسة. وبالتالي، يجب أن تكون الطرف العلوي من النطاق قريبة من MBC-B من سلالة البرية من نوع. نكرر هذه التجربة ثلاث مرات على الأقل، مع إعطاء ما لا يقل عن 9 نقاط بيانات لكل سلالة.

والخطوة الأكثر أهمية في هذه المقايسات هي تجنب التلوث. لمنع التلوث بين السلالات، يجب ترك عمود فارغ بين السلالات. خطوة أخرى حاسمة هي السماح بوقت كاف للشوكات المعدنية على الجهاز متعدد الجوانب لتبريد بما فيه الكفاية. ويمكن اختبار هذا عن طريق إشعال شوكات، وتوقيت فترة التبريد ولمس بسرعة شوكات بيديه.

إذا كان انفصال الخلايا عن بيو فيلم بعد التعرض للمضادات الحيوية مشكلة، يمكن تعديل طريقة MBC-B لتشمل خطوة سونيكيشن. تخطي الخطوة 1.3.3 (24 ساعة حضانة بعد إضافة وسائل الإعلام الجديدة). بدلا من ذلك، قم بتغطية آبار لوحة الميكروتتر ذات ال 96 بئرا بعد إضافة 115 ميكرولتر من الوسائط الطازجة (الخطوة 1.3.2) مع ختم لوحة لاصقة معقمة ولوحة سونيكاتي لطرد خلايا بيو فيلم من جدران الآبار. استخدام sonicator حمام مائي. يجب تحديد شروط محددة (الوقت والكثافة) لإزالة خلايا بيو فيلم بكفاءة من البلاستيك مسبقا.

تم استخدام اختلاف MBC-B لفحص مكتبة من 4000 متحول إدخال الإرسال والاستقبال من P. aeruginosa للمسوخ مقاومة المضادات الحيوية الخاصة بيو فيلم. تم اختيار تركيز البراميسين (50 ميكروغرام / مل) من شأنه أن لا يقتل خلايا بيو فيلم البرية ولكن من شأنه أن يسمح لتحديد المسوخ التي كانت 3 أضعاف أكثر حساسية من بيو فيلم نوع البرية. بدلا من تلقيح أعمدة من الآبار بسلالة واحدة محددة من البكتيريا، تم تلقيح كل بئر بتحول مختلف. تركت المسوخ لتشكيل بيو فيلم، تتعرض ل50 μز / مل التوبراميسين، تركت للتعافي من التعرض لتوبراميسين ومن ثم المقايسة على البقاء. وأعيد اختبار المسوخ التي لم تنجو من 50 μالتعرض لغاز/مل من البراميسين في ظل ظروف الفحص نفسها. واستخدمت بروتوكولات MBC-P و MBC-B لتأكيد الأنماط الظاهرية الحساسة للبراميسين للمسوخ.

هناك طرق أخرى لاقس مقاومة المضادات الحيوية في الأغشية الحيوية، أي الأغشية الحيوية مستعمرة والأغشية الحيوية التي تزرع في المفاعلات الحيوية12،13. هذه الأساليب هي أكثر بكثير شاقة ومحدودة في عدد من السلالات التي يمكن بسهولة أن يكون المقايسة. وبالتالي ، فإن الميزة التي يتمتع بها MBC-B على هذه الطرق الأخرى هي أنها عالية الإنتاجية ، مما يسمح للباحث بإجراء شاشات أو فحص العديد من السلالات ، بالإضافة إلى العديد من تركيزات المضادات الحيوية المختلفة في وقت واحد.

اسم الكاشف شركة رقم الفهرس تعليقات (اختياري)
1x M63 إعداد كمخزون M63 5x عن طريق حل 15 ز خ2PO4،35 زK 2HPO4 و 10 غرام (NH4)2SO4 في 1 لتر من الماء. هذا المخزون لا تحتاج إلى أن يكون autoclaved ويمكن تخزينها في درجة حرارة الغرفة.  تمييع 5X الأسهم 1:5، أوتوكلاف، بارد، ثم إضافة المكونات المطلوبة.
KH2PO4 صياد P285-500
K2HPO4 صياد P288-500
(NH4) 2 SO4 سيغما A5132
كبريتات المغنيسيوم صياد M63-500 أضف إلى التركيز النهائي 1 mM.  إعداد كمخزن 1 M في الماء وautclave.
توسبراميسين سيغما إعداد 50 ملغ / مل الأسهم. Aliquot وتخزينها في -20 درجة مئوية.
أرجينين سيغما A5131 أضف إلى التركيز النهائي 0.4٪.  إعداد كمخزن 20٪ في الماء وتعقيم مرشح.  هذا البديل الكربون / مصدر الطاقة يمكن أن تحل محل الجلوكوز وأحماض كازامينو
96 لوحة ميكروتاتر كورنينج 3595 عقم، مسطح القاع، تبخر منخفض
ترانفيربيت (ماصة متعددة القنوات) براند تك 2703610 8 قنوات، 20-200 ميكرولتر
جهاز متعدد prong دان كار MC48 48 شوكة تناسب 1/2 من لوحة microtiter 96 جيدا

الجدول 1 - الجداول 

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

وتعلن صاحبة البلاغ أنه ليس لديها مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgments

ويود المؤلف أن يشكر لي زانغ، وشيان زي لي، وآرون هينز، وكلايتون هول على المساعدة التحريرية في هذه المخطوطة. تم تطوير هذا المقايسة في البداية في مختبر جورج أوتول، كلية جيزيل للطب في دارتموث. ويدعم البحث في مختبر الدكتور ماه من المنح المقدمة من مجلس العلوم الطبيعية والبحوث الهندسية في كندا والتليف الكيسي كندا.

Materials

Name Company Catalog Number Comments

1x M63

Prepare as a 5x M63 stock by dissolving 15g KH2PO4, 35g K2HPO4 and 10g (NH4)2SO4 in 1 L of water. This stock does not need to be autoclaved and can be stored at room temperature.  Dilute 5x stock 1:5, autoclave, cool, then add the desired components.

KH2PO4

 Fisher

P285-500

K2HPO4

 Fisher

P288-500

(NH4)2SO4

 Sigma

A5132

Magnesium sulfate

 Fisher

M63-500

Add to 1 mM final concentration.  Prepare as a 1 M stock in water and autoclave.

Tobramycin

 Sigma

Prepare 50 mg/m stock. Aliquot and store at -20°C.

Arginine

 Sigma

A5131

Add to 0.4% final concentration.  Prepare as a 20% stock in water and filter sterilize.  This alternative carbon/energy source can replace glucose and casamino acids

96-well microtiter plates

 Corning

3595

Sterile, flat-bottom, low evaporation

Tranferpette (multichannel pipette)

 BrandTech

2703610

8-channel, 20-200 μl

Multiprong device

 Dan-Kar

MC48

48 prongs fit into ½ of a 96-well microtiter plate

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. Approved standard-eighth edition. , Ninth Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2009).
  2. Hoiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. Antibiotic resistance of bacterial biofilms. Int. J. Antimicrob. Agents. 35 (4), 322-332 (2010).
  3. Mah, T. F., O'Toole, G. A. Mechanisms of biofilm resistance to antimicrobial agents. Trends Microbiol. 9 (1), 34-39 (2001).
  4. Mah, T. F. Biofilm-specific antibiotic resistance. Future Microbiol. 7 (9), 1061-1072 (2012).
  5. Mah, T. F., Pitts, B., Pellock, B., Walker, G. C., Stewart, P. S., O'Toole, G. A. A genetic basis for Pseudomonas aeruginosa biofilm antibiotic resistance. Nature. 426 (6964), 306-310 (2003).
  6. Zhang, L., Mah, T. F. The Involvement of a Novel Efflux System in Biofilm-Specific Resistance to Antibiotics. J. Bacteriol. 190 (13), 4447-4452 (2008).
  7. Zhang, L., Hinz, A. J., Nadeau, J. P., Mah, T. F. Pseudomonas aeruginosa tssC1 Links Type VI Secretion and Biofilm-specific Antibiotic Resistance. J. Bacteriol. 193 (19), 5510-5513 (2011).
  8. Beaudoin, T., Zhang, L., Hinz, A. J., Parr, C. J., Mah, T. F. The Biofilm-Specific Antibiotic Resistance Gene, ndvB, is Important for Expression of Ethanol Oxidation Genes in Pseudomonas aeruginosa Biofilms. J. Bacteriol. 194 (12), 3128-3136 (2012).
  9. O'Toole, G. A. Microtiter Dish Biofilm Formation Assay. J. Vis. Exp. (47), e2437 (2011).
  10. Lewis, K. Multidrug tolerance of biofilms and persister cells. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 322, 107-131 (2008).
  11. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-First Informational Supplement. 31, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2011).
  12. Merritt, J. H., Kadouri, D. E., O'Toole, G. A. Growing and Analyzing Static Biofilms. Curr. Protoc. Microbiol. 1, J. Wiley & Sons. Hoboken, NJ. 1B.1.1-1B.1.17 (2005).
  13. Ramey, B. E., Parsek, M. R. Chapter 1. Growing and analyzing biofilms in fermenters. Curr. Protoc. Microbiol. 1, J. Wiley & Sons. Hoboken, NJ. 1B.3.1-1B.3.14 (2005).

Tags

علم المناعة، العدد 83، بيو فيلم، العوالق، مقاومة المضادات الحيوية، ثابت، مضاد للبكتيريا، الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC)
إنشاء الحد الأدنى من تركيز مبيد الجراثيم لعامل مضاد للميكروبات للخلايا العوالق (MBC-P) وخلايا بيو فيلم (MBC-B)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mah, T. F. Establishing the Minimal… More

Mah, T. F. Establishing the Minimal Bactericidal Concentration of an Antimicrobial Agent for Planktonic Cells (MBC-P) and Biofilm Cells (MBC-B). J. Vis. Exp. (83), e50854, doi:10.3791/50854 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter