Summary
Almindeligt anvendte, er meget tilgængelige metoder til at undersøge celle migration og invasion in vitro beskrevet. Den første metode er den celle sårlukning assay, der måler cellemotilitet. Den anden metode er den transwell migration og invasion assay, der vurderer det kemotaktiske og invasive kapacitet af celler.
Introduction
Motilitet er et væsentligt element i levende celler. Cell migration er involveret i udformningen af livet, fosterudvikling, immunrespons, og mange patologiske processer, såsom cancer metastaser og inflammation 1-9. Derfor metoder til at studere celle vandringsadfærd er meget nyttige forskning værktøjer til en bred vifte af discipliner i biomedicinske videnskaber, biologi, bioteknik og felter relateret.
Studiet af celle migration i kræftforskning er af særlig interesse som den vigtigste dødsårsag i kræftpatienter er relateret til metastatisk progression. For kræft til at sprede og udbrede i hele kroppen, skal kræftceller migrere og invadere gennem ekstracellulær matrix (ECM), intravasate i blodcirkulationen, tillægger et fjernt sted, og endelig ekstravasere at danne fjernt foci 1,10-12. Forskellige biologiske metoder kan anvendes til at studere disse begivenheder i detaljer. Cellekultur sår lukning en Dend den transwell migration og invasion assays er meget udbredt i det videnskabelige samfund 1,10. Disse tests kan give den nødvendige data, der kan give mulighed for en forståelse af, hvor godt en bestemt celletype kan spontant migrere eller svare på en kemo-lokkemidler og retningsbestemt migrere mod det. Adskillige vandrende fænotyper er blevet beskrevet. Celler kan migrere i en enkelt celle form, som det ses i mesenchymale eller amoeboid-lignende bevægelse eller flercellede bevægelse mærket kollektiv migration eller celle streaming 13. Fremgangsmåden til bevægelse anvendes i motile celler kan let observeres ved hjælp af cellekultur sårlukning assay.
Blandt de mange måder at studere cellemigrering cellen sårlukning assayet er en af de enkleste. Denne metode er nyttig til at bestemme migrationen evne helcelle masserne. Når taget et skridt videre den kan bruges til at observere de enkelte celles morfologiske kendetegn ved migration 14. Efter analysen af sårlukning mange fænotyper kan blive afsløret. Måling af lukkede distance over tid, når man sammenligner med en kontrol kan afsløre specifikke ændringer migration eller en forringet vandrende fænotype, der var ukendt tidligere. Desuden kan enkelt celle lamellipodium dannelse, hale tilbagetrækning, og retningsbestemt bevægelse give fingerpeg til, hvad der kan blive forringet eller forøget i cellerne af interesse 14.
The transwell migration og invasion-assays kan anvendes til at analysere evnen af enkelte celler til retningsbestemt reagerer på forskellige kemo-tiltrækningsmidler om de er kemokiner, vækstfaktorer, lipider eller nukleotider 4,5,8,15,16. Det kan også vurdere forskellen vandrende evne på grund af overekspression af en receptor 1,14. Disse assays kan også anvendes til at identificere og karakterisere de vigtige regulatorer af cellemigrering, såsom Rho familie af små GTPaser 2. Efter disse korte og let tilgængeligerende prøver, den tilstand af cellemigrering og en celles evne til at invadere i en 3-D matrix kan også bestemmes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Cellekultur sårlukning Assay
- Frigør cellerne fra vævskulturplade anvendelse af 0,25% trypsin-EDTA-opløsning. Pellet-celler i et 15 ml konisk rør ved centrifugering aspireres supernatanten og resuspender cellerne i dyrkningsmediet. Plate et passende antal celler i en 6-brønds plade til 100% konfluens i 24 timer.
Bemærk: Prøver kan være nødvendige for at bestemme tid og antallet af celler for at opnå 100% konfluens på grund af celletypen og størrelsen af brønden anvendes (for eksempel, er 1 x 10 6 B16F10 melanom celler podet i en brønd af en 6-brønds plade 24 timer før såret generation). Alternativt kan 12-well eller 24-brønds plader anvendes.
Bemærk: Hvis det er tilgængeligt, kan celler podet i en kultur-Insert (fra ibidi LLC) på en behandlet vævskulturplade gør såret pre-støbt. En kultur-Insert kan beskytte overfladen af vævskulturpladen fra skader ved pipettespidsen. Hvis en kultur-Insert bruges springes1.2. - I et sterilt miljø (typisk en biosikkerhed hætte) anvender en 200 ul pipettespidsen trykker fast mod toppen af vævskulturplade og hurtigt gøre en lodret sår ned gennem cellemonolaget. En anden størrelse pipettespids kan anvendes til at gøre såret størrelse, der er ønsket. Brug ikke overdreven kraft mod vævskulturpladen med pipettespidsen da det kan beskadige overfladen. Hvis såret er præ-støbt, kan dette trin udelades.
- Aspireres forsigtigt medierne og celle debris. Tilsæt langsomt nok dyrkningsmedier mod brøndvæggen til at dække bunden af brønden og undgå afmontering yderligere celler. Efter generering og inspektion af såret en indledende billede skal tages. Placer vævskulturplade i en inkubator indstillet på passende temperatur og CO 2-koncentration (typisk 37 ° C og 5% CO 2).
- På flere tidspunkter, fx hver 3 timer fjernes pladen fra incubateller og placere den under et inverteret mikroskop til at tage et snapshot billede og for at kontrollere sår lukning. Hvis time-lapse mikroskopi er tilgængelig, tage et billede hver X antal minutter (typisk starter med hver 5 minutter) til enhver tid varighed i en temperatur og CO 2-kammer. Afhængig af celletypen kan sårlukning tid varierer.
- At analysere resultaterne af snapshot billeder, måle afstanden af den ene side af såret til den anden ved hjælp af en skala bar. Analysere og tydeligt til stede sårlukning over tid ved hjælp af et punktdiagram eller søjlediagram, fx Figur 1.
- At analysere time-lapse billeder, importere billederne ind i ImageJ software (frit tilgængelig på http://rsb.info.nih.gov/ij/) for at lave en video. For at gøre dette åbne ImageJ klikke på Fil, Import, og Image Sequence. Find filen med billeder; klik på det første foto i filen. Spar video ved at vælge Filer, Gem som, og AVI. Enkelte migrerende celler kan iagttages til Characterize retningsbestemt bevægelse. Desuden kan morfologiske karakteristika såsom lamellipodia dannelse og bagkant tilbagetrækning blive undersøgt så godt (figur 2 og supplerende video).
2.. Transwell Cell Migration og Invasion Assay
- I et sterilt miljø (typisk en biosikkerhed hætte) løsne celler fra vævskultur pladen ved hjælp af en ikke-enzymatisk celle dissociation buffer eller 0,25% trypsin-EDTA-opløsning, pellet cellerne ved centrifugering, og aspireres eksisterende medier forlader de pelleterede celler. Resuspender cellerne i serumfrit cellekulturmedium indeholdende 0,1% BSA (bovint serumalbumin).
Bemærk: Afhængigt af cellelinien undersøges 0,25% trypsin-EDTA kan påvirke cellemigration og invasion på grund af spaltning af forskellige receptorer på celleoverfladen 17.
Bemærk: Antallet af celler pr ml afhænger af størrelsen af cellerne. Yderligere tests kan være nødvendig for at finde en podningstæthed at Probestemmer de bedste resultater. Typisk 1 x 10 6 celler / ml er et godt udgangspunkt for de fleste celletyper ved brug af 24-godt Transwell indsætte. Der er en række Transwell skærstørrelser og antallet af tilsatte celler bør tilpasses i overensstemmelse hermed. - Plade 100 pi celle opløsning oven på filtermembranen i transwell indsatsen og inkuberes i 10 minutter ved 37 ° C og 5% CO2 for at tillade celler at bundfælde sig.
Bemærk: Det porestørrelse transwell membran, som anvendes, er afhængig af den individuelle størrelse af cellerne i prøven. For eksempel, hvis cellerne er for små, at de kan passere gennem porerne uden behov for at lette overgangen, eller hvis de er for store, kan de ikke passer gennem porerne. Der er flere Transwell skær med pore størrelser, der spænder fra 3 um, 5 um, og 8 um for celle migration assays. De Transwell indsatse er kommercielt tilgængelige fra firmaer som Corning.
Bemærk: Den transwell migration assay kan let modificeres til at udføre celleinvasion assay. For at gøre dette, tilføj ekstracellulære matrix (ECM) materialer på toppen af transwell membranen og derefter tilføje celler på toppen af ECM. For eksempel er Matrigel optøet og flydende på is og derefter 30-50 pi Matrigel sættes til en 24-brønds transwell indsætte og størknes i et 37 ° C inkubator i 15-30 minutter til dannelse af et tyndt gellag. Tilsættes Cell opløsning oven på Matrigel coating simulere invasion via den ekstracellulære matrix.
Bemærk: Der er markante forskelle mellem transwell cellevandring og transwell celleinvasion assays. The transwell cellemigrering assay måler den kemotaktiske evne af celler mod en kemo-attraktant. The transwell celleinvasion assay måler imidlertid både celle kemotaksi og invasion af celler gennem ekstracellulær matrix, en proces, der er almindeligt forekommende i cancermetastase eller fosterudvikling. - Ved hjælp af en pipette, meget carefully tilsættes 600 pi af den ønskede kemo-tiltrækningsstof i bunden af det nedre kammer i en 24-brønds plade. Tilsæt kemo-lokkemiddel uden at flytte transwell indsatsen og undgå at skabe bobler. Sørg for kemo-lokkemiddel væske i bunden gør godt kontakt med membranen i den øvre og til dannelse af en kemotaktisk gradient. Inkubationstiden er afhængig af celletype og kemo-tiltrækningsstof anvendes.
Bemærk: Yderligere test kan være nødvendige for at afgøre, inkubationstiden.
Bemærk: adhærente celler, vil de migrerede celler tillægger den anden side af membranen 1,8. Kvantificeringen af migrerede celler kan udføres efter trin 2.4 2.8 (trin 2,4-2,8 behøver ikke at blive udført i et sterilt miljø). For ikke-adhærente celler, vil de migrerede celler falde i medierne i det nedre kammer. Antallet af migrerede celler kan tælles ved anvendelse af hæmocytometer eller flowcytometer 5. - Fjern transwell indsatsen fra pladen. Brug en bomuld tippes applikator så mange gange som nødvendigt for at forsigtigt at fjerne medierne og resterende celler, der ikke har migreret fra toppen af membranen uden at beskadige det.
- Læg 600-1.000 pi 70% ethanol i en brønd på en 24-brønds plade. Placer transwell indsatsen i 70% ethanol i 10 minutter for at tillade cellefiksering. Fjern transwell insertionen fra 24-brønds plade og bruge en bomulds-applikator for at fjerne resterende ethanol fra toppen af membranen. Lad transwell membranen tørre (typisk 10-15 minutter).
- Læg 600-1.000 pi 0,2% krystalviolet i en brønd på en 24-brønds plade og positionere membran ind i det for farvning. Der inkuberes ved stuetemperatur i 5-10 minutter.
- Fjern forsigtigt krystalviolet fra toppen af membranen med en pipettespids eller bomuld applikator. Meget omhyggeligt, for at undgå afvaskning faste celler, dyppe membranen i destilleret vand så mange gange som nødvendigt for at fjerne den overskydende krystal violet. Lad transwell membranen tørre.
- Se under et omvendt mikroskop og tælle antallet af celler i forskellige synsfelter for at få en gennemsnitlig sum af celler, der har migreret gennem membranen mod kemo-tiltrækningsstof og fastgjort på undersiden af membranen (figur 3).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sårlukkesystemet assay og transwell cellemigrering assay præsenteres her blev udført ved hjælp af musen B16F10 melanom celler som modelsystem. I sårlukning assayet blev B16F10-celler podet i en 6-brønds vævskulturplade og dyrket til 100% konfluens i 24 timer. Et sår på ca 700 um bred blev genereret ved hjælp af en pipette spids og sårlukning (celle migration) blev optaget med time-lapse mikroskopi. Alternativt kan sårlukning også blive undersøgt ved at tage snapshot billeder på forskellige tidspunkter, hvis time-lapse mikroskopi er ikke tilgængelig 1. Fire billeder fra time-lapse series ved 0, 4, 8, og 12-timers tidspunkter er vist i fig. 1. Baseret på bredden af såret beregnede vi migration afstand og hastigheden af cellevandring på 40,42 um / time (Figur 1B). Time-lapse billeder blev også samlet i en video ved hjælp af ImageJ programmet (se supplerende video). The dynamisk celle migration proces kan studeres. Som vist i figur 2 blev morfologi migrerende celler med lamellipodia (forkant), og haler (bagkant) klart overholdt.
I transwell cellemigrering assay blev 24-brønds indsatser fra Corning anvendes. B16F10 melanom celler blev resuspenderet i en koncentration på 1 x 10 6 celler / ml i migrationen puffer bestående af DMEM-medium og 0,1% BSA uden serum. Konditionerede medier fra NIH3T3 fibroblast celler dyrket i DMEM-medium indeholdende 10% føtalt bovint serum blev anvendt som kemo-tiltrækningsstof. 100 pi af B16F10-celler blev tilsat oven på transwell membran i det øvre kammer og 600 pi af kemo-attraktant blev tilsat til det nederste kammer eller det samme volumen af migration buffer tilsat som en negativ kontrol. Cellemigration blev udført som beskrevet i proceduren. Antallet af migrerede celler kunne kvantificeres ved at tælle under et mikroskop eller ibilleder taget (figur 3B). Som vist i figur 3, var der en 15-dobling i cellerne migrerer mod kemo-tiltrækkende middel i sammenligning med kontrol af migration buffer (figur 3C). The transwell assay undersøger celle kemotaxi retningsbestemt cellevandring mod kemo-tiltrækningsstof.
Figur 1.. B16F10 melanom celle sårlukning assay. (A) i en 16-timers Sårlukning assay billeder blev taget hver 5 minutter ved hjælp af en time-lapse mikroskop. Repræsentative billeder ved 0, 4, 8 og 12 timer er vist og skalere stænger (400 um) tilsættes til måling sår bredde. (B) Afstanden af såret blev målt i um. Et punktdiagram blev brugt til at vise bredden af såret over tid og hastigheden af sårlukning blev beregnet. Til genbedømme r 2 værdi blev en lineær regression køre på såret bredde data ved hjælp af GraphPad Prism software (version 5.0, GraphPad Software, Inc.). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2.. Morfologi migrere B16F10 cellerne fra time-lapse mikroskopi af såret lukning analysen. Under en 16 timers Sårlukning assay billeder blev taget hvert 5. minut. Alle billeder blev samlet i en video ved hjælp af ImageJ programmet (5 billeder / sekund). Cell migration involverer celle polarisering, lamellipodia udvidelse og bagkant tilbagetrækning blev observeret. Billeder fra 34,6, 36,6, og 38,6 sekunders tidspunkter af videoen blev præsenteret (video tid, der svarer til den faktiske time-lapse migration tid (hr: min: sek) 34,6 sekunder, 14:20:00; 36,6 sekunder, 15:10:00; og 38,6 sekunder, 16:00:00, henholdsvis). Scale bar 50 mM. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Transwell migration assay B16F10 melanom celler. (A) Et diagram af transwell insert apparatet anvendes til at måle cellemigration og invasion. (B) Repræsentative billeder af B16F10 celle transwell migration. Cellemigrering buffer og NIH3T3-celle-konditioneret medium blev tilsat til det nederste kammer som den negative kontrol og kemo-tiltrækningsstof hhv. Efter celle migration og farvning med krystalviolet som beskrevet i proceduren blev billeder af de migrerede celler (lilla farvede) taget med en MICRoscope med et 10x objektiv (samlet forstørrelse 100x). Membranens porer kan også observeres som de mange små, runde og mørke farvede prikker i billedet. (C) Kvantificering af celler migrerer mod migration buffer eller kemo-attraktant (gennemsnit af 5 billedindstillinger felter ved 100x total forstørrelse). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende Video. Time-lapse video af en B16F10 melanom celle sårlukning assay. Billeder blev taget hver 5 minutter til 16 timer for at frembringe 193 billeder. Alle billeder blev samlet i en video ved hjælp af ImageJ programmet (5 billeder / sekund). Se "Supplementary_Video_JOVE.avi" supplerende fil under Downloads.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cell migration er et vigtigt aspekt at studere i kræftforskning, og det kan også anvendes til udviklingsmæssige, immunologiske og sårheling studier. Cellekulturen sårlukning assay og transwell celle migration og invasion-assays afslører detaljerede oplysninger om celle vandrende adfærd og kan anvendes til at undersøge de molekylære mekanismer i cellemigrering 1,2,10,14. Vores undersøgelse brugt disse celle motilitet assays til at bestemme migrationen hastigheds-og invasion kapaciteter en B16F10 melanom cellelinie.
Cellen sårlukning assay undersøger muligheden for en særlig cellelinje til at migrere og derefter lukke et sår lavet i en sammenflydende plade af celler. Denne analyse er meget tilgængelig for grupper med basisudstyr og i forhold til de eksisterende metoder er en enkel måde at måle celle migration. Vis variation i sårlukning analysen kan findes i de enkelte behandlingsgrupper, men der er flere trin, may skal træffes for at bidrage til at mindske den. En mulig metode til at reducere variation er til pladen hver prøve med det samme antal celler for at opnå synkron konfluens og opretholde en sund celle status ved indledningen af hvert forsøg. Adskillige undersøgelser af cellekultur eksperimenter kan være behov for at fastslå den nøjagtige plating nummer, der er nødvendig for at opnå uforanderlig sammenløb og sund celle status blandt uafhængige stikprøver. Desuden vil stigningen stikprøvestørrelsen også reducere variation. For langsom vandreklitter cellelinjer, der kræver over 24 år timers inkubation tid til at observere en betydelig migration, er det praktisk at bruge aphidicolin eller anden spredning inhibitor for at forhindre celle nummer ændringer, der potentielt kan påvirke resultatet af analysen.
Efter mastering evnen til at studere celle migration hastighed ved hjælp af celle sårlukkesystem assay, en detaljeret evaluering af encellede vandrende adfærd kan også udfyldes 14. Desuden efter en wound lukning assay celler kan fikseres og forskellige proteiner involveret med cytoskeletal struktur og dynamik kan ses og vurderes ved hjælp af immuncytokemi 2. Denne analyse kan føre til yderligere detaljerede biokemiske forandringer hidtil ukendte. Cellen sårlukning assay er også meget modtagelig for real-time levende cell imaging at studere migration dynamik ved hjælp af time-lapse fluorescens mikroskopi. For eksempel kan actin-GFP, tubulin-GFP og paxillin-GFP-fusionsproteiner udtrykkes i levende celler for at vise lokaliseringen af proteiner på forskellige tidspunkter i cellemigrering eller adhæsion 18,19. Nogle begrænsninger af sårlukning assay omfatte, for eksempel, er det ikke egnet til ikke-adhærente celler, og ikke måle celle kemotaksi. Desuden har nogle cellelinjer har en tendens til at løsne sig fra pladen umiddelbart efter at såret er foretaget (f.eks HEK293T celler). For de cellelinjer, er det bedre at bruge pre-støbt sår plader eller transwell migration assay diskuteret nedenfor.
Den transwell celle migration og invasion analysen giver en grundig analyse af cellernes evne til at fornemme en bestemt kemo-tiltrækningsstof og migrere gennem en fysisk barriere mod det. Denne test kan yderligere bruges til at undersøge celleinvasion ved at tilføje et lag af ekstracellulær matrix eller et lag af endotelceller på toppen af transwell membran til at efterligne processen ECM invasion og ekstravasation 1,10. Derudover efter invasionen gennem Matrigel kan immunologisk farvning af cytoskeletale proteiner i kombination med fluorescensmikroskopi være værdifulde for morfologisk undersøgelse i 3-D invasion. En begrænsning ved anvendelse af trans-brønd celle invasion assay er, at tidsforskudte data celleinvasion er vanskeligt at opnå med konventionel mikroskopi og billedbehandling af levende celler i denne proces er kompleks.
For at opnå nøjagtige resultater, er der flere kritiske trin i transwell celle migration og invasion analyser, der er af betydning. Først, da celle migration hastighed kan variere meget mellem forskellige celletyper flere indledende forsøg skal udføres for at vedtage en specifik migration tidsramme, som vil blive anvendt i proceduren. For det andet skal kemo-tiltrækningsstof også gælde for den celletype af interesse. En bred vifte af kemo-lokkemidler bør undersøges i de foregående eksperimenter før måling den endelige migration og invasion evne af en bestemt celletype. Fibroblaster-konditioneret medium er almindeligt anvendt som en stærk kemo-tiltrækningsstof for en bred vifte af celletyper. Hvis der anvendes en enkelt oprenset kemo-tiltrækningsstof sørge for, at receptorer af kemo-tiltrækningsstof er udtrykt i celletypen af interesse. Endelig for cellen invasion assay sørg coating af Matrigel eller andre ekstracellulære matrix er homogen for at minimere eksperimentel variation. Konklusionen er, selv om der er nogle begrænsninger, den megetadgang for cellemigrering assays beskrevet her er anvendelige til en bred vifte af biologiske undersøgelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini | 100106 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Trypsin EDTA 0.25% | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Crystal violet | Sigma | C0775-100G | Dissolved in water at 0.2% |
| Cell disassociation buffer | Gibco | 13151-014 | |
| Cell culture incubator | Thermo Fisher Scientific | Model # 3145 | |
| SterilGARD biosafety hood | The Baker Company, Inc. | Model # VBM-600 | |
| EVOS Fl inverted microscope | Thermo Fisher Scientific | Model # AMF-4302-US | |
| Tissue culture plate | Becton Dickinson | 353046 | Catalog number varies depending on the type of culture plate |
| Corning Transwell insert | Fisher | 07-200-150 | Catalog number varies depending on the pore size of the membrane |
References
- Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
- Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
- Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell. 84 (3), 359-369 (1996).
- Peter, C., et al. Migration to apoptotic "find-me" signals is mediated via the phagocyte receptor G2A. J. Biol. Chem. 283 (9), 5296-5305 (2008).
- Radu, C. G., Yang, L. V., Riedinger, M., Au, M., Witte, O. N. T cell chemotaxis to lysophosphatidylcholine through the G2A receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101 (1), 245-250 (2004).
- Buul, J. D., Hordijk, P. L. Signaling in leukocyte transendothelial migration. Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. (5), 824-833 (2004).
- Yang, L. V., Heng, H. H., Wan, J., Southwood, C. M., Gow, A., Li, L. Alternative promoters and polyadenylation regulate tissue-specific expression of Hemogen isoforms during hematopoiesis and spermatogenesis. 228 (4), 606-616 (2003).
- Yang, L. V., Radu, C. G., Wang, L., Riedinger, M., Witte, O. N. Gi-independent macrophage chemotaxis to lysophosphatidylcholine via the immunoregulatory GPCR G2A. Blood. 105 (3), 1127-1134 (2005).
- Yoshida, M., Yoshida, K. Sperm chemotaxis and regulation of flagellar movement by Ca2+. Mol. Hum. Reprod. 17 (8), 457-465 (2011).
- Albini, A. Tumor and endothelial cell invasion of basement membranes. The matrigel chemoinvasion assay as a tool for dissecting molecular mechanisms. Pathol. Oncol. Res. 4 (3), 230-241 (1998).
- Fidler, I. J. Critical determinants of metastasis. Semin. Cancer Biol. 12 (2), 89-96 (2002).
- Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nat. Med. 12 (8), 895-904 (2006).
- Roussos, E. T., Condeelis, J. S., Patsialou, A. Chemotaxis in cancer. Nat. Rev. Cancer. 11 (8), 573-587 (2011).
- Zhang, Y., et al. Comparative study of 3D morphology and functions on genetically engineered mouse melanoma cells. Integr. Biol. (Camb. 4 (11), 1428-1436 (2012).
- Junger, W. G. Purinergic regulation of neutrophil chemotaxis. Cell. Mol. Life Sci. 65 (16), 2528-2540 (2008).
- Lazennec, G., Richmond, A. Chemokines and chemokine receptors: new insights into cancer-related inflammation. Trends Mol. Med. 16 (3), 133-144 (2010).
- Huang, H. L., et al. Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells. J. Biomed. Sci. 17, (2010).
- Cortesio, C. L., Boateng, L. R., Piazza, T. M., Bennin, D. A., Huttenlocher, A. Calpain-mediated proteolysis of paxillin negatively regulates focal adhesion dynamics and cell migration. J. Biol. Chem. 286 (12), 9998-10006 (2011).
- Wehrle-Haller, B., Imhof, B. A. Actin microtubules and focal adhesion dynamics during cell migration. Int. J. Biochem. Cell Biol. 35 (1), 39-50 (2003).
