Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Torkat blod Spot Insamling av hälso Biomarkörer för att maximera Deltagande i befolkningsstudier

Published: January 28, 2014 doi: 10.3791/50973

Summary

Biomarkörer är direkt uppmätta biologiska indikatorer på sjukdom eller hälsa. I befolkningen och samhällsvetenskap, biomarkörer måste vara lätt att få, transport, och analysera. Torkad Blood Spot (DBS) samling möter detta behov, kan samlas in i fält med hög svarsfrekvens och analyseras för en mängd olika biomarkörer.

Abstract

Biomarkörer är direkt uppmätta biologiska indikatorer på sjukdom, hälsa, exponering, eller annan biologisk information. I befolkningen och samhällsvetenskap, biomarkörer måste vara lätt att få, transport, och analysera. Torkat blod fläckar möta detta behov, och kan samlas in i fält med hög svarsfrekvens. Dessa faktorer är särskilt viktiga i longitudinella studiedesign inklusive interventioner där avgången är avgörande för att undvika, och höga svarsfrekvensen förbättra tolkningen av resultaten. Torkat blod Spot provsamling är enkel, snabb, relativt smärtfritt, mindre invasiva sedan venpunktion, och kräver minimalt fält lagring (dvs. prov behöver inte vara omedelbart fryses och kan lagras under lång tid i en stabil frysmiljö innan analys). Proverna kan analyseras för en mängd olika analyter, inklusive kolesterol, C-reaktivt protein, glykosylerat hemoglobin, många cytokiner och other analyter, såväl som tillhandahålla genetiskt material. DBS kollektionen är avbildad som anställd i flera nya studier.

Introduction

Biomarkörer kan ge värdefull information om biologiska processer som sträcker sig från normal till patogen som kan bidra till kliniskt identifierbar sjukdomar 1. I forskningsmiljöer är torkade blodfläckar (DBS) blir allt föredraget för venpunktion som en metod för insamling av biomarkörer i helblod. DBS kollektionen är enkel, relativt smärtfritt, mindre invasiva sedan venpunktion, och kräver minimalt lagringskrav (dvs. prov behöver inte omedelbart fryses och kan lagras under lång tid i en stabil frysmiljö före analys). DBS-prov kan testas under en mängd olika analyter, inklusive kolesterol, C-reaktivt protein, glykosylerat hemoglobin, Epstein-Barr-virusantikroppar, och flera cytokiner.

Venpunktion har länge varit den gyllene standarden för insamling av biomarkörer i blodet. Att ta fram, lagra och transportera blodprov krävs adherenCE för att ett antal protokoll och hälso koder, vilket kanske inte är möjligt att i vissa forskningsprotokoll. Phlebotomists måste certifieras officiellt för venpunktion, medan DBS provtagningsförfaranden är enklare och kräver ingen officiell certifiering. Venösa blodinsamling kräver också mer utrustning än vad DBS samling (dvs. nålar, rör, vändkors), och mer efter insamling insats. Venpunktion prover måste behandlas (dvs. serum eller plasma extraheras från blodprovet genom centrifugering eller stå i rumstemperatur under en viss tid) och fryses mellan -20 ° C och -70 ° C omedelbart för att förhindra nedbrytning av analyter , medan DBS prover måste helt enkelt får lufttorka och sedan kan förvaras i rumstemperatur i en vecka eller mer, beroende på analyt, innan överföring till en frys 2. DBS-proven är mindre kostsamt att samla än venpunktion prover för skäl som beskrivits ovan. DBS prover ocksåtar mindre plats, vilket minskar transport-och lagringskostnader före analys.

Användningen av saliv som biomarkör har blivit nyckeln i biobehavioral studier. Saliv erbjuder en enkel, icke-invasiv metod för att samla in biomarkörer och har blivit standard för fältarbete som syftar till att mäta kortisol eller kotinin 3-5. Urin är ett annat exemplar som kan samlas icke-invasivt och kan användas i befolkningsnivå studier för analyser av melatonin eller för toxikologi. Medan både urin och saliv erbjuder rakt fram insamlingsförfaranden som kan fyllas i av deltagarna själva, kan inte alla analyter mätas i dessa medier.

DBS erbjuder ett enkelt, kostnadseffektivt, alternativ till venpunktion och blir en allt genomfört forskning verktyg inom området och befolkningsstudier 6.

Protocol

Följande protokoll har godkänts av det tillämpliga granskningsnämnder och har utförts i enlighet med Helsingforsdeklarationen.

1. Innan du börjar: Standard Precuations

Se till att all provtagning personal har passerat NIOSH krävs blodburna patogener (BBP) Utbildning.

  1. Tekniska åtgärder
    1. Användning Food and Drug Administration godkänt vassa avfallsbehållare för att kassera använda sterila engångslansetter. Använd ett korrekt märkta bioavfall fat för något annat material som kommer i kontakt med eventuellt infekterat material.
    2. Överfyll inte behållaren för vassa föremål. Bara fylla en behållare för vassa föremål till 3/4 kapacitet innan du byter ut behållaren för att förhindra skador. Det är en indikator för compartmental fullhet på varje behållare för vassa föremål.
    3. Endast avyttra vassa föremål i avfallsbehållaren. Använd inte vassa föremål för någon othennes avfall.
    4. Släng alla nonsharp material som kommer i kontakt med potentiella BBP i ett korrekt märkta bioavfall fat.
  2. Personlig skyddsutrustning (PPE)
    1. Alltid korrekt använda skyddsutrustning för att skydda mot infektion från BBP. Skyddsutrustning som används vid insamling av DBS inkluderar handskar, rockar, ögonskydd, långa byxor och stängda Skor.
    2. Använd handskar för att hantera blod eller något som har kontaktat blod eller annat potentiellt smittsamma material (OPIMs). Handskar bör inte vara för hårt eller för löst, eftersom detta kan hämma processen med "mjölkning" (kommer att beskrivas senare). Bär inga ringar samtidigt samla blodfläckar som de skulle kunna punktera handsken.
    3. Använd skyddskläder för att skydda hud och kläder från blod och OPIMs. En skyddsrock som har kommit i kontakt med en BBP bör tvättas i en blekmedel / vattenlösning 10% före återanvändning. Oavsett exponering bör labbrock tvättas regelbundet för att hålla den cluta.
    4. Bär slutna rejäla skor för att skydda fötterna mot eventuell kontakt med blod och OPIMs.
    5. Om så önskas, skyddsglasögon för att skydda mot kontakt med blod och OPIMs grund av splatter.
    6. För att upprätthålla renlighet i en arbetsyta, ta bort all personlig skyddsutrustning innan de lämnar arbetsområdet för att undvika kontamine poster utanför labbet området.
  3. Arbetspraktik Kontroller
    1. Tvätta händerna med tvål och varmt vatten i 20 sek före och efter fysisk kontakt med varje deltagare. Använd en handduk för att stänga av rinnande vatten. Om en diskbänken inte är tillgänglig, använd en hand sanitizer på minst 60% alkohol.
    2. Oavsett möjligheten att tvätta händerna, använda alkohol Hand Sanitizer innan de ansöker och efter borttagning handskar. Använd tillräckligt med desinfektionsmedel för att täcka alla ytor på båda händerna och gnugga händerna tills den är torr. Skölj inte eller torka händerna torra med en handduk eftersom detta kommer att minska effekten av desinfektionsmedlet.
    3. Ät inte ellerdricka eller använda smink eller kontaktlinser i bloduppsamlingsområden. Personlig exponering för BBPS kan uppstå genom dessa vägar som är direktlinjer till slemhinnor.
    4. Hantera inte biologiskt material utan handskar och handha inga ofarliga material med handskar som tidigare har berört biologiskt material.
  4. Korrekt Hushållning
    God hushållning kommer att fortsätta att hjälpa till att skydda mot exponering för en BBP och kommer att förhindra korskontaminering av miljön.
    1. Använd virusdödande mikrobiella desinfektionsmedel våtservetter att ordentligt rena områden förorenats under DBS samling.
    2. Håll biologiskt eller förorenat avfall separat från vanliga papperskorgen, kontaminerat material är de som har synliga blod eller OPIM på dem.
  5. Exponeringsomfång
    Om de utsätts för en BBP, svara på följande sätt.
    1. Tvätta det utsatta området omedelbart och grundligt med tvål och vatten.Snabba åtgärder kan minska risken för infektion.
    2. Identifiera källan och sträckningen av exponering för att kunna förklara situationen för fältet handledare och / eller svarar läkaren.
    3. Meddela jour handledare omedelbart efter exponeringen sker. Det betonas att få stöd från ett fält handledare för att förstå graden av risk för infektion så det kan bedömas om omedelbar medicinsk behandling krävs. Riktlinjer som anges i särskilda exponeringskontroll planer (ECP) måste ges till alla dem som riskerar att utsättas för BBP.

2. Inställning av Kollektion Room och material

  1. Välj en provsamlingsplats som inte är avsedd för att äta, till exempel en breakroom, och som är fri från all orelaterade projekt utrustning. Man behöver inte vill vara i ett område som är trångt, det är viktigt att ha rörelsefrihet. Följande beskriver hur du ställer in den torkade blod-fläck samling (lab)-området.
  2. Ställ in biologiskt avfall fat och linje interiören med ett biologiskt avfallspåse. Avfalls fat ska vara tillgänglig när du sitter.
  3. Rengör uppsamlingsområdet noggrant med desinficerande våtservetter eller liknande produkt. Kassera alla material som används för att rengöra labbet området i biologiskt avfall fat. Använd handskar under detta steg för att skydda huden mot exponering för skadliga kemikalier.
  4. Byt handskar och ställa in resterande insamlings leveranser.
    1. Placera handskar och alkohol Hand Sanitizer på uppsamlingsbordet.
    2. Placera vassa föremål inom räckhåll för samlare stolen. Den vassa föremål bör hanteras med handskar hela tiden och sedan kasseras när den är full.
    3. Placera alla återstående material som krävs för DBS samling på en skyddande underpad i uppsamlingsområdet. Inkludera ett filterpapper samling kort, några lansetter, spritsuddar, gasbinda kuddar, och plåster, men inte alltför många så området är rörigt. Görinte ställa in mer än vad som kan användas för varje deltagare.

3. DBS Prov Cellection

Använd alltid skyddsutrustning (skyddsrock, handskar, långbyxor, slutna rejäla skor och om så önskas, skyddsglasögon) under samlingen och placera en skyddande underpad (CHUX) på varv för att skydda sina gångkläder.

  1. Förbereda deltagare:
    1. Efter att ha fått samtycke, be deltagaren om han / hon skulle föredra att använda vänster eller höger hand för insamling och väljer ett finger för indrivning. Undvik starkt calloused eller skadade (sargat) fingrar och eventuella ringed fingrar. Typiskt pinky och tumme inte är valda för att minimera deltagare smärta och underlätta insamling, respektive. Sidorna av fingertopparna används som uppsamlingsställe för konsekvens och enkelhet i samlingen.
    2. Har deltagaren gnugga händerna tillsammans för att värma sina händer och stimulera blodflödet. En hand warmer kan användas, eller deltagaren kan köra sina händer under varmt vatten om en diskbänk är tillgänglig. En annan teknik för att stimulera blodflödet skulle vara att ha deltagaren växelvis bita och slappna målet handen, sedan vila helt före fingerstick.
    3. Rengör valda fingret med en alkohol dyna och låt den torka helt. Upprepa med en andra våtservetten till att helt ta bort eventuella föroreningar eller handkrämer. Fingret ska vara helt torr innan du fortsätter med fingret stick eller alkohol kommer att förorena blodprovet. Som med alla material som används för insamling, omedelbart göra sig av spritkompresser de i biologiskt avfallsbehållare.
  2. Förberedelse av punktionsstället på deltagarens finger:
    1. Säkra deltagarens arm för att förhindra rörelse under insamling och för att slappna av i armen och handmuskler. Vila deltagarens armbågen på kanten av bordet eller i knät. Håll deltagarens handen positioned bekvämt under hjärtnivå och deras muskler avslappnad för att underlätta blodflödet.
    2. Ta tag i valda fingret mellan tummen och pekfingret och försiktigt mjölka fingret genom att långsamt och stadigt klämma fingret medan du flyttar grepp från handflatan till fingerspets för att dra blod mot fingertoppen.
    3. Tryck på mikro lansett stadigt mot deltagarens fingret vinkelrätt mot fingeravtryck och ladda ur Lancet. Gör inte hål i mitten av fingret eller nära nagelbädden, utan sikta mellan dessa två punkter, på ulnar sidan av fingret. Omedelbart kassera den använda lansetten i avfallsbehållaren.
  3. Samla blodfläckar:
    1. Torka den första droppen av blod bort med en steril kompress för att avlägsna vävnadsvätska från provet och omedelbart kassera gasväven in i biologiskt avfall fat.
    2. Under upprätthållande deltagarens handen under sitt hjärta med en nedåtriktad vinkel, allmtly mjölka handen utgångs vid handleden och arbeta ner till basen på fingret för att producera blod. Inte bara pressa fingret, eftersom detta kommer att minska blodflödet. Mjölk fingret tills en stor droppe hänger från fingertoppen.
    3. Samla fläckar med hjälp av uppsamlingspapper.
      1. Sätt försiktigt samling papper nedanför fingret och låta droppen falla av sin egen vikt. Detta möjliggör insamling av blodfläckar på högsta volym. Om blod pooler på filterpapper, det vill säga "pärlor", knacka försiktigt på kortet för att stimulera blod att mätta in i papperet.
      2. Om blodet är alltför viskös eller dropparna är för små för att falla av sin egen vikt långsamt upp den samling papper i kontakt med bloddroppen för att absorbera blod från fingret via kapillärverkan utan att röra fingret. Om fingret vidrör samling papper, flytta till en annan plats på papperet så att uppsamlingsområdet har äventyrats. Deltagarens finger should Rör aldrig filterpapper.
      3. Placera inte bloddroppar ovanpå varandra, även om en blodfläck inte fyller samlingen cirkeln.
      4. Låt inte blodet köra ner fingret eller på nageln som det gör samlingen av stora fläckar svårare.
    4. Om deltagarens blodproppar som helst under insamlingsprocessen, be om lov att sticka ett annat finger, sedan ren och bandage initialpunktionsställe och börja om, om framställningen godtas.
      1. För att förhindra koagulering, fortsätta mjölka deltagarens finger för att hålla blodet flyter eller prova ordentligt torka av punktering med steril gasbinda för att störa proppbildning.
        OBS: Efterföljande fingerkäppar kan vara nödvändiga för ett par anledningar: Ett kallt rum kan medföra en snabbare koagulering, även viskositeten av deltagarnas blod kan inte vara perfekt, eller dålig mjölkningsteknik kan också påverka blodflödet. Handvärmare eller rinnande varmt vatten, som används före punkturen kan reversera effekten av ett kallt rum.
    5. När DBS har samlats in, eller om deltagaren inte vill efterföljande fingerkäppar, rengör stickstället av någon främmande blod.
    6. Bandage stickstället för att förhindra eventuella föroreningar när deltagaren lämnar provsamlingen området.
  4. FI Kvalitetskontroll (QC) bedömning:
    Efter avslutad provtagning, bedöma prover för kvalitet. Se till fläckar är 1) minst 0,375 i diameter mätt från baksidan av uppsamlingsområdet, 2) adekvat dränkts genom insamling papper för att vara av liknande storlek på båda sidor av filterpapper, fläckar som inte uppfyller detta kriterium anger insamling via kontakt med fingret till samlingen papper och sannolikt smetar, 3) inte är i kontakt med varandra (överlappande områden av fläckar är inte analyserbar).
  5. Slutföra provtagning
    1. Efter guidelines som beskrivs i steg 1,1, avyttra kvarvarande förorenade insamlingsmaterial, inklusive eventuella föremål som kan ha varit i kontakt med potentiellt smittsamt.
    2. Stå samlingen papper på ett skyddande undermatta för att torka. Space insamlings kort för att tillåta bra luftflöde mellan dem. Den minsta mängd tid att lufttorka är 15 min, företrädesvis åtminstone 30 min. För att möjliggöra maximalt luftflöde, är det viktigt att lägga sig på baksidan av insamlingen kortet på ett sådant sätt att den kan stå fritt och ge luftflöde bakom proverna om insamling papper.
    3. Med alla steg klar, ta bort skyddsutrustning.
  6. Svar på ett ämne känsla svag eller inte väl
    Även osannolikt, kan en deltagare blir yr, yr eller svimmar under eller efter finger stick. Var uppmärksam på tecken såsom blekhet, svettning i ansiktet och pannan, klagomål av suddighet vision, hängande eller fladdrande ögonlock, eller klagomål av illamående. Uppkomsten av tessa symtom är ofta plötsligt, prov samlare måste vara beredda att reagera snabbt om någon av symptomen är synliga. Om något av dessa symtom förekommer när som helst under förfarandet, reagerar enligt följande procedurer.
    1. Om en deltagare känner sig svag, yr, yr, eller visar tecken på att svimma, vidta följande åtgärder:
      1. Stoppa proceduren.
      2. Se till att deltagaren inte faller eller blir skadade.
      3. Lugnt lugna deltagaren och om nödvändigt, be deltagaren att böja i midjan och satte hans / hennes huvud mellan hans / hennes ben. Om rörlighet är begränsad och deltagaren kan flyttas, kan en intilliggande vadde läge användas för att vila.
      4. Har deltagaren vila i 10 min.
      5. Återuppta förfarandet om deltagaren samtycker för att fortsätta.
    2. Om en deltagare svimmar, vidta följande åtgärder:
      1. Stoppa proceduren.
      2. Se till attdeltagaren inte faller eller blir skadade.
      3. Har deltagaren ligger på hans / hennes rygg så fort som möjligt med fötterna förhöjda. Deltagaren kommer att instrueras att ligga ner direkt från sittande ställning utan att stå upp.
      4. Be deltagaren att lossa åtsittande kläder.
      5. Har deltagaren vila i 10 min.
      6. Blod fläck samling bör inte fortsätta.
      7. Om deltagaren inte svarar efter 1 min, ring 911.
  7. Bryta ned labbet området:
    När insamling av blodfläckar har slutförts, skall uppsamlingsområdet brytas ned och området saneras för att se till att passer-Bysen kommer inte vara smittad med BBP. Samlingen blodområdet, måste behållarna utrustning, insamling av material och avfallsbehållare vara rena för BBP. Som alltid bära skyddsutrustning vid hantering av potentiellt smittsamt.
    1. Ta bort från uppsamlingsområdet ochpacka allt förorenat material.
    2. Kassera eventuellt kvar förorenat avfall i bioavfall fat.
    3. Stäng avfallsbehållaren och förvara den på en plats som ger skydd mot föroreningar. Om avfallsbehållaren är 3/4, på lämpligt sätt göra sig av med den och ersätta med en ny behållare för vassa föremål.
    4. Torka hela provtagning område med virusdödande mikrobiella desinficerande våtservetter.
    5. När allt biologiskt material som har avyttrats, kan den biologiskt påsen autoklaveras. Vid borttagning av påsen från avfall fat, vara försiktig att endast vidröra utsidan av påsen och förslut påsen ordentligt. Det är också bra att använda virusdödande mikrobiella våtservetter för att rengöra utsidan av all utrustning för att förhindra korskontaminering.

4. Utbildning för att samla DBS

Kontrollera alla torkat blod fläck samlare är certifierad av en kvalificerad person innan du utför det förfarande på patienter eller försökspersoner. Se till samlare visar respekt för deltagarna, självförtroende och färdigheter i användning av skyddsutrustning och insamlingsblodförsörjningen, i samlingen av fläckar av tillräcklig volym, och att slutföra förfarandet i tid och på ett effektivt sätt, helst på under 10 minuter.

5. Prov Förpackning och lagring

  1. Se till DBS prover har torkat i minst 15 minuter innan de säckar för lagring, kan en mättad kort tar 30 minuter eller längre för att adekvat torka. Stäng samling kortluckan och se till provet är helt torr för att förhindra utsmetning och förorena provet.
  2. Ta ett biologiskt exemplar påsen och placera en torkmedelspåse i provpåsen. Placera DBS provet i biologiskt exemplar påsen. Använd alltid handskar vid hantering av DBS prover. Låt inte blodproven vidröra utsidan av preparatpåse.
  3. Placera varje prov på sitt eget biologiskt provpåse kvickhetha torkmedel paket. Platta påsen för att avlägsna överskott av luft och sedan försegla påsen tätt. Placera säckar provet i ett förvarings kylare för transport eller tillfällig förvaring. Undvik förhöjda temperaturer.
  4. Frysa eller analys DBS prov inom två veckor för insamling, som DBS-prov kan vanligtvis förvaras i rumstemperatur i två veckor utan väsentlig försämring beroende på analyt 7,2.

6. Prov Transport och Leverans

  1. Om inte känd för att innehålla smittämnen, fartygs torkat blod fläck prover som är undantagna prover från människa enligt US Department of Transportation föreskrifter och i enlighet med del 2, kapitel 6, § 6.3.2.3.6 av International Civil Aviation Organization (ICAO) tekniska instruktioner 8 .
  2. Om fryst, fartygsprover över en natt på torris med erforderliga extra försiktighetsåtgärder för farliga ämnen, eller med gelpaks fryses till -80 ° C. Fartyg på måndag-onsdagför att undvika att tina i transit på grund av förseningar eller helger / helgdagar, med bekräftelse från den mottagande platsen som de förväntar sig och kan ta emot och frysa proverna.

7. Bedömning Kvalitetskontroll

  1. Efter insamling och före analys (företrädesvis före frysning för att minimera antalet frysnings-upptiningscykler) bedöma prover för kvalitet.
  2. Ta med följande kriterier i bedömningen av provkvalitet, korrekt förpackning, färgkodade torkmedel förblir intakt (torr), mättnad av fläckar, storleken på fläckar, rätt insamlingsmetoder inklusive fläckar inte överlappande eller utsmetad på kortet indikerar kontakt med ämnet finger.

8. Frys Förvaring

Även om nedbrytningstider skiljer sig med analyt, frysa DBS prov inom två veckor kollektion för bästa resultat. Freeze prover med torkmedel i ett laboratorium-grade frys. Som med alla biologiska prov, minimera frys-tö cycles, även om vissa analyser i DBS prover har visat några tecken på försämring i upp till sex frys-tö cykler 9-11.

Representative Results

Figur 1
Figur 1. Torkat blod fläck prov. En samling kort visas med fyra, giltiga insamlade fläckar i processen för torkning. Klicka här för att visa en större bild.

Figur 2
Figur 2. Bra och dåligt torkade blodstickprover. Resultat av framgångsrik (höger) och misslyckade (vänster) DBS samling visas. Klicka här för att visa en större imålder.

Figur 3
Figur 3. Chefer förhållningssätt och metoder i samband med risk anställda kardiometabola sjukdomar 6. Siffran har modifierats Berkman, LF, Buxton, OM, Ertel, K. & Okechukwu, C. Managers praxis i samband med arbete-familj balans förutse personal kardiovaskulära risk-och sömntiden i utökade vård. Journal of Occupational Health Psychology 115, 316-329 (2010). Anställda som utsätts för chefer med mitten eller låga arbets familjen betyg för öppenhet och kreativitet för att hjälpa till med sina anställdas arbete och familj behöver, har statistiskt signifikant ökad oddsen för att ha två eller flera kardiovaskulära risker (nuvarande rökare, fetma, högt blodtryck eller hypertension, högt kolesterol och högt glykosylerat hemoglobin (Hb A1C) eller diabetesdiagnos). Topp-och mellan paneler skildra medelvärden ± standardavvikelser för totalkolesterol bedöms av torkat blod fläck och Hb A1C bedöms av vårdenheten (som också kan vara ett tillförlitligt sätt av torkade blodfläckar). Undre panel visar kardiovaskulär risk sjukdom genom manager poäng. Analys begränsad till sjuksköterskor och andra anställda som direkt vård tyder på att exponering för chefer med låg kreativitet och öppenhet i samband med arbete-familjen frågor kan vara särskilt viktigt för dessa individer (eller för lågt WF poäng = 6,4, p = 0,01). Alla modeller kontrollerar för ålder, kön, lön, utbildning, ras / etnicitet, och arbetsplatsen. Klicka här för att visa en större bild.

Discussion

Biomarkörer är mycket användbara verktyg i flera discipliner, bland annat medicin, cellbiologi, genetik, psykologi, sociologi, demografi, och social epidemiologi. Inom varje disciplin, var tidig fas validitet och reliabilitet biomarkerforskning används för att avslöja både dolda sjukdomsrisk och ge longitudinell förutsägelse av hälsoresultat. I dessa fall, biomarkörer som är noggrann, hållbara (dvs. de kan överleva den eftersläpning mellan insamling och genomförande av labbet analysprovet att extrahera biomarkörer), och mångsidig (dvs. användbar i en mängd olika modeller) är obligatoriska.

Medan DBS kollektion är en relativt enkel procedur, kan flera tekniker att maximera volymen av insamlade fläckar. Innan insamlingen påbörjas, vilket garanterar en deltagares handen är varm, och därför att blodkärlen är vidgade, hjälper blodflödet när fingret är punkterad. Med hjälp av handvärmare eller som har endeltagare kör händerna under varmt vatten kan hjälpa till med denna process. Mjölkning fingret innan kollektionen kommer att dra blod till fingerspetsen och värma handen för att hjälpa blodflödet. Mjölkningen är en process som förbättrar med praktik. Samlare bör använda någon teknik som de tycker är mest bekvämt och effektivt, men den vanligaste metoden innebär mjölkning deltagarens hand med samlar andra handen. Denna metod gör det möjligt för samlare tumme att arbeta djupt in deltagarens flata medan den andra handen kan stabilisera deltagarens handled. Som ett exempel, om en var insamling av blod från ett finger på deltagarens vänstra sidan skulle kollektorn stabilisera deltagarens handled med sin vänstra hand och mjölk med sin högra hand. Vanliga misstag när mjölkningen inte inkluderar användning av ett fast grepp, att dra i huden ovanför handen i stället arbeta i musklerna att dra blod mot fingerspetsen. Det är också viktigt att undvika att tappenching fingret med mjölknings hand eller tätt gripande deltagarens handled med nonmilking sidan, vilka båda hindra blodflödet.

När punktera fingret, göra punktering så djupt som möjligt genom att stadigt trycka lansett i fingret före utsläpp. Ett grunt punktering resulterar i mindre blodflöde och snabbare koagulering. Efter att punktera fingret, är nyckeln att arbeta snabbt. Tunt blod leder till enklare insamling och större fläckar. Efter punktering, blir blodet mer trögflytande till koagulering. Ju mindre tid som krävs för att samla in blodfläckar på kortet desto större volym.

Helst deltagarens blod kommer att vara tillräckligt tunn som droppar kommer att falla av sin egen vikt, men det kommer inte att vara fallet för alla deltagare, som vissa människors blod är tjockare eller blodproppar snabbare än andra. Om blodet är för tjock för att falla från fingret, måste filterkortet föras till blodet för indrivning. Whsv föra kortet till blodet är det viktigt att hålla kortet i kontakt med droppen, medan den hänger från fingret så länge som möjligt, snarare än bara dabbing blodet till kortet. Detta kommer att hjälpa drag blod från fingret för att maximera storleken på fläcken. Denna teknik kräver stadiga händer för att hålla kontakt mellan blod och kortet. Använd båda händerna och en stadig deltagare handen och en för att hålla kortet, och hålla båda händerna i kontakt med varandra hjälper till att stabilisera kortet och blod tillsammans.

Avancerade forskningsområden, exempelvis cardiometabolic riskbedömning, har länge förlitat sig på biomarkörer såsom C-reaktivt protein (CRP), insulin, och glykosylerat hemoglobin (HbA1c) för tidig risk upptäckt och förebyggande insatser, samt biomarkörer för "hard endpoints" för hjärt-kärlsjukdom (CVD) risk-och CVD-associerad dödlighet 12. Klinisk epidemiologi bedömer ofta biomarkörer att prospectively förutse kardiometabola riskresultat såsom hjärtsjukdomar och diabetes typ II. Kanske är den mest använda av alla biomarkörer är Framingham riskpoäng, en komposit som inkluderar blodtryck, HDL-kolesterol och total kolesterol nivåer som har visat användbarhet i att förutsäga CVD 13. Däremot har Framingham poäng upplevt några tekniska kontroverser, och har begränsningar i studier fokuserade på att koppla sociala och miljömässiga faktorer för hälsan, vilket tyder på att det behövs mer exakta och specifika biomarkörer relaterade till kardiovaskulär forskning.

Det finns ett antal kommersiellt tillgängliga kit som använder ELISA eller liknande tekniker är tillgängliga för analys av DBS-prover. Nödvändigt för analysen av DBS-prover är användningen av specifika och optimerade elueringsstegen att föra de torkade proven i lösning 2. Detta är ett växande forskningsområde som analyser för flera analyter utvecklas för närvarande 1. Bland the-analyser som redan validerats och används utbrett är kolesterol 2, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, leptin 17, och cyotkines 18. Det finns ett antal laboratorier som specialiserat sig på analys av DBS, bland annat University of Washington Institutionen för laboratoriemedicin (UW Lab Med) Biomarkör Laboratory (Regi: Mark Wener).

Med tanke på att en panel av biomarkörer, snarare än en ensam biomarkör, är mest användbar inom områdena hjärt-och diabetesforskning, biomarkörer måste beaktas tillsammans med en rad olika kontextuella faktorer för att maximera deras nytta. Biomarkerforskning kan bli dyrt dock, både ekonomiskt och i tid för datainsamling. Medan det är viktigt att välja biomarkörer som är korrekta, varaktig och mångsidig, arbete och familj biomarkerforskning måste förankras i praktiska genom att välja biomarkörer som är billiga, är lämpligt och kan samlas in snabbt with lätthet. Dessutom praktiska överväganden leder ofta till en oförmåga att samtidigt maximera pris, kvalitet och hastighet i en procedur. Häri ligger nästa steg i hälso biomarkerforskning inom fält-och befolkningsstudier. Området biomarkerforskning är inne i en period av kraftig tillväxt, men det är ändå det mesta av arbetet för att komma.

Disclosures

Orfeu Buxton har fått en utredare-initierade bidrag från Sepracor Inc (numera Sunovion, ESRC-0977, ClinicalTrials.gov identifierare NCT00900159), fungerar som konsult och expertvittne för Dinsmore LLC, i Scientific Advisory Board i Matsutani America, och fått konsult avgifter från Wake Forest University Medical Center.

Acknowledgments

Detta arbete stöddes av arbete, familj och hälsa Network (www.WorkFamilyHealthNetwork.org), som finansieras av ett samarbetsavtal med National Institutes of Health och Centers for Disease Control and Prevention: Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health och mänsklig utveckling (Grant # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), National Institute on Aging (Grant # U01AG027669), Office of Behavioral och vetenskap Sciences Research, National Heart, Lung and Blood Institute (R01HL107240), och Nationella institutet för arbetarskydd Safety and Health (Grant # U01OH008788, U01HD059773). Bidrag från William T. Grant Foundation, Alfred P Sloan Foundation, och administrationen för barn och familjer har ytterligare medel. Innehållet i denna publikation är helt och hållet författarnas egna och representerar inte nödvändigtvis officiella ståndpunkter dessa institut och kontor.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Asepti II Microbial Wipes EcoLab D12330345 3rd party shipping
Biohazard waste bags VWR 14220-092 High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil
Biohazard waste barrel Tyco 58578-092 8 g Slide lid
Sharps Container BD Medical BD305487 1.4 qt
Chux VWR 82020-845 Absorbent bench underpads 
Gloves VWR XSmall: 89038-267 Powder-free, latex-free nitrile gloves
Small: 89038-268
Medium: 89038-270
Large: 89038-272
XLarge: 89038-274
Hand sanitizer (e.g. Purell) Johnson Johnson 89040-210 3rd party shipping
Alcohol wipes Webcol and Curity 82003-856 Prep pads
Gauze Versalon 82004-826 Nonwoven sponges
Band-Aids Nutramax Stat Strips 15431-475
Lancets Owen Mumford 82028-060 3.0 mm, 21 G 
Protein paper collection cards Whatman Custom-build 903 Protein Saver Collection paper
Desiccant VWR 61161-319 Humidity sponges
Specimen bags Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip 56766-370 6 in x 9 in
Specimen storage cooler Igloo Playmate Mini 4 qt; direct from manufacturer

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. McDade, T. W., Williams, S., Snodgrass, J. J. What a drop can do: dried blood spots as a minimally invasive method for integrating biomarkers into population-based research. Demography. 44, 899-925 (2007).
  2. Kirschbaum, C., Read, G. F., Hellhammer, D. H. Assessment of hormone and drugs in saliva in biobehavioral research. , Hogrefe & Huber Publishers. (1992).
  3. Piazza, J. R., Almeida, D. M., Dmitrieva, N. O., Klein, L. C. Frontiers in the use of biomarkers of health in research on stress and aging. J. Gerontol. Series B Psychol. Sci. Soc. Sci. 65, 513-525 (2010).
  4. Smyth, J. M. Individual differences in the diurnal cycle of cortisol. Psychoneuroendocrinology. 22, 89-105 (1997).
  5. Berkman, L. F., Buxton, O. M., Ertel, K., Okechukwu, C. Manager's practices related to work-family balance predict employee cardiovascular risk and sleep duration in extended care settings. J. Occup. Health Psychol. 115, 316-329 (2010).
  6. Buxton, O. M., Malarick, K., Wang, W., Seeman, T. Changes in dried blood spot Hb A1c with varied postcollection conditions. Clin. Chem. 55, 1034-1036 (2009).
  7. International Civil Aviation Organization. Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air. , (2010).
  8. McDade, T. W. Epstein-Barr virus antibodies in whole blood spots: a minimally invasive method for assessing an aspect of cell-mediated immunity. Psychosom. Med. 62, 560-567 (2000).
  9. McDade, T. W., Burhop, J., Dohnal, J. High-sensitivity enzyme immunoassay for C-reactive protein in dried blood spots. Clin. Chem. 50, 652-654 (2004).
  10. McDade, T. W., Shell-Duncan, B. Whole blood collected on filter paper provides a minimally invasive method for assessing human transferrin receptor level. J. Nutr. 132, 3760-3763 (2002).
  11. Gerszten, R. E., Wang, T. J. The search for new cardiovascular biomarkers. Nature. 451, 949-952 (2008).
  12. D'Agostino, R. B., Grundy, S., Sullivan, L. M., Wilson, P. Validation of the Framingham coronary heart disease prediction scores: results of a multiple ethnic groups investigation. J. Am. Med. Assoc. 286, 180-187 (2001).
  13. McDade, T. W., Rutehrford, J., Adair, L., Kuzawa, C. W. Early origins of inflammation: microbial exposures in infancy predict lower levels of C-reactive protein in adulthood. Proc. R Soc. B.. , (2009).
  14. McDade, T. W. Measuring Stress in Humans. A Practical Guide for the Field. Ice, G. H., James, G. D. , Cambridge University Press. 181-207 (2007).
  15. Tanner, S., McDade, T. W. Enzyme immunoassay for total immunoglobulin E in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. 19, 440-442 (2007).
  16. Miller, A. A., Sharrock, K. C., McDade, T. W. Measurement of leptin in dried blood spot samples. Am. J. Hum. Biol. 18, 857-860 (2006).
  17. Miller, E. M., McDade, T. W. A highly sensitive immunoassay for interleukin-6 in dried blood spots. Am. J. Hum. Biol. , (2012).

Tags

Medicin torkade blodfläckar (DBS) biomarkörer cardiometabolic risk Inflammation vanliga försiktighetsåtgärder blodinsamling
Torkat blod Spot Insamling av hälso Biomarkörer för att maximera Deltagande i befolkningsstudier
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ostler, M. W., Porter, J. H.,More

Ostler, M. W., Porter, J. H., Buxton, O. M. Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies. J. Vis. Exp. (83), e50973, doi:10.3791/50973 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter